Abdullah.A dan Soedarmanto. 1982. Budidaya Tembakau. Jakarta: CV Yasaguna. Agarwal. A., and T.M .Said. 2005. Oxidative stress, DNA damage and apoptosis
in male infertility: a clinical approach, BJU Internat.95:503-507.
Arief. H, 2008. Radikal Bebas . SMF Ilmu Kesehatan Anak Fk Unair/RSU Dr.Soetomo: Surabaya.
Aryoseto, L. 2009. Hubungan antara jumlah leukosit dengan morfologi spermatozoa pada pasien di rumah sakit dokter kariadi. Laporan Akhir
Penelitian Karya Tulis Ilmiah. Semarang: Fakultas Kedokteran
Universitas Diponegoro. hlm. 14.
Astawan. M, 2008. Sehat Dengan Buah. Cetakan Pertama. Jakarta: Penerbit Dian Rakyat.
Aviram, M., Dornfeld, L., Rosenblat, M., Volkova, N., Kaplan, M., Coleman, R., Hayek, T., Presser, D., dan Fuhrman, B.S 2000. Pomegranate Juice Consumption Reduces Oxidative Stress, Atherogenic Modifications to LDL, and Platelet Aggregation : Studies in Human and in Atherosclerotic
Apolipoprotein E-deficient Mice. Available from
Accessed : 15-09-2014.
Batubara, I.V.D. Wantouw, B. Tendean, L. 2013. Pengaruh Paparan Asap Rokok Kretek Terhadap Kualitas Spermatozoa Mencit Jantan (Mus Musculus). Vol. 1. No.1. Manado. Fakultas Kedokteran Universitas Samratulangi Press. hlm: 330-335.
Budka,F. 2008. Active Ingredients, Their Bio availibility and The Health Benefit of Punica granatum Linn (Pomegranate). Accessed : 15-09-2014.
Buhler,D.R and Miranda, C. 2000. Antioxidant Activities of Flavonoid.Departement of Environmental and Molecular Toxicology Oregon StateUniversity.
Cahyono, Bambang.1998. Tembakau Budi Daya dan Analisis Usaha Tani. Kansius.Yogyakarta.
26
Cao, G., Mumlitelli H.U., Moreno C.S., dan Prior R.L. 2001. Anthocyanins are Absorbed in Glycated Forms in Elderly Women. American Journal
OfClinical Nutrition. 73 (5): 920-926.
Chairul., Harapini. M., Daryati, Y. 1992. Pengaruh Ekstrak Kencur (Kaemferia
galanga L.) Terhadap Kehamilan Mencit Putih (Mus musculus L.). Seminar Nasional Indonesia
Duke,J.A.2010. Handbook of Phytochemical Constituents of GRAS Herbsand Other Economical Plants. CRCPress.Egypt.
(5): 4-5
Hafez, E.S.E.1993.Semen Evaluation In : Reproduction In Farm Animal. 6thEdition.Lea and Febiger.Philadelfia. USA
Harbone,J.B and Wiliam C.A, 2001. Anthocyanins and other Flavonoids. The Royal Society of Chemistry.Nat Prod Rep.18:310-333.
Harborne, J. B. 1987. Phytochemical Methods A Guide To Modern Techniques Of
Plant Analysis . Germany: Chapman & Hall.
Ignarro, L.J., Byrns, R.E., Sumi, D., Nigris, F., Napoli, C. 2006. PomegranateJuice Protects Nitric Oxide Against Oxidative Destruction and Enhances theBiological Actions of Nitric Oxide. Available online
Karim. Pengaruh paparan asap rokok elektrik terhadap motilitas, jumlah sperma dan kadar testis mencit (Mus musculus L.). [Tesis]. Medan: Universitas Sumatera Utara;2011;1,60-1.
Madhawati, R. 2012, Si Cantik Delima (Punica granatum) Dengan Sejuta
Manfaat Antioksidan sebagai bahan Alternatif Alami Tampil Sehat dan Awet Muda, Universitas Negeri Malang, malang.
Nijveldt,R.J.2001.Flavonoid: A review of Probable Mechanism of Action anf Potential Applications. Am J Clin Nutr. (74): 418-425.
Nugraheni, T. Asitirin, O. Widiyani, T. 2003. Pengaruh Vitamin C Terhadap Perbaikan Spermatogenesis dan Kualitas Spermatozoa Mencit (Mus Musculus L.) Setelah Pemberian Ekstrak Tembakau (Nicotiana tabacum L.). Biofarmasi. 1(1). hlm 1-19.
Rugh, R. 1968. The Mouse Its Reproduction and Development. Minneapolis: Burgers Publishing Company.
Rusmiati, 2007. Pengaruh ekstrak kayu secang (Caesalpinia sappan L) terhadap viabilitas spermatozoa mencit jantan (Mus musculus L.).
27
Salisbury, G.W. dan N.L Vandemark.1998. Fisiologi Reproduksi dan Inseminasi
Buatan Pada Sapi. Penerjemah: Djanuar, R. Yogyakarta: UGM Press.
Savitri, E.S. 2008, Rahasia Tumbuhan Berkhasiat Obat Perspektif Islam. UIN Press, Malang.
Siska. S.C, 2004. Role of Oxidative stress and antioxidants in andrology and assited reproducttive technology. Andrology. American Society. Hal 6-8 Soehadi, K. & Arsyad, K.(1983). Analisis Sperma. Surabaya: Airlangga
Universitas Press.
Sugianto,N.L. 2011. Pemberian Jus Buah Delima (Punica granatum) Dapat
Meningkatkan Kadar Glutation Peroksidase Darah Pada Mencit (Mus musculus) Dengan Aktivitas Fisik Maksimal. Penelitian Pendahuluan
Program Magister Ilmu Biomedik UNUD. hlm: 30-31
Toelihere. 1985. Fisiologi Reproduksi Ternak. Cetakan keenam. Angkasa Bandung.
Wahyuni, F.D, Asyiah, I.N, Hariyadi, S. 2013. Pengaruh Ekstrak N-heksan Daging Buah Delima Putih (Punica granatum) Terhadap Penurunan Kadar Kolesterol Darah Pada Tikus Putih (Rattus norvegicus L.) dan Pemanfaatnya Sebagai Buku suplemen. Vol (2). No (4)
Washington W.J., R. C. Murthly A.Doye K. Eugene D. Brown and I. Bradley. 1983. Induction of morphologically abnormal sperm in rats exposed to oxylene. Arch. Androl. (11) : 233-237
Wijanarko. 2008. Pengaruhvarietas buah delima
(Punicagranatum)terhadapaktivitasantioksidandan total fenol .Dalam:
Seminar TugasAkhir S1 Jurusan Kimia FMIPA UNDIP , Jurusan Kimia UNDIP.
World Health Organization (WHO), 1988. Penuntun Laboratorium WHO untuk
pemeriksaan Semen Manusia dan Interaksi semen-getah serviks, Terj.
Oleh M.K. Tadjudin, Jakarta: Penerbit FK-UI. hlm. 14.
Word Health Organization.2012. Pencegahan dan Pengendalian ISPA di Fasilitas Pelayanan Kesehat
Wyrobek, A. J and Bruce, W. R 1975. Chemical induction of sperm abnormalities in mice. Proc Natl Acad Sci USA.72: 4425-4429
28
Yanjun, Z., Dana, K., Robert, D., Rypo, L., dan David, W. International Multidimentional Authenticity Specification (IMAS) Algorithm for Detectionof Comercial Pomegranate Juice Adulteration. J. Agric Food
Chem. 57(6):2550-2557.
LAMPIRAN
LAMPIRAN 1. Data Rataan Jumlah Spermatozoa mencit (Mus musculus L.) Rataan jumlah spermatozoa mencit (Mus musculus L.)
Kelompok Jumlah spermatozoa (jt/ml)
K0 103 K1 6,91 K2 154,81 P1 123,78 P2 117,25 P3 123,35
LAMPIRAN 2. Data Rataan Morfologi Spermatozoa mencit (Mus musculus L.)
Rataan morfologi spermatozoa mencit (Mus musculus L.)
Kelompok Morfologi spermatozoa (%)
K0 74 K1 5.18 K2 87,17 P1 85,03 P2 85,7 P3 84,11
LAMPIRAN 3. Data Rataan Viabilitas Spermatozoa mencit (Mus musculus L.)
Rataan Viabilitas spermatozoa mencit (Mus musculus L.)
Kelompok Viabilitas spermatozoa (%)
29 K1 5,08 K2 85,63 P1 82,98 P2 83,73 P3 83,5
LAMPIRAN 4. Data Rataan Motilitas Spermatozoa mencit (Mus musculus L.)
Rataan Viabilitas spermatozoa mencit (Mus musculus L.)
Kelompok Viabilitas spermatozoa (%)
K0 72,5 K1 5,77 K2 85,3 P1 82,9 P2 82,07 P3 83,31
30
LAMPIRAN 5. Analisis Statistik a. Jumlah Spermatozoa
Onewa
ANOVA
Jumlah_Spermatozoa
Sum of Squares Df Mean Square F Sig.
Between Groups 51587,092 5 10317,418 195,469 ,000
Within Groups 950,093 18 52,783
Total 52537,185 23
Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
Dependent Variable: Jumlah_Sperm Bonferroni
(I) Perlakuan (J) Perlakuan Mean
Difference (I-J)
Std. Error Sig. 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
K0 K1 96,08750* 5,13726 ,000 78,7217 113,4533 K2 -51,81250* 5,13726 ,000 -69,1783 -34,4467 P1 -20,78750* 5,13726 ,011 -38,1533 -3,4217 P2 -14,25000 5,13726 ,188 -31,6158 3,1158 P3 -18,97500* 5,13726 ,025 -36,3408 -1,6092 K1 K0 -96,08750* 5,13726 ,000 -113,4533 -78,7217 K2 -147,90000* 5,13726 ,000 -165,2658 -130,5342 P1 -116,87500* 5,13726 ,000 -134,2408 -99,5092 P2 -110,33750* 5,13726 ,000 -127,7033 -92,9717 P3 -115,06250* 5,13726 ,000 -132,4283 -97,6967 K2 K0 51,81250* 5,13726 ,000 34,4467 69,1783 K1 147,90000* 5,13726 ,000 130,5342 165,2658 P1 31,02500* 5,13726 ,000 13,6592 48,3908 P2 37,56250* 5,13726 ,000 20,1967 54,9283 P3 32,83750* 5,13726 ,000 15,4717 50,2033
31 P1 K0 20,78750* 5,13726 ,011 3,4217 38,1533 K1 116,87500* 5,13726 ,000 99,5092 134,2408 K2 -31,02500* 5,13726 ,000 -48,3908 -13,6592 P2 6,53750 5,13726 1,000 -10,8283 23,9033 P3 1,81250 5,13726 1,000 -15,5533 19,1783 P2 K0 14,25000 5,13726 ,188 -3,1158 31,6158 K1 110,33750* 5,13726 ,000 92,9717 127,7033 K2 -37,56250* 5,13726 ,000 -54,9283 -20,1967 P1 -6,53750 5,13726 1,000 -23,9033 10,8283 P3 -4,72500 5,13726 1,000 -22,0908 12,6408 P3 K0 18,97500* 5,13726 ,025 1,6092 36,3408 K1 115,06250* 5,13726 ,000 97,6967 132,4283 K2 -32,83750* 5,13726 ,000 -50,2033 -15,4717 P1 -1,81250 5,13726 1,000 -19,1783 15,5533 P2 4,72500 5,13726 1,000 -12,6408 22,0908
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
b. Morfologi Spermatozoa
Oneway
ANOVA
Morfologi_Spermatozoa
Sum of Squares Df Mean Square F Sig.
Between Groups 26417,369 4 6604,342 2585,578 ,000
Within Groups 51,086 20 2,554
Total 26468,455 24
Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
Dependent Variable: Morfologi_Spermatozoa Bonferroni
(I) Kelompok (J) Kelompok Mean
Difference (I-J)
Std. Error Sig. 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
K1 K2 -82,45000* 1,01080 ,000 -85,6375 -79,2625 P1 -80,90000* 1,01080 ,000 -84,0875 -77,7125 P2 -81,77000* 1,01080 ,000 -84,9575 -78,5825 P3 -79,83000* 1,01080 ,000 -83,0175 -76,6425 K2 K1 82,45000* 1,01080 ,000 79,2625 85,6375 P1 1,55000 1,01080 1,000 -1,6375 4,7375 P2 ,68000 1,01080 1,000 -2,5075 3,8675
32 P3 2,62000 1,01080 ,174 -,5675 5,8075 P1 K1 80,90000* 1,01080 ,000 77,7125 84,0875 K2 -1,55000 1,01080 1,000 -4,7375 1,6375 P2 -,87000 1,01080 1,000 -4,0575 2,3175 P3 1,07000 1,01080 1,000 -2,1175 4,2575 P2 K1 81,77000* 1,01080 ,000 78,5825 84,9575 K2 -,68000 1,01080 1,000 -3,8675 2,5075 P1 ,87000 1,01080 1,000 -2,3175 4,0575 P3 1,94000 1,01080 ,693 -1,2475 5,1275 P3 K1 79,83000* 1,01080 ,000 76,6425 83,0175 K2 -2,62000 1,01080 ,174 -5,8075 ,5675 P1 -1,07000 1,01080 1,000 -4,2575 2,1175 P2 -1,94000 1,01080 ,693 -5,1275 1,2475
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
c. Viabilitas Spermatozoa
Oneway
ANOVA
Viabilitas_Spermatozoa
Sum of Squares Df Mean Square F Sig.
Between Groups 25352,523 4 6338,131 2372,987 ,000
Within Groups 53,419 20 2,671
Total 25405,942 24
Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
Dependent Variable: Viabilitas_Spermatozoa Bonferroni
(I) Kelompok (J) Kelompok Mean
Difference (I-J)
Std. Error Sig. 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
K1 K2 -80,73000* 1,03362 ,000 -83,9894 -77,4706 P1 -78,58000* 1,03362 ,000 -81,8394 -75,3206 P2 -79,85000* 1,03362 ,000 -83,1094 -76,5906 P3 -79,21000* 1,03362 ,000 -82,4694 -75,9506 K2 K1 80,73000* 1,03362 ,000 77,4706 83,9894 P1 2,15000 1,03362 ,506 -1,1094 5,4094 P2 ,88000 1,03362 1,000 -2,3794 4,1394 P3 1,52000 1,03362 1,000 -1,7394 4,7794
33 P1 K1 78,58000* 1,03362 ,000 75,3206 81,8394 K2 -2,15000 1,03362 ,506 -5,4094 1,1094 P2 -1,27000 1,03362 1,000 -4,5294 1,9894 P3 -,63000 1,03362 1,000 -3,8894 2,6294 P2 K1 79,85000* 1,03362 ,000 76,5906 83,1094 K2 -,88000 1,03362 1,000 -4,1394 2,3794 P1 1,27000 1,03362 1,000 -1,9894 4,5294 P3 ,64000 1,03362 1,000 -2,6194 3,8994 P3 K1 79,21000* 1,03362 ,000 75,9506 82,4694 K2 -1,52000 1,03362 1,000 -4,7794 1,7394 P1 ,63000 1,03362 1,000 -2,6294 3,8894 P2 -,64000 1,03362 1,000 -3,8994 2,6194
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
d. Motilitas Spermatozoa
Oneway
ANOVA
Motilitas_Spermatozoa
Sum of Squares Df Mean Square F Sig.
Between Groups 24614,983 4 6153,746 1569,393 ,000
Within Groups 78,422 20 3,921
Total 24693,405 24
Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
Dependent Variable: Motilitas_Spermatozoa Bonferroni
(I) Kelompok (J) Kelompok Mean
Difference (I-J)
Std. Error Sig. 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
K1 K2 -79,81000* 1,25237 ,000 -83,7592 -75,8608 P1 -77,96000* 1,25237 ,000 -81,9092 -74,0108 P2 -77,80000* 1,25237 ,000 -81,7492 -73,8508 P3 -78,13000* 1,25237 ,000 -82,0792 -74,1808 K2 K1 79,81000* 1,25237 ,000 75,8608 83,7592 P1 1,85000 1,25237 1,000 -2,0992 5,7992 P2 2,01000 1,25237 1,000 -1,9392 5,9592 P3 1,68000 1,25237 1,000 -2,2692 5,6292
34 P1 K1 77,96000* 1,25237 ,000 74,0108 81,9092 K2 -1,85000 1,25237 1,000 -5,7992 2,0992 P2 ,16000 1,25237 1,000 -3,7892 4,1092 P3 -,17000 1,25237 1,000 -4,1192 3,7792 P2 K1 77,80000* 1,25237 ,000 73,8508 81,7492 K2 -2,01000 1,25237 1,000 -5,9592 1,9392 P1 -,16000 1,25237 1,000 -4,1092 3,7892 P3 -,33000 1,25237 1,000 -4,2792 3,6192 P3 K1 78,13000* 1,25237 ,000 74,1808 82,0792 K2 -1,68000 1,25237 1,000 -5,6292 2,2692 P1 ,17000 1,25237 1,000 -3,7792 4,1192 P2 ,33000 1,25237 1,000 -3,6192 4,2792
35
LAMPIRAN 6. Alat dan Bahan
Pemeliharaan Kandang Mus musculusL.
Improved Neubauer Gelas Arloji
36
Chloroform Methanol
Daun Tembakau Ekstrak Tembakau
37
LAMPIRAN 7. Gambar Hasil Pengamatan
Spermatozoa Normal Ket: 2. Leher lurus 3. Ekor lurus 1. Kepala berkait Ket: 1. Kepala tumpul 2. Leher bengkok 3. Ekor bengkok
38
disimpan dilemari es pada suhu 40C Spermatozoa Abnormal
LAMPIRAN 8. Prosedur Pembuatan Jus Buah Delima
dicuci bersih buah delima dikupas kulit
ditimbang buah sebanyak 250 gram diblender buah delima
disaring bijinya
dibuat konsentrasi 4%, 5% dan 6% Buah Delima
Hasil
39
ditambahkan NaOH 10% sampai PH=10 dicek dengan kertas lakmus
dimasukkan kedalam corong pemisah dimasukkan kedalam beaker glass LAMPIRAN 9. Prosedur Pembuatan Ekstrak DaunTembakau
dipotong kecil-kecil
dikeringkan anginkan selama 48 jam diblender sampai halus
dimasukan kedalam botol winker Daun Tembakau Simplisia Meserat Residu Filtrat Residu Filtrat ditimbang sebanyak 800g
dimeserasi selama 48 jam dalam pelarut metanol
dipisahkan dengan rotavapor dimasukkan kedalam beaker glasss
diasamkan dengan HCl 2N sampai PH=2 diekstraksi dengan CHCl3
dicek dengan kertas lakmus
ditambahkan CHCl3
dipisahkan dengan corong dirotavapor
40
ditutup dengan cover glass ditutup dengan cover glass
diamati dibawah mikroskop diamati dibawah mikroskop
LAMPIRAN 10. Prosedur Pengamatan Spermatozoa Mencit a. Jumlah Spermatozoa
dilakukan pembedahan
dipotong bagian epididimis dan bagian distal vas deferens dimasukkan cauda epididimis ke dalam cawan arloji yang berisi NaCl 0,9 %
dipotong dengan pisau silet diambil dengan pipet tetes
dimasukkan ke dalam kaca hemositometer/improved neubauer
dilakukan penghitungan
b. Morfologi Spermatozoa Mencit
dilakukan pembedahan
dipotong bagian epididimis dan bagian distal vas deferens dimasukkan cauda epididimis ke dalam cawan arloji yang berisi NaCl 0,9 %
dipotong dengan pisau silet diambil dengan pipet tetes
dimasukkan ke dalam kaca hemositometer/improved neubauer Ekstrak Larutan Ekstrak Mus musculus L. Hasil Mus musculus L. dibuat dosis 0.121mg/bb ditambahkan aquades 100 ml
41
ditetesi pewarna giemsa 3% ditutup dengan cover glass diamati dibawah mikroskop
ditutup dengan cover glass
dilakukan penghitungan sperma yang normal dan abnormal
c. Viabilitas Spermatozoa Mencit
dilakukan pembedahan
dipotong bagian epididimis dan bagian distal vas deferens dimasukkan cauda epididimis ke dalam cawan arloji yang berisi NaCl 0,9 %
dipotong dengan pisau silet diambil dengan pipet tetes
dimasukkan ke dalam kaca hemositometer/improved neubauer
d. Motilitas Spermatozoa Mencit
dilakukan pembedahan
dipotong bagian epididimis dan bagian distal vas deferens dimasukkan cauda epididimis ke dalam cawan arloji yang berisi NaCl 0,9 %
dipotong dengan pisau silet diambil dengan pipet tetes
dimasukkan ke dalam kaca hemositometer/improved neubauer
Mus musculus L.
Hasil
Mus musculus L.
Hasil
42
dilakukan penghitungan sperma yang bergerak dan tidak bergerak Hasil