Pemberian probiotik multispesies, kombinasi Bacillus subtilis ND2 dan
Staphylococcus lentus L1k melalui media budi daya ikan lele dumbo dapat menekan populasi sel Aeromonas hydrophila sampai 40% dengan tingkat kelangsungan hidup ikan lele dumbo mencapai 89,33%.
Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai frekuensi pemberian probiotik melalui media pemeliharaan untuk menghambat pertumbuhan patogen
Aeromonas hydrophila.
Daftar Pustaka
Anderson DP, Siwicki AK. 1995. Basic haematology and serology for fish health programs. In M. Shariff, J.R. Authur , R.P. Subasinghe. (Ed) Diseases in Asian Aquaculture II, Fish Health Section, Asian Fisheries Society. Philippines: 185-202.
Balcazar JL, de-Blas I, Ruiz-Zarzuela I, Vendrell D, Muzquiz JL. 2004.
Probiotics: a tool for the future of fish and shellfish health management. Journal of Aquaculture in the Tropics 19: 239–242.
Bastiawan D, Wahid A, Alifudin M, Agustiawan. 2001. Gambaran darah lele dumbo (Clarias spp.) yang diinfeksi cendawan Aphanomyces sp. pada pH yang berbeda.Jurnal Penelitian Indonesia 3: 44-47.
Bernard VH, Nurhidayu A, Ina-Salwany MY, Abdelhadi Y. 2013. Bacillus cereus: JAQ04 strain as a potential probiotic for red tilapia; Oreochromis
21 Blaxhall PC, Daisley KW. 1973. Routine haematologycal methods for use with
fish blood. Journal of Fish Biology. 5: 577 – 581.
Boyd CE, Massaut L. 1999. Risks associated with the use of chemicals in pond aquaculture. Aquaculture Engineering 20:113-132.
Brown EM. 2000. Darah dan sumsum tulang. Histologi Veteriner. Penerjemah: R. Hartono. Jakarta: UI Press. Hal:108-143.
Chinabut S, Limsuwan C, Sawat PK. 1991. Histology of the Walking Catfish
Clarias batrachus. Thailand: Department of Fisheries. 96
Chirila F, Fit N, Nadas G, Negrea O, Ranga, R. 2008. Isolation and characterization of an Aeromonas hydrophila strain in a Carp (Cyprinus carpio) toxemia focus. Veterinary Medicine 65: 244-247.
Defoirdt T, Thanh LD, Delsen BV, Schryver PD, Sorgeloos P, Boon N, Bossier P. 2010. N-acylhomoserine lactone-degrading Bacillus strains isolated from aquaculture animals. Aquaculture 311: 258-260.
Effendi MI. 2002. Biologi Perikanan. Yayasan Pustaka Nusantara. Bogor.
Ellis AE. 1990. Lysozyme assays. In: Techniques in fish immunology. Stolen J. S., Fletcher T. C., Anderson D. P., Robertsen B. S., Van Miswinkel W. B. (eds), SOS Publications, air Haven, N. 101-103.
Erdem B, Kariptas E, Cil E, Isik K. 2011. Biochemical identification and numerical taxonomy of Aeromonas spp. isolated from food samples in Turkey. Turkey Journal of Biology. 35: 463-472.
Esteban MA. 2012. An overview of the immunological defense in fish skin [review article]. International Scholarly Research Network Immunology.
2012: 1-29.
Firdaus R. 2012. Seleksi bakteri kandidat probiotik untuk penghambatan patogen
Streptococcus agalactiae tipe non-hemolitik pada ikan nila Oreochromis niloticus secara in vitro dan in vivo. [Skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Fu C, Li, Hu W, Wang Y, Zhu W. 2007. Growth and energy budget of F2 ‘all
-fish’ growth hormone gene transgenic common Carp. Journal of Fish
Biology 70: 347-361.
Fujaya Y. 2004. Fisiologi Ikan: Dasar Pengembangan Teknologi Perikanan. Rineka Cipta. Jakarta.
Fuller R. 1992. History and development of probiotics in probiotics the Scientifiec basis. Chapman & Hall. London, New York, Tokyo, Melbourne, Madras.1-8.
Fyzul AN, Al-Harbi AH, Austin B. 2007. Development in the use of probiotics for disease control in aquaculture. Aquaculture 431. 1-11.
Haditomo AHC. 2011. Pemberian probiotik pada media budidaya untuk pengendalian A. hydrophila pada ikan mas (Cyprinus carpio). [Tesis]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Hasibuan UR. 2013. Aplikasi probiotik amilolitik Nb21b dan proteolitik L1k melalui pakan untuk pengendalian Streptococcosis pada ikan nila
Oreochromis niloticus. [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Huisman EA. 1987. Principles of Fish Production. Departement of Fish Culture and Fisheries, Wageningen Agricultural University, Nedherland.
22
Irianto A. 2005. Patologi Ikan Teleostei. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.
Irianto A, Austin B. 2002. Review probiotics in aquaculture. Journal Fish Diseases 25: 633.
Kalaiselvi S, Panneerselvam A. 2011. Invitro assessment of antagonistic activity of Trichoderma sp. against Sarocladium oryzae causing sheath rot disease in paddy. International Journal of Applied Biology and Pharmaceutical Technology. 2 (1): 179-183.
Kumar MP, Ramulu KS. 2013. Haematological changes in Pangasius hypophthalmus infected with Aeromonas hydrophila. International Journal of Food, Agriculture and Veterinary Sciences 3: 70-75.
Lupatsch I, Santos GA, Schrama JW, Verreth JAJ. 2009. Effect of stocking density and feeding level on energy expenditure and stress responsiveness in European sea bass Dicentrarchus labrax. Aquaculture 298: 245-250.
Madigan MT, Martinko JM, Stahl DA, Clark DP. 2011. Brock Biology of Microorganisms. 13th ed. San Francisco (USA): Pearson Education Inc. Magnadottir B. 2010. Immunological control of fish disease [review]. Marine
Biotechnology. 12: 361-379.
Mocanu M, Cristea V, Dediu L, Bocioc E, Grecu RI, Ion S, Vasilean I. 2010. The effect of probiotic diet on growth and hematology parameters of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum 1792). Lucrari Stiintifice-Sera Zootheniie 59: 258-263.
Nayak SK. 2010. Probiotic and immunity: A fish perspective. Fish and shellfish immunology 29:1-14.
Nayak SK. 2011. Biology of eukaryotic probiotics. In Liong, M.T (Ed). Textbook of biology, genetics and health aspects, probiotics. London: Springer. 29-55. Ravi AV, Musthafa KS, Jegathammbal G, Kathiresan K, Pandian SK. 2007. Screening and evaluation of probiotics as a biocontrol agent against pathogenic vibrios in marine aquaculture. Applied Microbiology 45: 219-223.
Salinas I, Cuesta A, Esteban MA, Meseguer J. 2005. Dietary administration of
Lactobacillus delbrueckii and Bacillus subtilis, single or combined, on
gilthead seabream cellular innate mmune responses. Fish & Shellfish
Immunology 19:67-77.
Santoso RA. 2013. Aplikasi berbagai dosis bakteri proteolitik L1k dalam pakan untuk pengendalian Streptococcosis pada ikan nila Oreochromis niloticus
dengan metode kohabitasi. [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Secombes SJ. 1990. Isolation of Salmonid macrophage and analysis of their Killing activity. In Stolen, D.P. Fletcher, B.S. Anderson, M.V. and W.B. Winkel (Ed). Techniques in Fish Immunology. USA. SOS Publication: 137-152.
Sekar S, Surianarayanan M, Perinkulam RD, Bhuvanesh KS, Phani K, Asit BM. 2012. The metabolic advantage of choline lactate in growth media: an experimental analysis with Staphylococcus lentus. Applied Biochemistry and Biotechnology. 169: 380–392
Septi NA. 2014. Respons imun dan dinamika mikroba dalam budidaya ikan lele
Clarias sp. super intensif berbasis bioflok dengan penambahan bakteri L1k. [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
23 Sharma I, Kumar A, Pramanik AK. 2009. Review of technique on isolation and identification of Aeromonads from food of animal and fish origin. Assam University Journal of Science and Technology: Biologycal Sciences. 4(1): 73-85.
Sorokulova IB, Pinchuk IV, Denayrolles M, Osipova IG, Huang JM, Cutting SM, Urdaci MC. 2007. The safety of two Bacillus probiotic strain for human use.
Digestive Diseases and Sciences 53: 954-963.
[SNI] Standar Nasional Indonesia. (2002). Ikan Lele Dumbo (Clarias gariepinus) Bagian 5 : Produksi Kelas Pembesaran di Kolam. SNI : 01-6484.5-2002. Badan Standardisasi Nasional. 1-9.
Takeuchi 1988. Laboratory Work-Chemical Evaluation of Dietary Nutriens. P.179 233, in Watanabe (Ed) Fish Nutrition and Mariculture. Kanagawa International Fisheries Training. Japan International Cooperation Agency. Japan.
Uddin N, Al-Harbi AH. 2010 Bacterial population of African catfish, Clarias gariepinus (Burchell 1822) cultured in earthen ponds. Journal of Applied Aquaculture 22:187–193
Uddin N, Al-Harbi AH. 2012. Bacterial Flora of Polycultured Common Carp (Cyprinus carpio) and African Catfish (Clarias gariepinus). International Aquatic Research. 4(10): 1-9.
Veersamy R, Min LS, Mohanraj, Pauline R, Sivadasan S, Varghese C, Rajak H, dan Marimuthu K. 2014. Effect of aqueous extract of Polygonum minus leaf on the immunity and survival of African catfish (Clarias gariepinus).
Journal of Coastlife Medicine 2 (3): 209 – 213.
Wijaya A. 2011. Pengaruh pemberian bakteri probiotik (Bacillus sp.) pada media pemeliharaan terhadap kelangsungan hidup benih ikan nila (Oreochromis niloticus) yang terinfeksi Streptococcus agalactiae. [Skripsi]. Jatinagor: Universitas Padjajaran.
Yousr AH, Napis S, Rusul GRA, Son R. 2007. Detection of aerolysin and hemolysin genes in Aeromonas spp. isolated from environmental and shellfish sources by polymerase chain reaction. ASEAN Food Journal 14: 115-122.
24
LAMPIRAN
Lampiran 1 Pengukuran kadar hematokrit
Darah dihisap dengan menggunakan tabung mikrohematokrit dengan sistem kapiler. Setelah kira-kira mencapai kurang lebih ¾ bagian tabung, ditutup dengan bahan penutup (critoseal). tabung kapiler yang berisi darah kemudian disentrifuge
dengan kecepatan putaran 1500 rpm selama 5 menit. Pengukuran dilakukan dengan membandingkan bagian darah yang mengendap dengan seluruh bagian darah yang ada dalam tabung mikrohematokrit.
Lampiran 2 Penghitungan diferensial leukosit
Pengamatan diferensial leukosit dilakukan dengan mengamati preparat ulas darah yang diwarnai dengan pewarna Giemsa di bawah mikroskop. Pembuatan preparat ulas darah dilakukan dengan menempatkan setetes darah pada gelas obyek, dibuat preparat ulas dan dibiarkan kering udara kemudian diwarnai. Terlebih dahulu dilakukan fiksasi dengan merendam preparat yang telah kering ke dalam metanol selama 5 menit, kemudian dikeringkan dalam udara, setelah itu dimasukkan ke dalam larutan Giemsa 10% selama 30 menit. Setelah diwarnai, preparat dikeringkan dan siap untuk diamati di bawah mikroskop dengan perbesaran 1000 x. Pengamatan dan penghitungan masing-masing jenis sel dilakukan hingga jumlah semua jenis sel mencapai 100.
Lampiran 3 Pengukuran Respiratory Burst Activity
Darah dari ikan sampel diambil sebanyak 50 µl dimasukkan dalam microplate, diinkubasi selama 1 jam suhu 37oC, kemudian supernatan dibuang dan dicuci PBS 50 µl sebanyak 3 kali, ditambahkan 50 µl NBT 0,2% diinkubasi selama 1 jam suhu 37oC. Fiksasi metanol 100% (50 µl) 2-3 menit lalu dibilas dengan metanol 30% (50 µl) 3 kali dan dikering udarakan, kemudian ditambah KOH 60 µl + DMSO 70 µl dan pengecekkan optical density (ELISA Reader 540nm).
Lampiran 4 Pengukuran Aktivitas Lisozim
Mencampurkan bubuk Micrococcuslysodeikticus 0,2 mg/ml dalam larutan NaH2PO4 dengan konsentrasi 0,05 pada suhu 25°C (kultur cair). Serum ikan sampel diambil sebanyak 30 µl dimasukkan dalam microplate dan ditambahkan 170 µl kultur cair Micrococcuslysodeikticus. Pembacaan adsorbsi dengan ELISA reader 530nm pada menit ke-30 dan menit ke-60.
25