PENETAPAN KADAR HIDROKORTISON ASETAT DAN
KLORAMFENIKOL DALAM SEDIAAN KRIM SECARA
SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF DENGAN METODE
ZERO CROSSING
SKRIPSI
matera Utar
OLEH:
ANJANU SYAFRISAL
NIM 131524098
PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
PENETAPAN KADAR HIDROKORTISON ASETAT DAN
KLORAMFENIKOL DALAM SEDIAAN KRIM SECARA
SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF DENGAN METODE
ZERO CROSSING
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh Gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH:
ANJANU SYAFRISAL
NIM 131524098
PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
PENGESAHAN SKRIPSI
PENETAPAN KADAR HIDROKORTISON ASETAT DAN
KLORAMFENIKOL DALAM SEDIAAN KRIM SECARA
SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF DENGAN METODE
ZERO CROSSING
OLEH:
ANJANU SYAFRISAL
NIM 131524098
Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
Pada Tanggal: 25 Januari 2016
Medan, Maret 2016
Drs. Maralaut batubara, M.Phill., Apt.
NIP 195101311976031003
Dra. Tuty Roida Pardede, M.Si., Apt. NIP 195401101980032001
Dra. Sudarmi, M.Si., Apt. NIP 195406101983032001 Disetujui oleh:
Pembimbing I
Drs. Maralaut Batubara, M.Phill., Apt. NIP 195101311976031003
Pembimbing II
Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt. NIP 195006221980021001
Panitia Penguji,
Prof. Dr. rer. nat. Effendy De Lux Putra, S.U., Apt. NIP 195306191983031001
Drs. Maralaut Batubara, M.Phill., Apt.
NIP 195101311976031003
Dra. Tuty Roida Pardede, M.Si., Apt. NIP 195401101980032001
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmaanirrahiim,
Puji syukur kepada Allah SWT atas segala limpahan rahmat dan
karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini,
serta shalawat beriring salam untuk Rasulullah Muhammad SAW sebagai suri
tauladan dalam kehidupan. Bahan skripsi ini disusun untuk melengkapi salah satu
syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas
Sumatera Utara, dengan judul “Penetapan Kadar Hidrokortison Asetat dan
Kloramfenikol Dalam Sediaan Krim Secara Spektrofotometri Derivatif dengan
Metode Zero Crossing”.
Pada kesempatan ini dengan segala kerendahan hati penulis mengucapkan
terima kasih yang sebesar-besarnya kepada, Ibu Dr.Masfria,M.S., Apt. selaku
Dekan Fakultas Farmasi USU Medan, yang telah memberikan fasilitas sehingga
penulis dapat menyelesaikan pendidikan. Bapak Drs. Maralaut Batubara., M.Si.,
Apt. selaku pembimbing I, serta Bapak Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt. selaku
pembimbing II yang telah membimbing dan memberikan petunjuk serta
saran-saran selama penelitian hingga selesainya bahan skripsi ini. Bapak Prof. Dr. rer.
nat. Effendy De Lux Putra, S.U., Apt. selaku ketua penguji, Ibu Dra. Tuty Roida
Pardede, M.Si., Apt. selaku anggota penguji dan Ibu Dra. Sudarmi, M.Si., Apt.
selaku anggota penguji. Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas Farmasi USU yang
telah mendidik dan memberikan ilmu yang bermanfaat kepada saya selama
v
Ucapan terimakasih dan penghargaan yang tulus tiada terhingga kepada
Ayahanda Suparmin dan Ibunda Nayuk Atminah yang telah memberikan cinta
dan kasih sayang yang tidak ternilai dengan apapun, pengorbanan baik materi
maupun motivasi serta doa yang tulus yang tidak pernah berhenti.
Penulis juga tidak lupa mengucapkan terima kasih kepada teman-teman
ekstensi farmasi angkatan 2013, Bang Upin, Fati, Mia, Vatra, Tiwi dan kawan
satu lab lainnya dan sahabat-sahabatku yang telah memberikan bantuan dan
semangat tak terhingga.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa dalam penulisan bahan skripsi ini
masih jauh dari kesempurnaan, oleh karena itu dengan segala kerendahan hati,
penulis menerima kritik dan saran demi kesempurnaan bahan skripsi ini.
Akhirnya, penulis berharap semoga bahan skripsi ini dapat memberi manfaat bagi
kita semua.
Medan, Januari 2016 Penulis,
Anjanu Syafrisal NIM 131524098
PENETAPAN KADAR HIDROKORTISON ASETAT DAN KLORAMFENIKOL DALAM SEDIAAN KRIM SECARA
SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF DENGAN METODE ZERO CROSSING ABSTRAK
Campuran hidrokortison asetat dan kloramfenikol merupakan salah satu jenis kombinasi dalam sediaan krim. Penetapan kadar hidrokortison asetat dan kloramfenikol dalam sediaan krim tidak terdapat dalam monografi, baik pada Farmakope Indonesia edisi V (2014) maupun United States Pharmacopeia (USP) edisi XXX (2007) sehingga diperlukan suatu metode analisis yang memenuhi uji validitas pada penetapan kadarnya. Tujuan penelitian ini adalah untuk menguji validasi metode spektrofotometri derivatif dalam menetapkan kadar hidrokortison asetat dan kloramfenikol dalam sediaan krim.
Metode penelitian yang dilakukan adalah pengambilan sampel secara purposif terhadap campuran krim hidrokortison asetat dan kloramfenikol yaitu
sediaan krim “merek X” dan penetapan kadar secara spektrofotometri derivatif metode zero crossing dengan pelarut etanol absolut.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar hidrokortison asetat dalam sediaan krim “merek X” tiap gram adalah 23,75–26,28 mg dan kadar
kloramfenikol dalam sediaan krim “merek x” tiap gram adalah 1λ,83–21,096 mg. Dari hasil analisis penetapan kadar hidrokortison asetat dan kloramfenikol dalam sediaan krim menunjukkan hidrokortison asetat dan kloramfenikol memenuhi persyaratan kadar untuk sediaan krim hidrokortison asetat tunggal dan kloramfenikol tunggal menurut USP edisi XXX (2007) dan Farmakope Indonesia edisi V (2014). Hasil uji validasi yang dilakukan terhadap sediaan krim “merek
X”, untuk hidrokortison asetat diperoleh persen perolehan kembali = 100,46%, simpangan baku relatif (RSD) = 1,15% dan untuk kloramfenikol diperoleh persen perolehan kembali = 100,07%, simpangan baku relatif (RSD) = 1,37%.
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan, dapat disimpulkan bahwa metode spektrofotometri derivatif dengan pelarut etanol absolut dapat diukur pada derivat kedua dengan panjang gelombang analisis 222,20 nm untuk hidrokortison asetat dan 228,40 nm untuk kloramfenikol. Serta memenuhi persyaratan akurasi dan presisi, dan dapat digunakan untuk menetapkan kadar hidrokortison asetat dan kloramfenikol pada sediaan krim.
vii
DETERMINATION OF HYDROCORTISONE ACETATE AND CHLORAMPHENICOL IN CREAM BY SPECTROPHOTOMETRY
DERIVATIVE WITH ZERO CROSSING METHOD ABSTRACT the validation of derivative spectrophotometry method in determination of h ydrocort i s one acet at e and chloramphenicol in cream.
The method of this research was done by purposive sampling to h ydrocort i s one acet at e and chloramphenicol of the ointment Chloramfecort® in cream content using derivative spectrophotometry with zero crossing technique and determination used ethanol absolute solution.
The result of this research is obtain that the h ydr ocort is one acet at e in
cream “sample X” each gram is (23.75–26.28) mg and chloramphenicol in cream
“sample X” each gram is (1λ.83–21.096) mg. Based on this results of analysis
Based on the results of research, that derivative spectrophotometry method with ethanol absolute solution and measured at the second derivate with wavelength of 222.20 nm for h ydrocort i s one acet at e and 228.40 nm for chloramphenicol. And fulfilled the requirements of accuracy and precision and can be used to determinate the content of h ydrocort is one acet ate and chloramphenicol in cream.
Keywords: H yd r o c o r t i s o n e Ac e t a t e , Chloramphenicol, Derivative, Spectrophotometry, Zero Crossing, Second Derivatives, Validation
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ... i
HALAMAN JUDUL... ii
HALAMAN PENGESAHAN ... iii
KATA PENGANTAR ... iv
ABSTRAK ... vi
ABSTRACT ... vii
DAFTAR ISI ... viii
DAFTAR TABEL ... xii
DAFTAR GAMBAR ... xiii
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN ... xv
DAFTAR LAMPIRAN ... ... xviii
BAB I PENDAHULUAN ... 1
1.1 Latar Belakang ... 1
1.2 Perumusan Masalah ... 3
1.3 Hipotesis ... 4
1.4 Tujuan Penelitian ... 4
1.5 Manfaat Penelitian ... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 6
2.1 Uraian Bahan ... 6
2.1.1 Hidrokortison asetat ... 6
2.1.2 Kloramfenikol ... 7
ix
2.2.1 Hukum Lambert-beer ... 10
2.2.2 Kegunan Spektrofotometri ... 10
2.3 Spektrofotometri Derivatif ... 11
2.3.1 Komponen Spetrofotometri Derivatif ... 14
2.3.2 Kegunaan Spektrofotometri Derivatif ... 14
2.4 Validasi Metode Analisis ... 15
2.4.1 Akurasi ... 16
2.4.2 Presisi ... 16
2.4.3 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi ... 17
2.4.4 Liniearitas ... 17
BAB III METODE PENELITIAN ... 18
3.1 Jenis Penelitian ... 18
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian ... 18
3.3 Alat ... 18
3.4 Bahan ... 18
3.5 Pengambilan Sampel ... 19
3.6 Prosedur Penelitian ... 19
3.6.1 Pembuatan Larutan Induk Baku dan Standar ... 19
3.6.1.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Hidrokortison Asetat ... 19
3.6.1.2 Pembuatan Larutan Induk Baku Kloramfenikol. ... 19
3.6.1.3 Pembuatan Larutan Standar Hidrokortison asetat ... 20
3.6.1.4 Pembuatan Larutan Standar Kloramfenikol ... 20
3.6.2 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum ... ... 20
3.6.2.1 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum
Hidrokortison Asetat ... 20
3.6.2.2 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Kloramfenikol ... 21
3.6.3 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif ... 21
3.6.3.1 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif Hidrokortison Asetat ... 21
3.6.3.2 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif Kloramfenikol ... 21
3.6.4 Penentuan Zero Crossing ... 22
3.6.5 Penentuan Panjang Gelombang Analisis ... 22
3.6.6 Pembuatan dan Penentuan Linieritas Spektrum Kalibrasi ... 23
3.6.6.1 Pembuatan dan Penentuan Spektrum Kalibrasi Hidrokortison Asetat ... 23
3.6.6.2 Pembuatan dan Penentuan Spektrum Kalibrasi Kloramfenikol ... 23
3.6.7 Penetapan Kadar Hidrokortison Asetat dan Kloramfenikol dalam Sediaan Krim ... 24
3.6.8 Analisis Data Penetapan Kadar SecaraSpesifik ... 25
3.6.9 Uji Validasi ... 26
3.6.9.1 Uji Akurasi ... 26
3.6.9.2 Uji Presisi ... 27
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 28
4.1 Hasil Penentuan Spektrum Serapan Maksimum ... 28
4.2 Hasil Penentuan Spektrum Serapan ... 30
4.3 Penentuan Zero Crossing pada Serapan Derivat ... 31
xi
4.3.2 Penentuan Zero Crossing pada Serapan Derivat
Kedua ... 33
4.4 Hasil Penentuan Panjang Gelombang AnalisisHidrokortison Asetat dan Kloramfenikol ... 35
4.5 Hasil Penentuan Linieritas Kurva Kalibrasi ... 40
4.5.1 Kurva Kalibrasi ... 40
4.5.2 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi ... 41
4.6 Hasil Penentuan Kadar Hidrokortison Asetat dan Kloramfenikol dalam Sediaan Krim ... 41
4.7 Hasil Uji Validasi ... 42
4.7.1 Hasil Uji Akurasi ... 42
4.7.2 Hasil Uji Presisi... 43
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 45
5.1 Kesimpulan... 45
5.2 Saran ... 45
DAFTAR PUSTAKA ... 46
LAMPIRAN ... 48
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Panjang Gelombang Analisis dan Absorbansi pada Derivat
Kedua ... 39
4.2 Kadar Hidrokortison Asetat dan Kloramfenikol dalam Krim ... 42
4.3 Hasil Perolehan Kembali Hidrokortison Asetat dan Kloramfenikol dengan Metode Penambahan Baku Standar
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
4.1 Spektrum Serapan Maksimum Hidrokortison Asetat
Konsentrasi 10 µg/mL... ... 28
4.2 Spektrum Serapan Maksimum Kloramfenikol Konsentrasi
8µg/mL ... 29
4.3 Spektrum Tumpang Tindih Serapan Maksimum Hidrokortison Asetat Konsentrasi 10 µg/mL dan Kloramfenikol Konsentrasi
8 µg/mL ... 29
4.4 Spektrum Serapan Hidrokortison Asetat Konsentrasi 10
µg/mL ... 30
4.5 Spektrum Serapan Kloramfenikol Konsentrasi 8 µg/mL ... 30
4.6 Spektrum Tumpang Tindih Serapan Hidrokortison Asetat dan
Kloramfenikol ... 31
4.7 Spektrum Serapan Hidrokortison Asetat Konsentrasi 10
µg/mL pada Derivat Pertama ... 32
4.8 Spektrum Serapan Kloramfenikol Konsentrasi 8 µg/mL pada
Derivat Pertama ... 32
4.9 Spektrum Tumpang Tindih Serapan Hidrokortison Asetat dan
Kloramfenikol pada Derivat Pertama ... 33
4.10 Spektrum Serapan Hidrokortison Asetat Konsentrasi 10
µg/mL pada Derivat Kedua ... 34
4.11 Spektrum Serapan Kloramfenikol Konsentrasi 8 µg/mL pada
Derivat Kedua ... 34
4.12 Spektrum Tumpang Tindih Serapan Derivat Kedua
Hidrokortison Asetat dan Kloramfenikol ... 35
4.13 Spektrum Tumpang Tindih Serapan Derivatif Kedua Hidrokortison Asetat dan Kloramfenikol dan Campuran
Hidrokortison Asetat dan Kloramfenikol ... 36
4.14 Panjang Gelombang Analisis Hidrokortison Asetat = 222,20
nm ... 37
4.15 Panjang Gelombang Analisis Kloramfenikol = 228,40 nm ... 37
4.16 Kurva Kalibrasi Hidrokortison Asetat Pada Panjang
Gelombang 222,20 nm ... 40
xv
5. Spektrum Serapan Baku Hidrokortison Asetat Konsentrasi 6 µg/ml ... 56
6. Spektrum Serapan Baku Hidrokortison Asetat Konsentrasi 8 µg/ml ... 56
7. Spektrum Serapan Baku Hidrokortison Asetat Konsentrasi 10 µg/ml ... 57
8. Spektrum Serapan Baku Hidrokortison Asetat Konsentrasi 12 µg/ml ... 57
9. Spektrum Serapan Baku Hidrokortison Asetat Konsentrasi 14 µg/ml ... 58
10. Tumpang Tindih Spektrum Serapan Baku Hidrokortison Asetat (6 µg/ml, 8 µg/ml, 10 µg/ml, 12 µg/ml dan 14 µg/ml) .. 58
11. Spektrum Serapan Baku Kloramfenikol Konsetrasi 8 µg/ml .... 59
12. Spektrum Serapan Baku Kloramfenikol Konsetrasi 10 µg/ml .. 59
13. Spektrum Serapan Baku Kloramfenikol Konsetrasi 12 µg/ml .. 60
14. Spektrum Serapan Baku Kloramfenikol Konsetrasi 14 µg/ml .. 60
15. Spektrum Serapan Baku Kloramfenikol Konsetrasi 16 µg/ml .. 61
16. Tumpang Tindih Spektrum Serapan Baku Kloramfenikol (8 µg/ml, 10 µg/ml, 12 µg/ml, 14 µg/ml, 16 µg/ml) ... 61
17. Spektrum Derivat Pertama Hidrokortison Asetat Konsentrasi 6 µg/ml ... 62
18. Spektrum Derivat Pertama Hidrokortison Asetat Konsentrasi
8 µg/ml ... 62
19. Spektrum Derivat Pertama Hidrokortison Asetat Konsentrasi
10 µg/ml ... 63
20. Spektrum Derivat Pertama Hidrokortison Asetat Konsentrasi
12 µg/ml ... 63
21. Spektrum Derivat Pertama Hidrokortison Asetat Konsentrasi
14 µg/ml ... 64
22. Tumpang Tindih Spektrum Derivat Pertama Hidrokortison
Asetat (6 µg/ml, 8 µg/ml, 10 µg/ml, 12 µ g/ml dan 14 µg/ml) .... 64
23. Spektrum Derivat Pertama Kloramfenikol Konsentrasi 8
µg/ml ... 65
24. Spektrum Derivat Pertama Kloramfenikol Konsentrasi 10
µg/ml ... 65
25. Spektrum Derivat Pertama Kloramfenikol Konsentrasi 12
µg/ml ... 66
26. Spektrum Derivat Pertama Kloramfenikol Konsentrasi 14
µg/ml ... 66
27. Spektrum Derivat Pertama Kloramfenikol Konsentrasi 16
µg/ml ... 67
28. Tumpang Tindih Spektrum Derivat Pertama Kloramfenikol (8
µg/ml, 10 µg/ml, 12 µg/ml, 14 µg/ml dan 16 µg/ml) ... 67
29. Spektrum Derivat Kedua Hidrokortison Asetat Konsentrasi 6
µg/ml ... 68
30. Spektrum Derivat Kedua Hidrokortison Asetat Konsentrasi 8
µg/ml ... 68
31. Spektrum Derivat Kedua Hidrokortison Asetat Konsentrasi
10 µg/ml ... 69
32. Spektrum Derivat Kedua Hidrokortison Asetat Konsentrasi
12 µg/ml ... 69
33. Spektrum Derivat Kedua Hidrokortison Asetat Konsentrasi
xvii
34. Spektrum Derivat Kedua Kloramfenikol Konsentrasi 8 µg/ml
... 70
35. Spektrum Derivat Kedua Kloramfenikol Konsentrasi 10
µg/ml ... 71
36. Spektrum Derivat Kedua Kloramfenikol Konsentrasi 12
µg/ml ... 71
37. Spektrum Derivat Kedua Kloramfenikol Konsentrasi 14
µg/ml ... 72
38. Spektrum Derivat Kedua Kloramfenikol Konsentrasi 16
µg/ml ... 72
39. Tumpang Tindih Spektrum Derivat Kedua Kloramfenikol (8
µg/ml, 10 µg/ml, 12 µg/ml, 14 µg/ml dan 16 µg/ml) ... 73
40. Serapan Derivat Kedua Hidrokortison Asetat Konsentrasi 10
µg/ml Pada = 220,20 nm ... 74
41. Serapan Derivat Kedua Kloramfenikol Konsentrasi 10 µg/ml
Pada = 228,40 nm ... 74
42. Serapan Derivat Kedua Campuran Hidrokortison Asetat Konsentrasi 10 µg/ml Dan Kloramfenikol Konsentrasi 8
µg/ml ... 75
43. Spektrum Serapan Derivat Kedua Sampel Krim Merek X ... 82
44. Spektrum Perolehan Kembali 80% Pada Sediaan Krim Merek
X ... 91
45. Spektrum Perolehan Kembali 100% Pada Sediaan Krim
Merek X ... 92
46. Spektrum Perolehan Kembali 120% Pada Sediaan Krim
Merek X ... 93
DAFTAR LAMPIRAN
6. Spektrum Serapan Derivat Pertama Baku Hidrokortison
Asetat dan Baku Kloramfenikol ... 62
7. Spektrum Serapan Derivat Kedua Baku Hidrokortison Asetat
dan Baku Kloramfenikol ... 68
8. Spektrum Serapan Panjang Gelombang Analisis Baku
Hidrokortison Asetat dan Baku Kloramfenikol ... 74
9. Data Kalibrasi Hidrokortison Asetat BPFI, Persamaan
Regresi dan Koefisien Korelasi ... 76
10. Data Kalibrasi Baku Kloramfenikol, Persamaan Regresi dan
Koefisien Korelasi ... 78
11. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Hidrokortison
Asetat ... 80
12. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Kloramfenikol
... 81
13. Spektrum Serapan Derivat Kedua Sampel ... 82
14. Hasil Analisis Kadar Hidrokortison Asetat Dan
Kloramfenikol dalam Sediaan Krim ... 83
15. Contoh Perhitungan Kadar Hidrokortson Asetat Dan
Kloramfenikol dalam Sediaan Krim ... 84
xix
17. Perhitungan Statistik Kloramfenikol pada Krim Merek X ... 89
18. Spektrum Serapan Krim Merek X pada Uji Perolehan Kembali ... 91
19. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Hidrokortison Asetat pada Krim Merek X ... 94
20. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Kloramfenikol pada Krim Merek X ... 95
21. Contoh Perhitungan Persentase Perolehan Kembali (% recovery) ... 96
22. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi Perolehan Kembali Hidrokortison asetat Pada Krim Merek X ... 100
23. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi Perolehan Kembali Kloramfenikol pada Krim Merek X... 101
24. Daftar Nilai Distribusi t ... 102
25. Sertifikat Pengujian Hidrokrotison Asetat ... 103
26. Sertifikat Pengujian Kloramfenikol ... 104
