Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol dan Fraksi n-Heksana serta Etilasetat Daun Ketepeng (Senna alata (L.)Roxb.)

(1)

44

Lampiran 2. Tumbuhan dan daun ketepeng

(2)

45

Tumbuhan ketepeng

Daun ketepeng

Lampiran 3.Gambarsimplisia dan serbuk simplisia daun ketepeng

(3)

46

Simplisia daun ketepeng

Serbuk simplisia daun ketepeng

Lampiran 4. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun ketepeng

(4)

47 Keterangan:

A = Stomata parasitik B = Kristal bentuk prisma C = Trikoma multiseluler

D = Pembuluh dengan penebalan spiral

(5)

48 Serbuk Simplisia

Lampiran 5.Bagan kerja penelitian

Dicuci di air mengali Ditiriskan

Ditimbang berat basahnya Dikeringkan

Ditimbang berat keringnya

Dihaluskan dengan blender Disimpan

Dimaserasi dengan etanol 80%

Difraksinasi Daun Ketepeng

Simplisia

Karakterisasi Skrining Fitokimia Pembuatan ekstrak

•Makroskopik

•Mikroskopik

•Penetapan Kadar Air

•Penetapan Kadar Sari yang Larut Air

•Penetapan Kadar Sari yang Larut Etanol

•Penetapan Kadar Abu Total

•Penetapan Kadar Abu yang Tidak Larut Asam

• Alkaloid

• Glikosida

• Antrakuinon

• Flavonoid

• Steroid

Uji Aktivitas Antibakteri

(6)

49

Lampiran 6.Bagan pembuatan ekstrak etanol daun ketepeng (Senna alata

(L.)Roxb.)

Dimasukkan ke dalam bejana

Dimasukkan etanol 80% sampai simplisia terendam sempurna

Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya, sambil sesekali diaduk

Disaring

Dimaserasi kembali dengan etanol 80 %

Di enap tuang

Diuapkan dengan penguap penguap vakum Diuapkan diatas penangas air

Maserat

Ekstrak kental (72,5 g)

500 g serbuk simplisia

Ampas

Ampas Maserat

(7)

50

Lampiran 7. Bagan pembuatan fraksi n-heksana dan fraksi etilasetat daun

ketepeng

Ditambahkan 120 ml etanol dan 300 ml akuades

Dihomogenkan

Dimasukkan dalam corong pisah Diekstraksi dengan 150 ml n-heksana

Dikocok dan didiamkan sampai terbentuk dua lapisan dan dipisahkan

Diekstraksi dengan 150 ml Dikumpulkan etil asetat

Dipekatkan dengan penguap vakum Diuapkan diatas penangas air Dikocok dan didiamkan

sampai terbentuk dua lapisan dan dipisahkan

Dikumpulkan

Dipekatkan dengan penguap vakum

Diuapkan diatas penangas air Ekstrak etanol daun ketepeng (30 g)

Fraksi n-heksana Fraksi air

Fraksi n-heksana pekat (3,51 g)

Fraksi etilasetat Fraksi air

Fraksi etilasetat pekat (2,41 g)

(8)

51

Lampiran 8. Bagan pengujian aktivitas antibakteri

← Diambil dengan jarum ose steril

← Ditanam pada media nutrient agar miring

← Diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam

← Disuspensikan dalam 10 ml media nutrient broth steril

←disesuaikan kekeruhan dengan standar 0,5 Mc. Farland

← Dimasukkan 0,1 ml inokulum ke dalam cawan petri

← Ditambahkan 15 ml media nutrient agar ke dalam cawan petri

← Dihomogenkan dan dibiarkan hingga memadat

← Diletakkan pencadang kertas yang telah direndam ke dalam larutan uji ekstrak /fraksi dengan berbagai konsentrasi dan pelarut DMSO sebagai blanko

← Diinkubasi pada suhu 37oC selama 18- 24 jam

← Diukur diameter daerah hambatan di sekitar pencadang kertas dengan menggunakan jangka sorong

Biakan murni bakteri

Stok kultur bakteri

Inokulum bakteri

Media Padat

Hasil

(9)

52

Lampiran9.Perhitungan Karakterisasi Simplisia Daun Ketepeng

1. Penetapan kadar air

a. Berat sampel = 5,046 g Volume I = 3,5 ml Volume II = 3,8 ml

Kadar air = 3,8-3,5

5,046x 100 % = 5,9453%

b. Berat sampel = 5,064 g Volume I = 3,8 ml Volume II = 4,2 ml

Kadar air = 4,2-3,8

5,064 x 100% = 7,9776%

c. Berat sampel = 5,045 g Volume I = 0,7 ml Volume II = 1,0 ml

Kadar air = 1,0-0,7

5,045x 100% = 5,9464%

Kadar air rata-rata = (5,9453+7,9776+5,9464)%

3

=

6,6231%

2. Perhitungan penetapankadar sari larutdalam etanol

a. Berat sampel = 5,0336 g

Kadar air

=

volume II-volume I

berat sampel

�

100 %

Kadar sari= berat sari berat sampel x

100

20 ×100%

(10)

53

Lampiran 9. (lanjutan)

Berat sari = 0,1565 g

Kadar sari rata-rata = 15,0536+15,0536+15,6271%

3 = 15,4087%

3. Perhitungan penetapankadar sarilarutdalam air

Kadar sari = berat sari berat sampel x

100

20 × 100%

(11)

54

Lampiran 9. (lanjutan)

Berat sari = 0,1988 g

Kadar sari =0,1988

5,0013

x

100

20

x

100% = 19,8748%

Kadar sari rata-rata = (20,0995+21,4228+19,8748 )%

3 = 20,4657%

4. Perhitungan penetapankadarabu total simplisia

Kadar abu total rata-rata = (4,4543+3,7697+4,2105)%

3 = 4,1448%

5. Perhitungan penetapankadarabu tidaklarutdalamasam

Kadar abu total = berat abu

berat sampel× 100%

Kadar abu yang tidaklarutdalamasam

=

berat abu

berat sampel

x

100%

(12)

55

Lampiran 9.(lanjutan)

Sampel I Berat sampel = 2,0160 g Berat abu = 0,0060 g

Kadar abu = 0,0060

2,0160 x 100% = 0,2976 %

Sampel II Berat sampel = 2,0850 g Berat abu = 0,0080 g

Kadar abu = 0,0080

2,0850 x 100% = 0,3836%

Sampel III Berat sampel = 2,0900 g Berat abu = 0,0090 g

Kadar abu = 0,0090

2,0900x 100%= 0,4306 %

Kadar abu yang tidaklarutasam rata-rata = 0,2976%+0,3836%+0,4306%

3 = 0,3706%

(13)

56

Lampiran 10. Data hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun ketepeng

terhadap bakteri Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis dan Pseudomonas aeruginosa

No

Konsen- trasi (mg/ml)

Diameter Daerah Hambat (mm)

Staphylococcus aureus

Staphylococcus

epidermidis Pseudomonas aeruginosa

D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*

D = Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri 1,2,3 = Pengulangan

D* = Diameter rata- rata daerah hambatan pertumbuhan bakteri - = Tidak terdapat daerah hambatan pertumbuhan bakteri

(14)

57

Lampiran 11. Data hasil uji aktivitas antibakteri fraksi n- heksanadaun ketepeng

No

Staphylococcus aureus

Staphylococcus

D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*

(15)

58

Lampiran 12. Data hasil uji aktivitas antibakteri fraksi etil asetatdaun ketepeng

No

Staphylococcus Aureus

Staphylococcus

D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*

(16)

59

Lampiran 13. Gambar pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun

ketepeng

Pengujian terhadap Pseudomonas aeruginosa A Pengujian terhadap Staphylococcus aureus

A

Pengujian terdahapStaphylococcus epidermidis

(17)

60

Lampiran 14. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana daun

ketepeng

Pengujian terhadap Staphylococcus aureus A

Pengujian terhadap Staphylococcus epidermidis A

Pengujian terhadap Pseudomonas aeruginosa A

(18)

61

Lampiran 15. Gambar pengujian aktivitas antibakteri fraksi etilasetat daun

ketepeng

Pengujian terhadap Staphylococcus aureus

A

Pengujian terhadap Staphylococcus epidermidis A

Pengujian terhadap Pseudomonas aeruginosa