AKTIVITAS INHIBISI ENZIM ALFA AMYLASE DAN ALFA GLUKOSIDASE
EKSTRAK DAUN SIRSAK (
Annona muricata
Linn.) SECARA INVITRO
Eko mugiyanto1,2), Partomuan simanjuntak3), Siswa setyahadi4). 1
Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila email: giyan77@yahoo.co.id 2
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Pekajangan Pekalongan 3
Penelitian Biologi LIPI Cibinong Bogor 4
BPPT Puspitek Serpong
Abstract
Diabetes mellitus(DM) is a chronic metabolicdisorder characterized by both postprandial and fastinghyperglycemia with disturbances in carbohydrate, fat and protein metabolism. There has been an enormous interest in the development of alternative medicine for type 2 diabetes. Annona muricata or sirsak has been use to cure cancer and according to American Association of Clinical Endocrinologist there was a significant increasing for patient cancer with obesity and diabetes. The goal of the present study was to provide in vitro evindence for potential inhibition of α amylase and α glucosidase activity. The result showed Annona muricata had inhibition activity at 73,426 µg/ml and 64,425 µg/ml for ethanolic fraction α amylase and α glucosidase respectively.
Keywords: Diabetes, α amylase, α glucosidase, annona muricata, sirsak
1. PENDAHULUAN
Menurut American Association of Clinical Endocrinologists (AACE) studi epidemiologi telah menunjukkan secara signifikan peningkatan penderita kanker pada orang dengan obesitas dan diabetes. Muncul kekhawatiran obat-obat antihyperglycemic yang dikaitkan dengan peningkatan prevalensi beberapa kanker; meskipun data yang tersedia masih terbatas (Handelsman Y et al, 2013). Peran hyperglycemic dalam timbulnya kanker masih kurang jelas, tetapi hubungannya tidak dapat dikesampingkan, seperti yang ada dalam data-data terkini yang menyatakan resiko kanker akan meningkat pada penderita diabetes.
Beberapa usulan tentang mekanisme yang mengaitkan antara obesitas deangan kanker adalah pengaruh baik secara langsung maupun tidak langsung insulin dan insulin like growth factor-1 (IGF-1), sex hormone, adipokinesis dan inflamasi (Roberts DL, 2010). Aktivasi dari serangkaian mekanisme diatas akan meningkatkan proliferasi, hambatan apoptosis dan peningkatan ketidakstabilan gen. Seperti yang telah
dilakukan oleh Morris PG dan Subbaramaiah K dalam studi tissue-based breast cancer, yang mendukung hipotesis mekanisme kanker pada penderita obesitas (Morris PG, 2011) (Subbaramaiah K, 2011).
dibandingkan dengan 20% untuk negara- negara maju (Shaw, 2010).
Disfungsi metabolisme glukosa berkaitan erat dengan cacat pada sekresi insulin dimana tingkat glukosa dalam plasma adalah abnormal, sebagai akibat dari gangguan metabolisme glukosa (R.A De Fronzo, 1982). Peningkatan abnormal glukosa darah memainkan peran patogenik dalam gangguan metabolisme (R.H Unger, 1985). Postprandial hiperglikemia atau dikenal sebagai Gangguan Toleransi Glukosa (GTG), adalah tahap regulasi glukosa yang terdapat dalam individu dimana toleransi glukosa berada di atas kisaran normal umumnya tetapi lebih rendah dari tingkat yang dianggap sebagai jenis diabetes mellitus –II (diabetes tipe-2). GTG merupakan tahap sementara antara toleransi glukosa normal dan tipe-II DM. Postprandial hiperglikemia memainkan peran sentral dalam pengembangan dan perkembangan komplikasi diabetes penyakit terutama jantung. Tahap postprandial ditandai dengan glikemia cepat dan meningkat (E. Bonora and M. Muggeo, 2001) (A. Ceriello, 2005).
Salah satu faktor penting yang muncul dalam hiperglikemia postprandial adalah penyerapan cepat glukosa dalam usus, penyerapan glukosa dapat ditunda dengan mengurangi laju pencernaan pati. Pankreas α- amilase adalah enzim kunci dalam sistem pencernaan yang mengkatalisis langkah awal dalam hidrolisis pati untuk banyak oligosakarida yang lebih kecil yang terdiri dari maltosa, maltotriosa dan sejumlah a- {l- 6) dan a- (I - 4) oligoglucans, kemudian dilanjutkan dengan kerja α -glucosidase yang akan terdegradasi menjadi glukosa yang di serap memasuki aliran darah. Degradasi pati secara cepat ini mengarah ke peningkatan PPHG (hiperglikemia post-prandial). Telah terbukti bahwa aktivitas HPA (manusia pankreas a-amilase) di usus kecil berkorelasi dengan peningkatan kadar glukosa post- prandial (Tarlin CA, 2008) (R. Quezada- Calvillo, 2007).
alfa-glukosidase adalah enzim yang terdapat didalam brush border usus yang bertanggung jawab untuk pencernaan dari
oligosakarida seperti maltosa, maltriose dan dekstrin dan menghasilkan monosakarida seperti glukosa, galaktosa dan fruktosa yang cepat diserap di dinding usus kecil (M Ranjan N., n.d.). Oleh karena itu, strategi penting untuk mengelola hiperglikemia postprandial adalah dengan menghambat aktivitas α-glucosidase (E. Borges de Melo, 2006).
Penggunaan obat-obatan dalam pengelolaan diabetes dapat dikategorikan ke dalam tiga kelompok. Obat dalam kelompok pertama bekerja meningkatkan ketersediaan insulin endogen, yang termasuk dalam kelompok ini adalah sulfonilurea seperti glibenclamide, glinides, analog insulin, agonis glucagon-like peptide 1 (GLP-1) dan inhibitor dipeptidyl peptidase-IV (DPP-IV). Dua anggota yang pertama dari kelompok ini bekerja pada reseptor sulfonilurea di pankreas untuk meningkatkan sekresi insulin. Agonis GLP-1 dan inhibitor DPP-IV pada sisi lain bekerja pada sel-sel ileum dari usus kecil. Kelompok kedua bekerja dengan meningkatkan sensitivitas insulin, seperti thiazolidinediones, yang merupakan agonis dari Peroksisom proliferatoractivated gamma receptor (PPAR) dan metformin biguanida. Kelompok ketiga terdiri dari inhibitor α- glukosidase seperti acarbose, yang bekerja dengan mengurangi pencernaan dan bioavailabilitas polisakarida (Chehade, 2000). Semua terapi yang ada memiliki keterbatasan efikasi, tolerabilitas terbatas dan/atau mekanisme tertentu berdasarkan efek samping (Moller, 2001).
menghambat secara luas glicosidase seperti α-amylase dan α-glucosidase. Oleh karena sifat non spesifik target tersebut sehingga diketahui memiliki efek samping seperti gangguan pencernaan, kembung, diare dan flatulen. Sehingga inhibitor lebih efektif untuk enzim, harus memiliki efek yang kuat penghambatan terhadap α-glukosidase dan memiliki efek yang ringan terhadap penghambatan α-amilase, yang dapat menjadi terapi yang efektif untuk mengelola hiperglikemia postprandial dengan efek samping yang minimal (WHO, 2008).
Menurut organisasi kesehatan dunia (WHO), lebih dari 80% dari populasi total penduduk dunia tergantung pada obat-obatan tradisional, WHO juga mengakui bahwa obat tradisional sebagai pengobatan yang mudah diakses, terjangkau dan merupakan budaya setempat yang dipercaya oleh banyak orang, yang ada sebagai cara mengatasi perkembangan penyakit tidak menular kronis di tengah-tengah melonjaknya biaya perawatan kesehatan dan penghematan ini terjadi hampir universal (WHO, 2008). Tanaman dan obat-obatan nabati yang digunakan saat ini merupakan dasar dari banyak obat-obatan modern untuk mengobati berbagai penyakit. Pemahaman yang lebih baik akan obat yang berasal dari tanaman tergantung pada dua faktor yang telah diketahui dengan baik. Salah satu kriteria adalah membuktikan bahwa obat yang telah dirumuskan bekerja sesuai dengan apa yang disebutkan dan lainnya adalah identifikasi senyawa aktif dengan cara analisis kandungan tanaman obat yang memiliki kemampuan mempengaruhi aktivitas fisiologis pada tubuh manusia (Soumya Prakash Rout, 2009).
Sirsak yang juga dikenal sebagai soursop, guanabana, graviola, Zuurzak, coração-da-India, guyabano atau corossol merupakan salah satu buah eksotis dan sangat enak dimakan. Sirsak, yang dikenal sebagai buah asli dari Hindia Barat, Amerika Tengah, dan Brasil sangat banyak dijumpai dan merupakan buah yang umum di Asia tropis saat ini. Sirsak sebenarnya pohon yang berasal dari Karibia dan Amerika Selatan
bagian utara, kini sirsak telah tersebar di seluruh daerah tropis lembab sehingga juga tumbuh di Asia Tenggara termasuk Malaysia dan Indonesia (Christophe Gleyea, 1999). Sirsak atau nama ilmiah, Annona muricata L termasuk dalam famili Annonaceae terdiri dari 2300 sampai 2500 spesies termasuk didalamnya lebih dari 130 genus, sehingga dapat dikatakan ini adalah keluarga terbesar dari Magnoliales. Hanya empat genera (Annona, Rollinia, Uvaria, dan Asimina) yang menghasilkan buah yang dapat dimakan seperti Annona (W. Popenoe, 1920).
Annona muricata atau yang juga disebut sur-sop, sirsak atau guanabana dinobatkan sebagai pohon buah populer yang dibudidayakan di seluruh daerah tropis dunia, dimana biji dan daun dari spesies ini ditemukan mengandung lebih dari 50 mono- THF acetogenins. Baru-baru ini beberapa intermediet kunci yang terlibat dalam biosintesis acetogenins ini telah diisolasi dari spesies ini dan diberi nama sebagai epomuricenins-A dan B, montecristin, cohibins-A dan B, muridienins-1 dan 2, muridienins-3 dan 4 , muricadienin dan chatenaytrienins-1, 2 dan 3 dan juga senyawa baru yang disebut sebagai sabadelin yang mungkin menjadi prekursor biogenetis cis- panatellin (Ivan A. Ross, 2003)
(memperkuat jantung), obat penurun panas (menyembuhkan demam), nerviness (menenangkan saraf), vermifuge (mengusir cacing), pediculocide (membunuh kutu), dan sebagai analgesik . Padma et al menegaskan aktivitas anti-virus dari ekstrak etanol A. muricata terhadap virus Herpes simpleks (Padma, 1998). Ekstrak A. muricata telah terbukti memiliki anti-parasit (Bories, 1991), anti-rematik, astringent (dos Santos, 2000), anti-leishmanial dan efek sitotoksik (Jaramillo, 2000). A. muricata juga telah terbukti efektif melawan resisten (MDR) sel kanker multi-obat (Oberlies, 1997). Annona muricata telah digunakan secara tradisional di banyak bagian dunia di mana akses ke pelayanan kesehatan formal terbatas (Adewole, 2006). Ada beberapa alasan mengapa penggunaan tanaman obat harus dipelajari diantaranya adalah obat herbal mungkin memiliki efek terapi tertentu, mereka juga mungkin memiliki efek samping beracun (Bailey, 1989).
Beberapa cara dapat dilakukan untuk mengurangi gangguan metabolik pada penderita diabetes, diantaranya dengan pola makan dan mengkonsumsi obat hipoglikemik oral (OHO) sintetik (Raharja, 2007), namun penggunaan obat ini dalam waktu yang lama akan menimbulkan efek samping, seperti hipoglikemia akut, kerusakan ginjal, kerusakan hati dan asidosis laktat (Murray, 2003). Oleh karena itu pemanfaatan bahan alam sebagai obat anti diabetes alami cenderung menjadi pilihan masyarakat (Levitan B, 2004).
2. METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian eksplorasi eksperimental dengan pendekatan kualitatif dan kuntitatif. Data yang didapat berasal dari daya hambat enzim alfa amylase dan alfa glukosidase. Daun sirsak diambil dari perkebunan disekitar Yogyakarta dan telah dideterminasi oleh Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI), Cibinong, Indonesia.
Bahan-bahan yang digunakan adalah daun sirsak, akuades, etanol 70%, enzim α amylase dan α glukosidase, amylum 1%, p-
nitrofenil-α-D-glukopiranosida(p-NPG), iodine 1%, larutan bufer fosfat pH 7,
serumbovine albumin, akarbosa, dimetilsulfoksida(DMSO), dan Na2CO3.
Tahapan penelitianmeliputi beberapa tahap kegiatan, yaitu preparasi serbukkering daun sirsak, pengukuran kadar airserbuk daun sirsak, ekstraksi daun sirsak secara bertingkat dimulai secara berturut-turut dari pelarut n-heksan; etilasetat; etanol; air serata ekstraksi dengan air secara terpisah, ujifitokimia, uji aktivitas ekstrak terhadap α amylase dan α glukosidase.
Penyiapan Serbuk Daun Sirsak
Kering dan Penetapan Kadar Air:
Daun sirsak yang digunakan adalahdimulai dari daun yang terletak pada lembarkeempat dari pucuk ke arah daun yang lebihtua. Serbuk daun sirsak keringdisiapkan dengan mengeringkan daun sirsak menggunakan oven pada suhu 50oC hinggakadar air kurang dari 10%. Daun sirsakkemudian dihaluskan hingga diperoleh serbukdaun sirsak kering berukuran 80 mesh.
Penyiapan Sampel Ekstrak
Penyiapan sampel ekstrak daun sirsakdilakukan dengan metode maserasi bertingkat mulai dari n-heksan; etil asetat; etanol; air dan dekok dengan air dengan perbandingan 1:10. Hasil dari maserasi dan dekok disaringdan filtratnya dikumpulkan. Filtrat kemudiandiuapkan dan dipekatkan menggunakan rotaryevaporator pada suhu 50oC sampai diperoleh
ekstrak daun sirsak.
Uji Aktivitas α-Amylase secara In Vitro
monosakarida oleh. Jika ekstrakmemiliki aktivitas penghambatan α -amilase, intensitas warna biru akan lebih. Dengan kata lain, intensitas warna biru dalam sampel uji berbanding lurus dengan aktivitas penghambatanα amilase (Sheikh et al., β008). aktivitas alfa-amilase dilakukan dengan metode pati-yodium. 10 µL dari larutan α- amilase (0,025 mg / mL) dicampur dengan 390 µL buffer fosfat (0,02 Mmengandung 0,006 M NaCl, pH 7,0) yang mengandung berbagai konsentrasi ekstrak. Setelah diinkubasi pada 37 ° C selama 10 menit, 100 µL larutan pati (1%) ditambahkan, dan campuran kembali diinkubasi selama 1 jam. Selanjutnya, 0,1 mL larutan iodine 1% ditambahkan, dansetelah menambahkan 5 ml air suling, absorbansi diambil pada 565 nm. Penentuan blanko,Sampel,substrat dan α- amilase dilakukan di bawah kondisi reaksi yang sama. Penghambatan aktivitas enzim dihitung sebagai (%) = (A-C) X100 / (B-C), mana, A = absorbansi sampel, B = absorbansi blanko (tanpa α-amilase), danC = absorbansi kontrol (tanpa pati).
Uji Aktivitas α-Glukosidase secara In Vitro
Pengujian terhadapdaya hambat aktivitas enzim α-glukosidasemenggunakan substrat p-nitrofenil-α-Dglukopiranosida(p-NPG) dan enzim αglukosidase.Larutan enzim dibuat denganmelarutkan 1.0 mg enzim α- glukosidasedalam larutan bufer fosfat (pH 7) yangmengandung 200 mg serum bovin albumin,sebelum digunakan enzim diencerkan 25 kalidengan bufer fosfat pH 7. Masing-masing sampel ekstrak daun sirsak dilarutkan dalam DMSO hingga konsentrasi 1,1.5, dan 2% (b/v). So digunakan sebagaikoreksi terhadap absorban ekstrak. Penghentian reaksi enzim substrat dilakukan dengan penambahan Na2CO3200 mM. Sistemreaksi seperti pada Tabel 1 disiapkan padamicroplate.Larutan kemudian diukurabsorbannya menggunakan pada panjang gelombang 400 nm.
Tabel 1 Sistem reaksi inhibisi α-glukosidase Blanko C S0 S1
Ekstrak (µL) - - 1 1
DMSO (µL) 1 1 - -
Bufer (µL) 49 49 49 49
Substrat 25 25 25 25
Inkubasi 37oC 5 menit
Bufer (µL) 25 - 25 -
Enzim (µL) - 25 - 25
Inkubasi 37oC 15 menit
Na2CO3(µL) 100 100 100 100
Keterangan:
Blanko = sistem reaksi tanpa adanya ekstrak dan enzim
C = campuran tanpa ekstrak S0= campuran tanpa enzim namundengan
ekstrak
S1 = campuran dengan enzim dan ekstrak Tablet akarbosa digunakansebagai kontrol positif.
Uji Fitokimia (Harborne 1987)
Uji fitokimia dilakukan pada ekstran yang mempunyai aktivitas inhibisi α amylase dan α glukosidase.
Identifikasi Alkaloid.
0.05 gram ekstrak daun sirsak diberi 10 mLkloroform dan beberapa tetes amoniak. Fraksikloroform dipisahkan dan diasamkan denganH2SO2 M. Fraksi asam diambil dan dibagimenjadi 3 bagian, kemudian ditambahkanpereaksi Dragendorf, Meyer, dan Wagner.Alkaloid ditandai denganterbentuknya endapan putih pada pereaksiMeyer, endapan merah pada pereaksiDragendorf, dan endapan coklat pada endapanpereaksi Wagner.
Identifikasi Flavonoid.
ditandai denganmunculnya warna merah, kuning, atau jinggapada lapisan amil alkohol.
Identifikasi Saponin.
0.05gram ekstrak daun sirsak ditambah airkemudian dididihkan selama beberapa menit.Larutan disaring dan filtratnya dikocok kuatkuat.Timbulnya buih yang stabil selama 10menit setelah pengocokkan menunjukkanterdapatnya saponin.
Identifikasi Tanin.
0.05 gramekstrak daun sirsak ditambah air kemudiandididihkan selama beberapa menit. Larutan inidisaring dan filtratnya ditambah FeCl3 1%(b/v). Warna biru tua atau hitam kehijauanmenunjukkan terdapatnya tanin.
Identifikasi Triterpenoiddan Steroid.
0.05 gram ekstrak daun sirsakditambah 25 mL etanol 30% lalu dipanaskanselama 5 menit dan disaring. Filtratnyadiuapkan lalu ditambah eter. Lapisan eterditambah pereaksi Lieberman Buchard. Warnamerah atau ungu menunjukkan triterpenoid.Warna hijau atau biru menunjukkan steroid.
3. HASIL DAN PEMBAHASAN
α-Amilasemerupakan salah satu enzim utama dalam tubuh manusia yang bertanggung jawab terhadapkatabolisme pati menjadi gula yang lebih sederhana. α- Amilase menghidrolisis polisakarida kompleks guna menghasilkan oligosakarida dan disakarida yang kemudian dihidrolisis lebih lanjut oleh α-glikosidase menjadi monosakarida yang diserap melalui usus kecil ke dalam pembuluh darah portal yang berakibat meningkatnya kadar glukosa postprandial. . inhibitor amilase juga dikenal sebagai pati blockers karena mencegah pati diserap oleh tubuh sehingga kadar glukosa postprandial menjadi rendah. Dengan memperlambat pencernaan dan pemecahan pati dimungkinkan memiliki efek menguntungkan pada resistensi insulin dan kontrol indeks glikemik pada penderita diabetes(Nair SS, 2013)
Ekstraksi
Proses ekstraksi dari simplisia daun Annona muricata Linn. dilakukan dengan cara maserasibertingkat berturut-turut dengan menggunakan pelarut heksan; etilasetat; etanol; air sebanyak 10 L selama 24. Ekstrak hasil penyarian dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 50oC. Skema ekstraksi dapat dilihat seperti gambar 1.Didapatkan rendemen ekstrak kering seperti yang ditunjukan ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil ekstrak daun sirsak
* dihitung terhadap 1kg simplisia kering Rendemen fraksi etil asetat yang tinggi dikarenakan dari polaritas dari etil asetat yang bersifat semi polar. Sesuai dengan asas like dissolves like maka sebagian besar senyawa baik yang polar maupun non polar akan terlarut didalamnya.
Gambar 1. Skema ekstraksi
Inhibisi α amylase
120
kurva konsentrasi (µg/ml) vs % inhibisi fraksi etanol
kurva konsentrasi (µg/ml) vs % inhibisi fraksi etanol
0
0 500 µg/ml 1000 1500
Fraksi ethanol menunjukan nilai IC50 sebesar 73,426µg/ml, sementara akarbose sebesar 0,502µg/ml. perbandingan IC50 dari masing- masing fraksi ditunjukkan seperti table 3.
Tabel 3. Nilai IC50 masing-masing fraksi IC50µg/ml
Fraksi heksan 10249 Fraksi Etil asetat 558,86 Fraksi Etanol 73,426 Fraksi Air 925,34 Fraksi Air dekok 3629,2
Akarbose 0,50241
Gambar 2. Kurva persen inhibisi terhadap konsentrasi fraksi etanol uji Inhibisi α amylase
Inhibisi α glukosidase
Sebagaimana pada uji Inhibisi α amylase pada ujiInhibisi α glukosidase fraksi ethanol memberikan nilai IC5064,425 µg/ml, sementara pembanding akarbose sebesar 0,034 µg/ml. perbandingan IC50 dari masing- masing fraksi ditunjukkan pada tabel4.
Tabel 4. Nilai IC50 masing-masing mempunya aktivitas inhibisi paling besar terhadap kedua enzim.Hasil uji fitokimia fraksi etanol ditunjukkan pada table 5.
Tabel 5.uji fitokimia ekstrak air danekstrak etanol daun sirsak
Uji Ekstrak Etanol
Alkaloid +
Keterangan: - = tidak terdeteksi + = terdeteksi
++ = terdeteksi lebih kuat
Dari skrining fitokimia kita dapat melihat bahwa adanya senyawa saponin, steroid dan flavonoid yang mungkin bertanggung jawab untuk aktivitas inhibisi ini.polifenol alami telah dilaporkan menghambat aktivitas karbohidrat hidrolisis enzim seperti α- amilase dan a-glukosidase(Tundis R, 2010).
% Fraksi heksan 1958,5 Fraksi Etil asetat 279,84 Fraksi Etanol 64,425 Fraksi Air 84,144 Fraksi Air dekok 168,93
4. SIMPULAN
Ekstrak etanol dari daun sirsak menunjukan aktivitas inhibisi enzim α amylase dan α glukosidase secara invitro sehingga dapat digunakansebagai agen antidiabetes disamping sebagai agen anti kanker yang telah dikenal di masyarakat. Ekstrak ini juga mengandung alkaloid, flavonoid,saponin, tanin, dan steroid sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terhadap senyawa yang bertanggung jawab terhadap aktivitas kedua enzim tersebut diatas.
5. REFERENSI
A. Ceriello, 2005.
Postprandialhyperglycemia and diabetes compli- cations: is it time to treat? Diabetes. s.l., s.n., pp. vol. 54, no. 1, pp. 1–7.
A. Horii, M. E. N. T. e. a., 1987. ―Primary structure of human pancreatic
ߙ
- amylase gene: its comparison with human salivaryߙ
-amylase gene,‖ Gene. s.l., s.n., pp. vol. 60, no. 1, pp. 57–64,.Adewole, S. a. E. C.-M., 2006. Morphological Changes and Hypoglycemic Effects of Annona Muricata Linn. (Annonaceae) Leaf Aqueous Extract on Pancreatic Β-Cells of Streptozotocin-Treated Diabetic Rats.. African Journal of Biomedical Research, Volume 9.
Bailey, C. A. D. C. (., 1989. Traditional treatments for diabetes.. Diabet Care, 12( 553-554).
Bories, C. L. P. C. D. M. S. H. R. G. P. C. A. a. L. A., 1991. . Anti-parasitic activity of Annona muricata and Annona cherimolia seeds.. Planta Med., 5.57(434-436.).
BS Ashok kumar, S. K. e. a., 2013. In vitro antidiabetic activity of Nisamalaki
Churna. Sains Malaysiana, 5(625- 628), p. 42.
Chehade, J. M. A., 2000. A rational approach to drug therapy of type 2 diabetes mellitus. Drugs. s.l., s.n., pp. 60, 95–113..
Christophe Gleyea, A. L. O. L. L. S. R. H., 1999. Isolation and structure elucidation of sabadelin, an acetogenin from roots of Annona muricata.. Phytochemistry., 52(1403-1404). dos Santos, A. a. S. A., 2000. Molluscicidal
properties of some species of Annona.. Phytomedicine., 8(115-120).
E. Bonora and M. Muggeo, 2001. Postprandial blood glucose as a risk factor for cardiovascular disease in type II diabetes: the epidemiological evidence, Diabetologia,. s.l., s.n., pp. vol. 44, no. 12, pp. 2107–2114.
E. Borges de Melo, A. d. S. G. a. I. C., 2006. ―
ߙ
- andߚ
-glucosidase inhibitors: chemical structure and biological activity,‖ Tetrahedron. s.l., s.n., pp. vol. 62, no. 44, pp. 10277–10302. Handelsman Y et al, 2013. Diabetes andCancer, Endocr Pract.. Florida, AACE, p. 677.
Heinrich, M. K. M. C. R. H. P. J. S. A. a. W. D., 1992. Parasitological and Microbiological Evaluation of Mixe Indian Medicinal Plants (Mexico). J. Ethnopharmacol. , 36(1):(81-85.). Ivan A. Ross, 2003. Medicinal Plant of The
World. New York: Springer Science+Business Media .
Jaramillo, M. C. A. G. J. G. M. R. S. a. V. I., 2000. Cytoxicity and antileishmanial activity of Annona muricata pericarp.. Fitoterapia., 71( 183-186.).
meta-analysis of prospective studies. . Arch Intern Med., 164(2147-55.). M Ranjan N., A. B. D. A. e., n.d. Effect on
Liver Enzymes due to Voglibose in Alloxan-Induced Diabetic Rabbits with Type-II Diabetes Mellitus, International Journal of PharmTech Research. s.l., s.n., pp. Vol.6, No.5, pp 1468-1475..
Moller, D., 2001. New drug targets for type 2 diabetes and the metabolic syndrome. Nature. s.l., s.n., pp. 414, 821–827.. Morris PG, H. C. G. D. e. a., 2011.
Inflammation and increased aromatase expression occur in the breast tissue of obese women with breast cancer. Cancer Prev Res (Phila).. s.l., s.n., pp. 4:1021-1029. Murray, d., 2003. Biokimia Harper’s.. Edisi
ke-25. ed. Japan.: EGC Japan..
N‟gouemo, P., 1λλ7. Effects of ethanol extract of Annona muricata on pentylenetetrazol-induced convulsive seizures in mice.. Phytother. Res. , 3.11(243-245.).
Nair SS, K. V. M., 2013. In vitro study on alpha amylase and alpha glucosidase inhibitory of activity selected plant extract. Eur J Exp Biol, 1(128-132), p. 3.
Oberlies, N. C. C. a. M. J., 1997. Structure– activity relationships of diverse Annonaceous acetogenins against multidrug resistant human mammary adenocarcinoma (MCF – 7/Adr) cells.. J. Med. Chem., 40 (13)(2102-2106.). Oberlies, N. C. C. a. M. J., 1997. Structure–
activity relationships of diverse Annonaceous acetogenins against multidrug resistant human mammary adenocarcinoma (MCF – 7/Adr) cells.. J. Med. Chem, 40 (13)(2102-2106).
P.C, F., 1962. Pharmacological screening of some West Indian medicinal plants.. J. Pharm. Pharmacol, 14(556-561.). Padma, P. P. N. T. S. a. K. R., 1998. Effect
of the extract of Annona muricata and Petunia nyctaginiflora on Herpes simplex virus.. J. Ethnopharmacol, 61(: 81-83.).
R. Quezada-Calvillo, C. C. R.-T. A. R. O. e. a., 2007. Contribution of mucosal maltase-glucoamylase activities to mouse small intestinal starch
ߙ
- glucogenesis, Journal of Nutrition. s.l., s.n., pp. vol. 137, no. 7, pp. 1725– 1733.R.A De Fronzo, D. ,. E. F. .., 1982. Hepatic and peripheral Insulin resistance: a common feature of type 2 and type 1 DM. Diabetologia,. s.l., s.n., pp. 23; 313-319.
R.H Unger, S. .., 1985. Hyperglycemia as an inducer as well as a consequence of impaired glet cell function and insulin resistance ; implication for the management of diabetes : Diabetologia,. s.l., s.n., pp. 28; 119- 121..
Raharja, T. d., 2007. Obat-obat Penting, Khasiat, Penggunaan dan Efek Samping,. Edisi VI, Cetakan Pertama, 65-88, ed. Jakarta: Penerbit Elex Media Komputindo,..
Roberts DL, D. C. R. A., 2010. Biological mechanisms linking obesity and cancer risk: new perspectives.. s.l., s.n., pp. 61:301-316.
Shaw, J. S. R. Z. P., 2010. Global estimates of the prevalence of diabetes for 2010 and 2030. Diabetes Research and Clinical Practice. s.l., s.n., pp. 87, 4– 14..
New Drugs.. International Journal of Pharmacy And Pharmaceutical Science, 1.Volume 1-23.
Subbaramaiah K, H. L. B. P. e. a., 2011. Obesity is associated with inflammation and elevated aromatase expression in the mouse mammary gland. Cancer Prev Res (Phila).. s.l., s.n., pp. 4:329-346..
Takeshi, K. S. N. Y. K. a. Y. I., (2002).. Report of the committee on the classification and diagnostic criteria of diabetes mellitus (The Committee of the Japan Diabetes Society on the diagnostic criteria of diabetes mellitus). s.l., s.n., pp. . 55: 65-85.. Tarlin CA, W. K. Z. R. B. H. B. G. A. R. W.
S., 2008. The Search for Human Pancreatic α Amylase Inhibitors: High-Throughput Screening of Terrestrial and Marine Natural Product Extracts. Chem Biochem. s.l., s.n., pp. 9;433-439..
Tundis R, L. M. M. F., 2010. Natural Product as alpha amylase and alpha glucosidase inhibitor and their hypoglicemic potential in teh treatment of diabetes: an update. Mini Rev Med Chem, 4(315-331), p. 10.
W. Popenoe, 1920. Manual of Tropical and Sub-Tropical Fruits,Hafner Press. New York, NY, USA, s.n.
Wallace, T. M. D., 2000. Poor glycaemic control in type 2 diabetes: a conspiracy of disease, suboptimal therapy and attitude. Quarterly Journal of Medicine. s.l., s.n., pp. 93, 369–374..
WHO, 2008. Traditional Medicine. http://www.who.int/mediacentre/factsh eets/fs134/en/>.
WHO, 2014. Traditional Medicine.. s.l., s.n., pp.<http://www.who.int/mediacentre/f ac-tsheets/fs134/en/>.
