Aktivitas Phenoloxidase dan Respiratory muscle

Aktivitas Phenoloxidase

Aktivitas phenoloxidase diukur dengan menggunakan spektrofotometrik dengan mencatat perubahan bentuk dopachrome yang diproduksi dari L-dihidroxyphenylalanine (L-DOPA). Hemolim yang telah diencerkan disentrifus 700 rpm pada suhu 4o_{C selama 20 menit. Larutan} supernatan yang dihasilkan dibuang dan pellet dicuci, kemudian dilarutkan kembali dengan cacodylatecitrate buffer (0.01M sodium cacodylate; 0.45 M sodium chloride; 0.01 M trisodium citrate; pada pH 7.0) lalu disentrifuge kembali. Pellet yang telah dilarutkan dengan 200 ml cacodylate buffer dan 100 ml aliquot kemudian diinkubasi dengan 50 ml trypsin (T-0303, Sigma, 1 mg/ml) yang berfungsi sebagai pengaktif selama 10 menit pada suhu 25-26o_{C; kemudian} ditambahkan 50 ml L-DOPA, yang dilanjutkan dengan 800 ml cacodylate buffer selama 5 menit. Kemudian mengatur optical density pada 490 nm. Larutan kontrol yang terdiri dari 100 µl larutan sel, 50 µl cacodylate buffer (untuk mengganti trypsin), dan 50 µl L-DOPA, digunakan untuk kontrol aktivitas phenoloxidase semua larutan yang akan diuji. Optical density aktivitas phenoloxidase udang yang diuji diekpresikan oleh bentuk dopachrome 50 µl hemolim (Hsieh et al. 2008).

Aktivitas Respiratory Burst