Lampiran 1. Perhitungan larutan sampel dan perhitungan sel 1. Perhitungan larutan sampel AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL RIMPANG LEMPUYANG GAJAH (Zingiber zerumbet L.) DAN RIMPANG LEMPUYANG EMPRIT (Zingiber littorale Val.) TERHADAP SEL KANKER PAYUDA

Lampiran 1. Perhitungan larutan sampel dan perhitungan sel

1. Perhitungan larutan sampel

Stok (100.000 µg/ml) = 50 mg ekstrak dalam 500 µl DMSO.

Sub stok (1000 µg/ml) = 10 µl (konsentrasi 100.000 µg/ml) ad media 1 ml. Rumus : C1 x V1 = C2 x V2

Keterangan : C1 = konsentrasi stok

C2 = Konsentrasi yang diinginkan V1 = Volume larutan stok

V2 = Volume total yang dibuat a. Konsentrasi 10 µg/ml (larutan uji 5 µg/ml)

C1 x V1 = C2 x V2 100 µg/ml x V1 = 10µg/ml x 400 µl  V1 = 40 µl

b. Konsentrasi 20 µg/ml (larutan uji 10 µg/ml)

C1 x V1 = C2 x V2 100 µg/ml x V1 = 10 µg/ml x 400 µl  V1 = 80 µl

c. Konsentrasi 50 µg/ml (larutan uji 25 µg/ml)

C1 x V1 = C2 x V2 1.000 µg/ml x V1 = 50 µg/ml x 400 µl  V1 = 20 µl

d. Konsentrasi 100 µg/ml (larutan uji 50 µg/ml)

C1 x V1 = C2 x V2 1.000 µg/ml x V1 = 100 µg/ml x 600 µl  V1 = 60 µl

e. Konsentrasi 200 µg/ml (larutan uji 100 µg/ml)

 V1 = 80 µl

f. Konsentrasi 300 µg/ml (larutan uji 150 µg/ml)

C1 x V1 = C2 x V2 1.000 µg/ml x V1 = 300 µg/ml x 400 µl  V1 = 120 µl

2. Perhitungan Sel

Sel 231₄ x 104 =577.500 sel/ml =2.887.500 sel/5ml Pengambilan sel =5000 _{2.887 .500}� 100x 5 ml

Lampiran 2. Pembuatan larutan MTT

Dibuat stok 50 mg serbuk MTT dilarutkan dalam 10 ml PBS sehingga diperoleh konsentrasi 5 mg/ml. Diinginkan konsentrasi larutan MTT untuk perlakuan adalah 0,5 mg/ml.

Perhitungan:

C1 x V1 = C2 x V2 5 mg/ml x V1 = 0,5 mg/ml x 10 ml  V1 = 1 ml

Lampiran 3. Perhitungan seri konsentrasi doxorubicin.

Sedian injeksi 2 mg/ml  2 g/L

 2

543,5 .

�/�

 3,68 x 10-3 M

 3,68 x 106 nM 1. Pembuatan stok (100.000 nM)

C1 x V1 = C2 x V2 3,68 x 106 nM x V1 = 100.000 nM x 500 µl  V1 = 13,6 µl

Jadi pengambilan dari sediaan injeksi 13,6 µl di ad kan 500 µl media 2. Pembuatan sub stok (1000 nM)

C1 x V1 = C2 x V2 100.000 nM x V1 = 1.000 nM x 500 µl  V1 = 5 µl

Jadi pengambilan dari stok 100.000 nM 5 µl di ad kan 500 µl media 3. Seri konsentrasi doxorubicin

No. Konsentrasi (nM)

Volume stok (µl)

Penambahan media (µl)

Pengambilan stok dari konsentrasi

(nM)

1 2,5 40 360 25

2 5 80 320 25

3 10 160 240 25

4 15 240 160 25

5 25 25 975 1000

6 50 20 380 1000

7 100 40 360 1000

8 150 60 340 1000

4. Perhitungan IC50

Y = -55,36X + 153,5

50 = -55,36X + 153,5

X = 1,8695981  antilog = 74,06

IC50 = 74,06 5. Konversi satuan

IC50 Doxorubicin = 74,06 nM = 74,06 �/� x 10-9

= 74,06 µ�/�

1000 � x 10

-3

= 74,06 µ�/�

� x 10

-6

Lampiran 4. Data hasil uji sitotoksik ekstrak etanol rimpang lempuyang emprit.

1. Absorbansi kontrol sel dan Kontrol media

Kontrol sel Rata2 k.sel Kontrol media Rata2 media k.sel-k.media 0,731

0,761

0,127

0,126 0,635

0,854 0,125

0,722 0,121

0,665 0,120

0,832 0,115

0,809 0,125

0,768 0,149

0,704 0,124

2. Absorbansi ekstrak etanol lempuyang emprit Konsentrasi

uji (µg/ml) log

Absorbansi % sel hidup rata2 % sel

hidup Rep.1 Rep.2 Rep.3 Rep.1 Rep.2 Rep.3

10 1,000 0,740 0,818 0,905 96,693 108,976 122,677 109,449 25 1,398 0,621 0,660 0,738 77,953 84,094 96,378 86,142 50 1,699 0,412 0,511 0,517 45,039 60,630 61,575 55,748 100 2,000 0,219 0,243 0,439 14,646 18,425 49,291 27,454 150 2,176 0,149 0,153 0,167 3,622 4,252 6,457 4,777

3. Grafik log konsentrasi terhadap persentase sel hidup (%)

0,000 20,000 40,000 60,000 80,000 100,000 120,000

0,000 1,000 2,000 3,000

p e rs e n ta s e s e l h id u p ( % )

log konsentrasi (ug/ml)

Lampiran 5. Data hasil uji sitotoksik ekstrak etanol rimpang lempuyang gajah.

1. Absorbansi kontrol sel dan kontrol media

Kontrol sel Rata-rata k.sel Kontrol media Rata-rata

media k.sel-k.media 0,721

0,846

0,107

0,105 0,741

0,682 0,102

0,832 0,104

0,836 0,107

0,846 0,101

0,886 0,105

0,973 0,109

0,994 0,106

2. Absorbansi ekstrak etanol lempuyang gajah Konsentrasi

uji (µg/ml) log

Absorbansi % sel hidup rata2 %

sel hidup Rep.1 Rep.2 Rep.3 Rep.1 Rep.2 Rep.3

5 0,699 0,655 0,572 0,661 74,195 62,995 75,004 70,731 10 1,000 0,627 0,665 0,623 70,445 75,574 69,906 71,975 25 1,398 0,44 0,172 0,423 45,209 9,042 42,915 32,389 50 1,699 0,253 0,262 0,342 19,973 21,188 31,984 24,381 100 2,000 0,118 0,109 0,118 1,754 0,540 1,754 1,350

3. Grafik log konsentrasi terhadap persentase kehidupan sel (%)

0,000 10,000 20,000 30,000 40,000 50,000 60,000 70,000 80,000

0,000 1,000 2,000 3,000

P e rs e n ta s e s e l h id u p ( % )

log konsentrasi (ug/ml)

Lampiran 6. Data hasil uji doxorubicin terhadap sel kanker payudara T47D

1. Kontrol sel dan kontrol media

kontrol sel

Rata-rata

kontrol sel media

Rata-rata media

kontrol sel -kontrol media 0.731

0.761

0.127

0.126 0.635

0.854 0.125

0.722 0.121

0.665 0.120

0.832 0.115

0.809 0.125

0.768 0.149

0.704 0.124

2. Doxorubicin Konsentrasi

uji (nM) log

Absorbansi % sel hidup rata2 %

sel hidup Rep.1 Rep.2 Rep.3 Rep.1 Rep.2 Rep.3

5 0.699 0.712 0.914 0.8 92.283 124.094 106.142 107.507 10 1.000 0.739 0.732 0.775 96.535 95.433 102.205 98.058 15 1.176 0.684 0.64 0.781 87.874 80.945 103.150 90.656 25 1.398 0.639 0.581 0.697 80.787 71.654 89.921 80.787 50 1.699 0.537 0.612 0.587 64.724 76.535 72.598 71.286 100 2.000 0.38 0.417 0.348 40.000 45.827 34.961 40.262 150 2.176 0.163 0.362 0.319 5.827 37.165 30.394 24.462

3. Grafik log konsentrasi terhadap % sel hidup

y = -55.36x + 153.5 R² = 0.946

0,000 20,000 40,000 60,000 80,000 100,000 120,000 140,000

0,000 1,000 2,000 3,000