LAPORAN PRAKTIKUM BIOREAKSI
ANALISIS KADAR VITAMIN C PADA BUAH TOMAT DENGAN VARIASI UMUR
Oleh:
1. Kiky Nur W.121810301005
2. Endah Retno K. 121810301019 3. Ines Dhara M.P. 121810301042 4. Lubabah Putri D. 121810301061
LABORATORIUM BIOKIMIA JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS JEMBER
2015
1.1 Latar Belakang
Vitamin merupakan suatu molekul organik yang sangat diperlukan tubuh untuk proses metabolisme dan pertumbuhan yang normal. Vitamin-vitamin ini dapat dibuat oleh tubuh manusia dalam jumlah yang cukup, oleh karena itu harus diperoleh dari bahan pangan yang dikonsumsi. Dalam bahan pangan hanya terdapat vitamin dalam jumlah yang relatif sangat kecil dan terdapat dalam bentuk yang berbeda-beda, diantaranya ada yang berbentuk provitamin atau calon vitamin yang dapat diubah dalam tubuh menjadi vitamin yang aktif.
Vitamin C atau asam askorbat adalah komponen berharga dalam makanan karena berguna sebagai antioksidan dan mengandung khasiat pengobatan. Vitamin C mudah diabsorpsi secara aktif, tubuh dapat menyimpan hingga 1500 mg vitamin C bila di konsumsi mencapai 100 mg sehari. Jumlah ini dapat mencegah terjadinya skorbut selama tiga bulan. Tanda-tanda skorbut akan terjadi bila persediaan di dalam tubuh tinggal 300 mg. Konsumsi melebihi taraf kejenuhan akan dikeluarkan melalui urin.
Vitamin C pada umumnya hanya terdapat di dalam pangan nabati, yaitu sayur dan buah seperti jeruk, nenas, rambutan, papaya, gandaria, tomat, dan bawang putih (Allium sativumL). Peranan utama vitamin C adalah dalam pembentukan kolagen interseluler.Kolagen merupakan senyawa protein yang banyak terdapat dalam tulang rawan, kulit bagian dalam tulang, dentin, dan vasculair endothelium. Asam askorbat sangat penting peranannya dalam proses hidroksilasi dua asam amino prolin dan lisin menjadi hidroksi prolin dan hidroksilisin.Penetapan kadar Vitamin C dalam suasana asam akan mereduksi larutan dye membentuk larutan yang tidak berwarna. Apabila semua asam askorbat sudah mereduksi larutan dye sedikit saja akan terlihat dengan terjadinya perubahan warna (merah jambu).
Terdapat beberapa metode untuk mengetahui kadar vitamin C pada suatu bahan pangan. Diantaranya adalah metode titrasi dan metode spektrofotometri yang akan dibandingkan hasilnya pada praktikum ini.
1.2 Rumusan Masalah
1.2.1 Bagaimana cara menganalisis kadar vitamin C pada tomat dengan menggunakan metode titrasi iodimetri dan metode spektrofotometri?
1.2.2 Bagaimana perbandingan kadar hasil dari kedua metode tersebut?
1.3 Tujuan Percobaan
Tujuan dari percobaan ini antara lain:
1.3.1 Mengetahui kadar vitamin C pada buah tomat.
1.3.2 Mengetahui perbandingan kadar vitamin C dari kedua metode. 1.4 Manfaat Percobaan
Manfaat pecobaan ini adalah :
1.4.1 Mengatahui cara menetukan kandugan vitamin suatu bahan atau sampel 1.4.2 Dapat menentukan perbandingan kadar vitamin C dengan metode titrasi dan
metode spektrofotometri
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Vitamin C
Asam askorbat (vitamin C) adalah turunan heksosa dan diklasifikasikan sebagai karbohidrat yang erat kaitannya dengan monosakarida. Vitamin C dapat disintesis dari D-glukosa dan D-galaktosa dalam tumbuh-tumbuhan dan sebagian besar hewan. Vitamin C terdapat dalam dua bentuk di alam, yaitu L-asam askorbat (bentuk tereduksi) dan L-asam dehidro askorbat (bentuk teroksidasi). Oksidasi bolak-balik L-asam askorbat menjadi L-asam dehidro askorbat terjadi apabila bersentuhan dengan tembaga, panas, atau alkali (Akhilender, 2003).
Vitamin C mempunyai banyak fungsi di dalam tubuh. Pertama, fungsi vitamin C adalah sebagai sintesis kolagen. Karena vitamin C mempunyai kaitan yang sangat penting dalam pembentukan kolagen. Karena vitamin C diperlukan untuk hidroksilasi prolin dan lisin menjadi hidroksiprolin yang merupakan bahan penting dalam pembentukan kolagen. Kolagen merupakan senyawa protein yang mempengaruhi integritas struktur sel di semua jaringan ikat, seperti pada tulang rawan, matriks tulang, gigi, membrane kapiler, kulit dan tendon. Dengan demikian maka fungsi vitamin C dalam kehidupan sehari-hari berperan dalam penyembuhan luka, patah tulang, perdarahan di bawah kulit dan perdarahan gusi. Asam askorbat penting untuk mengaktifkan enzim prolil hidroksilase, yang menunjang tahap hidroksilasi dalam pembentukan hidroksipolin, suatu unsure integral kolagen. Tanpa asam askorbat, maka serabut kolagen yang terbentuk di semua jaringan tubuh menjadi cacat dan lemah. Oleh sebab itu, vitamin ini penting untuk pertumbuhan dan kekurangan serabut di jaringan subkutan, kartilago, tulang, dan gigi (Guyton, 2007).
Sumber Vitamin C sebagian besar tergolong dari sayur-sayuran dan buah-buahan terutama buah-buah-buahan segar. Asupan gizi rata-rata sehari sekitar 30 sampai 100 mg vitamin C yang dianjurkan untuk orang dewasa. Namun, terdapat variasi kebutuhan dalam individu yang berbeda (Sweetman, 2005).
Tomat merupakan salah satu buah dan sayuran yang mengandung Vitamin C. Tomat merupakan salah satu sayuran yang mengandung vitamin C. Dalam satu buah tomat segar ukuran sedang (100 gram) mengandung sekitar 30 kalori, 40 mg vitamin C, 1500 SI vitamin A, 60 ug tiamin (vitamin B), zat besi, kalsium dan lain-lain (Depkes RI, 1972). Menurut Tonucci et al (1995) komposisi zat gizi yang terkandung di buah tomat cukup lengkap. Vitamin A dan C merupakan zat gizi yang jumlahnya cukup dominan dalam buah tomat. Menurut Jungs and Wells (1997) vitamin C dapat berbentuk sebagai asam askorbat dan asam L-dehidroaskorbat yang keduanya mempunyai keaktifan sebagai vitamin C.
Kandungan vitamin C yang cukup tinggi pada tomat berperan untuk mencegah penyakit sariawan, memelihara kesehatan gigi dan gusi, mempercepat sembuhnya luka serta mencegah kerusakan atau pendarahan pada pembuluh darah halus. Senyawa likopen dapat menurunkan risiko terkena kanker, terutama kanker prostat, lambung, tenggorokan dan kanker usus besar. Kandungan asam klorogenat dan asam p-kumarat di dalam tomat mampu melemahkan zat nitrosamin penyebab kanker (Tri Dewanti, 2010).
2.2 Macam-macam Analisa Vitamin C
Terdapat beberapa metode untuk mengetahui kadar vitamin C pada suatu bahan pangan yaitu metode titrasi dan metode spektrofotometri.
a. Metode Titrasi
1. Metode Titrasi 2,6 D (Dichloroindophenol)
Metode ini menggunakan 2,6 D dan menghasilkan hasil yang lebih spesifik dari titrasi yodium. Pada titrasi ini, persiapan sampel ditambahkan asam oksalat atau asam metafosfat, sehingga mencegah logam katalis lain mengoksidasi vitamin C. Namun, metode ini jarang dilakukan karena harga dari larutan 2,6 dan asam metafosfat sangat mahal (Wijanarko, 2002).
Titrasi Asam Basa merupakan contoh analisis volumetri, yaitu, suatu cara atau metode, yang menggunakan larutan yang disebut titran dan dilepaskan dari perangkat gelas yang disebut buret. Bila larutan yang diuji bersifat basa maka titran harus bersifat asam dan sebaliknya. Untuk menghitungnya kadar vitamin C dari metode ini adalah dengan mol NaOH = mol asam Askorbat (Sastrohamidjojo, 2005).
3. Iodium
Metode ini paling banyak digunakan, karena murah, sederhana, dan tidak memerlukan peralatan laboratorium yang canggih. titrasi ini memakai Iodium sebagai oksidator yang mengoksidasi vitamin C dan memakai amilum sebagai indikatornya. (Wijanarko, 2002).
Kadar vitamin C ini dapat ditentukan dengan dengan metode Iodimetri. Metode ini paling banyak digunakan, karena murah, sederhana, dan tidak memerlukan peralatan laboratorium yang canggih. Titrasi ini memakai Iodium sebagai oksidator yang mengoksidasi vitamin C dan memakai amilum sebagai indikatornya. (Wijanarko, 2002). Metode titrasi iodimetri langsung (iodimetri) mengacu kepada titrasi dengan suatu larutan iod standar. Metode titrasi iodimetri tak langsung (iodimetri) adalah berkenaan dengan titrasi dari iod yang dibebaskan dalam reaksi kimia (Bassett, 1994). Larutan standar yang digunakan dalam proses ini adalah larutan I2.
Iodimetri merupakan analisis titrimetri yang secara langsung digunakan untuk zat reduktor atau natrium tiosulfat dengan menggunakan larutan iodin atau dengan penambahan larutan baku berlebihan. Kelebihan iodine dititrasi kembali dengan larutan tiosulfat.
2Na2S2O3 + I2 → 2NaI + Na2S4O6
(Rivai, 1995).
langsung iodium murni dan pengenceran dalam botol volumetrik. Iodium, dimurnikan dengan sublimasi dan ditambahkan pada suatu larutan KI pekat, yang ditimbang dengan teliti sebelum dan sesudah penembahan iodium. Akan tetapi biasanya larutan distandarisasikan terhadap suatu standar primer, As2O3 yang paling biasa digunakan (Rivai,1995).
Metode titrasi iodimetri langsung (kadang-kadang dinamakan iodimetri) mengacu kepada titrasi dengan suatu larutan iod standar. Metode titrasi iodimetri tak langsung (kadang-kadang dinamakan iodimetri), adlaah berkenaan dengan titrasi dari iod yang dibebaskan dalam reaksi kimia. Potensial reduksi normal dari system reversible
I2 +2e →2I
-(Rivai, 1995).
Reaksi-reaksi kimia yang melibatkan oksidasi reduksi dipergunakan secara luas oleh analisis titrimetrik. Ion-ion dari berbagai unsur dapat hadir dalam kondisi oksidasi yang berbeda-beda, menghasilkan kemungkinan banyak reaksi redoks. Banyak dari reaksi-reaksi ini memenuhi syarat untuk dipergunakan dalam analisi titrimetrik dan penerapan-penerapannya cukup banyak (Rivai, 1995).
Kadar Vitamin C dapat dihitung dengan menggunakan rumus : %Kadar Vit C =
b. Metode Spektrofotometri
BAB 3. METODOLOGI PERCOBAAN
3.1 Alat dan Bahan Percobaan 3.1.1 Alat
-Kaca Arloji 2 buah
-Neraca 1 buah
-Pisau 1 buah
-Mortal Alu 1 buah
-Labu Ukur 100 mL 1 buah -Corong kaca 1 buah -Kertas saring 2 buah -Gelas Ukur 10 mL 1 buah -Gelas Kimia 100 mL 2 buah
- Pipet Tetes 10 buah
3.2.1 Standarisasi Larutan I2 0,01 N
3.2.2 Analisa Kadar Vitamin C dengan Metode Titrasi Iodimetri
Diambil 10 mL dan dimasukkan dalam Erlenmeyer
Ditambahkan 3 tetes amilum 1 %
Ditambah 20 mL aquades
Kemudian dititrasi dengan larutan standar I2 0.01 N
3.2.3 Analisa Kadar Vitamin C dengan Metode Spektrofotometri a. Pembuatan Kurva Standar
Ditimbang 20 mg asam askorbat
Dilarutkan dalam akuades sampai tanda batas 100 mL
Diukur absorbansi dengan Spektrofotometer UV pada panjang gelombang maksimum (271 nm)
b. Penentuan Kadar Vitamin C
Ditimbang 2 gram sampel vitamin c yang telah dihaluskan
Dilarutkan dalam labu ukur sampai volume 250 mL dengan akuades
Diukur absorbansi dengan Spektrofotometer UV pada panjang gelombang maksimum (271 nm)
BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Hasil
a. Metode Titrasi Iodimetri
Umur Tomat Volume Kadar Vitamin C
Tomat Muda
V1= 1,6 mL
V2= 1,1 mL
V3= 1,5 mL
15,4 %
Tomat Sedang
V1= 1 mL
V2= 1,1 mL
V3= 1mL
11,33 %
Tomat Tua
V1= 0,7 mL
V2=0,7 mL
V3=0,5 mL
6,93 %
b. Metode Spektrofotometri
4.2 Pembahasan
Buah tomat merupakan salah satu buah yang mengandung vitamin C, namun kadar vitamin C yang terkandung dalam buah tomat bervariasi berdasarkan umurnya. Pada percobaan ini dilakukan analisis kandungan vitamin C pada buah tomat dengan variasi umur, yakni pada tomat muda, tomat sedang dan tomat tua. Analisis kadar vitamin C ini dilakukan dengan 2 metode, yakni metode titrasi dan metode spektrofotometer.
Langkah awal untuk metode titrasi adalah persiapan sampel yaitu dengan menimbang masing-masing sampel dengan berat 8 gram. Kemudian sampel tersebut dihaluskan sampai terbentuk slurry dengan menggunakan mortal alu dimana fungsi penghancuran ini adalah untuk mempermudah vitamin C larut dalam air. Slurry yang didapatkan kemudian diencerkan dalam 100 mL akuades sehingga didapatkan sampel buah tomat berwarna hijau, orange dan merah muda. Setelah pengenceran dilakukan, sampel didiamkan selama 15 menit sambil dikocok sesekali. Hal ini dilakukan agar vitamin C benar-benar larut dalam aquades.
Langkah berikutnya dilakukan penyaringan kemudian dari masing-masing sampel diambil filtratnya 10 mL sebanyak 3 kali dan dimasukkan dalam labu erlenmeyer. Kemudian ditambah 3 tetes amilum 1% dan kemudian sampel dititrasi menggunakan larutan Iodium 0,01N yang berwarna. Penambahan indikator amilum akan membentuk kompleks dengan I2. Setelah tercapai titik
akhir titrasi, maka diperoleh data volume Iodium yang digunakan untuk menitrasi sampel. Berdasarkan hasil titrasi sampel dapat diketahui bahwa kadar vitamin C dalam 8 gram buah tomat masing-masing dari tua ke muda adalah 6,93%, 11,33% dan 15,4%. Kadar vitamin C di atas menunjukkan bahwa semakin muda umur tomat maka semakin banyak vitamin C yang terkandung. Metode yang digunakan kurang benar karena seharusnya indikator amilum ditambahkan setelah mendekati titik akhir titrasi. Hal ini karena jika amilum ditambahkan diawal dia akan membungkus I2 yang menyebabkan sukar lepas kembali dan menyebabkan warna
digunakan haruslah selalu dalam keadaan segar dan baru karena kanji mudah terurai oleh bakteri.
Selain dengan metode titrasi analisis kadar vitamin C dapat dilakukan dengan metode Spektrometri. Prinsip kerja spektrofotometri berdasarkan hukum Lambert-Beer adalah bila cahaya monokromatik melalui suatu media (larutan), maka sebagian cahaya tersebut diserap sebagian dipantulkan dan sebagian lagi dipancarkan. Absorbansi asalah cahaya yang diserap oleh larutan dan diukur oleh Spektrofotometer. Spektrofotometer yang digunakan adalah Spektrofotometer UltraViolet karena standar yang digunakan adalah asam askorbat yang merupakan larutan tidak berwarna sehingga panjang gelombang yang digunakan kurang dari panjang gelombang sinar tampak, dimana panjang gelombang maksimum yang digunakan sesuai dengan referensi adalah 271 nm.
Standar asam askorbat merupakan standar dari vitaman C, karena vitamin C yang terkandung dalam buah tomat adalah akibat adanya asam askorbat sehingga untuk menentukan kadar vitamin C dalam buah tomat ini digunakan asam askorbat. Standar asam askorbat sebanyak 20 mg dilarutkan dalam 100 mL akuades. Dari larutan induk 200 ppm tersebut dibuat larutan dengan konsentrasi 4 ppm, 8 ppm, 12 ppm dan 16 ppm. Standar tersebut kemudian diukur absorbansinya dengan panjang gelombang maksimum yang telah ditentukan. Data pengukuran menunjukkan bahwa absorbansi dari asam askorbat linear, seiring dengan kenaikan konsentrasi absorbansinya semakin besar sesuai dengan grafik data absorbansi dibawah ini:
Berdasarkan grafik tersebut diberoleh persamaan linearitas dari standar asam askorbat yakni y = 0,0153x + 0,063 dengan regresi 96,86%. Menggunakan persamaan tersebut dapat ditentukan kadar vitamin c pada masing-masing variasi buah tomat. Berdasarkan perhitungan diperoleh kadar vitamin c pada tomat muda dengan massa 3 gram diencerkan dalam 250 mL adalah 3,390 ppm, pada tomat sedang adalah 0,196 ppm dan pada tomat tua 0,065 ppm. Data tersebut menunjukkan bahwa semakin tua tomat yang dianalisis semakin kecil kadar vitamin C-nya. Hal ini dikarenakan adanya metabolisme dalam buah tomat yang mampu mempengaruhi kadar vitamin C-nya berkurang.
Gambar 1. Reaksi Oksidasi Vitamin C
Efisiensi antioksidan vitamin C sangat besar pada konsentrasi vitaminyang rendah, pada kondisi tersebut reaksi yang predominan adalah reaksipemutus. Pada konsentrasi tinggi, vitamin C menghambat secara signifikanreaksi rantai yang berlanjut antara asam askorbil dan molekul oksigen. Fungsimetabolik vitamin C sebagai kofaktor enzim (hydroxilating enzymes), agenprotektif (hydroxylases pada biosintesis collagen), dan sebagai radikal yangbereaksi dengan metal ion (Carr 1999).
BAB 5. PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Kesimpulan yang dapat diambil dari percobaan tentang Analisis Kadar Vitamin C Pada Buah Tomat Dengan Variasi Umur adalah
1. Penentuan kadar vitamin C dapat dilakukan dengan metode titrasi iodimetri dan metode spektrofotometri UV. Titrasi Iodimetri menggunakan I2 dan
indikator amilum sedangkan metode spektrofotometri UV menggunakan asam askorbat sebagai larutan standard dengan variasi konsentrasi.
2. Perolehan hasil dari metode titrasi iodimetri maupun metode spektrofotometri membuktikan bahwa tomat muda mengandung lebih banyak vitamin C dibandingkan dengan tomat sedang dan tomat tua
5.2 Saran
LAMPIRAN
1. Metode Titrasi Iodimetri a. Tomat Tua
V1= 0,7 mL
V2=0,7 mL
V3=0,5 mL
Vrata-rata=
%Kadar Vit C =
= = 6,93%
b. Tomat Sedang V1= 1 mL
V2= 1,1 mL
V3= 1mL
Vrata-rata=
%Kadar Vit C =
= =11,33 %
V1= 1,6 mL
V2= 1,1 mL
V3= 1,5 mL
Vrata-rata=
%Kadar Vit C =
= = 15,4%
2. Metode Spektrofotometri
Perhitungan kadar vitamin C berdasarkan persamann y = 0,0153x + 0,063
Variasi Tomat Muda Absorbansi
Tomat Muda 0,115
Tomat sedang 0,066
Tomat tua 0,064
Tomat muda: y = 0,0153x + 0,063 0,115= 0,0153 x + 0,063 0,115 – 0,063 = 0,0153 x X = 0,052 / 0,0153 X = 3,39 ppm
y = 0,0153x + 0,063 0,066 = 0,0153x + 0,063 0,066 – 0,063 = 0,0153 x X = 0,003 / 0,0153 X = 0,196 ppm Tomat tua:
