SKRIPSI
STUDI FARMAKOGNOSI RIMPANG dan
UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA MINYAK
ATSIRI RIMPANG LENGKUAS
(
Alpinia galanga
L )
UTAMI KHOERUNNISA
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS
AIRLANGGA DEPARTEMEN
FARMAKOGNOSI DAN FITOKIMIA
i
SKRIPSI
STUDI FARMAKOGNOSI RIMPANG dan UJI
AKTIVITAS ANTIMIKROBA MINYAK ATSIRI
RIMPANG LENGKUAS (
Alpinia galanga
L )
UTAMI KHOERUNNISA
051111229
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA
DEPARTEMEN FARMAKOGNOSI DAN FITOKIMIA
ii
LEMBAR PERSETUJUAN
PUBLIKASI KARYA ILMIAH
Untuk perkembangan ilmu pengetahuan, dengan ini saya menyetujui skripsi/karya ilmiah saya, dengan judul:
STUDI FARMAKOGNOSI RIMPANG dan UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA MINYAK ATSIRI RIMPANG LENGKUAS
(Alpinia galangaL )
Untuk dipublikasikan atau ditampilkan di internet atau media lain yaitu digital library Perpustakaan Universitas Airlangga untuk kepentingan akademik sebatas sesuai dengan Undang-Undang Hak cipta.
Demikian pernyataan persetujuan publikasi skripsi/karya ilmiah ini saya buat dengan sebenarnya.
Surabaya, 14 Agustus 2015
Utami Khoerunnisa
iii
LEMBAR PERNYATAAN
Saya yang bertanda tangan dibawah ini,
Nama : Utami Khoerunnisa
NIM : 051111229
Fakultas : Farmasi
Dengan ini menyatakan dengan sesungguhnya bahwa hasil skripsi/ tugas akhir yang saya tulis dengan judul :
STUDI FARMAKOGNOSI RIMPANG dan UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA MINYAK ATSIRI RIMPANG LENGKUAS
(Alpinia galangaL )
Adalah benar merupakan hasil karya saya sendiri. Apabila dikemudian hari diketahui bahwa skrpsi ini menggunakan data fiktif atau hasil dari plagiarisme, maka saya bersedia menerima sanksi berupa pembatalan kelulusan dan atau pencabutan gelar yang saya peroleh.
Demikian surat pernyatan ini saya buat untuk dipergunakan sebagaimana semestinya.
Surabaya, 14 Agustus 2015
iv Lembar pengesahan
STUDI FARMAKOGNOSI RIMPANG dan UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA MINYAK ATSIRI RIMPANG LENGKUAS (Alpinia
galangaL )
SKRIPSI
Dibuat untuk Memenuhi Syarat Mencapai Gelar Sarjana Farmasi Pada Fakultas Farmasi Universitas Airlannga
2015
Oleh :
UTAMI KHOERUNNISA NIM : 051111229
Disetujui Oleh :
Pembimbing Utama Pembimbing serta
v
KATA PENGANTAR
Puji syukur ke hadirat Allah SWT karena dengan rahmat dan ridho Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “STUDI
FARMAKOGNOSI RIMPANG dan UJI AKTIVITAS
ANTIMIKROBA MINYAK ATSIRI RIMPANG LENGKUAS (Alpinia galangaL )”, untuk memenuhi syarat memperoleh gelar sarjana farmasi pada fakultas farmasi Universitas Airlannga.
Dalam penyusunan naskah penulis telah memperoleh bantuan dari berbagai pihak. Sehingga, pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan rasa terima kasih yang tak terhingga atas kesempatan, bimbingan, doa, dukungan, kerjasama, bantuan dan ilmu yang telah dibagikan kepada :
1. Prof. Dr. Mangestuti Agil, Apt., M.S., selaku pembimbing utama 2. Neny Purwitasari, S. Farm., M.Sc, selaku pembimbing serta 3. Yuni Priyandani, S.Si., Apt., Sp.FRS, selaku dosen wali
4. Dr. Achmad Fuad H., M.S. Dan Dr. Aty Widyawaruyanti, M.Si., selaku dosen penguji
5. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Airlangga
6. Ketua Departemen Farmakognosi dan Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Airlangga
7. Staf pengajar Fakultas Farmasi Universitas Airlangga
8. Staf Unit Layanan Pengujian Fakultas Farmasi Universitas Airlangga
9. Seluruh staf laboratorium di Departemen Farmakognosi dan Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Airlangga
vi
11. Ibunda Rohimah, Ayahanda Tarjudin dan keluarga besar 12. Rekan mahasiswa angkatan 2011
13. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu
Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pengembangan ilmu pengetahuan khususnya pada bidang kefarmasian.
vii RINGKASAN
STUDI FARMAKOGNOSI RIMPANG dan UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA MINYAK ATSIRI RIMPANG LENGKUAS
(Alpinia galangaL )
Utami Khoerunnisa
Alpinia galangaberasal dari Famili Zingiberaceae. Famili ini tersebar luas pada daerah tropis khususnya daerah Asia Tenggara (Habsah, 1999). Tumbuhan ini mudah ditemukan di hutan, (Paliwal, 2014). Pada pengobatan tradisional Cina tumbuhan ini digunakan untuk menghilangkan sakit perut, mengobati flu (Srividya et al., 2010). Rimpang dan bunga dari tumbuhan ini juga digunakan untuk penambah rasa pada masakan Asia. Rimpang muda dari tumbuhan ini sering digunakan untuk masakan Thailand (Weiet al., 2010). Minyak atsiri dan ekstrak dari rimpang ini telah dipelajari secara luas dan terbukti sebagai antijamur, antimikroba, antiamoeba, antioksidan (Wei et al., 2010). Berdasarkan beberapa penelitian tersebut sehingga dilakukan penelitian ini yang bertujuan untuk membantu memastikan kualitas, keamanan, mutu.
Studi farmakognosi meliputi anatomi dan morfologi, skrining fitokimia, dan parameter fisikokimia. Selain itu dilakukan penelitian mengenai uji aktivitas antimikroba dari minyak atsiri. Untuk mendapatkan data anatomi dan morfologi dilakukan pemeriksaan berupa studi makroskopik dan mikroskopik. Skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung dalam tumbuhan ini. Parameter fisiko-kimia meliputi parameter sari larut dalam pelarut tertentu, penetapan kadar minyak atsiri, susut pengeringan, penetapan kadar air, dan parameter kadar abu. Uji aktivitas bertujuan untuk menguji kemampuan minyak atsiri tersebut dilakukan dengan melihat daya hambat minyak atsiri terhadapStaphylococcus aureus, Eschericia colidan jamur Candida albicans.
viii
ix ABSTRACT
PHARMACOGNOSTIC STUDY OF RHIZOME AND ANTIMICROBIAL ACTIVITY FROM ESSENTIAL OILAlpinia
galangaL RHIZOME
Utami Khoerunnisa
Alpinia galanga belongs to Family Zingiberaceae. The Zingiberaceae is among are widely distributed throughout the tropics particulary southeast Asia. The rhizome has been used as a traditional medicine in China for relieving stomach ache, treating cold. In addition, its rhizome and flowers are popular additions to Asian cuisine. The young rhizome of galangal are often used in Thai cooking for their pungently sweet, peppery, ginger-like flavor. The essential oils and extracts of greater galangal rhizome have been studied extensively and have been proven to exhibit antifungal, antimicrobial, antiamoebic and antioxidant activities.
Morphology and anatomy data were obtained through macroscopic and microscopic characteristic observation. The result showed macroscopic dimension, length 7-12 cm(s); weight 2-3 cm(s); shape cylindrical; present rootlets and then microscopic they are epidermis; cortex; starch; vascular bundle, endodermis, sclerenchym bundle; secretion cell consist of essential oil. The phytochemical screening shows the presence of flavonoid and terpenoid in Alpinia galanga L. The physicochemical value are water soluble substances (33.1228± 0.6608) %, alcohol soluble substances (16.9611± 0.3599) %, the yield of essential oil 0.35 %v/b, loss on drying (14.3990 ± 0.1720) %, ash value (7.5285± 0.1623) %, ash insoluble acid (2.9255± 0.1157) %, ash soluble water (2.9720± 0.0328) %. Antimicrobial activity of essential oil showed to inhibit Staphylococcus aureus and Candida albican with MIC value 0.06% v/v and 0.093% v/v.
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL... i
LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI ILMIAH... ii
LEMBAR PERNYATAAN... iii
BAB I PENDAHULUAN... 1
1.1 Latar Belakang... 1
1.2 Rumusan Masalah... 3
1.3 Tujuan Penelitian... 3
1.4 Manfaat Penelitian... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA... 5
2.1 Tinjauan tentangAlpinia galangaL. Willd... 5
2.1.1 Klasifikasi... 5
2.1.2 Nama Daerah... 6
2.1.3 Morfologi Tanaman... 6
2.1.4 Ekologi dan Penyebaran... 6
2.1.5 Kandungan Metabolit... 6
2.1.6 Kegunaan Tanaman... 7
2.2 Tinjauan tentang Pengamatan Maksroskopis... 8
2.3 Tinjauan tentang Pengamatan Mikroskopis... 8
2.5 Tinjauan tentang Ekstrak... 9
2.5.1 Definisi Ekstrak... 9
2.5.2 Proses Pembuatan Ekstrak... 9
2.5.3 Metode Ekstraksi... 10
2.6 Tinjauan tentang Maserasi... 12
2.7 Tinjauan tentang Skrining Fitokimia... 12
2.8 Tinjauan tentang Fisikokimia... 13
2.9 Tinjauan tentang Destilasi... 14
2.10 Tinjauan tentang Minyak Atsiri... 14
2.11 Tinjauan tentang GC-MS... 14
2.12 Tinjauan tentang Mikroba... 15
2.13 Tinjauan tentang Cara Penentuan Efek Antimikroba... 17
2.14 Tinjauan tentang Antibiotik... 18
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL... 19
BAB IV METODE PENELITIAN... 21
4.1 Bahan Penelitian... 21
4.1.1 Tanaman... 21
4.1.2 Bahan... 21
4.2 Alat Penelitian... 21
4.3 Pengamatan Morfologi... 22
4.4 Pengamatan Anatomi ... 22
4.5 Pengamatan Organoleptis... 22
4.6 Skrining Fitokimia Ekstrak... 22
4.6.1 Pemeriksaan Alkaloid... 22
4.6.2 Pemeriksaan Saponin... 23
4.6.3 Pemeriksaan Flavonoid... 25
4.6.4 Pemeriksaan Tanin... 26
4.6.5 Pemeriksaan Glikosida Antrakuinon... 27
4.7 Parameter Fisiko-Kimia... 28
4.7.1 Penentuan Parameter Sari Larut dalam Pelarut Tertentu... 28
4.7.2 Kadar Total Golongan Kandungan Kimia... 29
4.7.3 Susut Pengeringan... 30
4.7.4 Parameter Kadar Abu... 31
4.8 Destilasi dan Sifat Fisika Minyak Atsiri... 31
4.9 Uji Aktivitas Antimikroba... 32
4.10 Kerangka Penelitian... 37
BAB V HASIL PENELITIAN... 39
5.1 Pemeriksaan Morfologi... 39
5.2 Pemeriksaan Anatomi... 42
5.2.1 Pengamatan Irisan Melintang... 42
5.2.2 Pengamatan Fragmen Serbuk... 44
5.3 Pengamatan Organoleptis... 48
5.4 Skrining Fitokimia... 48
5.5 Parameter Fisiko-Kimia... 52
5.5.1 Penetapan Kadar Sari Yang Larut Dalam Air... 52
5.5.2 Penetapan Kadar Sari Yang Larut Dalam Etanol... 53
5.5.3 Penetapan Kadar Minyak Atsiri... 53
5.5.4 Penetapan Susut Pengeringan... 54
5.5.5 Penetapan Kadar Abu... 55
5.5.6 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam... 56
5.5.7 Penetapan Kadar Abu Larut Dalam Air... 56
5.6 Destilasi Minyak atsiri... 57
5.7 Uji Kandungan Minyak Atsiri menggunakan GC-MS... 58
5.8 Uji Aktivitas Antimikroba... 61
DAFTAR TABEL
5.1 pengamatan morfologi secara makroskopis ... 39
5.2 pengamatan organoleptis... 48
5.3 berat bahan dan ekstrak rimpang laos... 48
5.4 skrining fitokimia ekstrak etanol 96% rimpangAlpinia galanga... 51
5.5 Penetapan kadar sari yang larut dalam air... 52
5.6 penetapan kadar sari yang larut dalam etanol... 53
5.7 penetapan kadar minyak atsiri... 54
5.8 penetapan susut pengeringan... 54
5.9 penetapan kadar abu... 55
5.10 penetapan kadar abu tidak larut asam... 56
5.11 penetapan kadar abu larut air... 57
5.12 komponen minyak atsiriAlpinia galanga... 59
5.13 aktivitas antijamurC.albicans... 62
5.14 aktivitas antibakteriE.coli... 62
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 RimpangAlpinia galanga... 5
Gambar 3.1 Skema kerangka konsep... 20
Gambar 4.1 Skema pembuatan larutan uji... 35
Gambar 4.2 Skema kerangka penelitian... 38
Gambar 5.1 Rimpang Alpinia galanga... 39
Gambar 5.2 Lebar Rimpang saat dipotong Melintang... 40
Gambar 5.3 rimpang saat dipotong melintang... 40
Gambar 5.4 serabut kasar pada rimpang... 40
Gambar 5.5 simplisia rimpang... 41
Gambar 5.6 serbuk rimpang... 41
Gambar 5.7 pengamatan mikroskopis... 42
Gambar 5.8 pengamatan mikroskopis... 43
Gambar 5.9 pengamatan mikroskopis... 43
Gambar 5.10 pengamatan mikroskopis... 44
Gambar 5.11 epidermis dan jaringan gabus... 45
Gambar 5.12 parenkim dengan sel minyak... 45
Gambar 5.13 butir amilum... 46
Gambar 5.14 korteks dengan butir amilum... 46
Gambar 5.15 fragmen serabut sklerenkim... 47
Gambar 5.16 fragmen xylem dengan penebalan tangga... 47
Gambar 5.17 pemeriksaan Flavonoid dengan reaksi warna... 49
Gambar 5.18 kromatogram golongan flavonoid... 50
Gambar 5.19 kromatogram golongan terpenoid... 50
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat identifikasi ... 81
Lampiran 2. Sertifikat bakteriE.coli... 82
Lampiran 3. Sertifikat bakteriS.aureus... 83
Lampiran 4. Sertifikat jamurC. albicans... 84
Lampiran 5. Skema pembuatan larutan uji terhadapC.albicans... 85
Lampiran 6. Skema pembuatan larutan uji terhadapE.coli... 86
Lampiran 7. Skema pembuatan larutan uji terhadapS.aureus ... 87
Lampiran 8. Foto hasil uji aktivitas... 88
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Indonesia merupakan negara kepulauan yang memiliki kekayaan alam yang sangat melimpah, salah satu contoh adalah keanekaragaman tanaman berkhasiat yang digunakan sebagai preventif dan kuratif oleh masyarakat Indonesia berdasarkan pengalaman yang diwariskan secara turun temurun, sehingga tanaman berkhasiat tersebut memiliki potensi yang cukup besar untuk dimanfaatkan terutama dalam bidang kesehatan. Salah satu yang biasa dipakai oleh masyarakat adalah Alpinia galanga(L) atau biasa disebut dengan sebutan lengkuas.
Alpinia galanga berasal dari Famili Zingiberaceae. Famili ini tersebar luas pada daerah tropis khususnya daerah Asia Tenggara (Habsah, 1999). Tumbuhan ini mudah di hutan, (Paliwal, 2014). Pada pengobatan tradisional Cina tumbuhan ini digunakan untuk menghilangkan sakit perut, mengobati flu (Srividyaet al., 2010). Rimpang dan bunga dari tumbuhan ini juga digunakan untuk penambah rasa pada masakan Asia. Rimpang muda dari tumbuhan ini sering digunakan untuk masakanan Thailand (Weiet al., 2010) di Indonesia sendiri rimpang ini juga digunakan sebagai bumbu dapur. Minyak atsiri dan ekstrak dari rimpang ini telah dipelajari secara luas dan terbukti sebagai antijamur, antimikroba, antiamoeba, antioksidan (Weiet al., 2010).
2010). Biji A. galanga mengandung senyawa-senyawa diterpen yang bersifat sitotoksik dan antifungal (Morita & Itokawa, 1988).
Dengan berbagai khasiat dan penelitian yang telah diuraikan diatas rimpang A. galanga mempunyai potensi untuk dikembangkan menjadi produk herbal. Dalam pengembangan produk herbal harus memenuhi persyaratan yang telah ditetapkan oleh Pemerintah. Persyaratan tersebut ditetapkan untuk menjamin dari segi keamanan, mutu, dan kualitas.
Famili Zingiberaceae merupakan primadona untuk diteliti karena mudah dibudidayakan dan mudah tumbuh, di Indonesia sendiri Suku Zingiberaceae banyak ditemukan serta banyak khasiat yang terkandung didalamnya. Juga merupakan ciri dari Famili Zingiberaceae adalah dari minyak atsiri sehingga dilakukan juga uji aktivitas antimikroba minyak atsiri dari rimpangA. galanga.
Tahun 2015 akan dilaksanakan Masyarakat Ekonomi ASEAN (MEA) yang berdampak pada aliran bebas barang bagi negara-negara ASEAN, dampak arus bebas jasa, dampak arus bebas investasi, dampak arus tenaga kerja terampil, dan dampak arus bebas modal. Dari fakta-fakta yang telah di uraikan di atas diperlukan studi farmakognosi dari rimpangA. galangadan uji aktivitas antimikroba dari minyak atsiri rimpangA. galangakarena minyak atsiri merupakan ciri khas dari famili Zingiberaceae seperti yang telah dipaparkan diatas. Hasil yang didapat dari penelitian ini dapat dijadikan evaluasi apakah rimpang A. galanga memenuhi standar seperti yang telah ditetapkan oleh Pemerintah dalam buku resmi nya yaitu Farmakope Herbal Indonesia dan Materia Medika Indonesia, juga dapat dijadikan peluang oleh industri besar maupun kecil untuk mengembangkan produk herbal dari rimpangA. galanga.
serbuk simplisia agar terhidar dari pemalsuan. Untuk mendapatkan data anatomi dan morfologi dilakukan penelitian berupa studi makroskopik dan mikroskopik. Fitokimia dilakukan untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung dalam tumbuhan ini. Juga parameter fisiko-kimia yang meliputi parameter sari larut dalam pelarut tertentu, penetapan kadar minyak atsiri, susut pengeringan, penetapan kadar air, dan parameter kadar abu, dan uji aktivitas antimikroba. Uji aktivitas ini dilakukan dengan menggunakan minyak atsiri yang telah didestilasi dari rimpang A. galanga, untuk menguji kemampuan minyak atsiri tersebut dilakukan dengan melihat daya hambat minyak atsiri terhadap bakteri gram positif, gram negatif dan jamur.
Penelitian ini diharapkan dapat dijadikan ukuran dalam kontrol kualitas dari produk herbal untuk menjamin kualitas juga untuk mengetahui aktivitas antimikroba minyak atsiri dari rimpang lengkuas.
1.2 Rumusan Masalah
1. Apakah rimpang dari A. galanga pada penelitian ini memenuhi standar kualitas yang ditetapkan oleh MMI
2. Apakah minyak atsiri dari rimpang A. galanga mempunyai kemampuan untuk menghambat S. aureus, E. Coli dan Candida albican
1.3 Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum
A. Mendapatkan nilai dari parameter yang terdapat dalam studi farmakognosi yang dapat digunakan sebagai kontrol kualitas bahan baku untuk menjamin keaslian dan standar dari bahan baku.
2. Tujuan Khusus
A. Melakukan pengamatan anatomi rimpangA. galanga
B. Menetapkan kadar abu total, kadar abu tidak larut asam, kadar abu larut air, susut pengeringan, kadar sari yang larut air dan etanol, kadar (% rendemen) minyak atsiri dari serbuk simplisia rimpangA. galanga C. Melakukan skrining fitokimia ekstrak etanol 96% dari rimpang A.
galangadengan reaksi warna dan kromatografi lapis tipis (KLT). D. Melakukan analisis komponen minyak atsiri dari rimpang A.
galanga menggunakan kromatografi gas – spektrofotometri massa (GC-MS).
E. Menentukan konsentrasi hambat minimal minyak atsiri rimpang A. galanga terhadap Candida albicans, Eschericia coli, dan Staphylococcus aureus.
1.4 Manfaat Penelitian
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tinjauan tentangAlpinia galangaL. Willd 2.1.1. Klasifikasi
Divisi : Spermatophyta Sub Divisi : Angiospermae
Kelas : Monocotyledonae
Bangsa : Zingiberales
Suku : Zingiberaceae
Marga : Alpinia
Jenis : Alpinia galangaL. Willd
Sinonim : Languas galangaL. Merr,Alpinia
pyramidataBI,Alpinia officinarumHance, Languas galangaL. Stunz,Languas vulgare Koenig,Maranta galangaL., Amomum galangaL. Lour,Amomum medium
( Heyne,1987 ;Backer,1968;Sinaga,2005)
2.1.2. Nama daerah
Lengkueus (Gayo),Langkueueh (Aceh),Kelawas (Karo), Halawas (Simalungun), Lakuwe (Nias), Lengkuas (Melayu), Langkuweh (Minang), Lawas (Lampung), Laja (Sunda), lengkuas (Jawa, Madura), Langkuwas, Laus ( Banjar), Laja, Langkuwasan, Lahwas, Isem (Bali), Laja, Langkuwasa (Makassar), Aliku (Bugis), Lingkuwas ( Menado), Likui, Lingkuboto (Gorontalo), Laawasi lawasi (Ambon), Lawase, Lakwase, Kourola (Seram), Galiasa, Galiaha, Waliasa (Ternate,Halmahera), Langkwas (Roti), Hingkuase (Sangihe), Langkuwas ( Basemah), Laawasi, Lawasi (Alfuru), Lauwasel (Saparua), Langoase (Buru) (Depkes RI, 1978).
2.1.3. Morfologi Tanaman
Tinggi tanaman dapat tumbuh sampai 3 meter. Rimpangnya (diameter 2-4 cm) adalah bercabang, kuning cerah, berserabut dan harum. Daunnya berseling, berbentuk lanset, bundar memanjang, ujung tajam, berambut sangat halus atau kadang-kadang tidak berambut. Bunga terdapat diujung batang, berwarna putih dang harum (Depkes RI, 1978 ; Chan et al, 2011).
2.1.4. Ekologi dan Penyebaran
Tumbuh di seluruh Indonesia, Asia Tenggara, di bawah kaki pegunungan Himalaya sebelah timur hingga laut Cina dan India barat daya di antara Chats dan Lautan Indonesia. Di Jawa tumbuh liar di hutan, semak belukar, umumnya di tanam d itempat yang terbuka. Tumbuh pada ketinggian tempat sampai 1.200 m diatas permukaan laut (Depkes RI, 1978).
2.1.5. Kandungan Metabolit
dan lain-lain. Selain itu rimpang juga mengandung resin yang disebut galangol, kristal berwarna kuning yang disebut kaemferida dan galangin, kadinen, heksabidrokadalen hidrat, kuersetin, amilum, beberapa senyawa flavonoid, dan lain-lain. Penelitian yang lebih intensif menemukan bahwa rimpang lengkuas mengandung zat-zat yang dapat menghambat enzim xanthin oksidase sehingga bersifat sebagai antitumor, yaitu trans-p-kumari diasetat, transkoniferil diasetat, asetoksi chavikol asetat, asetoksi eugenol asetat, dan 4-hidroksi benzaidehida (Norroet al.,1988).
Juga mengandung suatu senyawa diarilheptanoid yang dinamakan 1-(4-hidroksifenil)-7-fenilheptan-3,5-diol. Buah lengkuas mengandung asetoksichavikol asetat dan asetoksieugenol asetat yang bersifat antiradang dan antitumor (Yu et al.,1988). Juga mengandung kariofilen oksida, kario-filenol, kuersetin-3-metil eter, isoramnetin, kaemferida, galangin, galangin-3-metil eter, ramnositrin, dan 7-hidroksi-3,5-dimetoksiflavon.
Biji lengkuas mengandung senyawa-senyawa diterpen yang bersifat sitotoksis dan antifungal, yaitu galanal A, galanal B, galanolakton,12-labdiena-15,16-dial,dan 17-epoksilabd-12-ena-15,16-dial (Morita & Itokawa,1988).
2.1.6. Kegunaan Tanaman
antibakteri terhadapStaphylococcus aureus, (Oonmetta-aree et al., 2005 ; Chan et al., 2011). Ekstrak etanol A. galanga secara signifikan sebagai antioksidan dan antidiabet pada model in vitro dan in vivo (Srividya et al., 2010).
2.2 Tinjauan tentang Pengamatan Makroskopis
Pemeriksaan makroskopis adalah pemeriksaan yang dilakukan dengan menggunakan kaca pembesar atau mikroskop binokuler. Cara ini digunakan untuk mencari kekhususan morfologi, ukuran, yang akan diperiksa (Depkes RI, 1987).
2.3 Tinjauan tentang Pengamatan Mikroskopis
Pemeriksaan mikroskopis adalah pemeriksaan yang dilakukan dengan menggunakan mikroskop yang derajat pembesarannya diatur sesuai keperluan dan dilengkapi dengan kamera. Pada pemeriksaan mikroskopis dicari unsur-unsur anatomi yang khas. Dari pemeriksaan ini akan diketahui jenis simplisia berdasarkan fragmen pengenal yang spesifik bagi masing-masing simplisia (Depkes RI, 1987).
2.4 Tinjauan tentang Pengamatan Simplisia
Simplisia adalah bahan alamiah yang digunakan sebagai obat yang belum mengalami pengolahan apapun juga kecuali dinyatakan lain simplisia merupakan bahan yang telah dikeringkan. Simplisia terdiri dari tiga jenis yaitu simplisia nabati, simplisia hewani, dan simplisia pelikan (mineral) (Depkes RI, 2000).
2.5 Tinjauan tentang Ekstrak 2.5.1 Definisi Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Depkes RI, 1995).
2.5.2 Proses Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak dilakukan melalui beberapa tahap,yaitu : 1. Pembuatan serbuk simplisia dan klasifikasinya
Proses awal pembuatan simplisia adalah tahapan pembuatan serbuk simplisia kering. Dari simplisia dibuat serbuk simplisia dengan peralatan tertentu sampai derajat kehalusan tertentu (Depkes RI, 2000).
2. Cairan pelarut
Cairan pengekstraksi dalam pembuatan ekstrak adalah pelarut yang baik (optimal) untuk senyawa kandungan yang berkhasiat atau yang aktif, dengan demikian senyawa tersebut dapat dipisahkan dari bahan dan dari senyawa kandungan lainnya, serta ekstrak hanya mengandung sebesar senyawa kandungan yang diinginkan. Dalam hal metabolit sekunder yang terkandung. Faktor utama untuk pertimbangan dalam pemilihan cairan pengekstraksi adalah selektifitas, kemudahan bekerja dan proses dengan cairan tersebut, ekonomis, ramah lingkungan dan keamanan (Depkes RI, 2000).
3. Separasi dan pemurnian
berpengaruh pada senyawa kandungan yang dikehendaki, sehingga diperoleh ekstrak yang lebih murni. Proses-proses pada tahapan ini adalah pengendapan, pemisahan dua cairan tidak saling campur,sentrifugasi,dekantasi,filtrasi serta proses adsorpsi dan penukaran ion (Depkes RI,2000).
4. Pemekatan dan penguapan
Pemekatan berarti peningkatan jumlah partikel solut (senyawa terlarut) secara penguapan pelarut tanpa sampai menjadi kondisi kering,ekstrak hanya menjadi kental/pekat (Depkes RI,2000)
5. Pengeringan ekstrak
Pengeringan berarti menghilangkan pelarut dari bahan sehingga menghasilkan serbuk, massa kering rapuh, tergantung proses dan peralatan yang digunakan (Depkes RI, 2000).
6. Rendemen
Rendemen adalah perbandingan antara ekstrak yang diperoleh dengan simplisia awal (Depkes RI, 2000).
2.5.3 Metode Ekstraksi 1. Cara Dingin
a. Maserasi
b. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstrak dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna (exhaustive extraction) yng umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetapan/penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlahnya 1-5 kali bahan.
2. Cara Panas a. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna.
b. Ekstraksi dengan Soxhlet
Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
c. Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengaduk kontinu) pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-50oC.
d. Pembuatan Infus
mendidih, temperatur terukur 96-98oC) selama waktu tertentu (15-20 menit).
e. Pembuatan Dekok
Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (≥30oC) dan temperatur sampai titik didih air.
2.6 Tinjauan tentang Maserasi
Penelitian ini menggunakan metode ekstraksi cara maserasi dengan pelarut etanol. Maserasi adalah suatu ekstraksi dengan beberapa kali pengocokan atau pemutaran pada suhu kamar, dimana intensitas gerakan sangat lambat sehingga akan terjadi kesetimbangan antara pelarut dengan bahan terlarut.
Pada maserasi dilakukan pengadukan karena berat jenis pelarut berbeda dengan berat jenis bahan yang diekstraksi, juga karena adanya pengaruh gaya gravitasi yang akan menyebabkan terjadinya pengendapan. Untuk itu pada maserasi selalu menggunakan pelarut yang baru karena pelarut yang lama sudah setimbang atau jenuh.
Maserasi kinetik merupakan maserasi yang dilakukan pada suhu kamar, tetapi bahan berada pada pengadukan yang konstan. Tipe dan intesitas gerakan yang digunakan dalam maserasi kinetik merupakan faktor penting. Maserasi merupakan metode ekstraksi yang paling banyak digunakan dibanding metode ekstraksi lainnya. Keuntungan metode maserasi yaitu hanya menggunakan sedikit sampel. Bahan-bahan obat tertentu mempunyai kandungan lendir yang lebih tinggi, hasilnya akan lebih optimal apabila diekstraksi dengan maserasi.
2.7 Tinjauan tentang Skrining Fitokimia
persyaratan yaitu sederhana, cepat, dan selektif dalam mengidentifikasi golongan senyawa kimia tertentu. Golongan senyawa kimia dapat ditentukan dengan cara reaksi warna, reaksi pengendapan dan metode kromatografi lapis tipis (KLT) (Fong, Tinwa, & Fransworth, 1990). 2.8 Tinjauan tentang Fisiko-Kimia
Berdasarkan Farmakope Herbal Indonesia tinjauan mengenai fisiko-kimia meliputi :
1. Susut Pengeringan
Penentuan susut pengeringan adalah pengukuran sisa zat setelah pengeringan pada temperatur 1050C selama 30 menit atau berat konstan, yang dinyatakan sebagai persen. Dalam hal khusus (jika bahan tidak mengandung minyak menguap/atsiri sisa pelarut organik menguap) identik dengan kadar air karena berada di atmosfer/lingkungan udara terbuka. Tujuan dari penentuan ini adalah memberikan batasan maksimal (rentang) tentang besarnya senyawa yang hilang pada proses pengeringan (Depkes RI,2000).
2. Kadar Abu
Bahan dipanaskan pada temperatur dimana senyawa organik dan turunannya terdestruksi dan menguap sehingga tinggal unsur mineral dan anorganik. Tujuan penetuan ini adalah untuk memberikan gambaran kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya ekstrak (Depkes RI,2000)
3. Sari Terlarut dalam Pelarut Tertentu
Tujuan : memberikan gambaran awal senyawa kandungan.( Depkes RI,2000)
2.9 Tinjauan tentang Destilasi
Metode yang digunakan untuk memisahkan minyak atsiri dari rimpang adalah menggunakan destilasi. Destilasi atau penyulingan dapat didefinisikan sebagai “pemisahan komponen-komponen suatu campuran dari dua jenis cairan atau lebih berdasarkan perbedaan tekanan uap dari masing-masing zat tersebut”(Stephen Miall, 1940). Proses penyulingan dengan demikian merupakan proses penting bagi produsen minyak atsiri. Secara umum ada dua macam sistem penyulingan campuran cairan yang perlu dikemukakan:
a. Penyulingan dari campuran cairan yang saling tidak melarut dan selanjutnya membentuk dua fase.
b. Penyulingan dari campuran cairan yang saling melarut secara sempurna dan hanya membentuk satu fase (Guenther, 1988). 2.10 Tinjauan tentang Minyak Atsiri
Minyak atsiri atau minyak menguap adalah massa yang berbau khas, yang berasal dari tanaman dan sifatnya mudah menguap pada suhu kamar tanpa mengalami peruraian. Minyak atsiri sering dikenal dengan nama volatile oil, ethereal oil, atau essential oil. Dalam Farmakope Indonesia III dikenal dengan namaOlea volatilia .
Pada umumnya minyak atsiri dalam keadaan segar tidak berwarna atau berwarna pucat, bila dibiarkan akan berwarna lebih gelap, berbau sesuai dengan bau tanaman penghasilnya. Umumnya larut dalam pelarut organik dan sukar larut dalam air (Midian, 1983)
2.11 Tinjauan tentang GC-MS
berpengaruh terhadap hasil akhir analisis. Salah satu metode analisis adalah dengan proses pemisahan kromatografi. Kromatografi adalah teknik pemisahan fisik suatu campuran berdasarkan perbedaan migrasi dari masing-masing komponen campuran pada fase diam dibawah pengaruh fase gerak. (Mulja, 1995)
Sistem kromatografi gas mempunyai resolusi tinggi sehingga optimal untuk pemisahan komponen yang stabil dengan pemanasan. Umumnya dibuat profil kandungan minyak atsiri atau metabolit sekunder tertentu lainnya seperti jenis fitosterol. Jenis kolom umumnya ada 3 jenis sesuai dengan urutan kepolaritasannya, yaitu OV-1,OV-% dan carbowax 2oM. Pemisahan dilakukan dengan menggunakan program temperatur, dari temperatur rendah sampai temperatur maksimal kolom. Detektor yang digunakan umumnya hanya FID karena metabolit sekunder tumbuhan umumnya senyawa organik hidrokabon.(Depkes RI, 2000)
Kromatografi gas cairan merupakan cara pemisahan minyak atsiri paling lazim. Pemisahan terjadi pada fase diam berdasarkan kelarutan cuplikan. Senyawa yang kelarutannya rendah keluar lebih dulu (Boyer, 1990; Gritter dkk., 1991). Keunggulan metode ini adalah cepat setimbang, gas pembawa kecepatan tinggi, memisahkan pada titik didih kecil, analisis kualitatif dan kuantitatif bersamaan, konsentrasi 0,01%, mudah dijalankan dan dipahami (Harbone, 1984; McNair & Bonelli, 1968).
2.12 Tinjauan tentang Mikroba 1. Staphylococcus aureus
berbentuk bundar, halus, menonjol dan berkilau. Koloni yang dibentuk dari bakteri ini adalah berwarna abu-abu sampai kuning emas tua. Bakteri ini membentuk pigmen lipochrom yang menyebabkan koloni tampak berwarna kuning keemasan dan kuning jeruk, pigmen tersebut yang membedakannya dengan Staphylococcus epidermidisyang menghasilkan pigmen putih (Todar, 2002).
Staphylococcus mengandung polisakarida dan protein yang bersifat antigenik dan merupakan substansi penting didalam struktur sel. Peptidoglikan merupakan suatu polimer polisakarida yang mengandung subunit-subunit yang tergabung, merupakan eksoskeleton yang kaku pada dinding sel. Peptidoglikan dirusak oleh asam kuat atau lisozim (Jawetzet al, 2005).
2. Eschericia coli
Eschericia coli adalah bakteri gram negatif, bentuk batang, bergerak, tidak berspora, kadang-kadang berkapsul dengan luas sekitar 0,7 µm dan panjang 1-4 µm. Bakteri ini tumbuh baik pada media bakteriologik dalam suasana aerob maupun anaerob dengan kebutuhan nutrien yang relatif sederhana. Bakteri ini mampu mengadakan fermentasi dan banyak memecahkan karbohidrat dalam bentuk asam, gas seperti H2S, O2 dan H2 yang kira-kira jumlahnya sama dengan dextrosa. Salah satu bakteri coliform, flora normal bagian percernaan dan saluran utama flora jasad renik aerob normal dalam tubuh, dimana salah satunya adalah Eschericia coli(Lennette, 1975). Pada dasarnya bakteri ini tidak patogen, namun beberapa galur menghasilkan toksin yang dapat menyebabkan hiperseksresi dalam usus halus (Jawetzet al, 1991).
3. Candida albicans
saluran pernafasan, saluran percernaan dan genetalia wanita, pada tempat ini jamur ini menjadi dominan. Kulit yang terinfeksi akan mengalami lesi yang disertai peradangan. Kadang-kadang ditemukan Candida dalam jumlah besar dalam saluran cerna setelah pemberian antibiotik oral, tetapi biasanya tidak terjadi gejala (Jawetzet al, 1991).
2.13 Tinjauan tentang Cara Penentuan Efek Antimikroba
Metode-metode yang lazim digunakan adalah metode penyebaran, metode ini dilakukan dengan cara menanam mikroba pada media agar padat yang sesuai, selanjutnya diletakkan dalam cakram atau silinder yang telah ditetesi dengan bahan uji lalu dimasukkan dalam lubang atau cangkir agar yang telah dibuat pada media. Aktivitas antimikroba dilihat dengan mengukur daerah sekitar cakram, lubang atau cangkir agar yang tidak ditumbuhi bakteri.
Metode yang terpilih dalam penelitian ini adalah metode pengenceran dalam agar (agar dillution method) alasannya fleksibilitas karena semua bahan yang berbentuk serbuk dapat digunakan dengan dilarutkan dengan pelarut yang sesuai lalu diencerkan dengan air steril. Metode ini memungkinkan digunakan dalam studi antimikroba bagi senyawa yang mudah larut maupun yang tidak mudah larut seperti minyak atsiri, keuntungan yang lainnya adalah hasil dari metode ini bersifat kuantitatif. Untuk sampel yang bersifat lipofilik dapat ditambahkan tween 20 atau tween 80 berfungsi untuk membantu menjaga kestabilan minyak atsiri didalam media (Rioset al, 1988).
2.14 Tinjauan tentang Antibiotika 1. Streptomycin
Merupakan golongan antibiotik aminoglikosida, yang bekerja menghentikan produksi protein esensial yang dibutuhkan bakteri untuk hidup. Serbuk; putih atau praktis tidak berbau atau hampir tidak berbau. Mudah larut dalam air, sangat sukar larut dalam etanol, praktis tidak larut dalam kloroform. (Kementrian kesehatan, 2014)
2. Ketokonazol
BAB III
KERANGKA KONSEPTUAL
Alpinia galangaberasal dari FamiliZingiberaceaemempunyai berbagai khasiat salah satunya yaitu minyak atsiri dan ekstrak dari rimpang terbukti sebagai antijamur, antimikroba, antiamoeba, antioksidan (Wei et al., 2010). Sehingga dapat berpotensi untuk dikembangkan menjadi produk herbal yang sesuai dengan persyaratan yang ditetapkan oleh pemerintah untuk menjamin dari segi keamanan, mutu, kualitas.
Studi farmakognosi dilakukan pada rimpang Alpinia galanga dan uji aktivitas antimikroba dari minyak atsiri rimpangAlpinia galanga. Parameter farmakognosi meliputi studi morfologi, anatomi dan organoleptis yang bertujuan menghindari kesalahan dalam pengambilan sample tanaman dan mengidentifikasi kebenaran dari serbuk simplisia agar terhindar dari pemalsuan. Parameter fitokimia untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung didalam tanaman tersebut yang dalam penelitian ini yang digunakan adalah rimpang Alpinia galanga. Parameter fisikokimia untuk mendapatkan nilai dari parameter fisikokimia dan nilai tersebut diharapkan tidak melebihi dari yang telah ditetapkan oleh buku monografi. Uji aktivitas antimikroba minyak atsiri menggunakan bakteri S. Epidermidis, E. Coli dan jamur Candida albicans.
Skema 3.1 Kerangka Konseptual
Alpinia galanga mempunyai berbagai khasiat salah satunya yaitu minyak atsiri dan ekstrak dari rimpang ini terbukti sebagai antijamur, antimikroba, antiamoeba dan antioksidan (Wei et al., 2010)
Dapat berpotensi dikembangkan menjadi produk herbal yang sesuai seperti persyaratan yang ditetapkan oleh Pemerintah untuk menjamin dari segi keamanan, mutu, kualitas.
Studi farmakognosi rimpangAlpinia galanga
pengujian aktivitas antimikroba dari minyak atsiri rimpangAlpinia galanga
Ciri Morfologi dan anatomi Skrining fitokimia Nilai fisikokimia
BAB IV
METODE PENELITIAN 4.1 Bahan Penelitian
4.1.1 Tanaman
Tanaman yang digunakan adalah rimpang Alpinia galanga ( lengkuas ) yang diperoleh dari Desa Sambilawang Kecamatan Dlanggu Kabupaten Mojokerto, rimpang ini dipanen pada bulan Maret- April dengan umur panen adalah 1 tahun. Determinasi tanaman ini dilakukan di UPT Balai Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Purwodadi , Pasuruan hasil determinasi terlampir.
4.1.2 Bahan
n-heksan teknis; Etanol 96% teknis; Etil asetat teknis; Kloroform teknis; Wagner; Meyer; Bouchardat; Dragendorf; Asam asetat anhidrat; Asam sulfat pekat; Asam sulfat encer; NaOH; NaSO4 anhidrat; NaCl; 10% alkohol soln dari α naphtol soln; Toluen; FeCl3; Agar Mueller
Hinton; Agar Saboraud Dextrose; Streptomycin; Ketokonazolmicronized AllCl48; bakteriEscherichia coli; bakteriStaphylococcus aureus; jamur Candida albicans;kertas saring; kertas saring bebas abu Whatman; tween 80; DMSO; larutan salin NaCl 0,9%; plat KLT; aquadest; kloralhidrat; air kloroform p; asam sulfat encer 10%.
4.2 Alat Penelitian
BXA41TF Olympus; Alat-alat gelas; Corong Buchner; Buchi rotavapor R-114; labu alas bulat; cawan petri; STAHL; kapas, cawan petri; micropipet; timbangan analitik Metler AB 204-S; deksikator; oven venticell Mmm medcenter; Furnice barnstead thermolyne; kurs porselen; botol timbang; cawan porselen; penangas udara.
4.3 Pengamatan Morfologi
Pemeriksaan makroskopis terhadap rimpang segar dapat dilihat dari tanda-tanda berikut :panjang, lebar, bentuk, ada tidaknya akar, bentuk, dan daging rimpang. Juga melihat tanaman Alpinia galanga secara keseluruhan (Chitral dan Thoppil, 2008)
4.4 Pengamatan Anatomi
Pengamatan anatomi secara mikroskopis meliputi pengamatan irisan melintang dan pengamatan fragmen spesifik pada serbuk simplisia dibuat dalam sediaan kloralhidrat yang dipanaskan.
4.5 Pengamatan Organoleptis
Pengamatan organoleptis terhadap rimpang segar dan serbuk simplisia rimpang lengkuas yang meliputi warna, bau, rasa
4.6 Skrining Fitokimia Ekstrak
Skrining fitokimia bertujuan untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung pada rimpang lengkuas. Rimpang lengkuas segar dikeringkan kemudian dilakukan pengecilan ukuran partikel sampai diperoleh serbuk simplisia yang halus. Kemudian diekstraksi dengan cara maserasi.
4.6.1 Pemeriksaan Alkaloid 1. Reaksi Pengendapan
menit. Setelah dingin ditambahkan 0,5 gram NaCl untuk mengendapkan protein yang dapat memberikan reaksi positif palsu, lalu disaring, kemudian filtrat ditambahkan HCl 2N sampai 10 ml. Filtrat yang digunakan untuk petunjuk alkaloid dengan penambahan pereaksi pengendapan. Pereaksi yang digunakan antara lain Wagner, Meyer, dan Bouchardat. Ekstrak mengandung alkaloid timbul endapan setelah ditambah dengna perekasi tersebut.
2. Kromatografi Lapis Tipis
Filtrat ditambahkan NH4OH 28% sampai alkalis, diekstraksi dengan 10 ml CHCl3, fase CHCl3 ditambahkan NaSO4 eksikatus, disaring, kemudian diuapkan sampai kering. Ekstrak CHCl3 dilarutkan dalam metanol dengan uji KLT.
Fase gerak : aseton : air : amoniak (40 : 7 : 3 ) Penampak noda : pereaksi dragendorf
Positif jika terjadi noda merah jingga (Fong, Tin-Wa, & Fransworth, 1990 ; Harborne, 1973).
4.6.2 Pemeriksaan Glikosida Saponin 1. Uji Buih
Sekitar 5 ml ekstrak dimasukkan kedalam tabung reaksi kemudian dikocok kuat dengan air suling 20 ml. Buih yang timbul diukur. Positif jika terjadi buih stinggi 3 cm diatas cairran, stabil selama 30 menit. Sebagai pembanding digunakan daging buah Sapindus rarak (Zaini & Indrayanto, 1978 ; Fong, Tin-Wa, & Fransworth, 1990 ; Thokcromet al, 2014).
2. Reaksi warna
dibuang. Diulang sampai n-heksan atau petroleum eter tidak berwarna. Residu ditambah 10 ml CHCl3, kemudian di gojok selama 5 menit, didekantir dalam tabung reaksi yang berisi 100 mg NaSO4 anhidrat, saring. Filtrat dibagi 3 (A,B,C) (Zaini & Indrayanto, 1978 ; Fong, Tin-Wa, & Fransworth, 1990).
a. Tes Liebermann-Burchard
A sebagai blanko, B ditambah 3 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat, kemudian dikocok pelan. Positif ika terjadi perubahan warna hijau-biru untuk saponin steroid, merah violet untuk saponin triterpenoid dan kuning muda untuk saponin tak jenuh (Zaini & Indrayanto, 1978 ; Fong, Tin-Wa, & Fransworth, 1990).
b. Tes Salkowski
A sebagai blanko, C ditambah 1-2 ml H2SO4 pekat melalui dinding tabung reaksi. Positif mengandung sterol tak jenuh bila terdapat cincin merah pada fase asam (Zaini & Indrayanto, 1978 ; Fong, Tin-Wa, & Fransworth, 1990).
3. Kromatografi Lapis Tipis
a. Ekstrak yang setara dengan 10 gram bahan ditambah dengan pelarut yang sesuai, ditotolkan pada fase diam sampai terlihat noda pada lampu UV, kemudian di eluasi dengan fase gerak. Langkah ini untuk identifiksai adany steroid atau triterpenoid bebas.
Fase diam : silika gel GF 254
Fase gerak : n-heksan : etil asetat (3:2) Penampak noda : Anisaldehid-asam sulfat
Positif bila terjadi noda warna merah ungu setelah lempeng KLT dipanaskan diatashot plate(Zaini & Indrayanto, 1978 ; Fong, Tin-Wa, & Fransworth, 1990).
4.6.3 Pemeriksaan Flavonoid 1. Reaksi warna
Ekstrak yang setara dengan 10 gram bahan, dipanaskan diatas penangas air sampai kering. Diekstraksi berulang-ulang dengan petroleum eter atau n-heksan sampai cairan tidak berwarna. Residu ditambahkan 20 ml etanol 80% disaring, filtrat dibagi empat (A,B,C,D)
a. Tes Bate smith & Metcalf
A sebagai blanko, B ditambah 0,5 ml HCl pekat, kemudian dipanaskan selama 15 menit diatas penangas air.
Positif jika terjadi warna merah terang atau ungu (leukoantosianin) (Zaini & Indrayanto, 1978 ; Fong, Tin-Wa, & Fransworth, 1990) b. Tes Wilstater
A sebagai blanko, C ditambahkan 0,5 ml HCl pekat dan 4 potong magnesium. Diamati warna yang terjadi, diencerkan dengan air suling, kemudian ditambah 1 ml butanol. Diamati waran yang terjadi pada setiap lapisan.
Perubahan warna merah jingga menunjukkan adanya flavon, merah pucat adanya flavonol, merah tua menunjukan flavanon.
2. Kromatografi Lapis Tipis
Fase diam : silika gel GF 254 tebal 0,25 mm
Fase gerak : butanol : asam asetat glasial : aquadest (4:1:5) Penampak noda : sitrat borat atau CeSO4 atau uap amonia atau FeCl3
2%
Noda yang diamati dengan pereaksi sitrat borat dan dengan sinar UV kemudian dibandingkan dengan noda dari rutin. Adanya flavonoid ditunjukan dengan adanya noda kuning terang, coklat lemah, kuning hijau, merah jingga.
Bila disemprot dengan CeSO4 akan timbul warna orange sampai coklat atau bila dialari uap amoia akan timbul warna kuning tidak permanen dan apabila dengan pereaksi FeCl3 2% akan timbul warna gelap (Zaini & Indrayanto, 1978 ; Fong, Tin-Wa, & Fransworth, 1990).
4.6.4 Pemeriksaan Tannin 1. Preparasi Sampel
a. ekstrak dengan berat 0,3 gram ditambah 6 ml akuades panas, diaduk dan dibiarkan sampai temperatur kamar, lalu tambahkan 3-4 tetes 10% NaCl, diaduk, dan disaring.
b. Filtrat dibagi menjadi tiga bagian masing-masing ± 4 ml dan disebut sebagai larutan IVA, IVB, dan IVC
2. Uji Gelatin
a. Larutan IVA digunakan sebagai blanko, larutan IVB ditambah dengan sedikit larutan gelatin dan 5 ml larutan NaCl 10%.
b. Jika terjadi endapan putih menunjukkan adanya tannin. 3. Uji Ferriklorida
Sebagai Larutan IVC diberi beberapa tetes larutan FeCl3, kemudian
a. Jika terjadi warna hijau kehitaman menunjukkan adanya tannin.
b. Jika pada penambahan gelatin dan NaCl tidak timbul endapan tetapi setelah ditambahkan dengan larutan FeCl3
terjadi perubahan warna menjadi hijau biru hingga hitam, menunjukkan adanya senyawa polifenol.
FeCl3(+) , Uji Gelatin (+) → tannin (+)
FeCl3(+) , Uji Gelatin (-) → polifenol (+)
FeCl3(-) , Uji Gelatin (-) → tannin (-)
4.6.5 Pemeriksaan Glikosida Jantung 1. Tes Keller-Killiani
Ekstrak yang setara dengan 10 gram bahan, diuapkan diatas penangas air sampai kering. Diekstraksi berulang-ulang dengan n-heksan sampai n-heksan tidak berwarna.
Residu diuapkan untuk menghilangkan n-heksan, ditambah 3 ml FeCl3, diaduk-aduk, dimasukkan dalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan H2SO4pekat melalui dinding tabung
reaksi. Adanya cincin ungu menunjukan adanya gula 2 deoxy. 2. Tes Liebermann-Burchard seperti pada saponin
Positif untuk inti steroid jika terbentuk warna hijau-biru. (Zaini & Indrayanto, 1978 ; Fong, Tin-Wa, & Fransworth, 1990) 4.6.6 Pemeriksaan Glikosida Antrakuinon
1. Reaksi warna a. Tes Borntrager
(A,B). A sebagai blanko, B ditambah 5 ml amonia, kemudian dikocok.
Positif jika terjadi warna merah pada lapisan alkali (Zaini & Indrayanto, 1978 ; Fong, Tin-Wa, & Fransworth, 1990)
b. Modifikasi Borntrager Test
Ekstrak yang setara dengan 1 gram bahan, diuapkan diatas penangas air sampai kering. Setelah dingin ditambah 10 ml KOH 5N dan 1 ml H2O2 encer, dipanaskan diatas penangas air selama 10 menit kemudian disaring. Filtrat ditambah asam asetat glasial sampai reaksi asam. Diekstraksi dengan toluen 2 kali masing-masing 5 ml. Fase tolena diambil, di bagi dua (A,B). A sebagai blanko, B ditambah 2-5 ml larutan amonia.
Positif jika terjadi warna merah pada lapisan alkali (Zaini & Indrayanto, 1978 ; Fong, Tin-Wa, & Fransworth, 1990)
3. Kromatografi Lapis Tipis
Bahan : 0,1-0,2 ml ekstrak etanol
Fase diam : silika gel GF 254 tebal 0,25 mm yang telah diimpregnasi dengan NaOH 0,01 M
Fase gerak : kloroform : etil asetat : asam asetat (75:24:1) Penampak noda : larutan KOH 10% metanol
Positif jika noda kuning, kuning0cokelat, merah, violet, hijau (Harborne, 1973)
4.7 Parameter Fisiko-Kimia
4.7.1 Penentuan Parameter Sari Larut dalam Pelarut Tertentu 1. Penentuan Kadar Senyawa yang Larut dalam Air
berkali-kali dikocok selama 6 jam pertama dan kemudian dibiarkan selama 18 jam. Saring, uapkan 20 ml filtrat hingga kering dalam cawan dangkal berdasarkan rata yang telah ditara, panaskan residu pada suhu 105oC hingga bobot tetap, penghitungan terhadap ekstrak
awal (Depkes RI,2000).
2. Penentuan Kadar Senyawa yang Larut dalam Etanol
Serbuk dikeringkan diudara, dimaserasi selama 24 jam 5,0 gram serbuk dengab 100 ml etanol (95%), menggunakan labu bersumbat sambil berkali-kali dikocok selama 6 jam pertama dan kemudian dibiarkan selama 18 jam. Disaring cepat dengan menghindar penguapan etanol (95%), diuapkan 25 ml filtrat hingga kering dalam cawan dangkal berdasarkan rata yang telah ditara,dipanaskan sisa pada suhu 105oC hingga bobot tetap. Dihitung
kadar dalam persen sari yang larut dalam etanol (95%), penghitungan terhadap bahan yang telah dikeringkan diudara (Depkes RI, 2000).
4.7.2 Kadar Total Golongan kandungan Kimia 1. Penetapan Kadar Minyak Atsiri
atsiri terdestilasi sempurna dan tidak bertambah lagi dalam bagian penampung berskala. Jika sejumlah volume minyak atsiri telah tertampung dalam bagian penampung berskala, pencatatan dapat dilakukan dengan pembacaan sampai 0,1 ml dan volume minyak atsiri untuk setiap 100 g ekstrak dapat dihitung dari bobot ekstrak yang ditimbang. Skala pada penampung dengan minyak atsiri dengan bobot jenis lebih besar dari air diletakkan
Sedemikian hingga minyak atsiri tertampung dibawah kondensat air, sehingga otomatis air kembali kedalam labu (Depkes RI,2000).
4.7.3 Susut Pengeringan
1. Parameter susut pengeringan
Ekstrak ditimbang secara seksama sebanyak 1 g sampai 2 g dan dimasukkan kedalam botol timbang dangkap tertutup yang sebelumnya telah dipanaskan pada suhu 105oC selama 30 menit dan
telah ditara. Sebelum ditimbang, ekstrak diratakan dalam botol timbang, dengan menggoyangkan botol, hingga merupakan lapisan setebal lebih kurang 5 mm sampai 10 mm. Jika ekstrak yang diuji berupa ekstrak kental, ratakan dengan bantuan pengaduk. Kemudian dimasukkan kedalam ruang pengering, buka tutupnya, keringkan pada suhu 105oC hingga botol tetap. Sebelum setiap pengeringan,
4.7.4 Parameter Kadar Abu 1. Penetapan kadar abu
Lebih kurang 2 g sampai 3 g ekstrak yang telah digerus dan ditimbang saksama, dimasukkan kedalam kurs silikat yang telah dipijarkan dan ditara, ratakan. Pijarkan perlahan-lahan hingga arang habis, dinginkan, timbang. Jika cara ini arang tidak dapat dihilangkan, tambahkan air panas, saring melalui kertas saring bebas abu. Pijarkan sisa kertas dan kertas saring dalam krus yang sama. Masukkan filtrat kedalam kurs, uapkan, pijarkan hingga bobot tetap, timbang. Hitung kadar abu terhadap bahan yang telah dikeringkan diudara. (Depkes RI,2000).
2. Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam
Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu, didihkan dengan 25 ml asam sulfat encer p selama 5 menit, kumpulkan bagian yang tidak larut dalam asam, saring melalui krus kaca masir atau kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas, pijarkan hingga bobot tetap, timbang. Hitung kadar abu yang tidak larut dalam asam terhadap bahan yang telah dikeringkan diudara (Depkes RI, 2000). 4.8 Destilasi Minyak Atsiri dan Sifat Fisika Minyak Atsiri
Destilasi minyak atsiri dilakukan dengan metode air dan uap (kukus). Rimpang lengkuas segar dicuci kemudian ditumbuk kasar. Umlah bahan yang digunakan untuk penyulingan sebanyak 20 kg. Uap air bercampur minyak yang dihasilkan kemudian dipisahkan dengan menggunakan corong pisah (Mangestutiet al, 2009) selanjutnya sebagian minyak atsiri disimpan pada suhu 4oC sebelum dianalisis menggunakan
GC-MS dan sebagian lagi diidentifikasi sifat-sifat minyak atsiri.
menentukan adanya air dalam minyak atsiri dengan cara meneteskan 1 tetes minyak atsiri dalam air jika permukaan air keruh berarti minyak atsiri mengandung air dan untuk menentukan adanya lemak dalam minyak atsiri adalah dengan cara meneteskan satu tetes minyak atsiri pada kertas saring jika terdapat noda transparan pada kertas saring maka minyak atsiri mengandung lemak, untuk rotasi optik untuk mengukur aktivitas optik alat yang digunakan adalah polarimeter.
4.9 Uji Aktivitas Antimikoba 1. Penyiapan Media
a. Pembuatan Media Agar Mueller Hinton
Media agar Mueller Hinton digunakan untuk uji anti bakteri, menurut E Merck cara pembuatan media ini dengan cara menimbang 36,5 g Media agar Mueller Hinton lalu dilarutkan dalam 1000 mL air suling. Lalu campuran tersebut dididihkan kemudian diatur pada pH 7,2-7,4 dan volume larutan tetap dijaga. Selanjutnya larutan dimasukkan kedalam tabung bertutup ulir masing-masing sebanyak 4,5 mL lalu disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121oC
selama 15 menit.
b. Pembuatan Media Saboraud Dextrose Agar
Media Saboraud Dextrose Agar digunakan untuk uji anti jamur, menurut FI IV cara pembuatan media ini dengan menimbang 65 g Media Saboraud Dextrose Agar instan lalu dilarutkan ke dalam 1000 mL air suling. Lalu campuran tersebut dididihkan kemudian diatur pada pH 7,2-7,4 dan volume larutan tetap dijaga. Selanjutnya larutan dimasukkan kedalam tabung bertutup ulir masing-masing sebanyak 4,5 mL lalu disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121oC
2. Pembuatan Inokulum
Diambil dalam jumlah tertentu koloni bakteri dan jamur dengan sengkelit dari biakan persediaan, selanjutnya masing-masing kloni dibiakkan (disusupensikan) dalam agar miring dan diinkubasi pada suhu 35-37oC selama 24-48 jam. Koloni dari agar miring
diambil menggunakan sengkelit, ditambah dengan salin steril 10 ml, lalu dikocok sampai homogen. Kemudian mengukur kekeruhan suspensi bakteri dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 580 nm, jika perlu diencerkan dengan salin steril sampai diperoleh transmittan 25% dibandingkan terhadap larutan salin sebagai blanko (Anonim, 1995).
3. Pembuatan Larutan Uji
Sampel yang digunakan adalah minyak atsiri, untuk membantu mendispersikan minyak kedalam media berair, maka minyak atsiri terlebih dahulu dilarutkan dengan Tween 80 dan dimetil sulfooksida (DMSO) dengan perbandingan 5:1. Selain dapat membantu mendispersikan minyak dalam media berbasis air, tween 80 juga dapat berfungsi untuk membantu menjaga kestabilan minyak atsiri didalam media. Konsentrasi akhir dari larutan pengencer tidak boleh lebih dari 2% (Rioset al, 1988).
1%v/v ppm, 0,5 %v/v, 0,25%v/v, 0,125%v/v, 0,06%v/v, 0,03%v/v dan 0,015% v/v.
Gambar 4.1 skema pembuatan larutan uji
4. Pembuatan Larutan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif a. Kontrol Positif
Kontrol positif yang digunakan adalah streptomicin dengan kadar 1000 ppm. Pembuatan kontrol positif ini dengan cara menimbang antibiotik sebanyak 50,0 mg, dilarutkan pada larutan pengencer sampai 5 ml (10.000 ppm). Selanjutnya dipipet 0,5 ml kemudian dimasukkan kedalam tabung yang berisi 4,5 ml media agar lalu dihomogenkan.
b. Kontrol Negatif
Dibuat dengan cara mencampurkan 0,5 ml pelarut dan 4,5 ml media agar, lalu dihomogenkan kemudian dimasukkan ke dalam cawan petri. Sehingga konsentrasi akhir pelarut (tween 80 dan DMSO) dalam media adalah 2%.
5. Penentuan Kadar Hambat Minimal
Penentuan kadar hambat minimal dilakukan dengan mencampur secara homogen media agar yang telah disterilkan dengan larutan uji, larutan kontrol positif dan kontrol negatif. Kemudian campuran dituang pada cawan petri dan diputar agar merata. Suhu pencampuran dilakukan pada 45-50oC. Suspensi
mikroba dipipet sebanyak 5 µl lalu masukkan kedalam tabung, homogenkan. Lalu dituang kedalam cawan petri dengan konsentrasi akhir mikroba uji 104-105 CFU/ml lalu diinkubasi pada suhu
35-37oC selama 24-48 jam, adanya pertumbuhan koloni mikroba
6. Teknik Analisis Data
Metode yang digunakan untuk menentukan KHM adalah metode dilusi agar, alasannya fleksibilitas karena semua bahan yang berbentuk serbuk dapat digunakan dengan dilarutkan dengan pelarut yang sesuai lalu diencerkan dengan air steril. Metode ini memungkinkan digunakan dalam studi antimikroba bagi senyawa yang mudah larut maupun yang tidak mudah larut seperti minyak atsiri, keuntungan yang lainnya adalah hasil dari metode ini bersifat kuantitatif (Rioset al, 1988).
Konsentrasi hambat minimum (KHM) ini ditentukan dengan mengamati secara visualpertumbuhan mikroba pada konsentrasi terkecil yang masih mampu menghambat pertumbuhan mikroba (Mangestutiet al, 2009).
4.10 Kerangka Penelitian
Rimpang lengkuas segar dicuci dengan air mengalir, sebagian dari rimpang tersebut digunakan untuk pengamatan ciri morfologi dan anatomi secara makroskopik dan mikroskopik, sebagian lagi dikeringkan kemudian disortasi dan diperkecil ukuran hingga didapatkan serbuk simplisia dan sebagian lagi digunakan untuk destilasi minyak atsiri. Serbuk digunakan untuk untuk pemeriksaan fragmen serbuk rimpang secara mikroskopik, untuk skrining fitokimia dan untuk fisikokima.
Pemeriksaan secara makroskopis, mikroskopis
Ciri morfologi dan anatomi rimpang lengkuas
Parameter sari larut dalam pelarut tertentu
Susut pengeringan
Parameter kadar abu ekstrak
Diekstraksi
Skema 4.2 Kerangka Penelitian
pencucian
Rimpang segar
BAB V HASIL PENELITIAN
5.1 Pemeriksaan Morfologi
Pada pemeriksaan makroskopis didapatkan bahwa rimpang mempunyai ukuran yang besar dengan warna coklat kemerahan pada bagian permukaan, pada bagian dalam berwarna merah muda dengan bekas patahan berserat pendek. Pengamatan dapat dilihat pada tabel 5.1
Tabel 5.1 Pengamatan morfologi dilakukan secara makroskopis
Panjang 7-12 cm
Lebar 2-3 cm
Bentuk silidris
Ada tidak nya akar kecil ada
Bentuk banyak
Daging rimpang Berserat kasar
Warna permukaan Coklat kemerahan
Hasil pemeriksaan dapat dilihat pada gambar 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6
Gambar 5.2 lebar rimpang saat dipotong melintang
Gambar 5.3 rimpang saat dipotong melintang
Gambar 5.5 simplisia rimpang
5.2 Pengamatan Anatomi
Pengamatan anatomi secara mikroskopis dilakukan meliputi irisan melintang dan pengamatan fragmen pada serbuk simplisia rimpang laos dalam media air dan kloralhidrat.
5.2.1 Pengamatan Irisan Melintang
Hasil pengamatan irisan melintang rimpang laos didapatkan hasil sebagai berikut : pada irisan melintang didapatkan epidermis, sel sekresi berisi minyak atsiri, parenkim korteks, korteks, endodermis, berkas pembuluh tipe kolateral tertutup, serabut sklerenkim, amilum.
Hasil pengamatan dapat dilihat pada gambar 5.7, 5.8, 5.9, 5.10
Gambar 5.7 pengamatan dengan mikroskop perbesaran 100x dalam media kloralhidrat; A= epidermis; B= parenkim korteks.
A
Gambar 5.8 pengamatan dengan mikroskop perbesaran 100x dalam media kloralhidrat; A= sel sekresi berisi minyak atsiri.
Gambar 5.9 pengamatan dengan mikroskop perbesaran 100x dalam media kloralhidrat; A= xylem; B=floem; C=serabut sklerenkim; D=korteks; E=endodermis; F= berkas pembuluh tipe kolateral tertutup.
A
A B
C
Gambar 5.10 pengamatan dengan mikroskop perbesaran 400x dalam media air; A= butir amilum dengan bentuk lonjong dan bulat.
5.2.2 Pengamatan Fragmen Serbuk
Hasil pengamatan sediaan serbuk rimpang didapatkan hasil sebagai berikut : pada pengamatan serbuk secara mikroskopik ditemukan fragmen epidermis berhimpitan dengan sel gabus, parenkim dengan sel minyak, butir amilum, korteks dengan butir amilum, fragmen serabut sklerenkim dengan dinding sel tebal, fragmen xylem dengam pembuluh tangga.
Hasil pengamatan dapat dilihat pada gambar 5.11, 5.12, 5.13, 5.14, 5.15, 5.16
Gambar 5.11 epidermis dan jaringan gabus pada pengamatan dengan mikroskop perbesaran 100x dalam media kloralhidrat.
Gambar 5.13 butir amilum berbentuk lonjong dan bulat telur pada pengamatan dengan mikroskop perbesaran 400x dalam media air.
Gambar 5.15 fragmen serabut sklerenkim dengan dinding sel tebal pada pengamatan dengan mikroskop perbesaran 100x dalam media kloralhidrat.
5.3 Pengamatan Organoleptis
Pengamatan organoleptis dilakukan menggunakan rimpang segar dan serbuk, didapatkan hasil yang tercantum pada tabel 5.2
Tabel 5.2 Hasil Pengamatan Organoleptis
Rimpang Segar Serbuk Rimpang
Warna Putih kemerahan Cokelat
Bau Bau aromatis Bau aromatis
Rasa Pedas Pedas
5.4 Skrining Fitokimia
Ekstrak etanol 96% didapatkan dari 100 gram berat serbuk dimaserasi dalam pelarut etanol 96% sebanyak 1.200 ml, ekstrak yang didapat sebesar 32,17 gram.
Hasil penimbangan bahan dan ekstrak dapat dilihat pada tabel 5.3 Tabel 5.3 berat bahan dan ekstrak rimpang laos
Rimpang
Laos 5167 592 88,5426 100 32,17
Hasil pengamatan dapat dilihat pada gambar 5.17, 5.18, 5.19
Gambar 5.18 Kromatogram golongan senyawa flavonoid ekstrak etanol 96% rimpang laos dengan fase diam = silika gel GF 254; fase
gerak=butanol : asam asetat glasial : aquadest (4:1:5); penampak noda= FeCl32%.
Gambar 5.19 Kromatogram golongan senyawa terpenoid ekstrak etanol 96% rimpang laos.fase diam = silika gel GF 254; fase gerak= n-heksan : etil asetat (3:2); penampak noda= anisaldehid- asam sulfat.
Rf 2 = 0,20
Rf 1= 0,33
Hasil skrining fitokimia dapat ekstrak etanol 96% rimpang Alpinia galangaL.dapat dilihat pada tabel 5.4
Tabel 5.4 Skrining fitokimia ekstrak etanol 96% rimpangAlpinia galanga Golongan
(-) tidak ada endapan (-) tidak ada endapan (-) tidak ada endapan (-) noda merah jingga
Saponin Uji buih
Liebermann-Burchard Salkowski
Kromatografi lapis
tipis
(-) tidak ada buih (-)
(-)
(+)noda berwarna merah ungu
Flavonoid Bate Smith & Metcalf Wilstater
5.5 Parameter Fisiko-Kimia
Bahan yang digunakan pada parameter fisikokimia adalah serbuk, berikut adalah hasil yang didapat :
5.5.1 Penetapan Kadar Sari Yang Larut Dalam Air Metode : Gravimetri
Tujuan : Memberikan gambaran awal kandungan kimia yang terdapat dalam simplisia yang larut dalam pelarut air.
Kadar sari yang larut dalam air simplisia rimpang laos= (33.1228± 0.6608) % dengan KV =1.9949 %. Hasil penetapan kadar sari yang larut dalam etanol memenuhi syarat yaitu tidak kurang dari 5.2 % . Nilai KV sesuai dengan yang dipersyaratkan yaitu tidak lebih dari 5 % untuk analisis bahan alam (Indrayanto, 1994). Dapat dilihat pada tabel 5.5
Tabel 5.5 Hasil Penetapan Kadar Sari Yang Larut Dalam Air
5.5.2 Penetapan Kadar Sari Yang Larut Dalam Etanol Metode : Gravimetri
Tujuan : memberikan gambaran awal kandungan kimia yang terdapat dalam simplisia yang larut dalam pelarut etanol.
Kadar sari yang larut dalam etanol simplisia rimpang laos= (16.9611± 0.3599) % dengan KV =2.1219 %. Hasil penetapan kadar sari yang larut dalam etanol memenuhi syarat yaitu tidak kurang dari 1.7 % . Nilai KV sesuia dengan yang dipersyaratkan yaitu tidak lebih dari 5 % untuk analisis bahan alam (Indrayanto, 1994). Dapat dilihat pada tabel 5.6
Tabel 5.6 Hasil Penetapan Kadar Sari Yang Larut Dalam Etanol
5.5.3 Penetapan Kadar Minyak Atsiri Metode : Stahl
Tujuan : Mengetahui jumlah minyak atsiri yang terkandung dalam tanaman.
Dari hasil tersebut diketahui bahwa kadar minyak atsiri simplisia rimpang laos tidak memenuhi syarat karena lebih kecil
dari nilai yang dipersyaratkan yaitu tidak kurang dari 0.5 % v/b. Dapat dilihat pada tabel dibawah ini 5.7
Tabel 5.7 Hasil penetapan kadar minyak atsiri
5.5.4 Penetapan Susut Pengeringan Metode : Gravimetri
Tujuan : Memberikan batasan maksimal rentang tentang besarnya senyawa yang hilang pada proses pengeringan.
Susut pengeringan simplisia rimpang laos= (14.3990 ± 0.1720) % dengan KV =1.1945 %. Nilai KV sesuai dengan yang dipersyaratkan yaitu tidak lebih dari 5 % untuk analisis bahan alam (Indrayanto, 1994). Dapat dilihat pada tabel
Tabel 5.8 Hasil Penetapan Susut Pengeringan
No Berat sampel (g) Volume minyak (ml) % v/b 1.
5.5.5 Penetapan Kadar Abu Metode : Gravimetri
Tujuan : Memberikan gambaran awal jumlah total material yang tersisa setelah pemijaran, yang terdiri dari abu-fisiologis yang berasal dari tanaman itu sendiri, dan abu non-fisiologis yang merupakan residu dari senyawa extraneous yang menempel pada permukaan tanaman.
Kadar abu simplisia rimpang laos= (7.5285± 0.1623) % dengan KV =2.1558 %. Hasil penetapan kadar abu tidak memenuhi syarat karena kadar abu yang didapat 7.5285 % sedangkan yang tertera pada MMI adalah tidak lebih dari 3.9 %.. Nilai KV sesuai dengan yang dipersyaratkan yaitu tidak lebih dari 5 % untuk analisis bahan alam (Indrayanto, 1994). Dapat dilihat pada tabel 5.9
Tabel 5.9 Hasil Penetapan Kadar Abu
5.5.6 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Dalam Asam Metode : Gravimetri
Tujuan : Memberikan gambaran kandungan mineral internal dan eksternal yang tidak larut dalam asam.
Kadar abu tidak larut asam simplisia rimpang laos= (2.9255± 0.1157) % dengan KV =3.9549 %. Nilai KV sesuai dengan yang dipersyaratkan yaitu tidak lebih dari 5 % untuk analisis bahan alam (Indrayanto, 1994). Dapat dilihat pada tabel 5.10
Tabel 5.10 Hasil Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Dalam Asam
5.5.7 Penetapan Kadar Abu Larut Dalam Air Metode : Gravimetri
Tujuan : Memberikan gambaran kandungan mineral internal dan eksternal yang larut dalam air.
Kadar abu larut air simplisia rimpang laos= (2.9720± 0.0328) % dengan KV =1.1036 %. Nilai KV sesuai dengan yang dipersyaratkan yaitu tidak lebih dari 5 % untuk analisis bahan alam (Indrayanto, 1994). Dapat dilihat pada tabel 5.11
Tabel 5.11 Hasil Penetapan Kadar Abu Larut Dalam Air
5.6 Destilasi Minyak Atsiri
Bahan penelitian adalah rimpang laos (Alpinia galanga) yang diperoleh dari desa pelaosan, Magetanyang pada bulan Maret telah diidentifikasi di UPT Balai Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Purwodadi, Pasuruan. Rimpang laos yang telah dirajang dengan ukuran lebih kurang 10 cm didestilasi menggunakan alat destilasi air- uap air.
Dari 12,452 kg rimpang laos segar didapatkan 2,5 ml minyak atsiri ( kadar minyak atsiri = 20.0770 % v/b).
5.7 Uji Kandungan Minyak Atsiri menggunakan GC-MS
Identifikasi komponen minyak berdasarkan pada perbandingan masing-masing spektra dengan yang terdapat pada database. library yang digunakan pada GC-MS ini adalah database NIST02.L dan database Wiley275.L. Berikut adalah hasil uji kandungan minyak atsiri:
Gambar 5.20 profil kromatogram GC-MS minyak atsiriAlpinia galanga
Tabel 5.12 Komponen minyak atsiriAlpinia galangamenggunakan GC-MS menggunakan pelarut n-heksan
Retention Time (min)
Peak area (%) Komponen
4.68 5.66 Eucalyptol
5.99 0.09 P-Menth-1(7)-en-9-ol
6.69 0.09 Trans-p-Menth-2-en-1,8-d iol
6.79 1.04 3-cyclohexen-1-ol
7.03 0.89 α-terpineol
8.27 0.22 4-allylphenol
8.45 0.07 1,2,3,4,5,8-hexahydronap hthalena
9.03 4.81 phenol
9.37 0.33 Geranyl acetat
9.53 0.18 Caryophyllene
9.64 2.22 cyclohexane
10.07 3.21 caryophyllene
10.34 4.00 (E)-β-Famesene
10.53 0.93 Alpha-caryophyllene
10.68 3.08 Cinnamic acid
10.86 2.56 D-Germacrene
11.06 1.97 Patchoulene
11.33 2.88 Eugenol acetate
11.78 0.75 (E,E)-Farnesyl acetate
12.23 1.43 Alloaromadedrene
12.35 0.44 Viridiflorol
12.46 0.74 naphthalene
13.11 10.87 Aromadendrene
13.93 1.07 2,5-Furandione
Kandungan terbesar dari minyak atsiri berdasarkan hasil GC-MS adalah 2-propenoic acid (25%), Aromadendrene (10.87%), eucalyptol (5.66%), (E)-β-Famesene (4.00%), caryophyllene (3.21%).
5.8 Uji Aktivitas Antimikroba
Penentuan aktivitas antimikroba dan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) minyak atsiri laos dilakukan dengan metode pengenceran dalam agar. Mikroba uji yang digunakan adalah Staphylococus aureusATCC 6538,Eschericia coliATCC 8739 dan
Candida albicans ATCC 10231. Pengulangan dilakukan 3 kali untuk masing-masing mikroba uji dan pengamatan ada tidaknya pertumbuhan dilakuakn secara visual. Hasil penelitian uji aktivitas antimikroba minyak atsiri laos yang telah dilakukan menunjukan bahwa minyak atsiri tersebut pada Staphylococus aureus dan Candida albicans mampu menghambat pertumbuhan pada konsentrasi 0.093% v/v pada Candida albicans dan konsentrasi 0.06% v/v pada Staphylococus aureus, sedangkan pada Eschericia coli tidak terjadi hambatan sama sekali. Hasil dapat dilihat pada tabel berikut.
15.20 2.08 (E)-Farnesyl acetate
Tabel 5. 13 Aktivitas Antijamur dari Minyak AtsiriAlpinia galanga
terhadapCandida albicans
Tabel 5.14 Aktivitas Antibakteri dari Minyak AtsiriAlpinia galanga
terhadapEschericia coli
Kadar larutan uji ( % v/v )
Ada / Tidak nya
pertumbuhan KHM yang didapat
0,015
pertumbuhan KHM yang didapat 0,250
Ada Tidak dapat ditentukan 0,375
Tabel 5.15 Aktivitas Antibakteri dari Minyak AtsiriAlpinia galanga
terhadap
Staphylococcus aureus
2,000 2,500
Kadar larutan uji ( % v/v )
Ada / Tidak nya
pertumbuhan KHM yang didapat
0,015
Ada
0,062 % v/v 0,031
0,040 0,050 0,062
Tidak ada 0,125
