PENGARUH KADAR GARAM TERHADAP KARAKTERISTIK KIMIAWI DAN KERAGAMAN PROBIOTIK BAKTERI ASAM LAKTAT YANG DIFERMENTASIKAN DARI REBUNG APUS (Gigantochloa apus) DALAM AIR KELAPA PADA SUHU 30 OC

(1)

55 Lampiran 1. Karakteristik Berbagai Jenis Bakteri Asam Laktat

Tabel 7. Karakteristik Berbagai Jenis Bakteri Asam Laktat

Karakteristik Bentuk Gas CO2 Pertumbuhan Suhu 10o_C Suhu 45o_C NaCl 6,5% NaCl 18% pH 4,4 pH 9,6 Aerococcus Bulat +/- + - + - - + Enterococcus Bulat - + + + - + + Lactococcus Bulat - + - - -

+/-

- Leuconostoc Bulat - + -

+/-

-

+/-

- Pediococcus Bulat + +/-

+/-

- + - Streptococcus Bulat - -

+/-

- - - - Tetragenococcus Bulat + + - + + - + Lactobacillus Batang - +/- +/- +/- - +/- - Carnobacterium Batang - + - ND - ND - Keterangan :

+ : positif - : negatif +/- : bervariasi ND : tidak diujikan

Sumber : Rahayu & Margiono (1997)

Lampiran 2. Media yang Digunakan Untuk Uji Pertumbuhan dan Aktivitas

Antibakteri

Media deMan Rogosa Sharpe Broth “Merck” (MRS B)

Media MRS B dibuat dengan cara melarutkan 52,2 gram bubuk MRS B dengan 1 liter

aquades, kemudian diaduk hingga larut. Media disterilisasi dengan menggunakan

autoklaf selama 15 menit dengan suhu 121

o

C. Media MRS B mempunyai komposisi

sebagai berikut 8 gram ekstrak daging, 10 gram kasein/daging pepton, 20 gram D

(+)-glucose, 4 gram ekstrak

yeast

, 5 gram

sodium acetate

, 2 gram

di-Potassium hydrogen

phosphate

, 0,04 gram

manganese sulfate

, 2 gram

di-ammonium hydrogen citrate

, 0,2

gram

magnesium sulfate

, dan 1 ml

tween

80. Media deMan Rogosa Sharpe Agar “Merck” (MRS A)

Media MRS A dibuat dengan cara melarutkan 68,2 gram bubuk MRS A dengan 1 liter

aquades. Untuk menghomogenkan media, digunakan

stirrer

sambil dipanaskan

menggunakan

hotplate

. Kemudian disterilisasi dengan menggunakan autoklaf selama 15

menit dengan suhu 121

o

_{C. Media MRS A mempunyai komposisi sebagai berikut 0,2 gram}

(2)

gram di-

Kalium hydrogen phosphate

, 1 gram

tween

80, 2 gram

ammonium-hydrogencitrate

, 20 gram D (+)-glucose, 5 gram

sodium acetate

, 0,04 gram

manganese

sulfate

, dan 10 gram ekstrak daging.

Media Nutrient Agar (NA)

Media NA dibuat dengan cara melarutkan 20 gram bubuk NA dengan 1 liter aquades.

Untuk menghomogenkan media, digunakan

stirrer

sambil dipanaskan menggunakan

hotplate

. Kemudian disterilisasi dengan menggunakan autoklaf selama 15 menit dengan

suhu 121

o

C. Media NA mengandung 3 gram ekstrak daging, 12 gram agar dan 5 gram

pepton daging dalam setiap liternya.

Lampiran 3. Larutan Standar McFarland No.3 dan No.5

Larutan McFarland No. 3 dibuat dengan mencampurkan 0,3 ml

BaCl2 1% dengan 9,7 ml

H2SO4 1%. Larutan McFarland No. 5 dibuat dengan mencampurkan 0,5 ml BaCl2 1% dan 9,5

ml H2SO4 1%. Larutan standar McFarland No. 3 menunjukkan konsentrasi bakteri 900 CFU

(x106 /ml). Larutan Standar McFarland No. 5 menunjukkan konsentrasi bakteri 1500 CFU

(x106 /ml). Dalam pengujian, larutan standar McFarland No. 3 dan 5 digunakan untuk uji

kemampuan antimikroba dan aktivitas bakteriosin.

Lampiran 4. Larutan Kimia yang digunakan dalam Uji Kimia

Larutan NaOH 0,01 M

Pembuatan larutan NaOH 0,01 M dilakukan dengan menimbang 2 gram NaOH, kemudian

dilarutkan dalam 500 ml aquades.

Larutan NaH2PO4 0,15 M

Pembuatan larutan NaH

2

PO

4

0,15 M dilakukan dengan menimbang 5,85 gram NaH

2

PO

4

,

kemudian dilarutkan dalam 250 ml aquades.

Larutan 0,2 M CH3COONa. 3H2O

Pembuatan larutan 0,2 M CH

3

COONa.3H

2

O dilakukan dengan menimbang

(3)

Larutan Asetat Buffer 0,1 M pH 5,6

Pembuatan larutan Asetat Buffer 0,1 M pH 5,6 dilakukan dengan menggunakan 4,8 ml

larutan 0,2 M asam asetat dan 45,2 ml larutan 0,2 M CH

3

COONa. 3H

2

O, kemudian

diencerkan pada labu takar 100 ml sampai tanda tera.

Larutan 1,3 dimethylbarbiturat 0,3 M

Pembuatan larutan 1,3 dimethylbarbiturat 0,3 M dilakukan dengan menimbang 70

miligram 1,3 dimethylbarbiturat, kemudian dilarutkan dalam 1,4 ml asetat buffer.

Larutan Chloramine T 0,15%

Pembuatan larutan Chloramine T 0,15% dilakukan dengan menimbang 75 miligram

Chloramine, kemudian dilarutkan dalam 50 ml aquades.

(4)

Lampiran 5. Hasil Kemampuan Tumbuh BAL pada Kadar Garam, pH, dan Kondisi

Suhu yang Berbeda

Tabel 8. Hasil Absorbansi Kemampuan Tumbuh BAL pada Kadar Garam 6,5% dan 18%

Kode Isolat 24 Jam 48 Jam 6,5% 18% 6,5% 18% Ul 1 Ul 2 Ul 1 Ul 2 Ul 1 Ul 2 Ul 1 Ul 2 H1 2,1281 2,1973 0,1290 0,1378 2,2699 2,3005 0,1377 0,1510 H7 2,0682 1,8799 0,0914 0,0828 2,3223 2,2799 0,0983 0,1051 H16 1,8164 1,8962 0,0098 0,1238 2,3451 2,2699 0,1227 0,1520 H17 2,0441 1,7314 0,0925 0,1309 2,3335 2,1140 0,0983 0,1364 H23 2,0157 2,0212 0,0944 0,1106 2,3223 2,2699 0,1124 0,1238 H25 2,1499 2,1891 0,1471 0,1815 2,2900 2,2900 0,1533 0,1881 H27 1,7994 1,7314 0,1302 0,1328 2,2506 2,1730 0,1510 0,1395 H30 2,2231 2,2799 0,1112 0,0732 2,3113 2,3571 0,1327 0,1333 H33 2,0441 2,1652 0,1827 0,0732 2,2900 2,3113 0,1677 0,0923 H37 2,1281 2,1809 0,0826 0,1068 2,2506 2,2699 0,0878 0,1270 H40 1,8130 1,9133 0,1135 0,1237 2,2058 2,3113 0,1359 0,1465 H42 1,8341 1,9839 0,0905 0,1127 2,2506 2,2699 0,1091 0,1193 H47 1,9839 2,0212 0,1006 0,1000 2,3113 2,3113 0,1178 0,1230 H50 2,0441 1,9098 0,0963 0,1088 2,3223 2,2900 0,1166 0,1185 I1 1,9640 1,7894 0,1072 0,1204 2,3113 2,2144 0,1323 0,1312 I2 2,0571 1,7830 0,1067 0,1055 2,3451 2,1891 0,1200 0,1340 I3 1,9177 1,9448 0,1537 0,0940 2,3223 2,3113 0,2397 0,1066 I5 1,8234 1,9402 0,1882 0,1190 2,2799 2,2900 0,1833 0,1390 I6 1,4917 1,9995 0,0751 0,2003 2,1499 2,2900 0,0962 0,2216 I34 1,4554 1,9995 0,1115 0,1733 2,1652 2,2799 0,1189 0,1776 I38 1,6392 2,0157 0,0847 0,1099 2,2799 2,2900 0,1049 0,1105 I50 1,4967 1,7202 0,0770 0,0935 2,1281 2,2058 0,0912 0,1251 J2 1,4772 1,7863 0,1354 0,1270 2,1281 2,1809 0,1715 0,1553 J7 1,4406 1,4435 0,1570 0,1298 2,1891 2,1809 0,1771 0,1372 J9 1,7766 2,0157 0,1278 0,1260 2,2699 2,2601 0,1388 0,1340 J10 1,4740 1,6341 0,1750 0,1129 2,1281 2,1499 0,2328 0,1368 J14 1,6038 1,8341 0,1737 0,0765 2,1891 2,2601 0,2334 0,0963 J18 1,6345 1,6145 0,1425 0,0991 2,2412 2,1809 0,1876 0,1187 J19 1,3793 1,7314 0,0925 0,1058 2,2412 2,1809 0,1084 0,1312 J20 1,5386 1,5331 0,1128 0,1595 2,2699 2,1575 0,1355 0,1797 J31 2,0157 2,1351 0,1436 0,0963 2,1351 2,3113 0,2452 0,1435 Keterangan: Ul : Ulangan

(5)

Tabel 9. Hasil Absorbansi Kemampuan Tumbuh BAL pada Kadar pH 4,4 dan pH 9,6

Kode Isolat 24 Jam 48 Jam 4,4 9,6 4,4 9,6 Ul 1 Ul 2 Ul 1 Ul 2 Ul 1 Ul 2 Ul 1 Ul 2 H1 2,3335 2,3335 2,3948 2,4509 2,2223 2,3223 2,5516 2,5516 H7 1,9890 2,0049 2,3693 2,3818 2,1351 2,1281 2,5911 2,5709 H16 1,9890 1,9943 2,3948 1,4692 2,1210 2,1425 2,6829 2,6581 H17 1,9448 2,0049 2,2799 2,2601 2,0873 2,1351 2,4819 2,4420 H23 1,9943 2,0808 2,3451 2,4984 2,1005 2,1140 2,5911 2,7092 H25 2,2601 2,3223 2,5516 2,4509 2,3113 2,3005 2,5623 2,4095 H27 1,9591 1,9448 2,2412 2,2142 2,1499 2,1072 2,0362 2,0911 H30 2,1571 2,1351 2,4509 2,4509 2,2058 2,1809 2,7092 2,6829 H33 1,8759 2,0745 1,5748 2,3693 2,1499 2,1425 2,5154 2,6829 H37 2,1652 2,1425 2,3451 2,3948 2,2144 2,1809 2,4819 2,5709 H40 1,9310 1,9221 2,2140 2,3571 2,1281 2,1575 2,6123 2,5911 H42 1,9591 2,0500 2,1973 2,1730 2,1652 2,0873 2,4082 2,4662 H47 1,9698 1,8680 2,3958 1,6392 2,0938 2,1351 2,6829 2,2799 H50 2,0325 1,9839 2,2412 2,1809 2,1210 2,0808 2,5709 2,3335 I1 1,9543 2,0441 2,1102 2,6345 2,0808 2,1210 2,0864 2,4662 I2 1,9689 1,9543 1,6058 1,8928 2,1005 2,1891 2,4220 2,4220 I3 2,0049 2,0103 2,3571 2,1809 2,0873 2,0873 2,6581 2,3571 I5 1,9448 1,9995 2,4509 2,1973 2,1351 2,1281 2,6345 2,3818 I6 2,0382 2,0500 2,2412 2,2144 2,1281 2,1425 2,4362 2,4509 I34 2,0500 1,9048 2,4220 2,4153 2,0873 2,1652 2,3709 2,2415 I38 1,9005 2,0500 2,4220 2,3113 2,1730 2,1005 2,2231 2,0933 I50 1,9789 2,0500 2,6829 2,7092 2,1281 2,1730 2,4082 2,5829 J2 1,9890 1,9448 2,3335 2,2799 2,1351 2,1210 2,6851 2,5516 J7 2,0049 2,0441 2,3223 2,2321 2,1351 2,1351 2,5516 2,4819 J9 1,9839 2,0500 2,2900 2,1267 2,1210 2,1281 2,4662 2,5911 J10 1,8921 1,9310 2,3451 2,3005 2,1809 2,1730 2,4819 2,5911 J14 1,9689 1,8680 2,3693 2,3633 2,1210 2,1351 2,6345 2,6581 J18 1,9995 1,9839 2,3005 2,2699 2,0938 2,0873 2,5331 2,4984 J19 1,8527 1,7703 2,2506 2,2412 2,1973 2,2506 2,5911 2,4362 J20 2,0212 2,0560 2,3113 2,2699 2,1210 2,1425 2,6581 2,5331 J31 1,9995 2,0382 2,6829 2,4220 2,3151 2,1652 2,2321 1,1011 Keterangan: Ul : Ulangan

(6)

Tabel 10. Hasil Absorbansi Kemampuan Tumbuh BAL pada Suhu 10

o

_{C dan 45}

o

_C

Kode Isolat 24 Jam 48 Jam 10o_C ₄₅o_C ₁₀o_C ₄₅o_C Ul 1 Ul 2 Ul 1 Ul 2 Ul 1 Ul 2 Ul 1 Ul 2 H1 0,8429 0,9147 0,7776 1,5460 1,5085 1,5242 0,7550 1,5516 H7 0,6877 0,9039 2,3693 2,3223 0,9333 0,9009 2,3005 2,4662 H16 0,5247 0,6368 2,4362 2,4362 0,8787 0,7169 2,3571 2,3948 H17 0,5022 0,6552 2,4082 2,4082 0,8071 0,7954 2,3451 2,3818 H23 0,4691 0,6781 2,4662 2,4662 0,7782 0,7445 2,4362 2,4220 H25 1,1477 1,3080 1,1931 1,1931 1,7314 1,7460 0,8549 0,9850 H27 0,3640 0,3212 2,4362 2,4362 0,6350 0,8126 2,3571 2,4082 H30 0,7656 0,9302 2,4220 2,4220 1,0905 1,1403 2,3571 2,3818 H33 0,4561 0,6664 2,3005 2,3005 0,6786 0,7007 2,4362 2,4509 H37 0,8848 1,1106 2,1973 2,1973 1,1691 1,2719 2,3005 2,4082 H40 0,4584 0,6722 2,4082 2,4082 0,7301 0,6438 2,3571 2,4220 H42 0,5112 0,5433 2,4082 2,4082 0,7656 0,6143 2,3571 2,4220 H47 0,4723 0,6581 2,3451 2,3451 0,7057 0,7146 2,3223 2,4082 H50 0,4265 0,3359 2,4082 2,4082 0,6422 0,9297 2,3948 2,4082 I1 0,4655 0,5428 2,4082 2,4082 0,7041 0,6649 2,3451 2,3818 I2 0,4453 0,5140 2,4082 2,4082 0,7150 0,6129 2,3818 2,3818 I3 0,4994 0,7523 2,4220 2,4220 0,7911 0,9669 2,3818 2,4082 I5 0,1945 0,1559 2,4082 2,4082 0,3168 1,2921 2,3571 2,4082 I6 0,2920 1,2223 2,4082 2,4082 0,5132 0,1388 2,3335 2,4220 I34 0,4229 0,6727 2,3948 2,3948 0,5261 0,4495 2,3335 2,3693 I38 0,4658 0,5923 2,3693 2,3818 0,6692 0,6748 2,3451 2,3818 I50 0,3990 0,4426 2,3571 2,4082 0,5729 0,5010 2,3948 2,3818 J2 0,5032 0,5171 2,3818 2,3948 0,6725 0,5978 2,3571 2,3818 J7 0,7454 0,3783 2,3948 2,4220 1,0096 0,5062 2,3223 2,3818 J9 0,5154 0,5737 2,2900 2,4362 0,7393 0,6617 2,2799 2,3948 J10 0,3558 0,4517 2,4082 2,3818 0,5547 0,4799 2,3818 2,3693 J14 0,3591 0,4375 2,3818 2,3335 0,5288 0,4967 2,3223 2,3818 J18 0,3683 0,5439 2,3818 2,3223 0,5370 0,5000 2,3571 2,4220 J19 0,5024 0,5306 2,3693 2,3451 0,7054 0,6613 2,3113 2,3818 J20 0,4489 0,5811 2,3451 2,3335 0,6466 0,6935 2,3005 2,4082 J31 0,3009 0,4538 2,3818 2,4082 0,4155 0,4773 2,3451 2,3818 Keterangan: Ul : Ulangan