Adiwidjaya D, Supito, Sumantri I. 2008. Penerapan teknologi budidaya udang vaname L. vannamei semiintensif pada lokasi tambak salinitas tinggi. Media Budidaya Air Payau Perekayasaan 7.
Andrade TPD, Srisuvan T, Tang KFJ, Lightner DV. 2007. Real time reverse transcription polymerase chain reaction assay using Taqman probe for detection and quantification of infectious myonecrosis virus (IMNV).
Aquaculture 264: 2-15.
Austin B. 2006. The bacterial microflora of fish, revised. Sci World J 6: 931–945.
Bergmeyer HU, Grassi. 1983. Methods of Enzymatic Analysis. Vol ke-2. Weinheim:
Verlag Chemie.
Bernfeld P. 1955. Methods in Enzymology. New York: Academic Pr.
Blaxhall, Daishley KW. 1973. Routine haematological methods for use with fish blood. J Fish Biol 5: 577-581.
Cappuccino JG, Sherman N. 2008. Microbiology: A Laboratory Manual. USA:
Pearson Benjamin Cummings.
Chien YH. 1992. Water quality requirements and management for marine shrimp culture. Di dalam: Wyban J, editor. Proceedings of the Special Session on Shrimp Farming; Baton Rouge, LA. USA: World Aquaculture Society. hlm
144-156.
Costa AM, Buglione CC, Bezerra FL, Martins PCC, Barracco MA. 2009. Immune assessement of farm-reared Penaeus vannamei shrimp naturally infected by
IMNV in NE Brazil. Aquaculture 291: 141-146.
Escobedo CM, Bonilla, Audoorn L, Wille M, Alday V, Sanz, Sorgeloos P, Pensaert MB, Nauwynck HJ. 2006. Standardized white spot syndrome virus (WSSV) inoculation procedures for intramuscular or oral routes. Dis Aquat Org 68: 181-188.
[FAO/WHO] Food and Agriculture Organization of The United Nations dan World Health Organization. 2001. Health and nutritional properties of probiotics in food including powder milk with live lactic acid bacteria [internet]. [diacu 2012 Agustus 15]. Tersedia dari: http://www.who.int/foodsafety/ publications/fs_management/en/probiotics.pdf.
Francis G, Harinder P, Makkar S, Becker K. 2001. Antinutritional factors present in plant-derived alternate fish feed ingredients and their effects in fish.
Aquaculture 199: 197–227.
Genc MA, Aktas M, Genc E, Yilmaz E. 2007. Effects of dietary mannan oligosaccharide on growth, body composition and hepatopancreas histology of Penaeus semisulcatus (de Haan 1844). Aquac Nut 13: 156-161.
Gill HS, Cross ML. 2002. Probiotics and immune function. Di dalam: Calder PC, Field CJ, Gill HS, editor. Nutrition and Immune Function. UK: CABI
35 Giulianini PG, Bierti M, Lorenzon S, Battistella S, Ferrero EA. 2007. Ultrastructural and functional characterization of circulating hemocytes from the freshwater crayfish Astacus leptodactylus: Cell types and their role after
in vivo artificial non-self challenge. Micron 38: 49-57.
Haryati T, Supriyati. 2010. Pemanfaatan senyawa oligosakarida dari bungkil kedelai dan ubi jalar pada ransum ayam pedaging. JITV 15 (4): 253-260.
Haryati T. 2011. Probiotik dan prebiotik sebagai pakan imbuhan nonruminansia.
Wartazoa 21 (3).
Hasan A. 2011. Ko-infeksi infectious myonecrosis virus (IMNV) dan Vibrio harveyi pada udang vaname (Litopenaeus vannamei) [tesis]. Bogor: Sekolah
Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Helland BG, Helland SJ, Gatlin DM. 2008. The effect of dietary supplementation with mannanoligosaccharide, fructooligosaccharide or galactooligosaccharide on the growth and feed utilization of Atlantic salmon (Salmo salar). Aquaculture 283: 163-167.
Hirono Y. 1992. Current practices of water quality management in shrimp farming and their limitations. Di dalam: Wyban J, editor. Proceedings of the Special Session on Shrimp Farming; Baton Rouge, LA. USA: World Aquaculture
Society. hlm 157-165.
Holmblad T, Soderhall K. 1999. Cell adhesion molecules and antioxidative enzymes in a crustaceans, possible role in immunity. Aquaculture 172: 111-
123.
Hood MA, Meyers SP. 1974. Microbial aspects of penaeid shrimp digestion.
Proceedings of the 27th Annual Session; Miami Beach, FL. USA: Gulf and
Caribbean Fisheries Institute. hlm 81-91.
Huisman EA. 1987. Principles of Fish Production. Waganigen: Departemen of Fish
Culture and Fisheries, Waganigen.
Jiravanichpaisal P, Lee BL, Soderhall K. 2006. Cell-mediated immunity in arthropods: hematopoiesis, coagulation, melanization and opsonization.
Immunobiology 211: 213-236.
Le Moullac G, Haffner P. 2000. Environmental factors affecting immune responses in crustacea. Aquaculture 191: 121–131.
Le Moullac G, Le Groumellec M, Ansquer D, Frosissard S, Levy P. 1997. Haematological and phenoloxidase activity changes in the shrimp Penaeus stylirostris in relation with the moult cycle: protection against vibriosis. Fish Shellfish Immunol 7: 227–234.
Li J, Beiping T, Kangsen M. 2009. Dietary probiotic Bacillus OJ and
isomaltooligosaccharides influence the intestine microbial populations, immune responses and resistance to white spot syndrome virus in shrimp (Litopenaeus vannamei). Aquaculture 291: 35–40.
Li K, Zheng TL, Tian Y, Yuan JJ. 2007. Bacterial community structure in intestine of the white shrimp, Litopenaeus vannamei [abstrak]. Wei Sheng Wu Xue Bao
47 (4): 649-653.
Li P, Gatlin DM. 2004. Dietary brewers yeast and the prebiotic GroBiotickTM AE
36
striped bass (Morone chrysops x M. saxatilis) to Streptococcus iniae infection. Aquaculture 231: 445-456.
Lightner DV, Pantoja CR, Poulos BT, Tang KFJ, Redman RM, Andrade TP, Bonami JR. 2004. Infectious myonecrosis: new disease in Pacific white shrimp. Glob Aquac Advocate 7: 85.
Lisal JS. 2005. Konsep probiotik dan prebiotik untuk modulasi mikrobiota usus besar. Medic Nusant 26: Oktober-Desember.
Liu CH, Chen JC. 2004. Effect of ammonia on the immune response of white shrimp Litopenaeus vannamei and its susceptibility to Vibrio alginolyticus. Fish Shellfish Immunol 16: 321-334.
Maggioni DS, Andreatta ER, Hermes EM, Barracco MA. 2004. Evaluation of some hemato-immunological parameters in female shrimp Litopenaeus vannamei
submitted to unilateral eyestalk ablation in association with a diet supplemented with superdoses of ascorbic acid as a form of immunostimulation. Aquaculture 241: 501–515.
Marlis A. 2008. Isolasi oligosakarida ubi jalar (Ipomoea batatas L) dan pengaruh
pengolahan terhadap potensi prebiotiknya [tesis]. Bogor: Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Mathious, Getesoupe, Hervi M, Metailler R, Ollevier. 2006. Effect of dietary inulin and oligosaccharides as prebiotics for weaning turbot, Psetta maxima
(Linnaeu, C. 1758). Aquac Int 14 (3): 219-229.
Merrifield DL, Dimitroglou A, Foey A, Davies SJ, Baker RTM, Bogwald J, Castex M, Ringo E. 2010. The current status and future focus of probiotic applications for salmonids. Aquaculture 302: 1-18.
Muchtadi D. 1989. Evaluasi Nilai Gizi Pangan. Depdikbud, Dirjen Dikti-PAU.
Bogor : Institut Pertanian Bogor.
Muhlia-Almazan A, Garcia-Carreno FL. 2003. Digestion physiology and proteolytic enzymes of crustacean species of the Mexican Pacific Ocean. Di dalam: Hendrickx ME, editor. Contributions to the Study of East Pacific Crustacean 2. Instituto de Ciencias del Mar y Limnologia, UNAM.
Munoz M, Cedeno R, Rodriguez J, van der Knaap WPW, Mialhe E, Bachere E. 2000. Measurement of reactive oxygen intermediate production in haemocytes of the penaeid shrimp, Penaeus vannamei. Aquaculture 191: 89-
107.
Mussatto SI, Mancilha IM. 2007. Non-digestible oligosaccharides: a review.
Carbohydr Polym 68: 587–597.
Nayak SK. 2010. Probiotics and immunity: a fish perspective. Fish Shellfish Immunol 29: 2-14.
North Carolina Sweet Potato Commission. 2013. Sweet potato varieties [internet]. [diacu 2013 Februari 10]. Tersedia dari: http://www.ncsweetpotatoes.com/ sweet-potatoes-101/sweet-potato-varieties.
Pangastuti A, Suwanto A, Lestari Y, Suhartono MT. 2010. Bacterial communities associated with white shrimp (Litopenaeus vannamei) larvae at early
37 Poulos BT, Lightner DV. 2006. Detection of infectious myonecrosis virus (IMNV) of penaeid shrimp by reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT- PCR). Dis Aquat Org 73: 69-72.
Poulos BT, Tang KFJ, Pantoja CR, Bonami JR, Lightner DV. 2006. Purification and characterization of infectious myonecrosis virus of penaeid shrimp.
Gener Virol 87: 987-996.
Putra AN. 2010. Kajian probiotik, prebiotik dan sinbiotik untuk meningkatkan kinerja pertumbuhan ikan nila (Oreochromis niloticus) [tesis]. Bogor:
Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Ringo E, Olsen RE, Gifstad TO, Dalmo RA, Amlund H, Hemre GI, Bakke AM. 2010. Prebiotics in aquaculture: a review. Aquac Nut 16: 117-136.
Roch P. 1999. Defense mechanisms and disease prevention in farmed marine invertebrates. Aquaculture 172: 125-145.
Rodriguez J, Le Moullac G. 2000. State of the art of immunological tools and health control of penaeid shrimp. Aquaculture 191: 109-119.
Rodriguez-Estrada U, Satoh S, Haga Y, Fushimi H, Sweetman J. 2009. Effect of single and combined supplementation of Enterococcus faecalis, mannan
oligosaccharide and polyhydrobutyric acid on growth performance and immune response of rainbow trout Oncorhynchus mykiss. Aquac sci 57: 609-
617.
Roxas MJT, Fukuba H, Mendoza EMT. 1985. Short report: the absence of oligosaccharides in storage roots of sweet potato (Ipomoea batatas L.). Philipp J Crop Sci 10 (3): 161-163.
Salze G, Mclean E, Schwarz MH, Craig SR. 2008. Dietary mannan oligosaccharide enhances salinity tolerance and gut development of larval cobia. Aquaculture
274: 148-152.
Senapin S, Phewsaiya K, Briggs M, Flegel TW. 2007. Outbreaks of infectious myonecrosis virus (IMNV) in Indonesia confirmed by genome sequencing and use of an alternative RT-PCR detection method. Aquaculture 266: 32-38.
Smith VJ, Brown JH, Hauton C. 2003. Immunostimulation in crustaceans: does it really protect against infection?. Fish Shellfish immunol 15: 71-90.
Soderhall K, Cerenius L. 1992. Crustacean immunity. Annual Ref Fish Dis: 3-23.
Song YL, Yu CI, Lien TW, Huang CC, Lin MN. 2003. Haemolymph parameters of Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) infected with taura syndrome
virus. Fish Shellfish Immunol 14: 317-331.
Subandiyono, Hastuti S. 2009. Nutrisi Ikan. Semarang: Universitas Diponegoro.
Syahailatua DY. 2009. Seleksi bakteri probiotik sebagai stimulator sistem imun pada udang vaname Litopenaeus vannamei [tesis]. Bogor: Sekolah
Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Takeuchi. 1988. Laboratory work-chemical evaluation of dietary nutrients. Di dalam: Watanabe, editor. Fish Nutrition and Mariculture; Kanagawa International Fisheries Training. Japan: Japan International Cooperation
Agency (JICA).
Tang KFJ, Ochoa WF, Sinkovits RS, Poulos BT, Ghabrial SA, Lightner DV, Baker TS, Nibert ML. 2008. Infectious myonecrosis virus has a totivirus-like, 120-
38
subunit capsid, but with fiber complexes at the fivefold axes. PNAS 45 (105):
17527-17531.
Tang KFJ. Pantoja CR, Poulos BT, Redman RM, Lightner DV. 2005. In situ hybridization demonstrates that Litopenaeus vanammei, L. stylirostris and Penaeus monodon are susceptible to experimental infection with infectious
myonecrosis virus (IMNV). Dis aquat Org 63: 261-265.
Taukhid, Nura’ini YL. 2008. Infectious myonecrosis virus (IMNV) in Pasific white shrimp, Litopenaeus vannamei in Indonesia. Indones Aquac 3 (2): 139-
146.
U-taynapun K, Viriyapongsutee B, Intrasungkha N, Supamattaya K. 2007. Bacterial community from gut of white shrimp, Penaeus vannamei, cultured
in earthen ponds. Songklanakarin J Sci Technol 2: 247-259.
Verschuere L, Rombaut G, Sorgeloos P, Verstraete W. 2000. Probiotic bacteria as biological control agents in Aquaculture. Microbiol Molec Biol 64: 655-671.
Weidner D, Rosenberry B. 1992. World shrimp farming. Di dalam: Wyban J, editor.
Proceeding of the special season on shrimp farming; Baton Rouge, LA.
USA: World Aquaculture Society.
Widanarni, Sukenda, Setiawati M. 2008. Bakteri probiotik dalam budidaya udang: seleksi, mekanisme aksi, karakterisasi dan aplikasinya sebagai agen biokontrol. J Ilmu Pertan Indones 13 (2): 80-89.
Widanarni, Suwanto A, Sukenda, Lay BW. 2003. Potency of Vibrio isolates for
biocontrol of vibriosis in tiger shrimp (Penaeus monodon) larvae. Biotropia
20: 11-23.
Wikipedia. 2012. Sweet potato [internet]. [diacu 2012 Agustus 15]. Tersedia dari: http://En.wikipedia.org/wiki/Sweet_potato.
Yilmaz E, Genc MA, Genc E. 2007. Effects of dietary mannan oligosaccharides on growth, body composition, intestine and liver histology of rainbow trout
Oncorhyncus mykiss. Aquaculture 59: 182-188.
Zhang Q, Ma H, Mai K, Zhang W, Liufu Z, Xu W. 2010. Interaction of dietary
Bacillus subtilis and fructooligosaccharide on growth performance, non-
specific immunity of sea cucumber, Apostichopus japonicas. Fish Shellfish Immunol 29: 204-211.
Zhou Q, Buentello JA, Gatlin DM. 2010. Effects of dietary prebiotics on growth performance, immune response and intestinal morphology of red drum (Sciaenops ocellatus). Aquaculture 309: 253-257.
40
Lampiran 1 Metode total plate count
Media agar 0,05 ml 0,1 ml Biakan bakteri 1:10 @ 0,9 ml PBS 0,1 ml 0,1 ml 1:10000 1:1000 1:100
Setiap pengenceran bakteri disebar dalam media (duplo)
Inkubasi selama 18 jam dan dihitung jumlah koloni yang tumbuh (30-300 koloni)
41 Lampiran 2 Pembuatan media bakteri
Seawater Complete (SWC)
Media SWC merupakan media umum untuk menumbuhkan bakteri air laut. Komposisi bahan untuk membuat media SWC cair yaitu bacto peptone 5 g, yeast extract 1 g, glycerol 3 ml, air laut 750 ml dan akuades 250 ml. Media SWC agar
dibuat dengan komposisi yang sama ditambah bacto agar sebanyak 15-20 g. Media
SWC dibuat dengan mencampurkan bahan-bahan tersebut, selanjutnya dipanaskan di atas hot plate sampai homogen (hampir mendidih) sambil diaduk menggunakan magnetic stirrer. Media SWC disterilkan dengan menggunakan autoklaf pada suhu
121oC dan tekanan 1 atm selama 15-20 menit. Setelah hangat kuku, media SWC agar dituangkan ke dalam cawan petri (± 15 ml) secara aseptik dan dibiarkan sampai membeku.
Thiosulfate Citrate Bilesalt Sucrose (TCBS) Agar
Media TCBS merupakan media selektif untuk menumbuhkan bakteri Vibrio.
Media TCBS agar dibuat dengan melarutkan bubuk media TCBS sebayak 98 g ke dalam 1.000 ml akuades yang telah disterilkan. Larutan tersebut selanjutnya dipanaskan di atas hot plate sampai homogen (hampir mendidih) sambil diaduk
menggunakan magnetic stirrer. Setelah hangat kuku, media TCBS dituangkan ke
dalam cawan petri (± 15 ml) secara aseptik dan dibiarkan sampai membeku.
Phosfat Buffer Saline (PBS)
Media PBS dibuat dengan mencampurkan NaCl 0,8 g; KH2PO4 0,2 g;
NaHPO4.2H2O 1,5 g; KCl 0,2 g dan akuades 1.000 ml. Media dipanaskan di atas
hot plate sampai larut sempurna sambil diaduk menggunakan magnetic stirrer.
Media SWC disterilkan dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121oC dan tekanan 1 atm selama 15-20 menit.
42
Lampiran 3 Sistem resirkulasi pada wadah perlakuan
b a 2 1 3 4 5 10 9 8 1 7 6 Keterangan gambar : a. Akuarium perlakuan
b. Sistem resirkulasi air (satu perlakuan dengan tiga ulangan) 1. Shelter
2. Anco
3. Pipa saluran air hasil treatment
4. Ember filter (pasir + karang + busa) 5. Pompa air
6. Bioball
7. Wadah treatment air
8. Talang saluran air kotor 9. Outlet air
10. Akuarium 11. Inlet air 11
43 Lampiran 4 Ekstraksi IMNV dari tubuh udang yang terinfeksi
Udang yang positif terinfeksi IMNV dibersihkan dan diambil bagian dagingnya. Daging udang dicacah sampai halus kemudian ditambahkan larutan PBS dengan perbandingan 1:10 w/v dan disentrifuse dengan kecepatan 6.500 rpm pada suhu 4 oC selama 20 menit. Supernatan diambil dan disentrifuse kembali
dengan kecepatan 13.000 rpm pada suhu 4 oC selama 20 menit. Selanjutnya
supernatan disaring dengan filter mess size 0,45 µm. Ekstrak virus hasil filtrasi
kemudian disimpan pada suhu -70 oC sampai dengan digunakan.
Lampiran 5 Tahapan dan waktu kegiatan penelitian pada uji in vivo
Uji resistensi udang vaname terhadap IMNV
Uji performa pertumbuhan.
Kegiatan Hari ke
-15 0 5 10 15 20 25 30 35 40
Persiapan dan adaptasi udang Pemberian sinbiotik
Injeksi IMNV Pengamatan sintasan Pengamatan gejala klinis Pengukuran parameter imunitas
Kegiatan Hari ke
-15 0 5 10 15 20 25 30
Persiapan dan adaptasi udang Pemberian sinbiotik
Penimbangan bobot udang
Pengukuran jumlah konsumsi pakan Analisis proksimat
44
Lampiran 6 Perhitungan total hemosit dengan menggunakan hemasitometer
Contoh perhitungan:
Jumlah sel hemosit terhitung = 100 sel (dalam 25 kotak besar)
Volume hemasitometer = 1 x 1 x 0,1 mm3 = 1 x 10-4 ml
Pengenceran hemolimph = 5 kali
Total hemosit = jumlah sel terhitung x (volume hemasitometer)-1 x pengenceran
= 100 x (1 x 10-4)-1 x 5
= 5 x 106 sel ml-1
Lampiran 7 Prosedur analisis proksimat Analisis kadar air
Cawan dipanaskan di dalam oven pada suhu 110 oC selama 1 jam kemudian
dimasukkan ke dalam desikator selama 30 menit sebelum ditimbang (X1). Sampel
ditimbang sebanyak 2-3 g (A) kemudian dimasukkan ke dalam cawan dan dipanaskan di dalam oven pada suhu 110 oC selama 4 jam. Cawan didinginkan
dalam desikator selama 30 menit sebelum ditimbang kembali (X2). Kadar air
dihitung dengan menggunakan rumus berikut:
� � = �1+ � − �� × %
1mm
mm Perhitungan sel hemosit pada 25 kotak besar
45 Analisis kadar abu
Cawan dipanaskan di dalam oven pada suhu 110 oC selama 1 jam kemudian
dimasukkan ke dalam desikator selama 30 menit sebelum ditimbang (X1). Sampel
ditimbang sebanyak 2-3 g (A) kemudian dimasukkan ke dalam cawan dan dipanaskan di dalam tanur pada suhu 600 oC sampai bahan menjadi abu. Setelah
suhu cawan turun sampai suhu 100-200oC, cawan didinginkan dalam desikator
selama 30 menit sebelum ditimbang kembali (X2). Kadar abu dihitung dengan
menggunakan rumus berikut:
� = � − �� 1 × %
Analisis kadar protein (metode Kjehdall)
Pada tahap oksidasi, sampel sebanyak 0,5 g dimasukkan ke dalam labu Kjehdall, kemudian ditambahkan 3 g katalis K2SO4+CuSO4.5H2O (9:1) dan 10 ml
H2SO4 pekat. Labu dipanaskan pada suhu 400oC (±1 jam) sampai larutan dalam
labu berwarna hijau bening. Selanjutnya larutan didinginkan selama ±30 menit dan ditambahkan 25 air destilasi. Setelah itu larutan dimasukkan ke dalam labu takar dan diencerkan dengan akuades sampai volume larutan tersebut mencapai 100 ml (A).
Pada tahap destilasi, H2SO4 0,05 N sebanyak 10 ml dituang ke dalam
erlenmeyer dan ditambahkan 2 tetes indikator methylred (B). Selanjutnya, 10 ml
NaOH 30% ditambahkan pada larutan A sebanyak 5 ml dan dimasukkan ke dalam labu Kjehdall. Kemudian dilakukan destruksi selama 10 menit mulai saat tetesan pertama pada larutan B.
Pada tahap titrasi, hasil destruksi dititrasi dengan NaOH 0,05 N. Blanko dibuat dengan melakukan prosedur yang sama tanpa penambahan sampel. Kadar protein dihitung menggunakan rumus berikut:
� � = , ∗× ��− ��� × , ∗∗× × %
Ket: Vb = Volume titran NaOH 0,05 N untuk blanko (ml)
Vs = Volume titran NaOH 0,05 N untuk sampel (ml)
A = Bobot sampel (g)
* = Setiap ml titran NaOH (0,05 N) ekivalen dengan 0,0007 g N ** = Faktor nitrogen
Analisis lipid (metode Folch)
Sampel sebanyak 2 g (A) ditambahkan 40 ml larutan kloroform:metanol (2:1). Senjutnya, dihomogenkan selama 5 menit dengan sentrifuse pada 5.000 rpm dan disaring menggunakan vacuum pump. Hasil penyaringan dipindahkan ke dalam
46
0,2 kali volume larutan kloroform-metanol yang digunakan. Selanjutnya, larutan kembali disaring dan dibilas dengan menggunakan 10 ml larutan kloroform- metanol. Setelah disaring larutan di dalam labu pemisah ditutup dan diaduk hingga merata selama 1 menit dan didiamkan selama 1 malam hingga terpisah menjadi 2 lapisan. Lapisan bagian bawah diambil dan ditampung dengan labu lain yang telah diketahui bobotnya (C). Selanjutnya larutan dalam labu tersebut diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator hingga larutan dalam labu menguap semua,
kemudian labu tersebut ditimbang kembali (B). Kadar lemak dihitung dengan menggunakan rumus berikut:
� � � = −� × %
Analisis serat kasar
Kertas saring dipanaskan dalam oven selama 1 jam pada suhu 110 oC, setelah
itu didinginkan dalam deksikator sebelum ditimbang (X1). Sampel A sebanyak 0,5
g ditambahkan 50 ml H2SO4 0,3 N dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer 250 ml
untuk dipanaskan selama 30 menit. Selanjutnya, 25 ml NaOH 1,5 N ditambahkan dan dipanaskan kembali selama 30 menit. Larutan dan bahan yang telah dipanaskan kemudian disaring dalam corong Buchner yang dihubungkan dengan vacuum pump
untuk mempercepat proses penyaringan. Larutan dan bahan yang tertinggal dalam corong dibilas secara berturut-turut menggunakan 50 ml air panas; 50 ml H2SO4 0,3
N; 50 ml air panas dan 25 ml aseton. Kertas saring dan isinya dimasukkan ke dalam cawan porselin lalu dikeringkan selama 1 jam dan kemudian didinginkan dalam deksikator sebelum ditimbang (X2). Selanjutnya kertas saring dan isinya tersebut
dipanaskan dalam tanur pada suhu 600oC hingga berwarna putih, kemudian
didinginkan dalam deksikator dan ditimbang (X3). Kadar serat kasar dihitung
dengan menggunakan rumus berikut:
47 Lampiran 8 Prosedur analisis enzim
Aktivitas enzim amylase (Bergmeyer dan Grassi 1983)
Perlakuan Blanko (ml) Standar (ml) Sampel (ml) Buffer borat (0,01 M; pH 8,0) 1,0 1,0 1,0
Substrat kasein (20 mmol;, pH 8,0) 1,0 1,0 1,0
Enzim dalam CaCl2 (2 mM) - - 0,2
Tirosin standar - 0,2 -
Aaquades 0,2 - -
Inkubasi pada 37 oC tepat, 10 menit
TCA (0,1 M) 2,0 2,0 2,0
CaCl2 (2 mM) - - 0,2
Enzim dalam CaCl2 (2 mM) 0,2 0,2 -
Inkubasi pada 37 oC tepat, 10 menit
Sentrifusi 4.000 rpm selama 10 menit
Filtrat 1,5 1,5 1,5
Na2CO3 (0,4 M) 5,0 5,0 5,0
Pereaksi folin (1:2) 1,0 1,0 1,0
Diamkan selama 20 menit pada 7 oC
Ukur absorbansi pada 578 nm
Aktivitas enzim amylase (Bernfeld 1955)
Perlakuan Blanko (ml) Standar (ml) Sampel (ml)
Enzim 0,1 - 0,1
Larutan pati 0,1 0,1 0,1
Inkubasi 20 oC, 3 menit
Pereaksi DNS 2,0 2,0 2,0
Ditempatkan dalam air mendidih selama 5 menit
48
Lampiran 9 Hasil analisis proksimat udang vaname dan pakan perlakuan
Komposisi biokimia tubuh udang vaname (n=5) sebelum (awal) dan setelah pemberian empat jenis pakan perlakuan selama 30 hari
Parameter analisis
Komposisi tubuh udang perlakuan*
Awal Kontrol Pro+Pre 1% Pro+Pre 2% Pro+Pre 3%
Kadar abu 14,38 13,27 13,55 12,18 11,67
Protein 56,32 61,78 58,19 62,34 64,13
Lemak 6,97 5,62 5,31 5,89 6,92
Serat kasar 6,61 4,94 3,93 3,41 4,22
BETN 15,71 14,39 19,02 16,19 13,06
*dalam persen bobot kering
Komposisi pakan udang perlakuan Parameter
analisis
Komposisi pakan perlakuan*
Kontrol Pro+Pre 1% Pro+Pre 2% Pro+Pre 3%
Kadar abu 10,73 10,82 10,76 10,74
Protein 39,42 39,03 37,89 38,78
Lemak 15,35 14,97 14,41 14,34
Serat kasar 3,23 3,31 2,61 2,43
BETN 31,34 30,74 31,49 30,82
*dalam persen bobot kering
Lampiran 10 Hasil analisis oligosakarida pada ekstrak ubi jalar dan pakan udang dengan HPLC
Ekstrak ubi jalar (50%)*
Name Migration Time
Area Height PPM Percentage
Maltoheptaosa 3.925 48.759 4.776 19.311 1,93 Raffinosa 4.246 94.006 7.907 40.723 4,07 Sukrosa 4.635 668.159 57.490 264.331 26,43 5.464 32.775 2.952 5.991 7.971 701 *Pengenceran 100 kali
49
Pakan komersil*
Name Migration Time
Area Height PPM Percentage
Maltoheptaosa 3.953 3.879.672 339.306 30.730 3,07 Sukrosa 4.646 1.155.931 120.275 9.146 0,90 5.121 156.865 14.816 5.420 187.711 19.338 6.117 99.637 6.033 *Pengenceran 2 kali
50
Lampiran 11 Hasil perhitungan pertumbuhan bakteri SKT-b
Jam ke Konsentrasi bakteri SKT-b Cfu ml-1 Log cfu ml-1
0 4,80 x 105 5,68 2 3,70 x 106 6,57 4 6,92 x 106 6,84 6 8,90 x 108 8,95 8 1,77 x 109 9,25 10 4,90 x 109 9,69 12 8,03 x 109 9,90 14 1,12 x 1010 10,05 16 5,90 x 1010 10,77 18 2,80 x 1010 10,45 20 1,77 x 1010 10,25 22 3,13 x 108 8,50
Lampiran 12 Hasil pengamatan tingkat infeksi IMNV pada udang vaname
Perlakuan Ulangan Tingkat infeksi (ekor)
Ringan Sedang Berat Sangat berat Mati Kontrol (-) 1 13 1 0 0 1 2 10 4 0 0 1 3 7 7 0 0 1 Kontrol (+) 1 0 1 0 1 13 2 0 0 2 1 12 3 0 1 1 1 12 Pro+Pre 1% 1 1 1 1 1 11 2 0 3 1 0 11 3 0 1 3 0 11 Pro+Pre 2% 1 0 0 0 7 8 2 1 2 1 2 9 3 0 4 2 0 9 Pro+Pre 3% 1 1 6 0 2 6 2 1 1 1 3 9 3 2 2 0 4 7
51 Lampiran 13 Hasil pengukuran kualitas air pemeliharaan udang selama perlakuan
Parameter Waktu pengukuran Perlakuan Kontrol (-) Kontrol (+) Pro+Pre 1% Pro+Pre 2% Pro+Pre 3% Suhu (oC) Awal 29,0 28,5 29,0 28,5 28,5 Pertengahan 29,0 29,0 29,0 28,0 29,0 Akhir 28,5 28,0 29,0 28,0 29,0 Salinitas (o/ oo) Awal 31,0 32,0 32,0 31,0 32,0 Pertengahan 32,0 35,0 35,0 34,0 35,0 Akhir 35,0 35,0 35,0 32,0 35,0 Oksigen terlarut (mg/l) Awal 6,6 7,5 7,9 7,2 7,5 Pertengahan 6,5 6,4 6,1 6,4 6,1 Akhir 3,9 3,5 3,9 4,0 3,5 Amonia (mg/l) Awal < 0,1 < 0,1 < 0,1 < 0,1 < 0,1 Pertengahan < 0,1 < 0,1 < 0,1 < 0,1 < 0,1 Akhir < 0,1 < 0,1 < 0,1 < 0,1 < 0,1 pH Awal 8,0 7,9 7,8 7,9 7,8 Pertengahan 7,5 7,5 7,4 7,5 7,4 Akhir 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0
52
