Berdasarkan hasil yang telah diperoleh, dapat disimpulkan bahwa:
1. Isolat Azotobacter koleksi Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Jurusan Biologi ITS dengan kode A1a, A1b, A2, A3, A5, A8, A9 dan A10 resisten terhadap PbCl2. 2. Isolat Azotobacter yang mempunyai kemampuan bioremoval
tertinggi terdapat pada pemaparan 77,91 mg/L PbCl2, yaitu pada isolat Azotobacter A1a dengan efisiensi bioremoval 11,37%.
5.2 Saran
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, diperlukan penelitian lanjutan yang memakai aplikasi isolat Azotobacter pada skala lapangan yang terkontol lingkungannya.
39 KESIMPULAN
Berdasarkan hasil yang telah diperoleh, dapat disimpulkan bahwa:
1. Isolat Azotobacter koleksi Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Jurusan Biologi ITS dengan kode A1a, A1b, A2, A3, A5, A8, A9 dan A10 resisten terhadap PbCl2. 2. Isolat Azotobacter yang mempunyai kemampuan bioremoval
tertinggi terdapat pada pemaparan 77,91 mg/L PbCl2, yaitu pada isolat Azotobacter A1a dengan efisiensi bioremoval 11,37%.
41 Anonim. 2012. http://file.upi.edu/Direktori/FMIPA/Jur._Pend. _Biologi /19680501994031_Kuliah_Pertumbuhan Miktoba.pdf [ 11 Juni 2015].
Arindah, T., Y. Trihadiningrum, M. Shovitri, S.A. Wilujeng & E.S. Pandebesie. 2013. Bioremoval Kromium Oleh Konsorsium Bakteri Pada Limbah Sintetik Industri Elektroplating. Prosiding Seminar Nasional Manajemen Teknologi XVIII Program Studi MMT-ITS, ISBN : 978-602-97491-7-5.
Arrizal, S., Rachmadiarti, F., dan Yuliani. 2013. Identifikasi Rhizobakteri pada Semanggi (Marsilea crenata Presl.)yang Terpapar Logam Berat Timbal (Pb). Lentera Bio Vol. 2 No. 1 Januari 2013: 165–169.
Auhim, H. S. 2014. Adsorption of Lead (II) Ions from Aqueous Solutions by Bacterial Alginate. 1109 J. Chem. Bio. Phy. Sci. Sec.B. Vol.4, No.2; 1108-1114.
Auhim, H.S. & N. H. Odaa. 2013. Optimization of flocculation conditions of exopolysaccharide biofloculant from Azotobacter chrococcum and its potential for river water treatment. J. Microbiol. Biotech. Res. 3 (3):93-99 ISSN : 2231 –3168 CODEN (USA) : JMBRB4.
Badawi, H. Mona & M. Fayez. 2014. Azotobacter-cereal panorama: Biodiversity and impacts on plant development and soil nitrogen income in gnotobiotic model system. Middle East Journal of Agriculture Research, 3(2): 144-154.
Chen, P., Greenberg, B., Taghavi, S., Romano, C., Lelie, D.Vd., dan He, C. 2005. An Exceptionally Selective Lead(ii )-Regulatory
Protein from Ralstonia Metallidurans :Development of a Fluorescent Lead(ii ) Probe. Angew. Chem. Int. Ed. 44 ,2–6. Choudhury, R & S. Srivastava .2001. Zinc resistance mechanisms in bacteria. CURRENT SCIENCE, vol. 81.
Cooper, S. 2003. Bacterial Growth and Division: Biochemistry and Regulation of Prokariyotic and Eukariyotic Division Cycles. Academi Press: San Diego.
DHOCNY (Department of Health Otsego County, New York). 2007. Lead Poisoning Prevention: What is Lead?. Department of Health Otsego County. New York.
Effendi, H. 2003. Telaah kualitas Air, bagi pengelolaan Sumber Daya dan Lingkungan Perairan. Penerbit Kanisiun (Anggota IKAPI). 024902.
Ekundayo, E.O., dan Killham, K. 2001. Lead Solubilization and Accumulation by Two Strain of Pseudomonas Obtained and B. Bacterium of Metals Found Around Mining Areas: Evaluation of the Effect of Physical and Physiological Parameters. 19th – 23rd October, Proceedings ISBN: 978-0-9802623-5-3 Pretoria, South Africa.
Emtiazi, G., Ethemadifar, Z. & Habibi, M.H. 2004. Production of extracellular polymer in Azotobacter and biosorption of metal by exopolymer. Afr. J. Biotech. 3:330-333.
Fardiaz, S. 1992. Polusi Air dan Udara. Penerbit Kanisius. Yogyakarta.
Gadd, G.M. 1993. Interaction of Fungi with toxic metals. New Phytologist 125:837-843.
Ghosh, S., Sadhukhan, P.C., Ghosh, D.K., Chaudhuri, J., and Mandal, A. 1997. Elimination of Mercury and Organomercurials by Nitrogen-fixing Bacteria. Bulletin Environmental Contamination Toxicology, 58: 993-998.
Gupta, A.K., Rathore, P., Kaur, N. and R. Singh. 1990. Production Therma Stability and Immobilization of Inulinase of Fusarium oxysporum. J. Chem. Tech. Biotech. P: 245-251. Harley, J.P. and L.M. Prescott. 2002. Laboratory Exercises in
Microbiology. 5th Ed The McGraw-Hill Companies: USA.
Hidayah, N & M. Shovitri. 2012. Adaptasi Isolat Bakteri Aerob Penghasil Gas Hidrogen pada Medium Limbah Organik. JURNAL SAINS DAN SENI ITS Vol. 1, ISSN: 2301-928X. Hiza, J., dan Apak, R., Colloid, J. Interface Sciences. 2006,295, 1-13.
Hogg, S. 2005. Essential Microbiology. Jhon Wiley & Sons LTD: England.
Holt, et al. 1994. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology 9th Edition. USA: Williams and Wilkins Baltimore. Janecka, J., Jenkins, M.B., Brackett, N.S., Lion, L.W. & Ghiorse, W.C. 2002. Characterization of a Sinorhizobium isolate and its extracellular polymer implicated in pollutant transport in soil. Appl. Environ. Microbiol. 68: 423-426
Khotimah, K., dan dan Zulaika, E. 2013. Azotobacter Sebagai Bioakumulator Merkuri. JURNAL SAINS POMITS Vol. 2, No. 1, (2013) ISSN: 2337-3539 (2301-9271).
Komousani, T. A., dan Mouselhy, S. S. 2011. Modulation of lead biohazards using a combination of epicatechin and lycopene in rats. Human and Experimental Toxicology. 30 (10) 1674-1681.
Li, C. & H.H.P. Fang. 2007. Fermentative Hydrogen Production from Waste Water and Solid Wastes by Mixed Cultures. Cr it Rev Environ SciTechn vol;37 No.1 :31-39.
Luqman, A., Shovitri, M., dan Zulaika, E. 2012. Resistensi Bakteri Azotobacter Terhadap Logam Berat. Scientific Conference of Enveronmental Technology IX.
Madigan, M.T., Martinko, J.M., Stahl, D.A., dan Clark, D.P. 2009. Brock Biology of Microorganism 13th Edition. Benjamin Cummings. Sansome Street,San Francisco.
Matthew, D.R., C.J. Rice., .Lucchini., C. Pin., A. Thompson., A.D.S. Cameron., M. Alston. 2011. Lag Phase is a Distinct Growth Phase that Prepares Bacteria for Exponential Growth and Involves Transient Metal Accumulation. Journal of Bacteriology, 686-701.
Murthy, S., Geetha, B., dan Sarangi, S.K. 2011. Effect of Lead on Metallothionen Concentration in Leadresistant Bacteria Bacillus cereus Isolation from Industrial Effluent. Available online at http://www.academicjournals.org/AJB. African Journal of Bacteriology, 10[71]:15966-15972.
Muslihah, S., W. Harimurti. 2011. Pengaruh ph dan Konsentrasi Zymomonas mobilis untuk Produksi Etanol dari Sampah Buah Jeruk. Skripsi Jurusan Teknik Lingkungan FTSP-ITS.
Nakamura, L. 2000. Phylogeny of Bacillus sphariceus- like organism. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. 50: 1715-1722.
NHMRC (National Health & Medical Research Council). 2009. NHMRC Public Statement, August 2009 – Blood lead levels: Lead exposure and health effects in Australia. National Health & Medical Research Council , 7th August 2009.
Notodarmojo, S. 2005. Pencemaran Tanah dan Air Tanah. Penerbit ITB. ISBN 979-3507-43-8.
Olenera, M.S., S. Tunalib. A.S. Ozcanc., O. Adnan., dan T. Gedikbeyb. 2008. Adsorption Characteristics of Lead (li) Ions Onto The Clay/Poly (Methoxyelthyl) Acrylamide (Pmea) Composite from Aqueous Solution Presented at The Conference on Desalination and The Environment. Sani Resort, Halkidiki, Greece. April 22-25, 2007. Desalination, 223: 308-322.
Prasetya, Y.A., Kuswytasari, N.D., dan Zulaika, E. 2012. Aadaptasi Genera Bacillus pada Media yang Mengandung Logam Timbal. Environmental Technology Scientific Conference IX-2012. Advances in Agriculture and Municipal Waste Technology to Anticipate Food and Energy Crisis. ISBN 978-602-95595-5-2. R. Saraswati, E. Husen, dan R.D.M. Simanungkalit. 2007. Metode Analisis Biologi Tanah. Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Sumber Daya Lahan Pertanian : Jawa Barat. Rao, M.B., Tanksale, A.M., Ghatge, M.S & Deshpande, V.V. 1998. Molecular and Biotechnological Aspects of Microbial Proteases. Microbiology and Molecular Biology Reviews.
Rasulov, B.A., Yili, A., dan Aisa, H.A. 2013. Biosorption of Metal Ions by Exopolysaccharide Produced by Azotobacter chroococcum XU1. Journal of Environmental Protection, 2013, 4, 989-993.
Roane, T.M., L.L. Pepper. 2000. Microorganism and Metal Pollution. Environmental Microbiology, 404-422.
Ruhnayat, A. 2007. Effect of Azotobacter, bat guano danglyricidia compost on the growth of bushy black pepper (Piper nigrum L.). Pros. Sem. XIII Persada. Fak. Kedokteran Hewan IPB. 249-252.
Ruizbang, L., Qinqin, S., Lizhi, J., Shuling, S., dan Zhenaheng, G. 1990. Use Of Azotobacter sp. An an Indicator to Detect The Toxicity of Heavy Metals in Soils. Journal of Environmental Sciences (China), Vol. 2 (3), Page 123-128.
Sabra, A., P. Zeng, H. Lonsdorf, and W.D. Deckwer. 2000. Effect of oxygen on formation and structure of Azotobacter vinelandii alginate and its role in producing nitrogenase. Appl. Environ. Microbiol 66:4037-4044.
Sakkir, B., Khidri, M.A., dan Sjafruddin A. 2008. Kadar timbal dalam darah pada anak-anak dikotaMakasar. Jurnal Kesehatan Masyarakat Madani. 01(02).
Satya, A., dan Larashati, S. 2012. Kemampuan Isolat Bakteri Dari Sedimen Situ Sebagai Aquatic Bioremoval Agent Ion Logam Timbal (Pb). Prosiding Seminar Nasional Limnologi VI Tahun 2012.
Sharma, T. 2013. Heavy Metal Tolerance of Gram Positive Bacteria Isolated from Contaminated Soil of Pithampur.
International Journal of Pharmaceutical & Research Sciences (IJPRS), 2:432-436.
Smith, W. H. 2012. Lead Contamination of the Roadside Ecosystem. Journal of the Air Pollution Control Association. Volume 26, No. 8.
Sobariah, E. .2007. Viabilitas Bakteri Probiotik In Vitro dan Pengaruh Pemberian Air Beroksigen terhadap Viabilitas Bakteri Probiotik secara In Viv. Tesis Pasca Sarjana IPB-Bogor.
Suhendrayatna. 2011. Bioremoval logam berat dengan menggunakan mikroorganisme. (suatu kajian pustaka). Disampaikan pada seminar on air bioteknologi untuk Indonesia. 1-14 Februari.
Syamsudin, A.N., Tedja, I., dan Achmad, S.S. 2005. Bioakumulasi Logam Berat oleh beberapa Galur. Hayati, 12[13]: 08-111.
Turpeinen, R., 2002. Interaction Between Metals, Microbes and Plants –Bioremidiation of Arsenic and Lead Contaminated Soils. Departement of Ecological and Environmental Sciences, University of Helsinki. Academi dissertation in environmental ecology, Faculty of Science of the University of Helsinki, Neopoli, Lathi, on May 17th.
Vatamaniuk, O.K., Mari, S., Lu, Y.P., dan Rea, P.A. 2000. Mechanism of heavy metal ion activation of phytochelin synthase. J. Biol. Chem. 275: 31451-31459.
Wang, L., Zengyong W., dan Jianzhu, L. 2010. Protective effect of N-acetilcysteine on experimental chronic lead
nephrpotoxicity in immature female rats. Human and Experimental Toxicology. 29(7) :581-591.
Wardhayani, S. 2006. Analisis Risiko Pencemaran Bahan Toksik Timbal (Pb) Pada Sapi Potong Di Tempat Pembuangan Akhir (Tpa) Sampah Jatibarang Semarang. Tesis Untuk memenuhi sebagian persyaratan Mencapai derajat Sarjana S-2 Magister Kesehatan Lingkungan.
Wulandari, S.N., Dewi, N.S., dan Suwondo. 2005. Identifikasi Bakteri Pengikat Timbal (Pb) Pada Sedimen Di Sungai Siak. Jurnal Biogenesis, 1 [2]: 62-65.
Zulaika, E., Luqman, A., Arindah, T., dan Sholikah, U. 2012. Bacteri Resisten Logam Berat yang Berpotensi sebagai Biosorben dan Bioakumulator. Seminar Nasional Waste Management for Sustainable Urban Development. Teknik Lingkungan, FTSP-ITS, 21 Pebruari 2012.
Lampiran 1: Lampiran 2: Lampiran 3: Lampiran 4: Lampiran 5: Lampiran 6: Lampiran 7: Lampiran 8: Lampiran 9: Lampiran 10: Lampiran 11: Lampiran 12: Lampiran 13: Lampiran 14: Komposisi Medium NA ...
Komposisi Burk Medium ...
Komposisi Medium NB ...
Skema uji viabilitas Azotobacter pada medium NB-PbCl2 ...
Skema kerja bioremoval isolat Azotobacter ...
Bentuk Koloni ...
Uji Motilitas ...
Uji Katalase ...
Pewarnaan Gram ...
Pewarnaan Methylene blue ...
Pewarnaan Cyst ...
Data OD Kurva Pertumbuhan Isolat A1a, A5, dan A9 ...
Hasil Analisis Bioremoval ... Uji Viabilitas Isolat Setelah
Terpapar Logam Pbcl2 Selama
49 49 49 50 51 51 52 53 54 55 57 58 60
49 LAMPIRAN
Lampiran 1: Komposisi Medium NA
A. Komposisi Medium NA (Nutrient Agar)/ 1L - Beef extract (3 gr)
- Pepton (5 gr) - Agar (12 gr)
Cara membuat: 20 gr NA dilarutkan dalam 1 L akuades, dihomogenkan dengan hot plate stirrer, dan disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121oC selama 15 menit.
*Untuk pembuatan NA-PbCl2, ditambahkan PbCl2 sesuai konsentrasi yang dibutuhkan, misal: NA- PbCl2 1mg/L, berarti PbCl2 ditambahkan sebanyak 1 mg untuk 1 L NA.
Lampiran 2: Komposisi Burk Medium - KH2PO 0.2 g/L - K2HPO4 0.8 g/L - MgS4 0.2 g/L - CaCI 2 0.09 g/L - Na2MoO4 1.0 ml - FeSO 4 1.0 ml - Sucrose 20.0 g/L - Agar 15.0 g/L - pH 7.2 (0.25 mg/mL Na2MoO4, 5.0 mg/nil FeSO4).
Lampiran 3: Komposisi Medium NB
B. Komposisi Medium NB (Nutrient Broth)/ 1L - Lab Lemco Powder (1 gr)
- Yeast extract (2 gr) - Pepton (5 gr)
- Sodium chloride (5 gr)
Cara membuat: 13 gr NB dilarutkan dalam 1 L akuades, dihomogenkan dengan hot plate stirrer, dan disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121oC selama 15 menit.
Lampiran 4: Skema uji viabilitas Azotobacter pada medium NB-PbCl2
Lampiran 5: Skema kerja bioremoval isolat Azotobacter
Lampiran 6: Bentuk Koloni
Lampiran 9: Pewarnaan Gram
Azotobacter chro Azotobacter A1a Azotobacter A1b
Azotobacter A6 Azotobacter A7 Azotobacter A8
Azotobacter A9 Azotobacter A10
Lampiran 10: Pewarnaan Methylene Blue
Azotobacter A2 Azotobacter A3 Azotobacter A5
Azotobacter A6 Azotobacter A7 Azotobacter A8
Lampiran 11: Pewarnaan Cyst
Azotobacter chro Azotobacter A1a Azotobacter A1b
Azotobacter A2 Azotobacter A3 Azotobacter A5
Azotobacter A9 Azotobacter A10
Lampiran 12: Data OD Kurva Pertumbuhan Isolat A1a, A5, dan A9
Jam ke- A1a
0 mg/L 50 mg/L 100 mg/L 150 mg/L 0 0,559 0,088 0,098 0,095 2 0,8725 0,094 0,138 0,233 4 0,972 0,146 0,232 0,279 6 0,987 0,267 0,138 0,241 8 1,06 0,266 0,283 0,278 10 1,102 0,308 0,327 0,324 12 1,185 0,339 0,402 0,319 14 1,2365 0,368 0,368 0,347 16 1,244 0,338 0,38 0,372 18 1,1855 0,392 0,451 0,434 20 0,9335 0,423 0,431 0,409 22 0,966 0,394 0,41 0,4 24 0,796 0,391 0,435 0,397
Jam ke- A5 0 mg/L 50 mg/L 100 mg/L 150 mg/L 0 0,4655 0,007 0,096 0,02 2 0,852 0,02 0,182 0,049 4 1,08 0,018 0,32 0,082 6 1,224 0,035 0,298 0,128 8 1,2755 0,053 0,316 0,211 10 1,4415 0,093 0,429 0,214 12 1,495 0,167 0,532 0,299 14 1,363 0,171 0,368 0,345 16 1,244 0,208 0,641 0,57 18 1,223 0,49 0,695 0,635 20 0,909 0,468 0,768 0,74 22 1,003 0,461 0,728 0,704 24 0,847 0,559 0,701 0,717 Jam ke- A9 0 mg/L 50 mg/L 100 mg/L 150 mg/L 0 0,3695 0,07 0,098 0,111 2 0,98 0,11 0,133 0,135 4 1,169 0,184 0,272 0,122 6 1,3465 0,214 0,248 0,13 8 1,4005 0,335 0,353 0,356 10 1,444 0,354 0,325 0,353 12 1,476 0,359 0,394 0,33 14 1,4465 0,353 0,411 0,379 16 1,4085 0,396 0,43 0,402
18 1,3545 0,428 0,415 0,403 20 1,456 0,438 0,409 0,465
22 1,429 0,422 0,4 0,433
24 1,3785 0,421 0,411 0,461 Lampiran 13: Hasil analisis bioremoval
Lampiran 14: Uji Viabilitas isolat setelah terpapar logam PbCl2 selama 24 jam
Lampiran 15: Analisis data dengan menggunakan Balanced Anova
ANOVA: C3 versus C1; C2 MANOVA for Isolat
s = 1 m = 0,0 n = 1,0
Test DF
Criterion Statistic F Num Denom P Wilks' 0,38462 3,200 2 4 0,016 Lawley-Hotelling 1,59994 3,200 2 4 0,016 Pillai's 0,61538 3,200 2 4 0,016 Roy's 1,59994
MANOVA for Konsentrasi s = 1 m = 0,0 n = 1,0
Test DF
Criterion Statistic F Num Denom P Wilks' 0,66864 0,991 2 4 0,379 Lawley-Hotelling 0,49556 0,991 2 4 0,379 Pillai's 0,33136 0,991 2 4 0,379 Roy's 0,49556
Lilis Wahyu Astutik panggilan Lilis lahir di Jombang 21 Oktober 1992 dari pasangan suami istri Bapak Burhan dan Ibu Nuryani. Penulis adalah anak ketiga dari 4 bersaudara. Penulis sekarang bertempat tinggal di Dsn. Bandung, Ds. Bandung RT/RW 03/02 No. 04, Kec. Diwek, Kab. Jombang. Riwayat pendiidkan penulis adalah MI Bandung III, SMP Negeri 1 Diwek, SMA Negeri 2 Jombang, setelah lulus SMA penulis berkeinginan untuk melanjutkan pendidikan ke jenjang kuliah dan pada tahun 2011 penulis terdaftar sebagai mahasiswa Biologi Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya. Pada saat kuliah penulis aktif dalam kegiatan organisasi dan memiliki beberapa prestasi seperti PKM P Terdanai DIKTI 2013 Juara II Presentasi GK PKM ITS EXPO 2013, Pemakalah Publikasi ilmiah IECC 2014. Penulis yang terdaftar dalam anggota B-16 ini semasa kuliah aktif menjadi asisten dosen praktikum Biokimia dan Fisiologi Hewan. Penulis memiliki minat yang tinggi dalam Bidang Mikrobiologi sehingga penulis mengambil peminatan Mikrobiologi dan Bioteknologi dan bidang tersebut yang mengantarkan penulis memperoleh gelar Sarjana Sains.