PRAKTIKUM 7 PENETAPAN KADAR TANIN TOTAL DENGAN METODE TITRIMETRI

PRAKTIKUM 7

PENETAPAN KADAR TANIN TOTAL

DENGAN METODE TITRIMETRI

Tujuan Praktikum

Setelah mengikuti praktikum ini diharapkan mahasiswa dapat

melakukan pengujian kuantitatif penetapan kadar senyawa tanin dari

simplisia menggunakan metode titrimetri.

DEFINISI

Tanin adalah senyawa metabolit sekunder tergolong polifenol.

Senyawa yang mampu mengikat protein.

melindungi protein dari

degradasi enzim mikroba

melindungi protein dari

enzim protease pada

tanaman

SIFAT

• Polifenol, mengandung hidroksil dan gugus lain seperti karboksil pada cincin aromatisnya

• sukar mengkristal, warna tanin akan menjadi gelap apabila terkena cahaya atau dibiarkan di udara terbuka.

• Larut air, kelarutannya besar dan akan bertambah besar apabila dilarutkan dalam air panas. Begitu pula dalam pelarut organik seperti metanol, etanol, aseton dan pelarut organik lainnya.

• Berat molekul antara 1000 - 5000; berat molekul kecil disebut ‘pseudo-tannins’ • Dapat mengendap bersama alkaloid, gelatin dan protein lainnya 

membentuk kopolimer mantap yang tidak larut dalam air (terbentuk endapan) • Sebagian besar tanin berbentuk glikosida

• dapat menggangu absorbsi besi dan kalsium sehingga dapat mengurangi bioavaliabiliti besi dan kalsium tubuh

Tanin Terhidrolisis (Hydrolysable

tannins)

• Terhidrolisis oleh asam atau enzim seperti tannase

• Tanin ini biasanya berikatan dengan karbohidrat dengan membentuk jembatan oksigen, karena itu tanin ini dapat dihidrolisis dengan menggunakan asam sulfat atau asam klorida.

• Sebagian besar larut air • Contoh :

Gallotanin  Senyawa gabungan dari karbohidrat dengan asam galat. Ellagitanins  Senyawa gabungan dua asam galat

Ellagitanin sederhana disebut juga ester asam hexahydroxydiphenic (HHDP). Senyawa ini dapat terpecah menjadi asam galic jika dilarutkan dalam air.

Tanin Terhidrolisis, lanjutan

Galotanin

Tanin Terkondensasi

• Dikenal juga dengan proantocyanidin (flavolan)

• Proanthocyanidin merupakan polimer dari flavan-3-ol (suatu flavonoid) yang dihubungkan dengan melalui C-8 dengan C-4.

• Salah satu contohnya adalah Sorghum procyanidin, senyawa ini merupakan trimer yang tersusun dari

epiccatechin dan catechin.

• tanin terkondensasi tidak larut air dibanding tanin terhidrolisis

Struktur tanin

terkondensasi

IDENTIFIKASI TANIN

KUALITATIF

KUANTITATIF

1. Diberikan larutan FeCl₃ berwarna biru hitam (terhidrolisis) / hijau cokelat (tanin terkondensasi).

2. Ditambahkan 1% gelatin dalam 10% NaCl  endapan putih

3. Ditambahkan asam lalu dipanaskan  merah (adanya proantosianidin)

4. Ditambahkan NaOH dan PE  flouresensi hijau (adanya proantosianidin)

1. Kolorimetri dengan spektrofotometer UV-Vis: - reagen: Folin-ciocalteu

- Pembanding: asam galat/asam tanat

- Hasil dilaporkan sebagai kadar fenol total (mg GAE/g atau mg TAE/g)

- Reagen: 10% vanillin dalam H₂SO₄, 95% etanol dan HCl pekat - Pembanding: katekin

- Hasil dilaporkan sebagai katekin

2. Gravimetri (Metode presipitasi menggunakan protein) Bahan: serbuk kulit sapi

Prosedur: jika sdh mengendap sempurna, saring, keringkan hingga bobot tetap

3. Titrimetri (secara permanganometri) reaksi oleh kalium permanganat (KMnO₄) Indikator: indigosulfonat/indigokarmin

TITRIMETRI (PERMANGANOMETRI)

• titrasi redoks yang dilakukan berdasarkan reaksi oleh kalium permanganat (KMnO₄)

• melibatkan dua tahapan, yakni: (1) standardisasi/pembakuan kalium permanganat dengan larutan natrium oksalat (2) titrasi analit dengan larutan kalium permanganat

• Indigokarmin: natrium indigodisulfonat (C₁₆H₈N₂Na₂O₈S₂) -> murni pereaksi

• Asam indigosulfonat (Larutan Pereaksi, LP) dibuat dengan cara:

larutkan 1 g indigokarmin dalam 25 mL asam sulfat, tambahkan 25 mL asam sulfat lagi dan encerkan dengan air secukupnya hingga 1000 ml (pengenceran dilakukan dengan menuangkan larutan ke dalam sebagian besar air, kemudian encerkan dengan air secukupnya hingga 1000 ml)

Prinsip dasar

• KMnO

₄

akan mengoksidase H

₂

C

₂

O

₄

membentuk CO

₂

• KMnO

₄

akan tereduksi menjadi Mn

2+

• 2MnO

₄-

_{+ 5C}

PROSEDUR KERJA

Pembuatan larutan baku primer asam oksalat dihidrat pa (H₂C₂O₄.2H₂O)

• Ditimbang seksama asam oksalat 0,6938 g (dalam botol timbang)

• Larutkan dengan aquadest secukupnya

• Masukan larutan tersebut ke dalam labu ukur 100,0 ml • Tambahkan aquadest sampai tanda batas pada labu ukur • Gojog hingga homogen

• Hitung Normalitas asam oksalat dihidrat (didapat 0,1xxx N) 𝑛𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙𝑖𝑡𝑎𝑠 𝑎𝑠𝑎𝑚 𝑜𝑘𝑠𝑎𝑙𝑎𝑡 = 𝑊 (𝑔) 𝑀𝑟 × 1000 𝑣𝑜𝑙 𝑎𝑑 (𝑚𝑙) × 𝑒𝑘𝑖𝑣𝑎𝑙𝑒𝑛 Mr H₂C₂O₄.2H₂O = 126 Ekivalen asam oksalat = 2 BE = Mr/ekivalensi

Pembuatan Larutan Standar KMnO₄

• Ditimbang 7,9 gram kristal KMn0₄

• Dilarutkan dengan 500 ml akuades, larutan dimasukkan ke dalam labu erlenmeyer 1 L.

• Dipanaskan sampai mendidih selama ± 15 menit • Setelah dingin disaring dengan gelas wool/kapas

dengan bantuan corong kaca,

• filtrat ditampung dalam labu ukur 1 L.

• Ditambahkan akuades sampai garis batas labu. • Digojok bolak-balik sampai homogen.

• Jika tidak langsung digunakan dapat disimpan dalam botol reagen warna coklat/gelap

Pembakuan larutan KMnO

₄

dengan asam oklasat dihidrat 0,1 N

• Dipipet 10 mL larutan asam oksalat dihidrat 0,1 N. Dimasukkan ke

dalam Erlenmeyer 100 ml, ditambahkan 10 ml larutan H

₂

SO

₄

4N,

dipanaskan sampai suhu 70-80 °C.

• Kemudian dalam keadaan panas dititrasi dengan KMnO

₄

yang akan

dibakukan.

• Titrasi dihentikan apabila sudah terjadi perubahan warna dari tidak

berwarna menjadi berwarna merah muda (sudah mencapai titik akhir

titrasi, TAT).

• Catat volume KMnO

₄

yang digunakan selama titrasi.

• Titrasi dilakukan 5 kali replikasi dan catat hasilnya.

Pengulangan ke- Normalitas Asam oksalat

Vol asam oksalat dihidrat

Vol KMnO₄ Normalitas KMnO₄

1 0,1xxx N 10 ml … ml … N 2 10 ml … ml … N 3 10 ml … ml … N 4 10 ml … ml … N 5 10 ml … ml … N Rerata ± SD … N

Penetapan kadar tanin dengan KMnO

₄

a) Jika larutan uji dibuat dari sampel serbuk simplisia:

• Serbuk simplisia ditimbang seksama 5 g lalu dimasukkan ke dalam gelas kimia.

• Tambahkan 50 ml aquades, panaskan di atas penangas sampai mendidih selama 30 menit, sambil diaduk. • Diamkan beberapa menit, diendapkan, lalu saring dengan kertas saring.

• Masukkan filtrat ke dalam labu ukur 250 ml.

• Ampas disari lagi dengan cara sebelumnya, lalu disaring dengan kertas saring dan filtrat dimasukkan ke dalam labu ukur yang sama. • Ulangi prosedur ini sampai larutan memberikan reaksi negatif terhadap larutan FeCl3.

• Larutan didinginkan dan ditambahkan aquades sampai dengan tanda batas labu ukur 250 ml.

• Larutan dipipet sebanyak 2,5 ml, dipindahkan ke dalam Erlenmeyer 100 ml, dan ditambahkan 75 ml aquades dan 2,5 ml indikator asam indigosulfonat. • Cara hitung faktor pengenceran:

Larutan dipipet sebanyak 2,5 ml, dipindahkan ke dalam Erlenmeyer 100 ml, dan ditambahkan 75 ml aquades dan 2,5 ml indikator asam indigosulfonat.

*Faktor pengenceran: 80 ml/2,5 ml = 32 kali

Catatan:

- 80 ml didapat dari: total volume yang direaksikan yaitu 2,5 ml larutan sampel dari stok + 75 ml aquades + 2,5 ml indikator; - 2,5 ml adalah volume larutan uji yang diambil dari stok larutan sampel

Atau

Larutan stok sampel = 5 g dalam 250 ml larutan  konsentrasi menjadi 5000 mg/250 ml = 20 mg/ml

Jika larutan stok sampel diambil 2,5 ml dan direaksikan dengan 75 ml aquades + 2,5 ml indicator  total volume adalah 80 ml Sehingga konsentrasi sampel yang direaksikan  2,5 ml x 20 mg/ml = Konsentrasi x 80 ml  konsentrasi = 0,625 mg/ml

*jadi faktor pengencerannya adalah 20 mg/ml menjadi 0,625 mg/ml = 32 kali

• Titrasi dengan larutan 0,1 N KMnO₄hingga terjadi perubahan warna dari biru tua menjadi larutan berwarna kuning emas. • Dicatat volume KMnO4yang digunakan.

b) Jika larutan uji dibuat dari sampel ekstrak:

• Timbang seksama 0,2 g ekstrak dalam 25 ml Erlenmeyer

• Panaskan dengan 5 ml air mendidih di atas tangas air selama 30 menit sambil diaduk.

• Diamkan selama 10 menit, endapkan  saring dgn kapas  masukan filtrat ke dalam labu takar 25 ml. • Sari sisa dengan air mendidih  saring larutan ke dalam labu takar yang sama.

• Ulangi penyarian beberapa kali hingga larutan bila direaksikan dengan FeCl₃tidak menunjukan adanya tanin (reaksi negatif)

• Dinginkan cairan dan tambahkan air secukupnya hingga 25 ml. • Cara hitung faktor pengenceran:

Larutan dipipet sebanyak 2,5 ml, dipindahkan ke dalam Erlenmeyer 100 ml, dan ditambahkan 75 ml aquades dan 2,5 ml indikator asam indigosulfonat.

*Faktor pengenceran: 80 ml/2,5 ml = 32 kali

Catatan:

- 80 ml didapat dari: total volume yang direaksikan yaitu 2,5 ml larutan sampel dari stok + 75 ml aquades + 2,5 ml indikator;

- 2,5 ml adalah volume larutan uji yang diambil dari stok larutan sampel

Atau

Larutan stok sampel = 0,2 g dalam 25 ml larutan  konsentrasi menjadi 200 mg/25 ml = 8 mg/ml

Jika larutan stok sampel diambil 2,5 ml dan direaksikan dengan 75 ml aquades + 2,5 ml indicator  total volume adalah 80 ml Sehingga konsentrasi sampel yang direaksikan  2,5 ml x 8 mg/ml = Konsentrasi x 80 ml  konsentrasi = 0,25 mg/ml

*jadi faktor pengencerannya adalah 8 mg/ml menjadi 0,25 mg/ml = 32 kali

• Titrasi dengan kalium permanganate (KMnO₄ ) 0,1 N hingga larutan berwarna kuning emas.

• Dicatat volume KMnO₄yang digunakan.

• Lakukan dengan replikasi 5 kali

Pengukuran blanko

a) Disiapkan 77,5 ml aquades dalam Erlemeyer 100 ml.

b) Ditambahkan indikator asam indigosulfonat 2,5 ml

c) Titrasi dengan KMnO

₄

hingga terjadi perubahan warna dari biru tua

menjadi larutan berwarna kuning emas.

Pengulangan ke- Normalitas KMnO₄ Vol titrasi pada sampel

Vol titrasi pada blanko Kadar tannin 1 0,xxxx N 0,00 – xxx ml 0,00 – xxx ml …. % 2 0,00 – xxx ml 0,00 – xxx ml …. % 3 0,00 – xxx ml 0,00 – xxx ml …. % 4 0,00 – xxx ml 0,00 – xxx ml …. % 5 0,00 – xxx ml 0,00 – xxx ml …. % Rerata ± SD …. %±xxx

Kadar tanin dihitung dengan kesetaraan 1 ml KMnO4 0,1 N setara

dengan 0,004157 g tanin.

Keterangan:

• V = volume KMnO

₄

yang digunakan pada titrasi sampel (mL)

• Vo = volume blanko KMnO

₄

(mL)