SOP teknik kultur jaringan Tanaman Nilam

Standard of Operation Procedure (SOP) Kegiatan : Good Development Practice

Sub Kegiatan : Peningkatan kualitas dan kuantitas bahan baku nilam melalui teknik kultur jaringan

I. Tujuan: M engem bangkan nilam unggul melalui t eknik kult ur jaringan II. Pihak Terkait:

III. Langkah-langkah pelaksanaan:

III.1. Perbanyakan nilam melalui teknik kultur jaringan

1.

_{Pilih t anam an nilam unggul yang sehat .}

4.

_{Larut an st erilan dibuang dan eksplan daun dicuci 3 kali dengan air st eril, m asing-m asing}

selam a 5 m enit .

5.

_{Daun nilam diam bil dan dilet akkan dalam caw an pet ri st eril dan dipot ong-pot ong}

dengan ukuran 0.5 cm kem udian dikult ur pada m edium induksi t unas yang m engandung zat pengat ur t um buh NAA dan BAP. Tunas m ulai t erbent uk 2 m inggu set elah kult ur.

6.

_{Set elah 6 m inggu kult ur, t unas disubkult ur pada m edium baru unt uk m em perbanyak}

t unas at au disubkult ur pada m edia pem anjangan t unas dan induksi akar yang m engandung zat pengat ur t um buh GA3 dan NAA unt uk m em bent uk plant let .

7.

_{Plant let diaklim atisasi pada m edia t anah.}

8.

_{Aklim at isasi dilakukan dengan cara plant let dikeluarkan dari bot ol dan dicuci dengan air}

m engalir unt uk m enghilangkan sisa m edia agar yang menem pel pada plant let .

9.

Plant let kem udian dit anam pada baki plast ik yang berisi cam puran m edia t anah, arang sekam dan kokopit .

10.

_{Baki plastik yang t elah dit anam i plant let dit ut up dengan plast ik unt uk m engurangi}

penguapan dan dit em pat kan dalam ruang t eduh.

11.

_{Set elah 2 m inggu, penut up plast ik dibuka secara bert ahap dan apabila plant let sudah}

survive/ t et ap hidup dalam baki plast ik t anpa penut up, individu plant let kem udian dipindahkan pada polibag yang berisi media t anah dan kom pos dan siap digunakan sebagai bibit nilam.

III.2. Induksi tanaman nilam tetraploid

1.

Eksplan daun nilam dicuci dengan air m engalir selam a 30 m enit , kem udian dist erilisasi di dalam lam inar air f low _{(LAF) dengan larut an st erilan 30% yang berbahan akt if 5.25%}

NaClO selam a 15 m enit .

2.

_{Larut an st erilan dibuang dan eksplan daun dicuci 3 kali dengan air st eril, m asing-m asing}

selam a 5 m enit .

3.

_{Daun nilam diam bil dan dilet akkan dalam caw an pet ri st eril dan dipot ong-pot ong}

dengan ukuran 0.5 cm kem udian dikult ur pada m edium induksi t unas yang m engandung kolkisin selama 2-4 m inggu unt uk m enginduksi t erjadinya poliploidi krom osom .

4.

_{Tunas yang t erbent uk t erbent uk dari eksplan daun yang diperlakukan dengan kolkisin}

5.

_{Plant let kem udian diaklim at isasi pada m edia t anah.}

6.

_{Analisis poliploidi t anam an dilakukan secara langsung dengan menghit ung jum lah}

krom osom dalam sel-sel ujung akar yang m engalami m it osis at au secara t idak langsung dengan m elihat perbedaan ukuran dan densit as sel st om at a.

Analisis kromosom

- Analisis krom osom dilakukan dengan m em buat preparat squash ujung akar t anam an nilam .

- Ujung akar t anam an nilam difiksasi dalam larut an alcohol:asam aset at glacial=3:1 selam a 24 jam .

- Ujung akar yang t elah difiksasi dicelupkan dalam larutan HCL 1N panas 60 oC selam a 5 m enit , kem udian dilet akkan dalam object glass dan dit et esi dengan larut an pew arna acet o orcein selam a 20 m enit .

- Preparat kem udian dit ut up dengan gelas penut up dan disquash.

- Preparat diam at i di baw ah m ikroskop dan dihit ung jum lah krom osom nya Pengamatan stomata

- Oleskan gelat in/ kut ek pada bagian baw ah daun nilam dan t unggu beberapa saat . - Set elah gelat in/ kut ek kering t em pelkan selot ip pada bagian baw ah daun yang t elah

diolesi gelat in

- Tarik/ am bil selot ip dan t em pelkan pada object glass dan am at i di baw ah m ikroskop. - Ukur dan hit ung jum lah st om at a, bandingkan dengan ukuran dan jum lah st om at a

pada t anam an nilam kont rol (diploid).