BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Kesimpulan yang dapat diperoleh dari penelitian ini adalah sebagai berikut.
1. Diperoleh tiga genus isolat murni bakteri pelarut fosfat yang dapat diidentifikasi, dari Bacillus.Micrococcus dan Pseudomonas pada rhizosfer tanah di kawasan mangrove Wonorejo Surabaya
2. Pada genus Bacillus secara makroskopik koloni memiliki warna putih pucat dengan bentuk bulat, tepi koloni rata dengan elevasi cembung dan secara mikroskopik termasuk Gram positif (+) dengan bentuk sel batang. Selanjutnya pada genus Micrococcus ditemukan 2 spesies yang berbeda yaitu Micrococcus sp.1 dengan koloni berwarna kuning dan Micrococcus sp.2 dengan koloni berwarna merah, namun keduanya sama-sama memiliki bentuk koloni bulat dengan tepian rata dan elevasinya cembung. Secara mikroskopis genus Micrococcus termasuk Gram positif dengan bentuk sel kokus. Secara mikroskopis yang membedakan Micrococcus sp.1 dari Micrococcus sp.2 adalah pada Micrococcus sp.2 memiliki hasil positif terhadap Gelatin, Inositol, Adonitol, Ornithin, Indol, VP, dan TDA pada uji fisiologis. Selanjutnya pada genus Pseudomonas juga ditemukan 2 jenis dengan penampakan makrosopis yang sama yaitu koloni memiliki warna putih pada bagian tengah dan transparan pada bagian tepi koloni dengan bentuk koloni tidak beraturan namun memiliki tepi yang rata dan elevasi yang datar. Dari segi mikroskopis yang membedakan
Pseudomonas sp.1 dan Pseudomonas sp.2 adalah pada Pseudomonas sp.2 menunjukkan hasil positif pada Manitol, Inositol, Adonitol dan Sukrosa
pada uji fisiologisnya.
5.2 Saran
1. Bakteri pelarut fosfat ini dapat digunakan sebagai pupuk hayati karena bakteri pelarut fosfat tersebut dapat menyediakan salah satu unsur hara makro hara yang diperlukan oleh tanaman yaitu fosfat.
DAFTAR PUSTAKA
Alexander, M. 1977. Soil microbiology. 2 nd ed. John Wiley and Sons Inc., New York. 472p.
Alexander, S. K. and Dennis S. 2001. Microbiology a photographic atlas for the laboratory. Benjamin Cummings an imprint of Addison Wesley Longman, Inc. Canada.
Anonimus. 2009. Citing computer references. Hutan mangrove wonorejo Surabaya. http://tugupahlawan.com/3224/wisata-alam-di-surabaya/. 5 Januari 2011.
Anonimus, 2011. Citing computer references. Mangrove Wonorejo. http://lh.surabaya.go.id/simbplh/SLHD/kesehatan.html. Agustus 2011.
Arshad, M. and W. T, Frankenberger. 1993. Microbial Production of Plant Growth Regulators.p. 307-347. In f. B. Metting (Ed). Soil Microbial Ecology.Marcel Dekker, Inc.New York, Bassel. Hongkong.
Banik, S. and B.K. Dey. 1982. Available phosphate content of an alluvial soil as influenced by inoculation of some isolated phosphate-solubilizing micro organisms. Plant Soil 69: 353-364.
Bohn, H. L., B. L. McNeal, and G.A. O’Connor. 1979. Soil chemistry. John Wiley and Sons Inc., New York.
Bridson, E. Y. 1998. The OXOID Manual, 8th Edition. OXOID Limited. England.
Buckman. H. O, and N. C. Brady. 1956. The nature and properties of soil, 5th ed. Macmillan. New York.
Buntan,A. 1992. Efektivitas bakteri pelarut fosfat dalam kompos terhadap peningkatan serapan P dan efisiensi pemupukan P pada tanaman jagung.
Tesis. Program Pascasarjana IPB. Bogor.
Case, C.L, and Johnson, T.R. 1995. Laboratory Experiments in Microbiology. 4th Edition. The Benjamin Cummings Publishing Company.
Dwipayana dan Herto. 2009. Identification of bacterial diversity in waste recycling paint sludge by conventional microbiological technique. LAPI ITB. Bandung.
Elfiati, D. 2005. Peranan mikroba pelarut P terhadap pertumbuhan tanaman. E-usu repository 2005. Fakultas Pertanian USU. Medan. (diakses tanggal : 27 september 2010).
Gaur, A. C. 1986. Phosphor microorganisms and various transfomations dalam: FAO (Ed.) efficient fertilizer use in acid upland soils of the humid 1 tropics. bulletin FAO fertilizer and plant nutrition, 10:106-111. Ginting, R.C.B., Saraswati R., dan Husen E. 2005. Mikroorganisme Pelarut
Fosfat. Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian : Bogor.
Glick, B. R. 1995. The enhancement of plant growth by free living bacteria.
Canadian journal microbiology. 41: 109-117.
Handayanto, E., dan Hairiah, K. 2009. Biologi tanah. landasan pengelolaan tanah sehat, pustaka adipura. Yogyakarta.
Havlin, J.L., J. D. Beaton., S.L.Tisdale., and W.L. Nelson, 1999. Soil fertility and fertilizers. An introduction to nutrient management, sixth ed. Prentice Hall, New Jersey.
Holt, G., Krieg, N. R., Sneath, P. H. J. T., and William S. T, 2003. Bergey’s manual of determinative bacteriology, 9th Edition. Lippincontt William and Wilking, Philadelphia. USA.
Islami, T. dan Utomo, W. H. 1995. Hubungan Tanah, Air, dan Tanaman. IKIP Semarang Press.
Kitamura, S., Anwar, C., Chaniago, A., and Baba, S. 1997. Handbook of mangroves in indonesia. MEDIT. Tokyo-Japan.
Kucey, R. M. N. 1983. Phosphate solubizing bacteria and fungi in various cultivated and virgin alberto sils. Can J. Soil Sci. 63 : 671-678.
Kundu, B. S. and A. C. Gaur. 1980. Establishment of nitrogen fixing and phosphate solubilizing bacteria in rhizosphere and their effect on yield and nutrient uptake of wheat crop. Plant and Soil. 57 : 223-230.
Koneman, E. W., Stephen D. W., Dowel, V.R., William M. J., Sommers, and Winn H. M. Washington C. 1988. Color atlas and textbook of diagnostic microbiology. third edition. Lippincott Company, Philadelphia.
Koesnandar dan Helianti. 2008. Isu bioetika dalam riset dan industrialisasi sumberdaya genetik mikroba. seminar bioetika nasional 2008.
Madigan, M. T., Martinko, J. M., and Parker, P. 2003. Biology of microorganism. 10th edition. Prentice Hall. USA.
Muslimin, L. W. 1995. Mikrobiologi lingkungan. Direktorat Jendral pendidikan Tinggi Departemen Pendidikan dan Kebudayaan.
Nautiyal, C.S. 1999. An efficient microbiological growth medium for screening phosphate solubilizing microorganisms. FEMS Microbiology letters. 170: 265-270
Pelczar, M. J., and R. O. Reid, 1965. Microbiology, 2nd ed., Mac. Graw Hill Book Co., New York.
Pelczar, M.J., Chan, E.C.S., 1988. Dasar-dasar mikrobiologi. UI-Press, Jakarta. Purnobasuki, Heri. 2005. Tinjauan persfektif hutan mangrove. Airlangga
University Press, Surabaya.
Rao, N. S. S. 1982a. Biofertilizersin agricultural. Oxford & IBH. Publ. Co. New Delhi.
Rao, N. S. S. 1982b. Phosphate solubilization by soil microorganisms. In N.S. Rao (ed.). Advanced in agricultural microbiology.New Delhi: Oxford and IBH Publishing Co.
Rao, N. S. S. 1994. Mikroorganisme tanah dan pertumbuhan tanaman. Edisi ke-2. Jakarta. Penerbit UI.
Rodriguez.H., and R. Fraga. 1999. Phosphate solubilizing bacteria and their role in plant growth promotiont. Biotech. Adv. 17:319-339.
Rusila N., Y., M. Khazali, dan I N.N Suryadiputra. 2006. Panduan pengenalan mangrove di indonesia. cetakan kedua. PHK/WI-IP, Bogor.
Saeni, M. S. 1989. Kimia lingkungan. Pusat Antar Universitas Ilmu Hayat Institut Pertanian Bogor. 117-120.
Sanchez, A. P. 1976. Properties and management of soil in the tropic. John Wiley and Sons Inc. New York.
Satria, A. 2008. Fosfor. http://arief-s3.blogspot.com/&usg, diakses tanggal 3 September 2010.
Saraswati, R., Simanungkalit, Husen, E., Santoso, J., Setyorini, D., dan Rachman, A. 2008. Baku mutu pupuk hayati. Balai Penelitian Tanah, Bogor. Stevenson, J. F. 1986. Cyclus of soil. John Wiley and Sons Inc. New York.
Suriadikarta, dan Simanungkalit, R.D.M. 2006. Pupuk organik dan pupuk hayati. Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Sumber Daya Lahan Pertanian : Bogor.
Supadi, T. H. 1991. Bakteri pelarut fosfat asal beberapa jenis tanah dan efeknya terhadap pertumbuhan dan hasil jagung. Disertasi doktor. UNPAD. Bandung.
Supardi, G. 1983. Sifat dan ciri tanah. Dep. Ilmu Tanah Fak. Pertanian IPB. Bogor.
Taha, S. M., S. A. Z. Mahmoud, A. H, Damsty, and A. M. Abd. El-Hafez. 1969. Activity of phosphate dissolving bacteria in Egyptian soils. Plant soil
31 (1) : 149-160.
Tatiek, H. 1991. Bakteri pelarut fosfat asal beberapa jenis tanah dan efeknya terhadap pertumbuhan dan hasil jagung (Zea mays L.) . Disertasi Universitas Padjadjaran, Bandung
Tisdale, S. N. and Beaton, J. D. 1984. Soil fertility and fertilizer. 4th ed. Mc. Macmillan Publ. Co. New York, 649 p.
Tomlinson, P. B. 1986. The botany of mangroves. Cambridge University Press, Cambridge.
Tortora, Gerard J., Funkey, Berdell R., Case, and Christine L. 2007. Microbiology. San Francisco.
Wijiyono. 2009. Keanekaragaman Bakteri Serasah Daun Avicennia marina yang Mengalami Dekomposisi Pada Berbagai Tingkat Salinitas di Teluk Tapian Nauli. Tesis. Pascasarjana Universitas Sumatra Utara Medan.
Young, C. C., C. L. Chen, and C. C. Chao. 1990. Effect of rhizobium, VAM and phosphatase solubizing bacteria on yield. Mineral and mineral phosphorus uptake of corn in subtropical-tropical soil. Departement of soil science. National Chun Hsing University Taichung. Taiwan.
Lampiran 1
RINGKASAN
EKSPLORASI BAKTERI PELARUT FOSFAT PADA TANAH DI KAWASAN MANGROVE WONOREJO SURABAYA
Nisa Dwi Octaviani, Drs. Agus Supriyanto, M.Kes dan Dr. Sucipto Hariyanto, DEA.
Prodi S-1 Biologi, Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Airlangga, Surabaya
ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui keberadaan bakteri pelarut fosfat pada tanah di kawasan Wonorejo Surabaya. Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif. Sampel tanah diambil dari 4 rhizosfer tanaman mangrove yang berbeda dengan 3 kali pengulangan. Bakteri pelarut fosfat diisolasi menggunakan media agar Pikovskaya dengan metode Pour plate. Kultur diinkubasi pada suhu 28ºC, dan koloni bakteri tumbuh 24-48 jam setelah penanaman. Kultur dinyatakan positif terdapat bakteri pelarut fosfat apabila terdapat halozone di sekitar koloni. Kemudian dibuat isolat murni dan dilakukan identifikasi secara makroskopis dan mikroskopis. Secara makroskopis yaitu pengamatan koloni yang meliputi bentuk, warna, elevasi dan tepi. Sedangkan identifikasi secara mikroskopis dilakukan dengan pewarnaan gram dan uji fisiologis. Dari hasil isolasi pada rhizosfer tanamam Mangrove Wonorejo diperoleh 12 isolat bakteri pelarut fosfat yang terdiri dari genus Bacillus sebanyak 5 isolat, genus Micrococcus sebanyak 5 isolat, dan genus Pseudomonas sebanyak 2 isolat.
Kata kunci: bakteri pelarut fosfat, fosfat, tanah mangrove, Wonorejo, eksplorasi.
ABSTRACT
This research was aimed to know the existance of phosphate solubilizing bacteria at mangrove soils in Wonorejo Surabaya. The type of this research was descriptive. Soil samples were collected from 4 different rhizosfer plants of mangrove with 3 times of replicates. The isolates were isolated using Pikovskaya
agar medium with pourplate methods. This mixture was incubated into temperature of 28ºC, and the colonies of bacteria started to developed at 24-48 hours after the starting point of this research. This research regarded positive phosphate solubilizing bacteria when there were had a halozone around the colony. Afterwards, helding the pure isolate of phosphate solubilizing bacteria and indentifiying about the macroscopic and microscopic. For the microscopic identification are about the colony including the form, colour, edge and elevation. And for the microscopic identification using Gram colouring and fisiologist testing. From the result of isolation rhizosfer plants of mangrove was obtained 12 isolates of phosphate solubilizing bacteria, there was from genera of Bacillus
consisted of 5 isolate, from genera of Micrococcus consisted of 5 isolate, and from genera of Pseudomonas consisted of 2 isolate
Pendahuluan
Hutan mangrove adalah tipe hutan yang khas dan terdapat di daerah pantai tempat pertemuan muara daratan dan lautan. Hutan mangrove di Indonesia merupakan ekosistem yang produktif dan mempunyai potensi tinggi untuk digunakan secara berkelanjutan. Di Surabaya terdapat ekowisata mangrove yang terletak di kawasan Wonorejo. Namun, data-data dan informasi yang berkaitan dengan sumber daya mangrovenya masih sangat terbatas.
Tanaman mangrove dapat tumbuh dengan subur walaupun tidak ada sumber nutrisi seperti pupuk yang sengaja ditambahkan untuk memberikan unsur-unsur hara ke dalam tanah. Hal ini mengindikasikan bahwa mangrove mendapatkan nutrisi yang cukup dari tanah di sekitarnya. Kemungkinan di dalam tanah tersebut terdapat suatu kegiatan yang dilakukan oleh organisme tanah. Bakteri pelarut fosfat (BPF) seperti Bacillus sp. dan Pseudomonas sp. merupakan mikroba tanah yang mempunyai kemampuan melarutkan fosfat (Rao, 1982).
Berdasarkan latar belakang di atas maka perlu dilakukan penelitian tentang eksplorasi bakteri pelarut fosfat yang terdapat dalam tanah hutan mangrove dan kemampuannya dalam melarutkan fosfat dengan menggunakan parameter secara kualitatif. Pendekatan secara kualitatif dengan melakukan identifikasi pada bakteri pelarut fosfat tersebut.
Metode Penelitian
Pengambilan sampel tanah
Sampel tanah dari rhizosfer mangrove diambil menggunakan alat cylinder crof dengan kedalaman + 20 cm dan dimasukkan dalam kantong plastik. Bersamaan dengan sampling pengambilan tanah dari rhizosfer tanaman mangrove, dilakukan pula pengukuran faktor fisik dan kimia disetiap titik pengambilan sampel meliputi : pH, Salinitas, Kelembapan, dan Temperatur. Selanjutnya dianalisis di Laboratorium
Tahap isolasi bakteri pelarut fosfat
selama beberapa menit untuk kemudian diambil suspensinya + 10 mL ke dalam botol berisi 90 mL aquades steril dan homogenkan. Menumbuhkan pada media selektif dengan cara mengambil masing-masing 1 mL suspensi tanah mangrove setiap sampel lalu menuangkannya kedalam cawan petri, kemudian menambahkan media Pikovskaya dan menghomogenkan. Memberi label dan menginkubasi pada suhu 37ºC selama 2-3 hari. Setelah inkubasi, dilakukan pengamatan pada koloni pengamatan pada koloni yang tumbuh pada cawan petri, keberadaan bakteri pelarut fosfat dikatatakan positif apabila terdapat zona jernih pada media
Pikovskaya. Kemudian koloni tersebut dimurnikan dengan cara mengambil satu ose pada koloni yang memiliki zona jernih dan di tanam pada media miring NA dengan metode streak untuk mendapatkan biakan murni.
Tahap Identifikasi 1. Uji morfologi
Uji morfologi meliputi pengamatan secara makroskopis pada koloni yang meliputi: bentuk, warna, tepi dan elevasi serta pengamatan secara mikroskopis yang didapatkan dari hasil pengecatan Gram untuk mengetahui bentuk bakteri dan jenis Gram bakteri.
2. Uji fisiologis
Untuk uji fisiologis menggunakan 24 senyawa uji yaitu: Lysine, Ornithine, H2S, Glucose, Mannitol, Xylose, O-nitrophenyl- -D-galacto-pyranoside (ONPG), Indole, Urease, Voges-Proskauer, Citrate, Tryptophan deaminase (TDA), Gelatin, Malonate, Inositol, Sorbitol, Rhamnose, Sucrose, Lactose, Arabinose,
Hasil dan Pembahasan
Tabel 4. Hasil Isolasi Pelarut Fosfat dari Rhizosfer Tanah Mangrove.
No Lokasi Sampling Ulangan
I II III pengambilan tanah (sampling) pertama, 4 isolat pada pengambilan tanah kedua, dan 6 isolat pada pengambilan tanah ketiga. Isolat keseluruhan yang berhasil didapatkan pada penelitian kali ini sebanyak 12 isolat. Keberadaan isolat-isolat bakteri pelarut fosfat pada rhizosfer tanaman-tanaman mangrove ini juga dipengaruhi oleh faktor-faktor lingkungan di sekitar tempat tumbuh tanaman tersebut, antara lain kelembapan, pH, suhu, dan salinitas. Kelembapan dan pH merupakan faktor yang mempengaruhi kehidupan bakteri (Rao, 1982).
Tabel 5. Karakter morfologi koloni bakteri pelarut fosfat pada media
beraturan Rata Datar
Tabel 6. Uji Morfologi sel secara mikroskopis isolat bakteri pelarut fosfat yang ada pada sampel.
Kode Isolat Morfologi Sel
Bentuk Gram
Berdasarkan tabel morfologi secara makroskopis dan mikroskopis, isolat I.1.2 memiliki kesamaan karakter morfologi koloni dan morfologi sel dengan kode isolat II.1.2 ; II.4.1 ; II.4.2 ; III.4.2. dan menunjukkan ciri genus Bacillus. Menurut Holt et. al., (2003) karakter Bacillus sp adalah berbentuk batang lurus, tersusun secara soliter atau berpasangan, gram positif. Pada isolat III.3.1 memiliki kesamaan karakter morfologi koloni dan morfologi sel dengan isolat III.3.2 dan III.3.4 dan menunjukkan ciri dari genus Micrococcus yang berpigmen merah.
Menurut Holt et al., (2003) karakter Micrococcus termasuk Gram positif (+), kadang motil, tidak membentuk spora, aerob obligat, koloni biasanya berpigmen kuning atau merah. Pada isolat II.4.3 memiliki kesamaan karakter morfologi koloni dan morfologi sel dengan III.2.2 dan menunjukkan ciri dari genus
beraturan Rata Datar
11 III.3.4 Merah Bulat Rata Cembung
aerob obligat, koloni biasanya berpigmen kuning atau merah. Pada isolat III.3.3 dan I.4.1 termasuk kedalam genus Pseudomonas. . Menurut Holt et al., (2003) karakter Pseudomonas merupakan bakteri berbentuk batang, motil dengan satu atau lebih flagella, gram negatif, aerob, tidak membentuk spora
Tabel 8. Uji fisiologis untuk isolat bakteri
Pada tabel 8. Uji fisiologis diatas terdapat kesamaan hasil uji fisiologis untuk beberapa isolat. Pada isolat Bacillus (I.1.2; II.1.2 ; II.4.1 ; II.4.2 ; III.4.2.) dapat memecah gugus amino Lysine, dan Arginin namun tidak dapat memecah gugus amino Ornithine, dapat memfermentasikan Lactose namun tidak dapat memfermentasikan Glucose, Mannitol, Xylose, Malonate, Inositol, Sorbitol, Rhamnose, Sucrose, Arabinose, Adonitol, Rafinose, dan Salicin, dapat menghidrolisis ONPG, Urease, dan Gelatine namun tidak dapat menghidrolisis asam amino sistein pada H2S, tidak terbentuk Indole, tidak membentuk acetoin
pada V-P, menghasilkan enzim citrase, dan tidak mendeaminasi Tryptophan pada TDA. Pada isolat Micrococcus sp.2 (III.3.1; III.3.2 dan III.3.4) dapat memecah gugus amino Lysine, dan Ornithine namun tidak dapat memecah gugus amino
Arginin, dapat memfermentasikan Malonate, Inositol, Glucose, Adonitol namun tidak dapat memfermentasikan Lactose, Mannitol, Xylose, Sorbitol, Rhamnose, Sucrose, Arabinose, Rafinose, dan Salicin, dapat menghidrolisis ONPG, Urease, dan Gelatine namun tidak dapat menghidrolisis asam amino sistein pada H2S, terbentuk Indole, membentuk acetoin pada V-P, menghasilkan enzim citrase, dan mendeaminasi Tryptophan pada TDA. Pada Micrococcus sp.1 (II.4.3 dan III.2.2) dapat memecah gugus amino Lysine, namun tidak dapat memecah Ornithine dan
Arginin, dapat memfermentasikan Malonate, namun tidak dapat
memfermentasikan Inositol, Glucose, Adonitol Lactose, Mannitol, Xylose, Sorbitol, Rhamnose, Sucrose, Arabinose, Rafinose, dan Salicin, dapat menghidrolisis ONPG, Urease, namun tidak dapat menghidrolisis Gelatine dan asam amino sistein pada H2S, tidak terbentuk Indole, tidak membentuk acetoin
pada V-P, menghasilkan enzim citrase, namun tidak mendeaminasi Tryptophan
pada TDA. Pada genus Pseudomonas (III.3.3 dan I.4.1) dibedakan dari hasil uji fisiologis karena isolat III.3.3 mampu memfermentasikan Mannitol, Inositol, Adonitol dan Sucrose
Pseudomonas sp.2. Pada Penelitian yang dilakukan oleh D.Costa et. al, (2004) pada tanah mangrove di India ditemukan beberapa genus bakteri yaitu Bacillus, Micrococcus, Pseudomonas, Mycobacteria, Microbacterium. Wijiono (2009) juga berhasil mengisolasi beberapa bakteri dari tanah mangrove di kawasan teluk tapian Nauli Tapanuli diantaranya B. subtilis, B. cereus, Micrococcus varians, Aeromonas hydrophila, Bacilllus mycoides dan Pseudomonas aeruginosa
Kesimpulan
Diperoleh tiga genus isolat murni bakteri pelarut fosfat yang dapat diidentifikasi, dari Bacillus.Micrococcus dan Pseudomonas pada rhizosfer tanah di kawasan mangrove Wonorejo Surabaya Pada genus Bacillus secara makroskopik koloni memiliki warna putih pucat dengan bentuk bulat, tepi koloni rata dengan elevasi cembung dan secara mikroskopik termasuk Gram positif (+) dengan bentuk sel batang. Pada genus Micrococcus ditemukan 2 spesies yang berbeda yaitu Micrococcus sp.1 dengan koloni berwarna kuning dan Micrococcus sp.2 dengan koloni berwarna merah, namun keduanya sama-sama memiliki bentuk koloni bulat dengan tepian rata dan elevasinya cembung. Secara mikroskopis genus Micrococcus termasuk Gram positif dengan bentuk sel kokus. Secara mikroskopis yang membedakan Micrococcus sp.1 dari Micrococcus sp.2
adalah pada Micrococcus sp.2 memiliki hasil positif terhadap Gelatin, Inositol, Adonitol, Ornithin, Indol, VP, dan TDA pada uji fisiologis. Pada genus
Pseudomonas juga ditemukan 2 jenis dengan penampakan makrosopis yang sama yaitu koloni memiliki warna putih pada bagian tengah dan transparan pada bagian tepi koloni dengan bentuk koloni tidak beraturan namun memiliki tepi yang rata dan elevasi yang datar. Dari segi mikroskopis yang membedakan Pseudomonas sp.1 dan Pseudomonas sp.2 adalah pada Pseudomonas sp.2 menunjukkan hasil positif pada Manitol, Inositol, Adonitol dan Sukrosa pada uji fisiologisnya.
Saran
lebih lanjut tentang keberadaan mikroba pelarut fosfat selain dari bakteri, seperti: kapang, khamir, dan aktinomiset
Daftar Pustaka
D’Costa, P. M., Kalekar, S., and Bhosle, S. 2004. Breakdown of Conifer Needle Debris in a New Nothern Reservoir. Southern Indian Lake. Manitoba. 41: 649-658.
Holt, G., Krieg, N. R., Sneath, P. H. J. T., and William S. T, 2003. Bergey’s manual of determinative bacteriology, 9th Edition. Lippincontt William and Wilking, Philadelphia. USA.
Rao, N. S. S. 1982. Phosphate solubilization by soil microorganisms. In N.S. Rao (ed.). Advanced in agricultural microbiology.New Delhi: Oxford and IBH Publishing Co.
Lampiran 2
Komposisi dan prosedur pembuatan media selektif pertumbuhan bakteri 1. Pembuatan medium selektif Pikovskaya
Komposisi bahan kimia yang diperlukan
1. Glukosa 10 g/L
2. Ca3PO4 5 g/L
3. (NH4)2SO4 0,5 g/L
4. KCl 0,2 g/L
5. MgSO4 0,1 g/L
6. MnSO4 0,1 g/L
7. FeSO4 0,1 g/L
8. Yeast Ekstrak 0,5 g/L
9. Agar Powder 15 g/L
10. Aquades 1 Liter
Cara membuat
Mengisi kurang lebih 500 mL aquades kedalam erlenmayer 1000 mL, lalu Menimbang satu per satu bahan dan mengaduk larutan dengan spatula setiap penambahan bahan, pada akhir kita menambahkan aquades sampai volume 1 Liter dan menambahkan agar powder lalu aduk dengan spatula, lalu kita memanaskan media sambil terus di aduk, sebelum di autoclav kita membagi larutan kedalam dua labu erlenmayer agar media tersterilisasi secara optimal, setelah steril kita memasukkan media kedalam cawan untuk langsung digunakan dan sisanya disimpan di dalam inkubator bersuhu 65oC.
2. Pembuatan Senyawa Uji Fisiologis berdasarkan buku The Manual OXOID a. Uji Lysine
Bahan :
Yeast extract 3.0 g
Glucose 1.0 g
L-lysine 5.0 g
Akuades 1000 mL pH 6.1 ± 0.2
Prosedur :
Mencampurkan semua zat kimia ke dalam 1000 mL akuades, kemudian diaduk sampai homogen. Setelah itu di sterilkan ke dalam autoclave
dengan suhu 121°C selama 15 menit dan tekanan 1 atm. Cara kerja :
Menginokulasikan satu ose kultur murni ke dalam medium, kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35°C.
Positive Bromocresol purple 0.016 g
Akuades 1000 mL
pH 6.1 ± 0.2 Prosedur :
Mencampurkan semua zat kimia ke dalam 1000 mL akuades, kemudian diaduk sampai homogen. Setelah itu di sterilkan ke dalam autoclave
dengan suhu 121°C selama 15 menit dan tekanan 1 atm. Cara kerja :
Menginokulasikan satu ose kultur murni ke dalam medium, kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35°C.
dekarboksilase
Positive
Ferrous ammonium sulphate 0.2 g
Sodium thiosulphate 0.2 g
Agar 3.5 g
Akuades 1000 mL
pH 7.3 ± 0.2 Prosedur
Glucose 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
Akuades 500 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara Kerja
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Positive karbohidrat asam (pH turun) terbentuk gas pada tabung durham warna berubah menjadi kuning
Negative karbohidrat tidak terbentuk gas tidak terjadi perubahan warna
e. Uji Mannitol Bahan :
Casein Peptone 10 g
Mannitol 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
Akuades 500 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
Cara kerja :
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Positive karbohidrat asam (pH turun) terbentuk gas pada tabung durham warna berubah menjadi kuning
Negative karbohidrat tidak terbentuk gas tidak terjadi perubahan warna
f. Uji Xylose Bahan :
Casein Peptone 10 g
Xylose 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
Akuades 500 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara kerja :
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Positive karbohidrat asam (pH turun) terbentuk gas pada tabung durham warna berubah menjadi kuning
g. Uji ONPG (O-nitrophenyl- -D-Galaktopiranosa) Bahan
ONPG disc
NaCl 0.88% 0.1 mL Cara kerja
1. Menempatkan disc yang steril ke dalam tabung reaksi 2. Menambahkan 0.1 mL NaCl 0.88%
3. Mengambil 1 ose biakan dan menginokulasikan ke dalam tabung reaksi yang berisi larutan fisiologis dan ONPG disc
4. Inkubasi pada suhu 35°C Positive berwarna kuning Negative tidak berwarna
h. Uji Indole Bahan
Tryptone 20 g
Peptone 6.1 g
Ferrous ammonium sulphate 0.2 g Sodium thiosulphate 0.2 g
Agar 3.5 g
Akuades 1000 mL
pH 7.3 ± 0.2 Prosedur
Mencampurkan seluruh zat kimia ke dalam 1000 mL akuades, setelah tercampur kemudian ditambahkan agar dan dipanaskan. Setelah itu disterilkan dalam autoclave selama 15 menit dengan suhu 121°C dan tekanan 1 atm.
Cara kerja :
inkubasi kemudian ditambahkan 0.2 mL reagen kovac dan didiamkan selama 10 menit.
Positive
Tryptophan NH3 + asam piruvat +indole Indol + reagen kovac = cincin merah
Negative
Tryptophan tryptophan
Tidak terjadi reaksi dengan reagen kovac
i. Uji Urease Bahan a
Peptone 1.0 g
Glukosa 1.0 g
Disodium fosfat 1.2 g Potassium dihidrogen fosfat 0.8 g
NaCl 5.0 g
Phenol red 0.004 g
Akuades 1000 mL
pH 6.8 ± 0.2 Bahan b
Larutan urea 40% steril 5 mL Prosedur
Mencampurkan semua bahan a, kemudian disterilkan di dalam autoclave dengan suhu 115°C selama 15 menit. Setelah steril,mendinginkan media hingga 55°C dan kemudian ditambahkan dengan bahan b secara aseptic, homogenkan.
Positive warna media berubah menjadi pink-merah Negative warna mediatidak mengalami perubahan warna
j. Uji V-P (Voges-Proskauer) Bahan
Peptone 5.0 g
Glukosa 5.0 g
Buffer fosfat 5.0 g
Akuades 1000 mL
pH 7.5 ± 0.2 Prosedur
Menambahkan seluruh zat kimia tersebut ke dalam akuades1000 mL, kemudian aduk hingga semua bahan tercampur rata. Setelah itu disterilkan ke dalam autoclave selama 15 menit dengan tekanan 121°C.
Cara kerja
Menginokulasikan 10 mL media dengan 2 ose kultur murni usia 24 jam, inkubasi kurang dari 48 jam pada suhu 35°C. setelah inkubasi, menambahkan larutan -naphtol alkohol 5% sebanyak 3 mL ke dalam tabung, setelah itu ditambahkan lagi dengan larutan KOH 40% sebanyak 3mL kemudian dihomogenkan.
Positive warna merah pada medium
Negative warna merah tembaga pada medium
k. Uji Citrate Bahan :
Magnesium sulfat 0.2 g
Ammonium dihidrogen fosfat 0.2 g Sodium ammonium fosfat 0.8 g
Sodium citrate, tribasic 2.0 g
NaCl 5.0 g
Bromothymol blue 0.08 g
Agar 15 g
Akuades 1000 mL
Prosedur :
Mencampurkan semua zat kimia ke dalam 1000 mL akuades, kemudian ditambahkan agar dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm.
Cara kerja:
Inokulasikan satu ose bakteri dengan cara menusukkannya ke dalam media di dalam tabung reaksi. Inkubasi 48 jam pada suhu 35°C.
Positive
Citrate asam oksaloasetat + asam asetat Asam oksaloasetat asam purivat +CO2
CO2 + Na+ Na2CO3(pH meningkat) berwarna biru Negative
Citrate (hijau) citrate (pH tidak berubah)
l. Uji TDA (Tryptophan Deamination) Bahan :
Tryptophan 120 g
Akuades 1000 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 1000 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam
autoclave selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara kerja:
Menginokulasikan kultur murni kedalam media berisi TDA lalu inkubasi 24-48 jam dengan suhu 35 derajat
m. Uji Gelatin Bahan :
Gelatin 120 g
Akuades 1000 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 1000 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam
autoclave selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara kerja
Mencampur suspense kultur biakan murni dengan media gelatin, lalu inkubasi 35 derajat selama 24-48 jam. Setelah itu masukkan lemari es bersuhu 20 derajat selama 30 menit.
Positive berwarna kuning Negative tidak berwarna
n. Uji Malonate Bahan :
Casein Peptone 10 g
Malonate 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
Akuades 500 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Positive karbohidrat asam (pH turun) terbentuk gas pada tabung durham warna berubah menjadi kuning
Negative karbohidrat tidak terbentuk gas tidak terjadi perubahan warna
o. Uji Inositol Bahan :
Casein Peptone 10 g
Inositol 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
Akuades 500 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara kerja :
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Positive karbohidrat asam (pH turun) terbentuk gas pada tabung durham warna berubah menjadi kuning
p. Uji Sorbitol Bahan :
Casein Peptone 10 g
Sorbitol 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
Akuades 500 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara Kerja:
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Positive karbohidrat asam (pH turun) terbentuk gas pada tabung durham warna berubah menjadi kuning
Negative karbohidrat tidak terbentuk gas tidak terjadi perubahan warna
q. Uji Rhamnose Bahan :
Casein Peptone 10 g
Rhamnose 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
Akuades 500 mL
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara kerja :
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Positive karbohidrat asam (pH turun) terbentuk gas pada tabung durham warna berubah menjadi kuning
Negative karbohidrat tidak terbentuk gas tidak terjadi perubahan warna
r. Uji Sucrose Bahan :
Casein Peptone 10 g
Sucrose 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
Akuades 500 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara kerja :
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Negative karbohidrat tidak terbentuk gas tidak terjadi perubahan warna
s. Uji Lactose Bahan :
Casein Peptone 10 g
Lactose 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
Akuades 500 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara Kerja
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Positive karbohidrat asam (pH turun) terbentuk gas pada tabung durham warna berubah menjadi kuning
Negative karbohidrat tidak terbentuk gas tidak terjadi perubahan warna
t. Uji Arabinose Bahan :
Casein Peptone 10 g
Arabinose 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm.
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Positive karbohidrat asam (pH turun) terbentuk gas pada tabung durham warna berubah menjadi kuning
Negative karbohidrat tidak terbentuk gas tidak terjadi perubahan warna
u. Uji Adonitol Bahan :
Casein Peptone 10 g
Adonitol 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
Akuades 500 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara kerja
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Negative karbohidrat tidak terbentuk gas tidak terjadi perubahan warna
v. Uji Rafinose Bahan :
Casein Peptone 10 g
Rafinose 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
Akuades 500 mL
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara kerja
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Positive karbohidrat asam (pH turun) terbentuk gas pada tabung durham warna berubah menjadi kuning
Negative karbohidrat tidak terbentuk gas tidak terjadi perubahan warna
w. Uji Salicin Bahan :
Casein Peptone 10 g
Salicin 5 g
Sodium Chloride 5 g
Phenol Red 0,018 g
pH 7.0 ±0.2 Prosedur :
Mencampurkan ke dalam 500 mL akuades, dan dipanaskan sampai semua bahan terlarut. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoclave
selama 15 menit pada suhu 121°C dan tekanan 1 atm. Cara kerja:
Menginokulasikan satu ose suspensi kultur murni biakan kedalam tabung berisi media dan sebelumnya terlebih dahulu telah diberi tabung durham. Lalu inkubasi 24-48 jam
Positive karbohidrat asam (pH turun) terbentuk gas pada tabung durham warna berubah menjadi kuning
Negative karbohidrat tidak terbentuk gas tidak terjadi perubahan warna Bromocresol purple 0.016 g
Akuades 1000 mL
pH 6.1 ± 0.2 Prosedur :
Mencampurkan semua zat kimia ke dalam 1000 mL akuades, kemudian diaduk sampai homogen. Setelah itu di sterilkan ke dalam autoclave
dengan suhu 121°C selama 15 menit dan tekanan 1 atm. Cara kerja :
Menginokulasikan satu ose kultur murni ke dalam medium, kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35°C.
Positive
Glukosa asam (pH turun, kuning)
Asam amino(arginine) amina + CO2 (pH meningkat, ungu) Negative
Glukosa asam (pH turun, kuning)
Lampiran 3
Lampiran 4
Suspensi sampel tanah dari rhizosfer tanah mangrove
Sampel 1 Sampel 2
Lampiran 5
Alat dan Bahan
Lemari es autoclave Laminar Air Flow
Neraca analitik Waterbath Vortex
Lampiran 6
Isolasi pada media Pikovskaya
1. Sampling I
Sampel 1 Sampel 2
