TEKNOLOGI
DNA
REKOMBINAN
PRODUKSI
INSULIN
REKOMBINAN
Lili sugiyarto
Insulin merupakan hormon yang
diproduksi sel dalam pankreas yaitu sel beta
Salah satu fungsinya menstimulasi
Type 1 (insulint-dependent)
Terjadi ketika sel2 beta tdk dp
memproduksi insulin
Kekurangan insulin mengakibatkan
konsentrasi gula darah tinggi
Akibatnya terjadi gangguan kesehatan
Org dg diabetes type 1
Harus injeksi rutin utk mengontrol gula
darah
Dahulu insulin dipurifikasi dari pankreas
babi dan sapi
Proses purifikasi mahal, sering juga
mengalami kesulitan dalam purifikasi, dan sering menghasilkan insulin tdk murni
Tidak efektif, sering terjadi alergi pada
1978 : insulin berhasil diklon ke dalam
vektor plasmid dan diekspresikan dalam sel bakteri oleh scientist di Genentech (perusahaan bioteknologi dkt San
Francisco, California)
1982 : ber hasil memproduksi
Recombinant Human Insulin yang disebut HUMULIN, DNA rekombinan pertama
Bakteri secara normal tidak mampu
memproduksi insulin
Insulin berhasil diproduksi melalui bakteri
rekombinan (microbial biotechnology)
Insulin merupakan protein pertama yang
Struktur insulin manusia
Insulin terdiri dari 2 rantai protein (A: 21 AA
dan B: 30 AA), dg ik. disulfida
Insulin rekombinan dibuat dg mengklon
gen insulin ke dalam plasmid yg terdapt
Gen setiap unit akan diklon ke dalam
plasmid yg berbeda yang terdapat gen lacZ mengkode enz. ß-gal
Plasmid rekombinan kmd d
tranformasikan k dlm E.coli untuk
menghasilkan protein fusi ß-gal-insulin
Isolasi protein fusi tsb dg Kromatografi
Kromatografi affinitas untuk mengisolasi
protein fusi ß-gal-insulin
Dilanjutkan dg purifikasi insulin rantai A
dan B
Mixed keduanya pada kondisi keduanya
Pemisahan ß-gal dan prot A
Effector cleavage : CNBr (--Met---Xaa--)
Active insulin by refold and oxidize cysteines (prot A
Pemisahan ß-gal dan prot A
Beberapa contoh therapeutic
protein dari bakteri
rekombinan
Erythropoietin ( utk produksi sel darah merah)
: utk treatment pasien anemia
Faktor VIII (faktor penggumpalan darah) : utk
pasien hemofilia
Interferon & interleukin (faktor yg menstimulasi
pertumbuhan dan prod sel darah) : utk pasien leukimia
Vaksin (hepatitis B) : stimulasi sistem imun dlm
pencegahan infeksi bakteri & virus) : imunisasi manusia/ hewan, treatment bbrp
Struktur protein
Ribosom : pabrik penghasil protein
Molekul kompleks dibangun oleh rantai
asam amino
Mempunyai berat molekul spesifik
Mempunyai muatan listrik shg mampu
berinteraksi dg molekul lain
