LAMPIRAN 1. Standar zona hambat antibiotik menurut CLSI

(1)

LAMPIRAN 1. Standar zona hambat antibiotik menurut CLSI

Jenis antibiotik

Konsentrasi

cakram antibiotik Diameter zona hambat (mm)

Sensitif intermediate Resisten

Kloramfenikol 30 µg ≥ 18 13 s/d 17 ≤ 12

Sumber: Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, formerly NCCLS) Providing NCCLS standards and guidelines ISO/TC 212 standards, and ISO/TC 76 standards.

LAMPIRAN 2. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat terhadap zona hambat pada mikroba uji E. coli Post Hoc Test pelarut untuk mikroba uji E. coli

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:ZonaHambat

Source

Type III Sum

of Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 265.154a 44 6.026 20.123 .000 Intercept 302.791 1 302.791 1.011E3 .000 Pelarut 4.650 2 2.325 7.764 .001 Konsentrasi 24.387 4 6.097 20.358 .000 Isolat 47.375 2 23.688 79.097 .000 Pelarut * Konsentrasi 3.515 8 .439 1.467 .180 Pelarut * Isolat 129.423 4 32.356 108.042 .000 Konsentrasi * Isolat 16.318 8 2.040 6.811 .000 Pelarut * Konsentrasi * Isolat 39.486 16 2.468 8.241 .000 Error 26.953 90 .299 Total 594.897 135 Corrected Total 292.106 134

(2)

LAMPIRAN 3. Post Hoc Test pelarut untuk mikroba uji E. coli

Duncan Zona Hambat

Pelarut N Subset 1 2 n-heksana 45 1.2358 metanol 45 1.6129 Etil asetat 45 1.6442 Sig. 1.000 .787

LAMPIRAN 4. Post Hoc Test konsentrasi untuk mikroba uji E. coli

Konsentrasi N Subset 1 2 3 0 27 .7100 40 27 1.4796 80 27 1.6293 60 27 1.6967 1.6967 100 27 1.9726 Sig. 1.000 .173 .067

LAMPIRAN 5. Post Hoc Test isolat untuk mikroba uji E. coli

Isolat N Subset 1 2 3 S2T16-1 45 .7100 S3T32-3 45 1.6442 S3T33-3 45 2.1387 Sig. 1.000 1.000 1.000

(3)

LAMPIRAN 6. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat terhadap zona hambat pada mikroba uji S. aureus

Source

Type III Sum

Corrected Model 90.656a 44 2.060 1.740E3 .000

Intercept 125.802 1 125.802 1.062E5 .000

Pelarut 17.603 2 8.801 7.431E3 .000

Konsentrasi 2.249 4 .562 474.795 .000

Isolat 17.603 2 8.801 7.431E3 .000

Pelarut * Konsentrasi 4.499 8 .562 474.795 .000

Pelarut * Isolat 35.205 4 8.801 7.431E3 .000

Konsentrasi * Isolat 4.499 8 .562 474.795 .000 Pelarut * Konsentrasi * Isolat 8.998 16 .562 474.795 .000 Error .107 90 .001 Total 216.565 135 Corrected Total 90.763 134

a. R Squared = .999 (Adjusted R Squared = .998)

LAMPIRAN 7. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji S. aureus

Duncan Zona hambat

Pelarut N Subset 1 2 n-heksana 45 .7100 Etil asetat 45 .7100 Metanol 45 1.4760 Sig. 1.000 1.000

(4)

LAMPIRAN 8. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji S. aureus

Konsentrasi N Subset 1 2 3 0 27 .7100 60 27 1.0148 40 27 1.0156 80 27 1.0204 100 27 1.0659 Sig. 1.000 .581 1.000

LAMPIRAN 9. Post Hoc Test Isolat untuk mikroba uji S. aureus

Isolat N Subset

1 2

S2T16-1 45 .7100

S3T32-3 45 .7100

(5)

LAMPIRAN 10. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat terhadap zona hambat pada mikroba uji C. albicans

Source

Type III Sum

of Squares Df Mean Square F Sig.

Corrected Model 254.597a 44 5.786 60.624 .000 Intercept 305.733 1 305.733 3.203E3 .000 Pelarut 170.599 2 85.300 893.702 .000 Konsentrasi 21.849 4 5.462 57.229 .000 Isolat 4.590 2 2.295 24.046 .000 Pelarut * Konsentrasi 43.698 8 5.462 57.229 .000 Pelarut * Isolat 9.180 4 2.295 24.046 .000 Konsentrasi * Isolat 1.560 8 .195 2.043 .050 Pelarut * Konsentrasi * Isolat 3.120 16 .195 2.043 .018 Error 8.590 90 .095 Total 568.920 135 Corrected Total 263.187 134

LAMPIRAN 11. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji C. albicans Duncan Zona hambat

Pelarut N Subset 1 2 n-heksana 45 .7100 Etil asetat 45 .7100 Metanol 45 3.0947 Sig. 1.000 1.000

(6)

LAMPIRAN 12. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji C. albicans

Konsentrasi N Subset 1 2 0 27 .7100 40 27 1.6044 80 27 1.6804 1.6804 60 27 1.7370 1.7370 100 27 1.7926 Sig. 1.000 .140 .213

LAMPIRAN 13. Post Hoc Isolat untuk mikroba uji C. albicans

Konsentrasi N Subset 1 2 S2T16-1 45 1.2504 S3T32-3 45 1.5827 S3T33-3 45 1.6816 Sig. 1.000 .132

(7)

LAMPIRAN 14. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat terhadap zona hambat pada mikroba uji F. oxysporum

Source

Type III Sum

of Squares Df Mean Square F Sig.

Corrected Model 10.622a 44 .241 6.129 .000 Intercept 111.339 1 111.339 2.827E3 .000 Pelarut 3.668 2 1.834 46.562 .000 Konsentrasi 2.249 4 .562 14.275 .000 Isolat .757 2 .379 9.614 .000 Pelarut * Konsentrasi 1.087 8 .136 3.449 .002 Pelarut * Isolat 1.063 4 .266 6.749 .000 Konsentrasi * Isolat .571 8 .071 1.812 .085 Pelarut * Konsentrasi * Isolat 1.226 16 .077 1.945 .026 Error 3.545 90 .039 Total 125.506 135 Corrected Total 14.167 134

LAMPIRAN 15. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji F. oxysporum

Konsentrasi N Subset 1 2 Etil asetat 45 .7596 n-heksana 45 .8269 Metanol 45 1.1380 Sig. .111 1.000

(8)

LAMPIRAN 16. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji F. oxysporum

Konsentrasi N Subset 1 2 3 0 27 .7100 60 27 .8730 40 27 .8981 80 27 .9489 100 27 1.1107 Sig. 1.000 .189 1.000

LAMPIRAN 17. Post Hoc Test isolat untuk mikroba uji F. oxysporum

Konsentrasi N Subset 1 2 S2T16-1 45 .8373 S3T32-3 45 .8753 S3T33-3 45 1.0118 Sig. .366 1.000

(9)

LAMPIRAN 18. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat terhadap zona hambat pada mikroba uji G. boninense

Source

Type III Sum

Corrected Model 110.856a 44 2.519 6.381 .000 Intercept 570.992 1 570.992 1.446E3 .000 Pelarut 8.190 2 4.095 10.371 .000 Konsentrasi 64.555 4 16.139 40.875 .000 Isolat 12.064 2 6.032 15.277 .000 Pelarut * Konsentrasi 2.813 8 .352 .891 .528 Pelarut * Isolat 12.265 4 3.066 7.766 .000 Konsentrasi * Isolat 3.603 8 .450 1.141 .344 Pelarut * Konsentrasi * Isolat 7.367 16 .460 1.166 .310 Error 35.535 90 .395 Total 717.384 135 Corrected Total 146.391 134

LAMPIRAN 19. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji G. boninense

Konsentrasi N Subset 1 2 Etil asetat 45 1.7733 n-heksana 45 2.0227 Metanol 45 2.3738 Sig. .063 1.000

(10)

LAMPIRAN 20. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji G. boninense

Konsentrasi N Subset 1 2 3 0 27 .7100 60 27 2.2419 40 27 2.2433 80 27 2.4144 2.4144 100 27 2.6733 Sig. 1.000 .347 .134

LAMPIRAN 21. Post Hoc Test isolat untuk mikroba uji G. boninense

Konsentrasi N Subset 1 2 S2T16-1 45 1.6593 S3T32-3 45 2.1300 S3T33-3 45 2.3804 Sig. 1.000 .062

(11)

LAMPIRAN 22. Hasil uji antagonis ekstrak isolat terhadap mikroba uji dalam bentuk zona hambat pertumbuhan (mm)

Mikroba uji K ons ent ra si eks tr ak ( % ) Ekstrak

Metanol n-heksana Etil Asetat

S 2T 16 -1 S 3T 32 -3 S 3T 33 -3 S 2T 16 -1 S 3T 32 -3 S 3T 33 -3 S 2T 16 -1 S 3T 32 -3 S 3T 33 -3 E. coli 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 40 0 0 13,03 0 0 6,70 0 15,30 0 60 0 0 15,46 0 0 13,50 0 15,56 0 80 0 0 17,26 0 0 9,70 0 18,63 0 100 0 0 19,73 0 0 18,83 0 21,93 0 S. aureus 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 40 0 0 11,46 0 0 0 0 0 0 60 0 0 11,43 0 0 0 0 0 0 80 0 0 11,80 0 0 0 0 0 0 100 0 0 14,83 0 0 0 0 0 0 C. albicans 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 40 6,33 16,63 13,20 0 0 0 0 0 0 60 8,93 19,20 14,53 0 0 0 0 0 0 80 6,07 18,90 16,58 0 0 0 0 0 0 100 10,00 19,20 17,13 0 0 0 0 0 0 F. oxysporum 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 40 0,83 1,08 1,23 0 0 0 0 0,33 0 60 0,69 1,58 0,04 0 0 0 0 0,67 0 80 0,79 1,42 0,99 0 0 0,50 0 0,75 0 100 1,53 2,22 1,55 0 0 1,00 0 2,08 0 G. boninense 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 40 6,90 7,23 5,18 0 7,16 6,32 2,24 7,41 5,60 60 7,73 6,47 9,05 0 6,96 4,87 2,38 8,01 4,00 80 7,90 9,40 7,68 0 6,79 5,75 4,84 8,61 3,46 100 9,40 10,97 7,18 0 6,26 7,85 6,77 8,71 6,07

(12)

LAMPIRAN 23. Alur Kerja Isolasi Bakteri Penghasil Antimikroba dari Sampel Tanah

Sampel Tanah

- Ditimbang sebanyak 1 g

- Ditambah aquadest steril hingga 10 ml

- Dihomogenkan.

Suspensi Tanah

-Diambil sebanyak 1 ml

-Disebarkan pada permukaan media NA

-Diinkubasi dapa suhu 30±2○C selama 24-48 jam

Kultur campuran bakteri

- Diamati koloni yang menunjukkan daerah bening di sekitarnya

- Disubkultur pada media NA

Kultur murni bakteri potensial antimikroba

(13)

LAMPIRAN 24. Alur Kerja Ekstraksi Isolat Bakteri Potensial Antimikroba Menggunakan Pelarut Metanol, n-heksana dan Etil Asetat

Isolat Bakteri Potensial Antimikroba

Kultur Bakteri

- Dibuat suspense dengan kekeruhan sesuai

Standar McFarland (1x108 CFU/ml)

- Disebarkan dengan cotton swab pada permukaan media NA

- Dibuat beberapa petri

- Diinkubasi selama 5-6 hari pada suhu ruang (ditutupi dengan aluminium foil)

- Dipotong kecil-kecil

- Dimasukkan dalam tabung Erlenmeyer 500 ml - Ditambahkan ± 150 ml pelarut metanol - Dimaserasi selama 3 hari

- Disaring dan disimpan dalam tabung

Erlenmeyer lain

- Dimaserasi kembali dengan volume yang sama

Maserat

- Disentrifuse pada kecepatan 3000 rpm selama 15 menit

Supernatan

- Dipekatkan dengan menggunakan rotary

Evaporator pada suhu tidak lebih dari 50±2°C

- Hal yang sama dilakukan terhadap jenis pelarut n-heksana dan etil asetat

(14)

LAMPIRAN 23. Alur Kerja Isolasi Bakteri Penghasil Antimikroba dari Sampel Tanah

Sampel Tanah

- Ditimbang sebanyak 1 g

- Ditambah aquadest steril hingga 10 ml

- Dihomogenkan.

Suspensi Tanah

-Diambil sebanyak 1 ml

-Disebarkan pada permukaan media NA

-Diinkubasi dapa suhu 30±2○C selama 24-48 jam

Kultur campuran bakteri

- Diamati koloni yang menunjukkan daerah bening di sekitarnya

- Disubkultur pada media NA

Kultur murni bakteri potensial antimikroba

(15)

LAMPIRAN 24. Alur Kerja Ekstraksi Isolat Bakteri Potensial Antimikroba Menggunakan Pelarut Metanol, n-heksana dan Etil Asetat

Isolat Bakteri Potensial Antimikroba

Kultur Bakteri

- Dibuat suspense dengan kekeruhan sesuai

Standar McFarland (1x108 CFU/ml)

- Disebarkan dengan cotton swab pada permukaan media NA

- Dibuat beberapa petri

- Diinkubasi selama 5-6 hari pada suhu ruang (ditutupi dengan aluminium foil)

- Dipotong kecil-kecil

- Dimasukkan dalam tabung Erlenmeyer 500 ml - Ditambahkan ± 150 ml pelarut metanol - Dimaserasi selama 3 hari

- Disaring dan disimpan dalam tabung

Erlenmeyer lain

- Dimaserasi kembali dengan volume yang sama

Maserat

- Disentrifuse pada kecepatan 3000 rpm selama 15 menit

Supernatan

- Dipekatkan dengan menggunakan rotary

Evaporator pada suhu tidak lebih dari 50±2°C

- Hal yang sama dilakukan terhadap jenis pelarut n-heksana dan etil asetat

(16)

LAMPIRAN 25 . Alur Kerja Pembuatan Larutan Standar McFarland 108 CFU/ml (http://www.quelab.com)

0,048 M BaCl2

0,18 M H2SO4

- Diambil sebanyak 0,5 ml - Diambil sebanyak 99,5 ml

Hasil

- Dihomogenkan kedua larutan

- Diukur densitas suspensi dengan menggunakan spektrofotometer ( nilai O.D. 625nm ± 0,13)

Larutan standar 0,5 McFarland 1x 108 CFU/ml

(17)

LAMPIRAN 26. Alur Kerja Uji Daya Hambat Isolat Potensial Terhadap Mikroba Patogen

Bakteri Patogen _{penghasil antimikroba}Isolat bakteri

- Masing-masing disubkultur selama ± 24 jam pada media NA - Diambil dengan jarum ose

- Masing-masing dilarutkan dalam larutan fisiologis (NaCl 0,9%)

- Dihomogenkan dan disesuaikan kekeruhannya dengan standar 0.5 McFarland (1x108 CFU/ml)

Suspensi bakteri patogen Suspensi bakteri penghasil

antimikroba

- Disebarkan dengan cotton swab pada permukaan media MHA

- Diletakkan cakram kertas yang sudah berisi suspensi bakteri antimikroba

- Ditetesi sebanyak 10µl pada cakram kertas steril

Hasil

- Diinkubasi pada T: 30±2○C selama 24-48 jam

- Diukur zona hambat yang terbentuk dengan jangka sorong

(18)

LAMPIRAN 27. Alur Kerja Uji Daya Hambat Ekstrak Isolat Potensial Terhadap Bakteri Patogen

Bakteri Patogen

Ekstrak Metabolit Sekunder

Hasil

- Diinkubasi pada T: 30±2○C selama 24-48 jam

Diameter zona hambat

- Disubkultur selama ± 24 jam pada media NA - Diambil dengan jarum ose

- Dilarutkan dalam larutan fisiologis (NaCl 0.9%) - Dihomogenkan dan disesuaikan kekeruhannya

dengan standar 0,5 McFarland (1x108 CFU/ml)

- Diencerkan dengan DMSO sesuai konsentrasi yaitu 40,60,80, dan 100% - Ditetesi sebanyak 10µl pada cakram

kertas steril

- Kontrol (-) digunakan cakram kertas yang berisi 10µl DMSO

- Kontrol (+) digunakan cakram kertas yang berisi kloramfenikol 30 µg

Suspensi Bakteri Patogen

- Disebarkan dengan cotton swab pada permukaan media MHA

- Diletakkan cakram kertas yang sudah berisi ekstrak meatbolit sekunder isolat potensial

(19)

LAMPIRAN 28. Alur Kerja Uji Daya Hambat Ekstrak Isolat Potensial Terhadap Jamur Patogen

Jamur Patogen

Ekstrak Metabolit Sekunder

Hasil

- Diinkubasi pada T: 27-29 ○C selama 24-48 jam

Diameter zona hambat

- Disubkultur selama 72-96 jam pada media PDA khusus untuk C. albicans ± 24 jam

- Diencerkan dengan DMSO sesuai konsetrasi yaitu 40,60,80, dan 100% - Ditetesi sebanyak 10µl pada cakram

kertas kosong steril

- Kontrol (-) digunakan cakram kertas yang berisi 10µl DMSO

- Kontrol (+) digunakan cakram kertas yang berisi ketokonazol 20µg

Jamur patogen usia 3-4 hari

- Diletakkan cakram kertas yang sudah berisi ekstrakmetabolit sekunder isolat potensial di ke empat sisinya sesuai konsentrasi