Lampiran 2.Flowsheet
Pembuatan Media Lactose Broth Single
←Ditimbang seksama media Lactose BrothSebanyak 13gr. ← Dimasukkan ke dalam beker gelas,
← Dilarutkan dalam 1 liter aquadest. ← Dimasukkanmagnetic stirrer.
← Dipanaskan diatas hot plate sampai larut
← Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang Berisi tabung
durham masing-masing 10 ml
← Disterilkan di dalan oven dengan tekanan 1 atm pada
suhu1210C Selama 15 menit
← Setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan
kering.
Pembuatan Media Lactose Broth Double
←Ditimbang seksama media Lactose Brot Sebanyak 26 gr.
← Dimasukkan ke dalam beker gelas,
← Dilarutkan dalam 500 ml aquadest. ← Dimasukkanmagnetic stirrer.
← Dipanaskan diatas hot plate sampai larut ← Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang Berisi tabung durham masing-masing 5 ml
← Disterilkan di dalan oven dengan tekanan atm padasuhu 1210C selama 15 menit.
← Setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering.
Pembuatan Media Brilliant Green Lactose Broth Single
←Ditimbang seksama media Brilliant Green Lactose Broth sebanyak 40 gr.
← Dimasukkan ke dalam beker gelas. ← Dilarutkan dalam 1 liter aquadest. ← Dimasukkanmagnetic stirrer.
← Dipanaskan diatas hot plate sampai larut.
← Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham masing-masing 10 mL.
← Disterilkan di dalan oven dengan tekanan 1 atm pada suhu 1210C selama 15 menit.
← Setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering.
Pembuatan Media Tryptone
←Ditimbang seksama media Tryptone sebanyak 15 gr. ← Dimasukkan ke dalam beker gelas.
← Dilarutkan dalam 1 liter aquadest. ← Dimasukkan magnetic stirrer.
← Dipanaskan diatas hot plate sampai larut.
Uji Pendugaan
←Pada tes Pendugaan digunakan media Lactose broth. Tes pendugaan dilakukandengan 2 cara :single dan double
← Single :
← 13 gram Lactose Broth dalam 1000 ml aquadest
← Siapkan 10 buah tabung reaksi yang telah diisi dengan tabung Durham dengan posisi terbalik. 10 tabung diisi dengan masing
masing 10 ml media.
← Double :
← 26 gram Lactode Broth dalam 500 ml aquadest.
← Siapkan 10 buah tabung reaksi yang telah diisi dengan tabungdurham dengan posisi terbalik. 5 tabung diisi dengan masing-masing 5ml.
Sampel
←Masukkan sampel yang sudah dihomogenkan secara aseptik ke dalam masing-masing tabung LB.
← Tabung lalu di goyang-goyang agar homogen. ← Inkubasikan pada inkubator pada suhu 350
C selama 2x24 jam. Reaksi dinyatakan positif bila terbentuk gas dalam tabung durham.
← Kemudian tabung-tabung yang positif dilanjutkan ke tes penegasan.
Sampel
←Tabung yang dinyatakan positif pada uji pendugaan, diinokulasikan
ke dalam tabung yang berisi media Tryptone. Masing-masing diisi
satu sampai dua ose yang pengerjaannya dilakukan secara aseptis.
← Diinkubasi pada suhu 440C selama 2x24 jam
← Setalah 48 jam, ditambahkan larutan kovaks sebanyak 0.5 ml dan
Dinyatakan positif jika terbentuk cincin merah
←Tabung yang positif dicocokan dengan tabel MPN
Lampiran 4.Tabel Perkiraan Terdekat (MPN)
Tabel MPN
Nilai MPN dan LK (Limit Kepercayaan) 95% untuk kombinasi 5 tabung 10 ml, 5 tabung 1 ml, dan 5 tabung 0,1 ml
5 Tabung
MPN/g
Batas
Kepercayaan 5 Tabung MPN/g
Lampiran 5.Gambar Media
Media Lactose Broth (LB) Media Tryptone Water
Lampiran 7.Gambar Alat Inkubator
Lampiran 8.Gambar Alat Sterilisasi
Autoklaf
Lampiran 9.Gambar Hasil Uji Pendugaan dan Uji Penegasan
Media Lactose Broth sebelum ditambahkan sampel untuk uji pendugaan.
