Lampiran 1.
Prosedur Pemeriksaan Sitogenetik
1. Preparasi Kromosom
- Bahan yang digunakan yaitu :
darah penderita 5 cc dalam heparin, media MEM, PHA, FBS, colcemid, thymidin, KCL 0.075M, larutan carnoy’s.
- Peralatan yang digunakan yaitu :
spuit, tabung Heparin, tabung falcon 10cc, laminary flow, inkubator,pipet ependrof, tip pipet, centrifuge, waterbath, pipet ukur, deck glass, mikroskop cahaya.
sampai homogen dan diinkubasi 37o C dalam waterbath selama 15-30 menit. Berikutnya tabung-tabung dipusingkan 1000 RPM selama 10 menit, supernatan dibuang dan ditambahkan 5ml larutan fiksasi Carnoy’s pelan-pelan melalui dinding tabung, kemudian dikocok. Pemberian larutan fiksasi ini diulangi sebanyak 3 kali sampai didapatkan presipitat yang jernih. Residu yang terbentuk disuspensikan dengan larutan Carnoy’s secukupnya sesuai dengan banyaknya pelet. Kemudian disebarkan pada gelas objek dengan meneteskan 2 tetes suspensi pada lokasi yang berbeda.
2. GTG banding (G-banding)
Pengecatan ini menggunakan reagen sebagai berikut : - H2O2 30%
- Larutan Trypsin 1% stok dalam buffer Hanks - Larutan buffer Hanks (HBSS) pH 6,8-7,2 - Phosphate Buffer Saline (PBS) pH 6,8
3. CBG Banding (C-banding)
Pengecatan ini menggunakan reagen berikut: - 0,2 N HCl
- 5% Ba(OH)2 ; 5 g Ba(OH)2 dalam 100mL aqua bidest
- 2 x SSC (0.3M sodium klorid, 0.03 M sodium sitrat, pH 7.0): 17.53 g NaCL dan 8.82 sodium sitrat dalam 1 L aqua bidest
- Cat Giemsa 2% dalam buffer fosfat pH 6.8
Lampiran 2.
Hasil Preliminary Study Panjang Kromosom Y pada 20 orang laki-laki bukan penderita ambigus genitalia
No. Kode Sampel
Banding Level Kariotipe
Panjang kromosom Y (µm) menurut program leica CW4000
1. Y31 586 3,16
11. PI02 559 3,26
12. KG20 561 2,53
13. N37 604 2,74
14. KG15 571 2,74
15. KG9 562 3,26
16. KG12 552 2,95
17. KG13 591 3,19
18. KG17 590 2,42
19. KG19 562 3,05
20 KG4 554 2,00
Minimum 2,00 Maximum 4,32
Rerata 2,88
Lampiran 3.
Hasil Tes Statistik perbedaan Panjang Kromosom Y antara Subyek dan Kontrol Penelitian
Descriptives
Interval for Mean
5% Trimmed Mean Median
Interval for Mean
5% Trimmed Mean Median
Statistic Std. Error
Tests of Normality
.065 24 .200* .986 24 .974
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
This is a lower bound of the true significance. *.
Kelompok
NPar Tests
Mann-Whitney Test
Ranks
24 28.19 676.50
24 20.81 499.50
48
N Mean Rank Sum of Ranks
Test Statisticsa
199.500
Asymp. Sig. (2-tailed)
ukuran rata-rata
Lampiran 4.
