EKSTRAKSI FUKOIDAN
100 g alga kering dimaserasi 1 L HCl 0,1 N (24 jam, suhu ruang)
↓
Filtrasi dengan kain nilon (200 mesh)
↓
Remaserasi 1 L HCl 0,2 N (2 jam, suhu 70°C)
↓
Refiltrasi dengan kain nilon (200 mesh)
↓
Filtrat digabung dan filtrasi dengan kertas Whatmann no.40
↓
Evaporasi hingga volume akhir 150 mL (suhu 70°C)
↓
Presipitasi etanol 95% (3x volume), diaduk & didiamkan 2 jam
↓
Sentrifugasi 8000 g, 4°C selama 5 menit
↓
Ambil pellet & dilarutkan dalam air pH=2 (HCl 1 N)
↓
Tambah larutan CaCl2 hingga 2 M & diaduk 30 menit (suhu ruang)
↓
Sentrifugasi 8000 g, 4°C selama 5 menit
↓
Ambil supernatan
↓
Presipitasi etanol 95% (3x volume), diaduk & didiamkan 2 jam
↓
Sentrifugasi 8000 g, 4°C selama 5 menit
↓
Ambil pellet & freeze drying
PURIFIKASI FUKOIDAN
Ekstrak fukoidan dimasukkan ke kolom DEAE-selulosa
↓
Dielusi dengan deionized water (2x volume resin)
↓
Ditambahkan larutan NaCl konsentrasi bertingkat 0.5 – 3 M (2x volume resin)
↓
Tiap 20 mL fraksi ditampung dalam botol vial
↓
Fraksi yang diperoleh diuji karbohidrat
↓
Fraksi (+) uji karbohidrat digabungkan
↓
Presipitasi dengan etanol dingin (3x volume)
↓
Sentrifugasi kecepatan 3000 rpm selama 15 menit
↓
Ambil pellet & dilarutkan dengan akuades
↓
Larutan dimasukkan kantong dialisis
↓
Dialisis selama 48 jam (direndam akuades & diaduk)
↓ Freeze dry
