Ekspresi p53 yang abnormal terdeteksi pada pterigium melalui imunohistokimia dengan antibodi monoklonal yang dapat mendeteksi protein p53 mutan (Shimmura, et al., 2000). Mutasi dan ekspresi berlebih p 53 ditemukan pada 50% keganasan manusia, seperti keloid kulit, pterigium, dan pinguecula (Pokroy, et al., 2002). P53 tipe liar diduga berperan dalam mengatur proliferasi sel dan bertindak sebagai penekan tumor (Nasiri, et al., 2007).
Empat dari lima jaringan pterigium berulang adalah p53 positif dengan aktivasi proliferasi 4,56+0,94 dibandingkan dengan kelompok kontrol (Chowers, et al., 2001). Donnenfeld et al., 2003 melaporkan bahwa pemberian mitomycin C subkonjungtiva sebelum operasi pterigium efektif dalam mengurangi tingkat kekambuhan sebesar. Pemberian mitomycin C subkonjungtiva memungkinkan obat bekerja langsung pada fibroblas aktif, sel yang bertanggung jawab atas kekambuhan pterigium, tanpa merusak sel induk epitel permukaan.
Tingkat kekambuhan pterigium yang dilaporkan setelah pemberian mitomycin C subkonjungtiva sebelum operasi bare sklera adalah 6% selama masa tindak lanjut rata-rata 24,4 bulan. Sebuah studi oleh Prabhasawat et al., 2006 menunjukkan bahwa pemberian 5-fluorourasil subkonjungtiva pada pterigium berulang lebih efektif dalam mencegah kekambuhan dibandingkan dengan kontrol dengan rata-rata tindak lanjut 6-26 bulan, dengan komplikasi minimal berupa belang-belang superfisial. . epiteliopati.
Rumusan Masalah
Tujuan Penelitian
Manfaat Penelitian
Chowers, Jacob, Zamir, Livni, Ilsar, Pery, 2001, menyelidiki aktivitas proliferasi dan ekspresi p53 pada pterigium primer dan berulang. Donnenfeld et al., 2002, melakukan penelitian tentang penggunaan mitomycin C subkonjungtiva sebagai terapi tambahan sebelum eksisi pterigium. Nugraheni, 2004 menyelidiki perbandingan ekspresi Transforming Growth Factor (TGF) β setelah pemberian Mitomycin C subkonjungtiva dan triamcinolone acetonide subkonjungtiva pada pterigium primer progresif.
Banyak penelitian telah dilakukan mengenai ekspresi p53 pada konjungtiva normal, pterigium primer dan berulang, serta tingkat kekambuhan dan tingkat keberhasilan operasi pterigium menggunakan Mitomycin C dan 5 Fluorouracil. Namun sayangnya, belum ada yang menyelidiki ekspresi tipe mutan p53 menggunakan teknik imunohistokimia pada pterigium progresif setelah penggunaan Mitomycin C dan 5 Fluorouracil subkonjungtiva. Berasal dari bahasa Yunani “Pterygos” yang berarti “sayap”, yang disebabkan oleh proses kronis pada puncak kornea.
Pterigium berulang adalah pterigium yang tumbuh secara agresif dalam waktu beberapa minggu hingga beberapa bulan setelah operasi pterigium primer. Pterigium primer diyakini merupakan proses kronis, dengan distribusi geografis berdasarkan paparan sinar matahari (Tan, Holland, Mannis, 2002).
Anatomi dan Patogenesis Pterigium
Pterigium didefinisikan sebagai pertumbuhan epitel segitiga pada bulbus konjungtiva dan jaringan pendukung subkonjungtiva hipertrofik, terjadi di daerah medial dan lateral fisura palpebra dan mengarah ke kornea. Radiasi ultraviolet menyebabkan mutasi pada gen seperti gen penekan tumor p53, yang menyebabkan ekspresi abnormal pada epitel pterigium. Matriks metalloproteinase (MMPs) dan penghambat jaringan MMP di tepi pterigum bertanggung jawab atas proses inflamasi, remodeling jaringan dan karakteristik angiogenesis pterigium, serta kerusakan lapisan Bowman dan invasi kornea.
Pterigium primer tumbuh secara lokal dan invasif menuju apeks kornea, dan epitel menunjukkan berbagai variasi kelainan mulai dari displasia ringan hingga karsinoma in situ. Lapisan epitel basal pada pterigium primer dan berulang menyebabkan ekspresi berlebih dari gen penekan tumor p53, salah satu faktor transkripsi internal.
Epidemiologi
Radiasi Ultraviolet
Diketahui odds rasio penduduk yang tinggal di daerah dibawah garis lintang 30º adalah 44,3 dan penduduk yang menghabiskan lebih dari 50% waktunya di luar rumah dalam 5 tahun pertama kehidupannya adalah 14,1 (Tan, Holland, Mannis, 2002.
Faktor Genetik
Faktor Risiko Lainnya
9 juga diduga sebagai faktor perancu dalam hubungan antara paparan sinar ultraviolet dan pterigium, sedangkan mata kering sebagai faktor penyebabnya masih diselidiki.
Klasifikasi
Hilangnya aktivitas p53 dapat menyebabkan kanker, salah satunya adalah sel mutan akan memasuki siklus sel, yang kedua menyebabkan apoptosis dan menyebabkan sel kanker mempertahankan ketidakstabilan genetik (Albert, et, al., 2002). P53 berperan penting dalam menjaga integritas gen dengan menghentikan siklus sel pada fase G1 atau menginduksi apoptosis ketika perbaikan DNA tidak mencukupi (Reszec & Sulkowski, 2005), mengendalikan siklus G1/S dan kemungkinan transisi siklus G2/M ( Polisi, dkk., 1998). Biasanya p53 tidak terdeteksi oleh imunohistokimia pada tumor tipe liar atau tipe liar, meskipun peningkatan kadar p53 mutan ditemukan pada berbagai tumor, yang berhubungan dengan mekanisme kontrol siklus sel yang abnormal.
11 Kerusakan DNA disebabkan oleh berbagai agen, dalam hal ini berfungsi mencegah replikasi kerusakan DNA. Pengaruhnya terhadap siklus sel semakin membuktikan bahwa peningkatan kadar p53 juga dapat menginduksi apoptosis pada siklus sel. Deteksi kerusakan DNA atau kesalahan replikasi dapat menyebabkan penghentian siklus sel dan apoptosis jika kerusakan tidak dapat diperbaiki.
Radiasi UV dapat menyebabkan mutasi pada gen seperti gen penekan tumor p53, bila diinaktivasi oleh mutasi dan hilangnya heterozigositas, serta dapat menyebabkan proliferasi sel dan ketidakstabilan genom. 12 dan tersedia untuk menginduksi ekspresi gen yang bertanggung jawab untuk menghambat sintesis DNA atau menyebabkan apoptosis sebagai respons terhadap kerusakan DNA.
Mitomicin C
Pada sel normal, protein p53 mempunyai masa hidup yang singkat dan pada tingkat yang rendah seringkali tidak terdeteksi. Tsai et al, mampu mendeteksi mutasi gen p53 pada populasi Cina dengan 6 kali substitusi dan dua kali penghapusan (Perra, et al., 2006). Tujuan dari strategi farmakologi adalah untuk mengaktifkan kembali p53 mutan melalui molekul kecil atau peptida yang dapat melindungi fungsi pengikatan DNA (Ricci & Zong, 2006.
Dushku, et al., 1999 melaporkan p53 dengan immunostaining negatif pada 5 spesimen yang berasal dari epitel limbal superior dan lateral dan pada kornea epitel limbal interpalpebral medial serta 9 spesimen pterigium yang menunjukkan ekspresi inti p53 pada sel epitel limbal dan tidak. Aktivasi metabolik terjadi melalui reduksi ikatan silang DNA oleh agen ankilasi, suatu proses yang dimediasi oleh sitokrom p450 reduktase dan terjadi lebih efisien dalam lingkungan hipoksia. Karena dapat mengganggu beberapa fase siklus sel, Mitomycin C tergolong sebagai agen ankilasi nonspesifik dalam siklus sel.
Mitomycin C menstabilkan kedua jenis p53, baik normal maupun mutan, menghancurkan potensi fosforilasi di ujung N. Agen ankilasi DNA menyebabkan pembentukan cincin nitrogen atau oksigen siklik ekstra dalam nukleotida, mengakibatkan hilangnya kromosom atau mutasi basa tunggal. Inoue, et al., 2001;Ricci & Zong, 2006.5 Fluorouracil (5 FU) adalah agen antifibrotik yang menghambat sintesis DNA dan mengurangi aktivitas fibroblastik (Prabasawat, et al., 2005).
5 FU tergolong agen kemoterapi karena medianya spesifik, mempunyai efek antiproliferatif dan berperan sebagai antagonis metabolisme pirimidin, oleh karena itu tergolong anti metabolit (Lama & Fechtner, 2003). Sebagai anti metabolit, 5 FU banyak digunakan dalam pengobatan karsinoma kolorektal, karsinoma payudara dan kanker areodigestif. Dipercaya bahwa melalui mekanisme berikut, 5 FU berubah menjadi 5-Fluoro-dUMP (FdUMP) dan 5-Fluoro-dUTP (FdUTP) di dalam sel.
5 FU juga diubah menjadi 5-Fluoro-UTP (FUTP) yang bergabung menjadi molekul RNA yaitu rRNA dan mengakibatkan terhambatnya proses rRNA, sehingga 5 FU akan menginduksi penghentian siklus sel dan/atau apoptosis. Menanggapi sinyal kerusakan DNA, fosforilasi MDM2 dan p53 mencegah interaksi MDM2-p53 dan mengurangi p53 dari penghambatan MDM2 (Sun, Dai, Lu, 2007). Dalam percobaan yang dilakukan Khaw dan rekannya, paparan 5 FU selama 5 menit in vivo dan in vitro terbukti mengakibatkan terhentinya pertumbuhan dan efek jangka panjang pada kultur fibroblas tendon manusia (Lama & Fechtner, 2003).
Berbagai Penanganan Pterigium
Sementara itu, Asfani dkk., 2002 mempelajari angka kekambuhan pterigium setelah pemberian triamcinolone acetonide dan MMC, menunjukkan angka 17,2% dan 13,8% dengan follow up 6 bulan. Berbagai terapi tambahan seperti thio tepa, membran ketuban, agen ankilasi, agen kemoterapi dapat digunakan dalam pengobatan pterigium dalam kombinasi dengan berbagai teknik bedah (Ogus, et al., 1999; Lam, et al., 1998; Burrato, et al., 2000). Meskipun banyak penelitian menyatakan bahwa tingkat kekambuhan sekitar 5-12% dengan penggunaan mitomisin C topikal, ada beberapa laporan mengenai efek toksik pada konjungtiva dan kornea.
Kesulitan penggunaan obat tetes mata mitomycin pada pterigium yang pernah dilaporkan adalah avaskular limbal, kompensasi kornea, pencairan kornea, perforasi kornea dan sklera, pembentukan katarak, iritis, fotofobia. Sedangkan komplikasi penggunaan mitomycin intraoperatif adalah keratitis punctate, chemosis dan granuloma konjungtiva (Al Fayez, 2002; Lam, et al., 1998; Tan, et al., 2005).
Hipotesis
Jaringan pterigium yang telah dieksisi diambil dan disimpan dalam tabung berisi buffered formalin, kemudian dikirim ke laboratorium Patologi Anatomi (PA), dibelah, diwarnai dengan antibodi monoklonal DO-7 untuk dihitung ekspresi positif p53 sebanyak 100 sel dalam 5 lapang pandang. . , menggunakan perbesaran 400x dan menghitung rata-ratanya. Untuk mengetahui perbedaan rerata ekspresi p53 antara kedua kelompok dianalisis menggunakan metode non parametrik yaitu uji Man Whitney dengan tingkat signifikansi p<0,05. Uji korelasi dilakukan untuk mengetahui hubungan antara ekspresi P53 dan jenis kelamin, usia, derajat pterigium, durasi paparan, penggunaan pelindung, dan pekerjaan.
Dalam periode penelitian dan terpenuhinya kriteria inklusi dan eksklusi, diperoleh sampel sebanyak 53 subjek yang dapat dihitung ekspresi p53nya, terdiri dari kelompok injeksi mitomycin C (n=27) dan kelompok injeksi FU 5 (n=26) . Karena penurunan p53 bergantung pada mekanisme program kematian sel, mutasi pada gen lain secara progresif mengikuti perkembangan banyak tahapan sel pterigium dan tumor limbal dari ekspresi p53. Di bawah ini adalah perbedaan rerata ekspresi P53 pada masing-masing kelompok perlakuan berdasarkan usia, jenis kelamin, derajat pterigium, paparan sinar matahari, pakaian pelindung, dan jenis pekerjaan.
Tsai et al tidak menemukan perbedaan yang signifikan antara ekspresi p53 serta usia dan jenis kelamin (Perra & Maxia, 2006. Terdapat perbedaan yang signifikan antara 2 kelompok perlakuan pada subjek yang terpapar sinar matahari lebih dari 5 jam (p=0,000). Perbedaan yang signifikan adalah ditemukan rerata ekspresi p53 antara 2 kelompok saat memakai topi pelindung dan tanpa topi pelindung (p= 0,001).
Subjek tanpa pelindung pada kedua kelompok memiliki rata-rata ekspresi p53 lebih tinggi dibandingkan subjek yang memakai topi. Terdapat perbedaan yang signifikan pada rerata ekspresi p53 pada subjek petani (p=0,000) Subjek yang memiliki pekerjaan pegawai pada kelompok 5FU memiliki rerata ekspresi p53 yang lebih rendah dibandingkan dengan pekerjaan lainnya. Karena tingkat signifikansi masing-masing variabel diatas 0,005 maka koefisien regresinya tidak signifikan, menunjukkan bahwa masing-masing variabel tidak berpengaruh signifikan pada ekspresi p53.
Pengamatan lebih lanjut menunjukkan ekspresi vimentin dalam sel limbal di tepi pterigium, ekspresi berlebih dari gen penekan p53, menunjukkan bahwa Ultraviolet B menginduksi mutasi pada awal pertumbuhan dengan menghambat apoptosis sel limbal dan menghancurkan produksi berlebihan berbagai faktor pertumbuhan. . Ekspresi p53 yang abnormal ditunjukkan pada pterigium melalui imunohistokimia dengan antibodi monoklonal yang dapat mendeteksi protein p53 mutan. 38 Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbandingan ekspresi p53 pada pterigium primer progresif setelah injeksi subkonjungtiva Mitomycin C dan 5-fluorouracil.
Dari hasil uji korelasi diperoleh koefisien regresi yang tidak signifikan pada masing-masing variabel umur, jenis kelamin, derajat pterigium, lama paparan sinar matahari, penggunaan alat pelindung diri, dan jenis pekerjaan, hal ini menunjukkan bahwa masing-masing variabel mempunyai pengaruh yang tidak signifikan terhadap p53. ekspresi. Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa rerata ekspresi p53 berbeda bermakna antara kelompok injeksi subkonjungtiva mitomycin C dan 5 fluorouracil.
LEMBAR PERSETUJUAN PENDERITA
SURAT PERSETUJUAN PENDERITA
