SITI MARYAM, 4450405008
EKSTRAK ENZIM BROMELIN DARI BUAH NANAS (Ananas sativus
schult.) DAN PEMANFAATANNYA
PADA ISOLASI DNA
Identitas Mahasiswa
- NAMA : SITI MARYAM - NIM : 4450405008
- PRODI : Biologi
- JURUSAN : Biologi
- FAKULTAS : Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam - EMAIL : e_siti2004 pada domain yahoo.com
- PEMBIMBING 1 : Ir. TUTI WIDIANTI, MBioMed
- PEMBIMBING 2 : Dra. RETNO SRI ISWARI SU
- TGL UJIAN : 2009-07-03
Judul
EKSTRAK ENZIM BROMELIN DARI BUAH NANAS (Ananas sativus schult.) DAN
PEMANFAATANNYA PADA ISOLASI DNA
Abstrak
Metode Kitchen preparation termodifikasi dikembangkan menggunakan ekstrak enzim bromelin yang langsung diisolasi dari buah nanas untuk menggantikan
jus nanas sumber enzim protease. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas
enzim bromelin dari bagian daging dan batang buah nanas dan pemanfaatannya untuk isolasi DNA dengan kuantitas dan kualitas yang baik.
Ekstrak enzim bromelin dibuat dengan mengambil cairan buah nanas yang
dicampur dengan buffer fosfat kemudian disentrifugasi pada suhu dingin dan diukur aktivitas enzimnya berdasar kenaikan absorbansi hasil reaksi enzim selama 20 menit pada panjang gelombang 280 nm. Isolasi DNA dilakukan dengan menggerus daun pisang bersama dengan garam dapur dan akuades dingin kemudian diinkubasi pada suhu 60˚C. Ditambahkan larutan detergen 25%, dikocok dan saring. Selanjutnya
ditambahkan ekstrak enzim bromelin sesuai perlakuan yaitu AI, AII, AIII, BI, BII, BIII, masing-masing diulang dua kali dan diinkubasi pada 40˚C. Untuk presipitasi tambahkan etanol absolut dingin. Jumlah (konsentrasi) molekul DNA diukur dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 260 nm dan kemurnian DNA ditentukan berdasar tingkat kontaminasi protein dalam larutan yaitu dengan membagi nilai
OD260 dengan OD280.
Volume crude dari batang nanas lebih besar dari bagian daging buahnya,
sedangkan aktivitas enzim bromelin bagian batang buah adalah 0,274 U/ml dan
aktivitas pada bagian daging buahnya sebesar 0,337 U/ml. Pada isolasi DNA metode Kitchen preparation termodifikasi sudah mendapatkan DNA dengan konsentrasi dan tingkat kemurnian yang cukup baik yaitu berturut-turut 0,315 μg /ml dan 1,67.
Pada bagian daging buah nanas menunjukkan aktivitas enzim bromelin lebih
tinggi dibanding dengan bagian batang dan DNA dengan kuantitas dan kualitas yang baik didapat dengan penambahan ekstrak enzim bromelin dari nanas yang
mempunyai aktivitas total lebih besar dari 0,775 Unit. Serta disarankan untuk menggunakan ekstrak enzim bromelin dari buah nanas yang mempunyai aktivitas total lebih dari 0,775 Unit sehingga dapat diperoleh DNA dengan kuantitas dan kualitas yang lebih baik.
Kata Kunci
Bromelin, Nanas, DNA
Referensi
Abcam plc. 2009. Proteinase K protein (Active) (ab51501) On line at www.abcam.com/index.html?
pageconfig=catalog_byproducttype&intproducttype id=1 [accessed 20 April 2008]
A.G.Scientific. 2009. Proteinase K [P1265]. On line at
www.agscintific.com/group/uq2fxfnfjgy30z23 [accessed 20 April 2008]
Aldrich, Inc. 2009. Proteinase K. On line at www.sigmaaldrich.com/lifescience/
metabolomics/enzyme-explorer/analytical-enzymes/protease-k.html [accessed 20 April 2008]
Anonim. 2000. 20 DNA Extraction. On line at
www.learn.genetics.utah.edu/contens/lab/extraction-dna.html [Accessed 12 Mei 2009]
Bioshop Canada Inc . 2009. Sodium Chlorida. On line at www.bioshop-canadainc.
com/showroom/product-list/catalog1.html [Accessed 20 April 2009]
Carr SM. 2007. Histone Protein Structure. On line at
www.mun.ca/biology/scarr/MGA2-02-45.jpg [accessed 23 September 2008]
Fatchiyah & EL Arumingtyas. 2006. Kromosom, gen,DNA, sinthesis protein dan regulasi. On line at http://inherent.brawijaya.ac.id/biomol/materi/ebook2.pdf
[accessed 4 Juli 2009]
Geno Technology Inc. USA. 2009. Proteinase K. On line at
www.gbiosciencest.com/protease-k.aspx [accessed 20 April 2008]
Herdyastuti N. 2006. Isolasi dan Karakterisasi Ekstrak Kasar Enzim Bromelin dari Batang Nanas (Ananas comusus L.merr). Berk. Penel. Hayati vol. 12: 75–77
Hideko I, T Noriko, O Shigeyuki, & T Setsuzo. 1979. Complete Structure of the Carbohydrate Moiety of Stem Bromelain. The Journal Of Biological Chemistry
Vol. 254 (21): 10715-10719
Horizon C., Rustikawati & Eliyanti. Penentuan Protokol yang Tepat untuk Menyiapkan DNA Genom Cabai (Capsicum sp.) Jurnal Akta Agrosia vol. 6. no.2 hlm 38-43 Jul-Des 2003)
Indonesia Detergent. 2009. Sabun dan Detergen. On line at
http://www.deterjenindonesia.com/?page_id=480 [accessed 3 Juli 2009].
33 34
Isnati AA. 2005. Amplifikasi Gen ND3 dari Mitokondria Empat Jenis Burung Famili Plocidae dengan Teknik Polimerase Chain Reaction (PCR) (Skripsi) Semarang : Universitas Negeri Semarang.
Iswari RS & A Yuniastuti. 2006. Biokimia. Yogyakarta: Graha Ilmu.
Iqbal M. 2007. Teknik Isolasi DNA. On line at
http://www.mochammadiqbal.wordpress.com/2007/04/15/5/)[accessed 4 April 2008].
Kurniawan K. 2008. Produksi, Identifikasi dan Karakterisasi Protease Ekstrasel dari Bacillus subtilis M 10 (Skripsi) Semarang : Universitas Negeri Semarang.
Kuswanto KR. 1988. Isolasi dan Pengujian Aktivitas Enzim. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
Lehninger AL. 1982. Dasar-dasar Bioimia. Terjemahan Maggy Thenawijaya, 1993.
Jilid 1. Jakarta: Penerbit Erlangga.
Muladno. 2002. Seputar Teknologi Rekayasa Genetika. Bogor: Pustaka Wirausaha Muda.
Naiola E & N Widhyastuti. 2007. Semi Purifikasi dan Karakterisasi Enzim Protease
Bacillus sp. Berk. Penelitian Hayati (13): 51-56 Rice G. 2009. DNA Extraction. On line at
www.serc.carleton.edu/mikrobelife/researc_method/extraction-dna/index.html [accessed 5 Juli 2009]
Robinson R. 2003. Purification of DNA. On line at www.hightbeam.com/doc/1G234046500054.html [accessed 12 Mei 2009]
Suharsono, A Tjahjoleksono, M Jusuf, dan A Hartana. 2002. Struktur dan Ekspresi Gen. On line at http://www.fp.ipb.ac.id/biotek/wpcontent/
uploads/2009/02/struktur-dan-ekspresi-gen.pdf [accessed 6 Juli 2009]
Sulandri S & MSA Zein. 2003. Panduan Praktis Laboratorium DNA. Bogor:
Bidang
Zoologi LIPI.
Sumiyati. 2009. Modifikasi Metode Isolasi DNA Pisang dengan Teknik Kitchen Preparation (Skripsi). Semarang : Universitas Negeri Semarang.
Supartono. 2004. Karakterisasi Enzim Protease Netral dari Buah Nenas Segar. Jurnal MIPA Universitas Negeri Semarang 27 (2): 134-142.
Suryo. 2005. Genetika. Yogyakarta : Gadjah Mada University Press.
Thermo Fisher Scientific Inc. 2009. Proteinase K Ideal for isolating high quality nucleic acids. On line at www.piercenet.com/product/browse.cfm?fldid/020407 [accessed 20 April 2008]
Toha AHA. 2001. Deoxyribo Nucleac Acid Keanekaragaman, Ekspresi, Rekayasa, dan Efek Pemanfaatannya. Bandung : Alfabeta.
Universitas Bangka Belitung [UBB]. 2009. Macam, Jenis, Manfaat dan Bahaya Garam . On line at www.ubb.ac.id/menulengkap.php [Accessed 20 April 2009]
Wharton cw. 1974. The Structure and Mechanism of Stem Bromelain (evaluation of the homogeneity of purified stem bromelain,determination of the molecular
weight and kinetic analysis of the bromelain-catalysed hydrolysis of nbenzyloxycarbonyll-
phenylalanyl-l-serine methyl ester). Biochem J. 143: 575- 586
William VG & MS Hargrove. 2002. Using Bromelain in Pineapple Juice to Investigate Enzyme Function. On line at http://www.ableweb.org/volumes/vol- 23/16-glider.pdf [accessed 5 Juli 2009]
Wulandari N. 2008. Keanekaragaman Genetika Pisang Bergenom B Berdasarkan Analisis Penanda RAPD (Skripsi) Semarang : Universitas Negeri Semarang.
Yasid E & L Nursanti. 2005. Penuntun Praktikum Biokimia Untuk Mahasiswa Analis. Yogyakarta : Penerbit Andi
Terima Kasih
http://unnes.ac.id
