Tugas Praktikum Mikrobiologi Umum
Pewarnaan Bakteri Gram Positif dan Negatif
Dosen Pengampu : Dr. Nurhayati, S. TP, M.Si
Oleh :
M. Yudha Aditya 20171010180
PROGRAM STUDI TEKNOLOGI HASIL PERTANIAN
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN UNIVERSITAS JEMBER
2021
LAPORAN HASIL PRAKTIKUM
TEKNIK MENGAMATI MIKROBA DENGAN PEWARNAAN GRAM
Tujuan : Untuk mengetahui apakah suatu bakteri termasuk ke dalam bakteri gram positif atau bakteri gram negatif.
Alat dan Bahan
1 . Biakan/Kultur Bakteri 2 . Kaca Objek
3 . Bunsen 4 . Jarum Ose 5 . Penjepit Kayu 6 . Korek Api 7 . Rak Pewarnaan
8 . Larutan Kristal Violet sebagai Pewarna Primer 9 . Lurutan Iodin/Lugol sebagai Mordant
10. Alkohol 95% sebagai Zat Dekolorisasi
11. Saf ranin sebagai Pewarna Tanding (dengan Kristal Violet) 12. Pipet Tetes (berbeda untuk setiap larutan)
13. Aquades Cara Kerja
1 . Persiapan Preparat
• Nyalakan bunsen dengan korek api
• Ambil lalu bersihkan kaca preparat hingga cukup bersih
• Jepit kaca preparat dengan penjepit kayu
• Lakukan pemanasan kaca preparat dengan cara dilalui api untuk membuat kaca steril
• Lalu ambil ose dan kemudian panaskan (pastikan jarum ose membara agar siap digunakan)
• Setelah ose cukup membara teteskan aquades pada ose (usahakan air dapat terambil oleh ose)
• Letakkan aquades yang terambil oleh ose tersebut tepat ke tengah kaca preparat
• Panaskan kembali ose hingga membara
• Siapkan isolat pada media kultur nutrien, sebelumnya lalui tepian cawan petri pada api sebelum membuka cawan
• Ambiul isolat perlahan dalam jumlah sedikit menggunakan ose yang sebelumnya sudah dibakar (jangan menggunakan ose saat masih panas)
• Oleskan isolat yang sebelumnya ditetesi aquades pada bagian tengah dan kemudian ratakan dengan menggunakan ose agar tidak terjadi penumpukan isolat
• Bakar kembali ose hingga membara
• Dekatkan kaca preparat tadi ke api secara hati-hati, isolat tidak boleh secara langsung terkena api dan hindari hangus pada isolat
2 . Pewarnaan
• Ambil larutan kristal violet menggunakan pipet tetes, lalu teteskan pada kaca objek dan bisrkan selama 1 menit, setelah 1 menit bersihkan menggunakan aquades
• Kemudian tambahkan larutan lugol/iodin dan biarkan selama 1 menit, bersihkan juga menggunakan aquades
• Lalu tambahkan larutan alkohol 95% teteskan alkohol selama 5 detik dan segera bilas menggunakan aquades
• Lalu teteskan juga saframin sebagai pewarna tanding dan b iarkan selama 1 menit, lalu cuci menggunakan aquades
• Setelah pewarnaan selesai, letakkan kaca objek di atas slide dryer untuk mengeringkan kaca objek 3 . Pengamatan
• Siapkan kaca preparat/objek yang akan diamati pewarnaan
• Sebelumnya tetesi kaca preparat dengan menggunakan minyak emersi sebanyak 1 tetes (karena menggunakan pembesaran 10 x 100
• Letakkan kaca preparat pada meja preparat mikroskop dan lakukan pengamatan di bawah mikroskop dengan pembesaran 10 x 100 pada lensa objektif , sebelumnya pastikan mikroskop berfungsi dengan baik sebelum digunakan
• Lakukan pengamatan secara seksama dan teliti perhatikan penggerak makro dan mikro untuk mendapatkan sinar f okus yang diinginkan.
HASIL PENGAMATAN
Terdapat bakteri yang berwarna ungu dan berwarna merah muda.
Bakteri yang berwarna ungu merupakan bakteri gram positif karena mempunyai lapisan peptidoglikan yang tebal sehingga bakteri dapat terwarnai oleh pewarna dari kristal violet, dikarenakan mempunyai peptidoglikan yang tebal sehingga dapat menyerap b anyak kristal violet dan tidak hilang jika ditetesi oleh alkohol, sebaliknya bakteri gram negatif mempunyai lapisan peptidoglikan yang lebih tipis akibatnya jika diberi tetesan alkohol akan hilang warnanya atau tidak berwarna, lalu diberi tetesan saframin yang menyebabkan warnanya menjadi merah muda.
