نسب‏شناسی ژنی برای قطعه ‏توالی‏های افتراقی بیان‌شده Trichoderma harzianum در طول کلونیزه‌شدن اسپرموسفر و سطح ریشة گوجه‏ فرنگی

(1)

ÃZÌ³¿Y{

Ê°a

½YËY

ÃÁ{

, ÃZ¼

,

½Zf]ZeÁZÆ]

)

- (

*

¾¨¸e :

mhdmhrb@gmail.com

E-mail:

1. rhizosphere

\¿

Ä «ÉY]Ê¿ÊZÀ

Ê·YÂe

½ZÌ]Ê«Yf§YÉZÅ

|

Ç

Trichoderma harzianum

µÂ{

Ì¿Â¸¯

Ã

½|

ËtÁ¨Â»bY È

ÄmÂ³ Ê´¿§

^*Ê°Â¯Ê]YÆ»É|Æ»

Ê¿ZuÁ|Ì¼u,

Ê¿ZzË|Æ»d¼Á

¹|¬»

. ÉZ¼Ì]ZË{ZfY ÃZÌ³ÃÁ³,ÊÅZÌ³ÊZÀ

a

|°¿Y{,Ê°

Ç

½YËY,YÂÅY½Y¼q|ÌÆÃZ´¿Y{,ÉÁZ¯

,

. ÉZ¼Ì]ZÌ¿Y{Á{ZfY ÃZÌ³ÃÁ³,ÊÅZÌ³ÊZÀ

|°¿Y{,Ê°a Ç

½YËY,|Æ»ÊÁ{§ÃZ´¿Y{,ÉÁZ¯

) d§ZË{xËZe :

/ / -

\ËÂexËZe :

/ / (

Ã|Ì°q

Z»{Â°ËeÉZÅÄËÂÊ ]

®ËÂ·ÂÌ]µfÀ¯¶»Z½YÂÀÄ]

Ã{Z¨fYÊÅZÌ³ÉZÅ³Z¼Ì]ÄÌ¸

Ã|

Y

|¿

.

Á

Äz¿Ìj°eÊ«Yf§YËZ¼¿

Â° »ÉZÅ )mRNA

DDRT-PCR

(

|Ã{Z¨fY

½Ze

½ZÌ]ËZ¼f»ÉZÅ

|

Ç ËÂ

È

T. harzianum T7

Ì¿Â¸¯¶uY»µÂ{

Ã

½|

¨Â»bY Á

Ët

È ÄmÂ³ Ê]ZË{Ê´¿§

{Â

. cY|Ì·Âe

DDRT-PCR

µÉÁ

Á®Ì°¨eZ³M

]Ê«Yf§Y|¿Z]

"

ˬ

"

·Zy Ä¿Z¼Å,ÉZ

Ê·YÂeÁÉZ

|Ê]ZË . Ä «

Ê·YÂe

½ZÌ]ÉZÅ

|

Ç

]Ä

YÃ{Z¨fYZ]Ã|»Md{

dm ÂmÁ É

BLAST2GO

cZÔYÃZ´ËZaÄ]

Ê§ » NCBI

Á

\¿

Ê¿ÊZÀ

ZÆ¿M Ê]

|

.

\¸£Y Ä «

Ê·YÂe

½ZÌ]ÉZÅ Ã|

¾ÌXeÁaZ]^e»

ÄfyZÀÉZÅ

{Â]Ê§ZËÃ|

.

¾ÌXeÁa¾ËY ÃÁ³Z]^e»ZÅ

|¼Á|¿{Â]¦¸fz»É{¯Z¯ÉZÅ 0Ze

{

dyÂ

ZÁ

¾Ì]Á½Á{µZÀ´ÌµZ¬f¿Y, ºÅ],Ê·Â¸

¼me,¾ÌXeÁaµZ¬f¿Y,½Z]Ì»Z]À¯

È

¾ÌXeÁa Z¬]Á|µfÀ¯,ZÅ É

,Ê·Â¸

µÂ°·Â»µZ¬f¿Y,ÊÌv»cYÌÌ¤eÄ]c{Z

ÊfËÉZÅ

¾ÌXeÁa {¯Z¯ ºÌÀe ,ºÔaÂfÌ Á ÄfÅ ¾Ì]

À¯YÁ { Ëe ,Ê·Â¸ ºÌ¬e ,ZÅ ÉZÅ

µÂ°·Â»Ì¼ e,±Â·Z¿M

\ÌMÉZÅ

|Ë{

Ç DNA

{¯Z¯´Ë{Á ÉZÅ

¦¸fz»cY{ÂmÂ»{ÊeZÌu

|ÀfY{¬¿

. Ê ] Ä «

Ê·YÂe

½ZÌ]ÉZÅ

|

Ç Ê]ZË{

|

½Z]^e»Ä ·Z»¾ËY{Ã ZÅ

|¿{Â]ÊË

ºË¿MÄ¯

Pe{Ì³{ÉZÅ Y~£¾Ì»

Ë

{YZ»{Â°ËeÊ ÃZ´fË

Ê»|¯½Z

|ÀÀ¯

.

ÃYÁ

É|Ì¸¯ÉZÅ :

½{¯Z¯

,

BLAST2GO

,

DDRT-PCR

, .ESTs

Ä»|¬»

Ê ] ÄËÂ

µfÀ¯ ¶»YÂ ½YÂÀ Ä] Z»{Â°Ëe ÉZÅ

³Z¼Ì] ÄÌ¸ ] ®ËÂ·ÂÌ]

ÊÅZÌ³ ÉZÅ

{Y¯Zy Ã{Z¨fY

dY Ã|

. ÄËÂ

Z»{Â°Ëe ÉZÅ

ÂÀ» Ä]

½{Y{ ½Z¿

|ËZ] Y|f]Y { ÃZÌ³ | ®Ëve Á Ê·fÀ¯ÂÌ] ½YÂe ÄË

ÃZ³

|ÀÀ¯Ìze ¶»YÂ ËZ Z] Á ÃÌ¿Â¸¯ Y

Ç

ÄË

ÃZ³ dÌ ¼m Y Êz] ¶«Y|u Á |ÀÀ¯ d]Z«

|Ì·ÂeZ]|ÀZ]{Z«Ze|ÀÅ{ZfyY{ÂyÄ]YÊ]Á°Ì»

Â]Zf»YÂ¿Y dÌ·

|Y§Ì£ÁY§ÉZÅ

®Ëve,Ê]Á°Ì»

Z¬·YÁ|

É Z¿YÂe,ÊÅZÌ³d»ÁZ¬»

Ë Y{ÂyÊ·fÀ¯ÂÌ]Ê

|ÀÅ{ ½Z¿ ZÅ³Z¼Ì] ÄÌ¸

)

Harman et al

Hermosa et al., 2012

( . ZZÀ

Ë

½Ê ZÅ Ë Z»{Â°ËeYÊ

½ZÌ] Ä¯

ZÆ¿M Ì·ÁY ¶uY» µÂ {

È ºÅ]

Z] À¯

ÄË

ÂeµZu{ÉZÅ

È Ä¿YÂmÁ~]

Ê»ÌÌ¤eÃ{

|À¯

¸u»

È

Ìze dÌ¸]Z« { dÆm Ê¼Æ»

Ê³|ÀÀ¯

ÄË

ÃZ³ Ä¿Â³{

dZ»{Â°ËeÉZÅ .

É{| f»cZ¬Ì¬ve

½ ½ZÌ] Ì·Z¿M Ây {

ËY { Z»{Â°Ëe ÉZÅ

Y~£ ¦¸fz»

Ë ºÅ] Á Ê Z] À¯

½ZÅZÌ³ Ã| ¹Zn¿Y Ä¯

ÌÆe Ä] nÀ»

È Ä « Y É{ZË {Y| e Ê·YÂe e

Ê·YÂ Å ÉZ

½ZÌ]

|

Ç ) ZÅEST

( Ä¿Â³ Ä¯Ã|Z»{Â°Ëe¦¸fz»ÉZÅ

Y^À»

» Ã|ÀËMcZ ·Z»ÉY]É|À

nÀ»Ê§YÁ

ZZÀ,¦¯Ä]

Ë É{Y| e¦ËZÁ¾ÌÌ eÁÊ

Y

½

ÉZÅ

Ì¿Z»{Â°Ëe

dYÃ|

)

Bailey et al&KDFRQ

et al 6DPROVNLet al 5XELRet al.,

(2012

. Ä «

Ê·YÂe ÉZÅ

½ZÌ]

|

Ç

½ Ä] Â]»

ÉZÅ

½ZÌ]

Ì¿Â¸¯ Ä] xZa { Ã|

Ã

½|

½Á{

ÈË Êf

ÄrÅZÌ³ Z¯Z¯ÉZÅ ÂW Z]

ZÆq ÈËÂ

T. ovalisporum DIS

id15221625 pdfMachine by Broadgun Software - a great PDF writer! - a great PDF creator! - http://www.pdfmachine.com http://www.broadgun.com

(2)

ÃZÌ³¿Y{

Ê°a

½YËY ÃÁ{

ÃZ¼,

½Zf]ZeÁZÆ],

,70a T. hamatum DIS 219b

,

T. harzianum DIS

219f

Á

Trichoderma sp DIS 172ai

Y Ã{Z¨fY Z]

Differential Display Reverse Transcriptase-PCR (DDRT-PCR)

ZZÀ

Ë

YÃ{Z¨fYZ]½Z¿ZÌ]tÁÊ

macroarrays

|Ê]

)

Bailey et al., 2006

(.

Ä¯

{

ZÆq½M Ä «

½ZÌ]Ê·YÂe Ã|

Z¬·Y É

|ÀfY{ÊËÓZ]½ZÌ]

¶»Z

glucosyl hydrolase family 2 (F3)

,

glucosyl

hydrolase family 7 (F7)

,

serine protease (F11)

Á

alcohol oxidase

. {

Ä ·Z»

ÉY )

Chacon et al.,

(2007

,

¾Ë|Àq È¿Zz]Zf¯

cDNA

Y , Á dZ

| Y | ]

T. harzianum CECT 2413

Ë ÉÁ

È

ÄmÂ³ ÃZÌ³ d¯ { Ê´¿§

ÄÌÆe ®Ì¿ÂaÁ|ÌÅ ÉZÅ

|

½M { Ä¯

Ä «

Ê·YÂe ÉZÅ

½ZÌ]

Ã|

½ Z] ^e»

ÉZÅ

{Ì³{

dyÂ

ZÁ

¶¬¿,Ê]q Á

¶°ËÁµZ¬f¿Y

fÀ,ZÅ

YÂË{ÁZ£

Ç Z]^e»É¿Y|Ì·ÂeÁÊ·Â¸

ATPases

Ì·ÁY¶uY»µÂ{

È

Ì¿Â¸¯

Ã

½|

|Z¬·Y . ·Z»{

È

´Ë{

)

Samolski et al., 2009

( , Äz¿cYÌÌ¤e

ÉY{]

{Ê¿

ËÂ

È Ê·fÀ¯ÂÌ]

ºÅ]{

À¯

ÄÌ·ÁYÉZÅ

ËZ]Y È

ÄmÂ³ÃZÌ³ Z]Ê´¿§

YÃ{Z¨fY ÉÁZÀ§

ÄËYMË

Ê]

½½M{Á|

ZÅ É Z]

ºÌÀe

½ZÌ]

ÓZ]

ZZÀ

Ë Ê

/ ,|¿|

»Z

/

¶ ÀÀ¯|¯

//

| Ç

Å/

»Â /

·Â /

±Â Å / ÉZ a/

ÊÀÌXeÁ

Ì³{

/

{

Ì»

//

Å

//

ÉZ

dyÂ

ÉZÁ Ä]

ºË¿M Ây

ZÅ Ë ÉY] Ê dyÂ

ZÁ

|ÌY ÅÂ]¯ÁÊ]q,ÄÀÌ»MÉZÅ Ì

ºË¿MÁcY|

ZÅ Ë ÉY]Ê

É¿YZ]^e»ÉZÅ|ÀËY§,Âf¯Z§Â¯Á¾Ì»ZfËÁfÀÂÌ]

dÌ¼ Á Y{

Ë Ê

Ì» È Âe ,Ä¿Z´Ì] cZ^Ì¯e Á ¹ÂÌ¸

¶°

Âe{Ê³{Â·MÉZÅZfyZÉÌ³ È

ºÅ ÊfË

{

½Z]Ì»t®Ë{¿ZËÉÁ

|¿{Â]

.

0YÌyY

ËZ»M{

Ê )

Rubio et al., 2012

( xZa ÉZÅ

ÄËZ¬»

Äz¿ÉY ÄÉY{]

ÈËÂ

T. harzianum CECT

2413 (T34)

,

T. virens Gv29-8 (T87)

Á

T. hamatum

IMI 224801 (T7)

dÌ]

ºÅ]Y| ]dZ

Z] À¯

Ë

È ÄrÅZÌ³ ÄmÂ³ ÉZÅ Y Ã{Z¨fY Z] Ê´¿§

ÁZÀ§

É

HDO microarrays

|Ê]

.

ËZ»M¾ËY{

½YÌ»

½ZÌ]

½

dyÂ{Ì³{ÉZÅ cY|ÌÅZÁ

Á¾]¯ÉZÅ

YÂË{fÀÂÌ]

Ç ÄÅ{Ê·Â¸

ÄËÂ

ËY§Y {Y{½Z¿

.

½ZÌ]¾ÌÀr¼Å dyÂ{Ì³{½®Ë

¬§Ê]qZÁ

Á{{

ÈËÂ

T34

Á T87

ËY§Y d§ZË .

½

Z]^e»ÉZÅ dyÂ

cY|ÌÅ ZÁ Å

¾]¯ ÉZ Ê°ËÂ·ÂËÌ§ ¶uY» Á

Ä Å { µZ¬f¿Y

ÉfÌ] ½ZÌ] ÄËÂ

Ä¯ |ÀfY{

ª§Á

{YZ»{Â°ËeµZ §ÉË~a

Ë

¹Â]

ÄË

ÃZ³ d]Zi

Ê»

|À¯

.

{

ºÅ]cZ ·Z»Ê]YÊ¸¯Ê]ZËY Z»{Â°ËeÊÀ¯

0ZÂz» ¦¸fz» ½ZÅZÌ³ Z]

cYÌÌ¤e Ä¯ ÊeZ ·Z»

Äz¿

{ Y Z»{Â°Ëe ÉY{]

Ì¿Â¸¯ Ä] À¯YÁ Ã

½|

dYÃ{¯Ê]ÄË

)

Bailey et al&KDFRQ

et al 6DPROVNLet al 5XELRet al.,

( 2012

pÌÅ Ä¯ | z»

Ä ·Z» Ä¿Â³ ÉY

) ZY ]

f{ { {ÂmÂ» cYZf¿Y (

xZa Ây {

ÉZÅ

Äz¿

Ì·ÁY ¶uY» { Z»{Â°Ëe ÉY{]

È

Ì¿Â¸¯

Ã

½|

¹Zn¿Y ¨Â»bY Äf§´¿

dY . Ê§ Y ,

dÌ¬§Â»

Ì¿Â¸¯ { Z»{Â°Ëe Ã

½|

{ ½M Y¬fY Á ÄË

ÄË

ÃZ³ ) ]Ä Ã{Z¨fY µZ»~] Á Ä] Ä¯ Ê»Z´ÀÅ ÃËÁ

Ê»

{Â

(

Ì¿Â¸¯Ä]ÂÀ»

Ã

½|

Ì·ÁY È

¨Â»bY{½M

Ä¿YÂm ¹Z´ÀÅ {

»Y{Y Á Zy { ~] Ê¿

È

{ ½M |

ÄË

ÃZ³ dY . Y~·

, ÃÆ] Z] Ä ·Z» ¾ËY {

Y ÉÌ³

Á

ÉZÅ Äz¿ t { ½ ½ZÌ] Ê]

Z] Á ÉY{]

Á Y Ã{Z¨fY

DDRT-PCR

,

½

Y ÈËÂ

[Zzf¿Y

|

Ç

T. harzianum T7

,

¿Â¸¯¬¿Z]

Ì Ç|ÀÀ¯Ã

ª§Â»

\¿ Á Ê]ZË{

Ê¿ ÊZÀ

|

)

Mehrabi-

Koushki et al., 2012

( Ì·ÁY¶uY»{Ä¯

È

Ì¿Â¸¯

Ã

½|

Á¨Â»bY ÄË

ÃZ³ ÄmÂ³ Ê´¿§

] Ê«Yf§Y½ZÌ {

|ÀfY .

ÁÁ{YÂ»

ZÅ

ºÅ]

Ä¿YÂmµZu{Á~]Z]Z»{Â°ËeÀ¯

ËÁÊ¿

È

ÄmÂ³ Ê´¿§

¦·Y ( ÄmÂ³ Á~]

Ê´¿§

) fËYÁ È

¶Ì^»

(

{ ½{Y{Y« Z]

ºË| dË¸¯ÂbÌÅ

%

| Ä¬Ì«{ Á{ c|» Ä]

Ê¿Â¨

0Ô»Z¯ËY{ÂfYaÁÊv

{½Áf

®Ô§

ÉÂfv» ÉZÅ

/ Y~£ Ìv» ºnu Ë

Ê

®Ì¿ÂaÁ|ÌÅ )

Yedidia et al., 1999

(

| ÄfzË

.

®Ô§

Á{{ZÅ rpm

c|»Ä]

ÉZ»{{dZ

Êf¿ZÈm{

{Y³ ÉY|Æ´¿Y{°ÌÂeZ]Â°¿Y½Á{

Ä¿YÂm Ze |

¹Zn¿Y dyYÂÀ°Ë Ê¿

{Ì³ .

½ÂÌ¿ZbÂ

ÂbY ÈËÂ

T. harzianum T7

d¸£Z]

{ÂbY

Ê¸Ì» Å

®Ô§ Ä] fÌ·

Ìv» ÉÂfv» ½Áf ÉZÅ

(3)

Ê°Â¯Ê]YÆ»

½YZ°¼ÅÁ :

\¿

Ä «ÉY]Ê¿ÊZÀ

Ê·YÂe

½ZÌ]Ê«Yf§YÉZÅ

Ç|

Trichoderma harzianum

{

...

d¯

)SM Yedidia et al., 1999

( ÄËZ»

Á Ê¿

ÉY]

Ä¿YÂm

»Ê¿

R

i

®Ô§

ZÅ

ËY{

rpm

ÉZ»{Á

Êf¿ZÈm{

{Y³ c|»Ä]

d§³Y«dZ

. ËZ»

È

»ÂÌ¸Ì»

Ê ) Ä¿YÂm ÉZÅÂbY Ã{

(

¼m Z]

Ìv» ÉÁM

Ä·Â·{É|

ÉZÅ

ÂÌ¨Ëf¿Z

¨Ëf¿ZZ]|ÀqÁ Ì

{Â

Á{

g

|dY{]½Áf¬»[MZ]

.

®Ô§

ÄmÂ³Á~]ÉÂfv»ÉZÅ Ä¿YÂmÊ´¿§

aÃ{

|Ë|m Ìv» Z] ½Áf ËY { Âf Y ®Ì¿ÂaÁ|ÌÅ )

ÉÁZu g/L

¯Â¸³ (

| ËÂ e .

¾ËY

®Ô§

ËZ» Z] ZÅ È

»ÂÌ¸Ì»

d^¿ Ä] Ê

ÂbY

Ä¿YÂm Ê¸Ì» Å { Ã{

ÄËZ» Ìv» fÌ·

Ê¿

|¿|

{ Á

f§³Y« É| ËY ½Z¼Å

|À .

®Ô§

ÉÂfv» ÉZÅ

Y~£Ìv»

Ë

®Ì¿ÂaÁ|ÌÅ Ê )

ÉÁZu g/L

¯Â¸³ (

½Á|]

Ä¿YÂm Á~]

ËZ» Z] Ã{

È

»ÂÌ¸Ì»

ÄËZ» Ê

ËY Á Ê¿

Z¬·YÌ£

Ë

|Äf§³¿{Ê .

dY{]

ÂÌ¸Ì»

¹

Á~]Y

Ä¿YÂm Ã| ÃÌ¿Â¸¯ Ã{

Á {ZnËY Y | ] dZ

ºÅ]ËY

|¹Zn¿YÀ¯

.

[ ( ÄrÅZÌ³ ÄmÂ³ ÉZÅ Äf{ { Ê´¿§

Ã{ ÉZÅ ZeË Ê

ÄËÁÊÅ|¿Z»Z

ÉZÅ ZÆ¿M ºË|dË¸¯ÂbÌÅ{

% Ä]

| Ä¬Ì«{ Ä c|»

| Âf Á Êv Ê¿Â¨

.

®Ô§

ºÌ¿ÉZÅ ÉÂfv»½ÁfÉfÌ·

ml

Ìv»

Y~£

Ë ®Ì¿ÂaÁ|ÌÅ Ê )

ÉÁZu g/L

¯Â¸³ ( ËZ» Z]

È

»ÂÌ¸Ì»

d^¿ Ä] Ê

Ä¿YÂm ÂbY

Å { Ã{

Ê¸Ì»

ÄËZ» fÌ·

| Ê¿

. Äf{

rÅZÌ³ ÉZÅ È

ÄmÂ³ Ê´¿§

0Ô»Z¯ËY{

®Ô§¶yY{{½Áf

Y«ZÅ d§³ Á

^ÀaÉZÅYÂ¿YÃ{Z¨fYZ]

È

|d]Zi½Áf

.

®Ô§

ÉZÅ

Y~£Ìv»ÉÂfv»

Ë

®Ì¿ÂaÁ|ÌÅÊ )

ÉÁZu g/L

¯Â¸³ (

ÂbY Z]

Ä¿YÂm ÉZÅ ÄËZ» d^¿ ½Z¼Å Ä] Ã{

Ê¿

|

Á

Z¬·Y Ì£ ËY

Ë

| Äf§³ ¿ { Ê .

®Ô§

{ ZÅ

ËY

Êf¿Z Èm{

{Y³ Á rpm

ÂeZ]Â°¿Y {

« Y{°Ì

| Ã{Y{ Y .

¹ÂÌ¸Ì» dY{]

Á

ºÅ]ËY{ZnËYY| ]dZ

d§³¹Zn¿YÀ¯

.

Á~]

Ä¿YÂm ÄËÁÃ{

|ÃÌ¿Â¸¯ÉZÅ Ç

{Ä¿Z³Y|m

®Ô§

ÉÂfv» ½Áf ÉZÅ

Ê¸Ì»

[M fÌ·

¬»

Á{Z]¾·Y°ÌÉÁ

rpm

ÉÂv¿Ä]|Ã{Y{½Z°e

Ä¯

¹ÂÌ¸Ì»

Á~]tYZÅ ÄËÁ

ZÅ {ÂY|m . ,b

®Ô§ÉYÂfv»

Å

YÃ{Z¨fYZ]Z ÉÂe

\ZÀ»ÉZÅ

f¸Ì§

Ä·Â· Ä] Á ÉZÅ

ÂÌ¨Ëf¿Z

ml

¶¬fÀ»

|¿|

. ÉY]

¼m cZ «ÉÁM

»ÂÌ¸Ì»

Ä·Â·,Ê

Á{{ZÅ

g

Ä]

c|»

Ä¬Ì«{

ÂÌ¨Ëf¿Z

|

|¿

. [ÂÉYÂfv»

{¯

Ç

»ÂÌ¸Ì»

[MYaÊ

Ë{Z¬»{Ê^¿ÉÌ³ mg

{

Ä·Â·

ÉZÅ

ÂÌ¨Ëf¿Z

ml

ºÌ¬e

|

{ Ä¸Z§Ô] Á

kYzfY|ÀËY§

RNA

d§³Y«

.

kYzfY RNA

ÌÆeÁ È cDNA

kYzfY RNA

ÉZne dÌ¯ Y Ã{Z¨fY Z]

RNeasy

Plant Mini Kit (Qiagen)

¶uY» ZY ] Á

d§³ ¹Zn¿Y ÃZ´ËZ»M ÉZ»{ { ½M ¶¼ ·YÂf{

.

{

Ê»Z¼e ÁZÅÄf{,¬»[M,µÂ¿ZeYYkYzfY¶uY»

½

d{ÁÉZne®qÂ¯

ÁÄ·Â·{kYzfYÂz»Z

Ä·Â·

ÉZÅ

ÂÌ¨Ëf¿Z

|«Z§ÁÊ·Â°·Â»Z¯Äm{Z]

RNase

Ã{Z¨fY

| . µÂ¸v»

RNA

Y Ã{Z¨fY Z] ¶Zu

f»Âf§Áf°bY )

µ|»

Biochrom WPA 221 Biowave

(

_M{Â¿Z¿ Á )

µ|»

Thermo scientific NanoDROP

(2000

d¸£

| ÊnÀ

. ÌÆe È cDNA

Y Ã{Z¨fY Z]

Äz¿ ºË¿M Â° » ÉY{]

SuperScript II reverse

transcriptase (Invitrogen, USA)

³Z£MÁ

dt-ACP1

Z]

ÁZÀ§

É ACP

ÉÁZu bp

,Ä¼Ì¼Ê·YÂe bp

Ê·YÂe

ºÌÀe

|ÀÀ¯

Ç Á ¾Ì¿YÂ³ µZeY bp

¾Ì¼Ìe Ê·YÂe

)

CTGTGAATGCTGCGACTACGATGGGGG_(T18)

(

]

Âf{ ¶uY» ZY ÉZne dÌ¯ ¶¼ ·Y

Gene-

Fishing_DEG Kit (Seegene)

d§³ ¹Zn¿Y .

cDNA

YÉZ¬»[MZ]]Y]lÀad^¿Ä]¶Zu

DNase

À¯YÁ{ÁªÌ«

ÉZÅ

DDRT-PCR

|Ã{Z¨fY .

À¯YÁ ÉZÅ DDRT-PCR

À¯YÁ ÉZÅ

DDRT-PCR

]Z ³Z£M

dT-ACP2

ÉYY{

ÁZÀ§

É )ACP CTGTGAATGCTGCGACTACGA

TGGGGG_(T15)

( Á dÌ]

Ê§{Ze ³Z£M \Ì¯e

ACP₄₁-ACP₆₀

Z]

Ã{Z¨fY dÌ¯Y

Gene-Fishing_DEG

Kit (Seegene)

Á

¹Zn¿Y Ã|¿Z ¶¼ ·YÂf{ ZY ]

| . Ê·YÂe dÌ]

Ê§{Ze ³Z£M ACP

¶»Z

bp

,Ä¼Ì¼ Ä]Z» Ê·YÂe bp

ºÌÀe Ê·YÂe

|ÀÀ¯

Ç µZeY

Á¾Ì¿YÂ³ bp

{Â]Ê§{ZeÊ·YÂe )

µÁ|m .(

Â¸z»

À¯YÁ

DDRT-PCR

ÉY]

Å µl

ÉÁZu µl

/

³Z£M

10µM-dTACP2

, µl

Ê§{Ze³Z£MY

5µM-

,ACP

µl

/ Y cDNA

ªÌ«

|

Ç

¿Â¼¿

È Z¬·Y Ë ZË Ê

(4)

ÃZÌ³¿Y{

Ê°a

½YËY ÃÁ{

ÃZ¼,

½Zf]ZeÁZÆ],

,µfÀ¯

µl

À¯YÁ ÉZne Â¸z»

) PCR 2X

SeeAmpTM ACPTM Master Mix

( Á µl

¬»[M

{Â]

. Ä·Â·

ZÅ

À¯YÁÉ

»Z¿]ÉYmYÁºÌÀeYa È

PCR

µ|» ¸°ËZÂ»e {

Biometra T Personal

Ze

½Z»

Ç|ÅZ»

[Á} ÉZ»{

Êf¿Z Èm{

{Y³ v¨ ÉÁ

È

|¶¬fÀ»ÃZ´f{Ä]ËZ¼¿

)

hot-start

.(

»Z¿]

È Z»{

Ë Ê

yq®Ë¶»Z

È

¾ËZ£M ) Èm{

Êf¿Z

{Y³ c|»Ä]

ÄfYÁÁÄÌ·ÁY[Á}ÄÌ¿Zi ,Â´·YÉZ

Èm{

Êf¿Z

{Y³ c|»Ä]

µZeYÄÌ¿Zi Ê§{Ze

ÁZÅ³Z£M

Êf¿ZÈm{

{Y³ c|»Ä]

ZÅ³Z£M]ÄÌ¿Zi (

,

yq È Ê¸Y ) Èm{

Êf¿Z

{Y³ c|»Ä]

ÄÌ¿Zi

ÄfYÁ ,ÉZ

Èm{

Êf¿Z

{Y³ c|»Ä]

ÄÌ¿Zi

µZeY

Y|§|Å ÁZÅ³Z£M

Èm{

Êf¿Z

{Y³ c|»Ä]

- ZÅ³Z£M]ÄÌ¿Zi (

ZÆ¿]Á Ë

Ê ) Èm{

Êf¿Z

{Y³ c|»Ä]

ÄÌ¿Zi ( {Â]

.

µÁ|m .

½Ê«Yf§Y½ZÌ]Ê]{Ã{Z¨fY{Â»ÉZÅ³Z£M YÁ{Ã{Z¨fY{Â»Z»{Â°ËeÉZÅ

À¯

DDRT-PCR

³Z£MÊ·YÂe *

³Z£M¹Z¿

³Z£MÊ·YÂe

³Z£M¹Z¿

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGXXX XXXXXXX 3′

ACP51

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGCC GAAGACCT3′

ACP41

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGTGC TCAGC00 3′

ACP52

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGX XXXXXXXXX 3′

ACP42

ACP53

ACP43

ACP54

ACP44

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGTCC TGCACCG 3′

ACP55

ACP45

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGTGC CCAAGCG 3′

ACP56

ACP46

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGAGC GGACCTC 3′

ACP57

ACP47

ACP58

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGA GCACTTCGG 3′

ACP48

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGGTG GCTGCAC 3′

ACP59

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGGC CAACTGCC 3′

ACP49

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGGGT CGAAGAG 3′

ACP60

5′GTCTACCAGGCATTCGCTTCATGGGGGA GAAGCTGCG 3′

ACP50

*

Ê]ZËZ]Ê«Yf§Y|¿Z]Ä ·Z»¾ËY{Ä¯ÊËZÅ³Z£MÊ§{ZeÊ·YÂe

¥uZ],|¿{°¿|Ì·ÂeË~a X

dYÃ|Ã{Y{½Z¿

.

·Zy Á kYzfY ÉZ

DNA

|¿Z] Y Á Ê«Yf§Y ÉZÅ

Ä¿Z¼Å ÉZ

ZÆ¿M

cÓÂv» ÉY~³Z] Y | ]

DDRT-PCR

,µ ÉÁ

|¿Z]

ÉÌj°e cZ « Á ] Ê«Yf§Y ÉZÅ DNA

Z]

ÉZnedÌ¯YÃ{Z¨fY

QIAquick Gel Extraction Kit

(Qiagen)

·ZyÃ|¿Z¶¼ ·YÂf{ZY]Á ÉZ

|

. cZ «

DNA

ºË¿MYÃ{Z¨fYZ]

T4 DNA Ligase

¶«Z¿ {

pTZ57R/T

{ Á ªÌ¨¸e µÂ¸

ÅZ

|¿Ë~a É Ç

ÈËÂ

E. coli DH5á

dÌ¯ Y Ã{Z¨fY Z] Ã| ÄÌÆe

ÉZne

InsTAclone™ PCR Cloning Kit

(Fermentas)

ÊÅZ³ Á

|Ë¸¯ µÂ¸v» Y Ã{Z¨fY Á

Ä¿Z¼Å ºÌ¸¯

| ÉZ

) ¶°

( . Á {

|Ë¸¯

ºÌ¸¯

d¯ , Éf¯Z]

Äf§ZËÌj°e Ìv» {

)LB

{

{Á|u / Ê¸Ì»

fÌ·

(

·Â·Ä]

Ä

Â¨Ëf¿ZÉZÅ ml

¶¬fÀ»

¦«ÂeYaÁ

Ä¬Ì«{

{xËÉÁÉY

g

ÉZ»{Á

Èm{

Êf¿Z

{Y³

|Â¨Ëf¿ZÄ¬Ì«{lÀac|»Ä]

.

½{Á§YZ]¶Zu[Â

µl

µÂ¸v»

Ê¸Ì»

ÓÂ»

¿ZbÂºÌ¸¯|Ë¸¯

ÃÌ xËÉÁÄ¬Ì«{Ã{c|»Ä]Á

|ÉY|Æ´¿

. ÉZ»{{,b

Èm{

Êf¿Z

{Y³ Ä]

| Â¨Ëf¿Z Ä¬Ì«{ lÀa c|»

Á ZËf¯Z] [Â

Ë Z] Ê

µl

µÂ¸v»

Ê¸Ì»

ºÌ¸¯ |Ë¸¯ ÓÂ»

]Ä

½YÂÀ

µÂ¸

|¿Ë~a Á | f» ÉZÅ Ã

¿ZbÂ

ÃÌ

|

. b

Ä]

µl

µÂ¸

| f»

, µl

/ Â¸z»

ªÌ¨¸e ©Â§

) ÄÌÆe

dÌ¯Z]Ã|

InsTAclone™ PCR Cloning

( ÁÄ§ZY

0Ô»Z¯

Â¸z»

|

. Ä¿Z¼Å Â¸z»

c|» Ä] ÉZ

ÉY|Æ´¿xËÉÁÄ¬Ì«{

Á |

¹³[M{

Èm{

Êf¿Z

{Y³ c|»Ä]

ÄÌ¿Zi , Ä]½MËµZ¬f¿Yb

xË ,

| Ã{Y{ ÊeYu Â

. Y ¶^«

¯

Â¸z» d

Ä¿Z¼Å

Ìv» ÉÁ ÉZ

´ÀË³ Á

´Y³

)

LBA+X-Gal+IPTG

(

·Â· Ä] , È

ÉÂfv» Â¨Ëf¿Z

(5)

Ç|

{

d§³¹Zn¿YÃ|¿Z¶¼ ·YÂf{

¶°

cZÌ¸¼{

³Z£M Y Ã{Z¨fY Z] ¿YÂy ,Ê]ZË

Ìa Á

M13

³Z£MÁÃZeÂ¯cZ «ÉY]

ÌaÉZÅ Â° »ÁÁ

M13

|À¸]cZ «ÉY]

Âe d§³¹Zn¿Y½Á¯Z»d¯

P1

µÉÁ

Z³M

|ÅZ»Á Ç

Y| ]½M

PCR

Ä¿Z¼Å ZÅ

³Z£MYÃ{Z¨fYZ]

ÉZÅ

edÆm P Ä¿Z¼Å|ÌË

ÉZÅ ,P1

,P2

,P3

P52

,

¶«Z¿Ê·YÂeY

pTZ57R/T

dYÃ|¶Zu

Ä «

Ê·YÂe Ã| ½ZÌ] ÉZÅ

Expressed

Sequence Tags=ESTs

Ä]

dm ÂmÁ ³

BLASTx

,

BLAST2GO

cZÌ¸¼ Z] Ze | Ê§ »

BLASTx

, Ä¬¿

ÉZ´¿

dZ´¿ZË ˺

Ì¨eÁ ,˻

Ê¿ÊZÀ

˼

Ä «

Ê·YÂe

½ZÌ]ÉZÅ ]Ã|

Ä

|ËMd{

Á

\¿ Á dÔ] ÉÂm

{ Ê¿ ÊZÀ

1. Mapping

2. Annotation 3. Gene ontology

½YZ°¼ÅÁ

\¿

Ä «ÉY]Ê¿ÊZÀ

Ê·YÂe

Ç|

µl

Y~£Ìv»

Ë Ê LB

Ä§ZY

ÉZ»{{Ä¬Ì«{

Èm{

Êf¿Z

{Y³

d§³ Z]

Á|ÌËPe ÄÀ³aÌj°e

ÉZÅ

Ã{Z¨fYdÆm|Ì¼ÔakYzfY, dÌ¯YÃ{Z¨fYZ]Ê]ZË

GeneJET™

Plasmid Miniprep Kit (Fe

Á ZY ]

d§³¹Zn¿YÃ|¿Z¶¼ ·YÂf{

Ê·YÂe

³Z£M Y Ã{Z¨fY Z] ¿YÂy ,Ê]ZË

³Z£MÁÃZeÂ¯cZ «ÉY]

|À¸]cZ «ÉY]

Â§Áf°·Y µl

|Ì¼Ôa Ä¿Z¼ÅYÃ|kYzfY

Ê]Zzf¿YÉZÅ

P1-P41

¹ÂË|ÌeYµÂ¸v»Z]ÉÌ»M

|ËZ»Á]

µg/ml

[

Â§Áf°·Y µl

À¯YÁµÂv»

ÉZÅ

PCR

|ÅZ»Á Ç

²¿Y| ]½M

¹ÂË|ÌeYµÂ¸v»Z]ÉÌ»M

|ËZ»Á]

µg/ml

|¿Z]ÃY|¿Y eÉZÅ P Ä¿Z¼Å|ÌË

Y|¿Y¼mYZÅ Ç

ÁÊ«Yf§Y|¿Z]Å bp

¶«Z¿Ê·YÂeY

Ê·YÂeÌ·Z¿MÁÉZfYËÁ

ZÅ

¹¿ Y Ã{Z¨fY Z] ZÅ

Y§Y

BioEdit

Ê]ZËY

Ê·YÂe ¾ËY ,b

Ã{Z¨fY {Â» ¶«Z¿ Ê·YÂe Z] ZÅ

pTZ57R/T

ºÅ

½Z°»YZe|ZfY

Ä¼Ì¼Ê·YÂeÁ¶«Z¿Ê·YÂe¥~u

³Z£MÄ]Ã|

{Â»ÉZÅ

PCR

Y§

{ÂºÅ

¹¿Y

Y§Y

DNA

¿YÂy Zf¿Â» ÉY]

Ìa ÉZÅ

Á Á

Ê·YÂe

®qÂ¯ ÉZÅ

Y e bp

Ê·YÂe¾f§³¿{½Á|]

Ê¸aÉZÅ A/T

»Y{YY È Ê]ZËY

| ¥~u Ä «

Sequence Tags=ESTs AmiGO

Á

BLAST2GO

dÔ]

BLASTx

\¿

Ê¿ÊZÀ

dm µÂv»

Á

Ê°Â¯Ê]YÆ»

Â¸z»

Ä¿Z¼Å ÉZ

|

c|»Ä]Á

ÉZ»{{Ä¬Ì«{

Á{Á rpm

Y«

d§³

Ìv»{Ê]Zzf¿Y Ã{Z¨fYdÆm|Ì¼ÔakYzfY,LB

Ê·YÂecZÌ¸¼{

dÌ¯YÃ{Z¨fYZ]Ê]ZË

Plasmid Miniprep Kit (Fermentas)

¶°

¦·Y

Â§Áf°·Y

²¿

¹ÂË|ÌeYµÂ¸v»Z]ÉÌ»M M13

µÉÁ

Z³M

P53

Á P54

|¿Z]ÃY|¿Y

Ê·YÂeÌ·Z¿MÁÉZfYËÁ

Ê·YÂe dÌ¨Ì¯

¹¿ Y Ã{Z¨fY Z] ZÅ

|

Ê·YÂe ¾ËY ,b

Ä¿Z¼ÅdÆm

ÉZ

pTZ57R/T

Ä¼Ì¼Ê·YÂeÁ¶«Z¿Ê·YÂe¥~u

{Ã{Z¨fY

-DDRT

PCR

Baser V3.5.0

¿YÂy Zf¿Â» ÉY]

| Ã{Z¨fY Â° » Ê·YÂe¾f§³¿{½Á|]

(6)

ÃZÌ³¿Y{

Ê°a

½YËY ÃÁ{

ÃZ¼,

½Zf]ZeÁZÆ],

ÉYY{Ä¯ÊeÂ

E-value

Á

P-value

Yf¼¯

/ Ä]

ÉY] \Ìee

BLASTx

\¿ Á ,|¿{Â] Ê¿ ÊZÀ

Äf§ZË À » ÉZÅ Z Y{

{

¿

|¿| Äf§³ .

Ä «

Ê·YÂe ÉZÅ

½ZÌ]

cZÔY®¿Z]{Ã|

NCBI GenBank

d¼«{

dbEST

|ÄËZ¼¿

.

hv]ÁlËZf¿

Ä¿Z¼Å

|¿Z]ÉZ

Ê·YÂe,Ê«Yf§YÉZÅ ÁÉZfYËÁ,Ê]ZË

Ä «Ê]ZËY Ê·YÂe

½ZÌ]ÉZÅ Ã|

Ä¿Z¼Å µÂ {

Z

|¿Z] ½{Â] ¦Ì d¸ Ä] ,É ÉZÅ

À¯YÁ dÌÅZ» Y ÊZ¿ É|Ì·Âe ÉZÅ

DDRT-PCR

Á

5¾ÌËZa d¸£

cZ «

DNA

·Zy

½Z»|¿Y Ã| ÉZ

Ä¿Z¼ÅYÊÀÌËZaZÌ]

YÉZÌ]Á|Ã|ÅZ»ÉZ

|¿Z]

|¿ Ê]ZËZ] Ê«Yf§Y ÉZÅ

.

dÆm {YÂ» Ê ] {

Ê]ZËZ]ËY§Y DNA

|¿Z]kYzfYY| ] ÉZÅ

YÊ«Yf§Y

¸u»{Áµ

È

·Zy Ä¿Â¼¿,ÉZ

{Á¹Z£{YºÅZ]ZÅ

¸u»

È Ä¿Z¼Å Ê]ZËY

Y|¿Y ZY ] ÉZ

Ç

|¿Z]

ÉZÅ

| ®Ì°¨e ºÅ Y ¶Zu

.

Ê·YÂe ] ÉZÅ Ä d{

Ã|»M

ÉZfYËÁÁÊ]ZËY

|

Á Ä «Ä¯½MÊ·YÂe Ê·YÂe

½ZÌ]

Ã|

) (EST

Äf§³¿{

Á

¹Â¿cZÔYÃZ´ËZa{

NCBI

z] {

dbEST

Z¼ dve Ç

Ä¿Â¼¿

ÉZÅ

JK757061

Ze

JK757086

Á

JK813925

Ze

JK813940

|ÃÌy}ÁÄËZ¼¿

) µÁ|m .(

µÁ|m . cZz»

Ä «

Ê·YÂe

½ZÌ]

|

Ç ) (ESTs

·Z»¾ËY{

È ÄËZ¼¿

{Ã|

NCBI

¹Z¿

)EST User_Id (

{¹Z¿

dbEST ) dbEST_Id ( Ä¿Â¼¿ÃZ¼

) GenBank_Accn (

¹Z¿

)EST User_Id (

{¹Z¿

dbEST ) dbEST_Id ( Ä¿Â¼¿ÃZ¼

) GenBank_Accn (

P10F-EST 79227039

JK757061 P45F-EST

79227060 JK757082

P36F-EST 79227040

JK757062 P45R-EST

79227061 JK757083

P36R-EST 79227041

JK757063

P5F-EST

79227062 JK757084

P48F-EST 79227042

JK757064

P8F-EST

79227063 JK757085

P48R-EST 79227043

JK757065

P4F-EST

79227064 JK757086

P7F-EST 79227044

JK757066

P54F-EST

76307382 JK813925

P11F-EST 79227045

JK757067

P52F-EST

76307383 JK813926

P12F-EST 79227046

JK757068

P53F-EST

76307384 JK813927

P1F-EST 79227047

JK757069

P6F-EST

76307385 JK813928

P1R-EST 79227048

JK757070

P32F-EST

76307386 JK813929

P2F-EST 79227049

JK757071

P35F-EST

76307387 JK813930

P3F-EST 79227050

JK757072

P37F-EST

76307388 JK813931

P15F-EST 79227051

JK757073

P40F-EST

76307389 JK813932

P17F-EST 79227052

JK757074

P42F-EST

76307390 JK813933

P26F-EST 79227053

JK757075

P46F-EST

76307391 JK813934

P26R-EST 79227054

JK757076

P47F-EST

76307392 JK813935

P27F-EST 79227055

JK757077

P49F-EST

76307393 JK813936

P38F-EST 79227056

JK757078

P50F-EST

76307394 JK813937

P41F-EST 79227057

JK757079

P39F-EST

76307395 JK813938

P43F-EST 79227058

JK757080

P51F-EST

76307396 JK813939

P43R-EST 79227059

JK757081

P44F-EST

76307397 JK813940

\¿¦¯

ÉY]Ê¿ÊZÀ

Ä «

Ê·YÂe

½ZÌ]

Ã|

Ä «

Ê·YÂe

½ZÌ]ÉZÅ

|

Ç ) (ESTs

ÃZ´ËZaÄ]

¹Â¿cZÔY

NCBI

ÁÊ§ »

ÂÀ»Ä]

¾ÌÌ e Ê·YÂeZ]½MÄ]Ze ÉZÅ

ÄËZ¼¿ É|ÌeÂX¸¯Â¿ Á ÊÀÌXeÁa

|

Ç d¼« { Ê¸^«

BLASTx

¾ÌÀr¼Å ,

\¿

d¼« { Ê¿ ÊZÀ

AmiGO

Á

BLAST2GO

dm ÂmÁ

|

) µÁ|m .(

Ä]

ÂÀ»

Ä « Ê·Z¼fuY {¯Z¯ ¦¯

Ê·YÂe ÉZÅ

]Ä d{

\¿¥|ÅZ]ÁÃ|»M Z]Ze|Ê Ê¿ÊZÀ

ÃZ´ËZa { {ÂmÂ» Ê¿ cZÔY ÃÂ^¿Y Y Ã{Z¨fY ÉZÅ

¨ÌÁÄ]¹Â¿cZÔY È

Ê·Â°·Â»

¸u»,˺

È Ê°ËÂ·ÂÌ]

˻

Á

Lm Ê·Â¸

˼

Ä « Å Êa Ê·YÂe

{]

.

{ ,ZfY ¾ËY {

1. Molecular Function

2. Biological Process 3. Cellular Component

\¿

dm Y Ã{Z¨fY Z] Ê¿ ÊZÀ

Á ÉÂm

BLAST2GO

¸u»Ä{¶ZulËZf¿, È

dÆmdÔ]

¦¯

Ê·YÂe ÉZÅ Ä]Z»

,

¼mdÆmdZ´¿

cZÔYÉÁM

\¿

dÌÅ ÃY¼Å Ê¿ ÊZÀ

ÉZÅ ٤

Ì¨e Á dÔ]

e dÆm P ] {Z¼fY ¶]Z« cZÔY |ÌË Ä

d{

»M ÉY] Ã|

Ê·YÂe Ê§ » ÉZÅ ¹Zn¿Y Ã|

d§³ .

¸u» {

È ,dÔ]

Ê·YÂe ÃZ´ËZa { Ä]Z» ÉZÅ ,¹Â¿ cZÔY Ê»Â¼ ÉZÅ

¿ZfM È

yZ

dÌÅ{Y| e,E

¶«Y|uÁÃ|Ê]ZËZ]ÉZÅ

ºÅ µÂ

ZfY

Ë Ê ٥

Ä « Å ÉY]

½ZÌ] Ê·YÂe

|

Ç

Ê§ » Ã|

d{Ä]

|»M .

¾ÌÀr¼Å , dÅZ^½YÌ»

Ä «

dÌÅ Z] Ê·YÂe ÉZÅ

dm ÂmÁ Ä¿Â³ Y Ã|

ÉZÅ

Z^fYÁ¦¸fz»

ZÆ¿M À»Y{Ä]ÄmÂeZ]

È

¿ZfM È

yZ

E

4. Hits

5. Alignment

(7)

Ê°Â¯Ê]YÆ»

½YZ°¼ÅÁ :

\¿

Ä «ÉY]Ê¿ÊZÀ

Ê·YÂe

Ç|

{

...

|ÄWYY )

¶°

ÉZÅ Á .(

dZ´¿È¸u»{

cZÔY,

\¿

dÌÅ Z] ÃY¼Å Ê¿ ÊZÀ

ÉZÅ Ä]

d{

Y Ã|»M

dm ÂmÁ Y ¹Y|¯ Å dÔ] É

Ä «

Ê·YÂe ÉZÅ

Ì]

½Z Ã|

Á Ê§ »

Ìv»{¹Â¿cZÔYÃZ´ËZaÄ]Ã|

¹¿

ÉY§Y

BLAST2GO

ÃZ´ËZa { Á Ê]ZËZ]

ÉZÅ ¾ÌXeÁa cZÔY

)PIR Non-redundant Reference

Protein database

(

|À¿Z»

,PSD UniProtKB

,

Swiss-

,Prot TrEMBL

,

RefSeq

,

GenPept

Á

PDB

dm ÂmÁ

|cZÔY¦¯Á )

¶°

Á .(

¶°

.

¸u»lËZf¿ÉY{Â¼¿ËZ¼¿

È

BLASTx

Ê§ »Y| ]

Ä «

½ZÌ]Ê·YÂe

Ìv»Ä]Ã|

BLAST2GO

.

yZËÂeY{Â¼¿

)E E value distribution

( Ê»½Z¿

lËZf¿ÉY]yZ¾ËYÄ¯|Å{

dm ÂmÁ À»Y{{dÔ]É

È - - -

Ê»Y«

{Ì³ .

Y{Â¼¿

dÅZ^ËÂe )

sequence similarity distribution

( Ê»½Z¿

Ä «¹Z¼eÄ¯|Å{

Ê·YÂe dÌÅZ]ZÅ ÉZÅ dm ÂmÁ Ã|

-

|{

|¿Y{dÅZ^

.

Y{Â¼¿

ËÂe Ä¿Â³dÅZ^¾ËfÌ]

ÉY )

Top-Hit species distribution

( Ê»½Z¿

Ä¯|Å{

½ZÌ]Ê·YÂeÄ «

Z]Ã|

Ê·YÂe ÄfyZÀÉ|ÌeÂX¸¯Â¿ÁÊÀÌXeÁaÉZÅ

|

Ç

¿Â³Ä

È

T. reesei

,

T. virens

Á

T. atroviride

|¿Y{YdÅZ^¾ËfÌ]

.

(8)

ËÂeY{Â¼¿^BLAST2GOÌv»Ä]Ã|

Ä¿Â³Ä]YdÅZ^¾ËfÌ]

{Y{®Ë{¿ÉZÅ

¶]Z« Á ¾Ëe

{Z¼fY

\¿ Ì¨e ¾Ëe

Y ÊZÀ

½ZÌ]ÉZÅ

|

Ç {¯ÄWYY|Ë|m

lËZf¿¾ËY

\¿cZÔY¹Z¼eÄ¯{Y{½Z¿

ÊZÀ

Ä «

Ê·YÂe

Ä ·Z» ¾ËY

Ê»Â¿ cZÔY ÃZ´ËZa Y

d{ Ä]

dY Ã|»M lËZf¿ Y Ã{Z¨fY Z]

¸u» Á{ Y ¶Zu È

Z^fY Á ¶^«

ÊnÀ

ZÆ¿M Z]

\¿sÂËÂe½Âr¼Å¦¸fz»ÉZÅ

ÊZÀ

\¿

\¿lËZf¿{Y| e,ÊZÀ

ÊZÀ

Ã|Ì¨eÉZÅ

¶°

Á dY{]®Ë,

Ã{Y{ÉZÅÌ¨eYÊ¸¯

|

Ç

\¿

Ê·YÂeÅÉY]ÊZÀ

®

|Äf¿Y{^e»É{¯Z¯ÃÁ³

Ê·Z¼fuY {¯Z¯

½

Ê]ZË{ ÉZÅ

ZY ] Ã|

ÁÊ¿ÊZÀ

BLASTx

¿Â¸¯ µÂ { ¦¸fz» ÉZÅ

Ì Ã

½|

ËÁÊ¿

È mÂ³ / Ä

´¿§

/ Ê Z]

ËÂ

/ È

T. harzianum

Âe Á ¹Zn¿Y Á È

À¯YÁ ÉZÅ

½ É{Y| e

¬¿

¾Ë§M

Ì¿Â¸¯ {

Ã

½|

ÃZ³

|Ê]ZË{

\¸£Y Ä «

Ê·YÂe

¾ÌXeÁa Z] Ã|

ÄfyZÀ É{¯Z¯ ZË Ê¼ÌÀe ÉZÅ

oZ« ÄZy cY{ÂmÂ»

ÄfyZÀ ^e» ZÅ

ÃZÌ³¿Y{

Ê°a

½YËY ÃÁ{

ÃZ¼,

½Zf]ZeÁZÆ],

È

BLASTx

Ê§ »Y| ]

Ä «

½ZÌ]Ê·YÂe

Ìv»Ä]Ã|

species distribution

Ê»½Z¿

Ä¯|Å{

Ä «

½ZÌ]Ê·YÂe Ã|

Ä¿Â³Ä]YdÅZ^¾ËfÌ]

dÌÅ ÃY¼Å cZÔY Y§Y

ÉZÅ

¼mªËÄYYdÔ]

{¯ÉÁM

¸u»ÉZÅ È

0Z¼Ì¬f»dÔ]

{

\¿ cZÔY ÃZ´ËZa

Ê¿ ÊZÀ

dZ´¿ ¶ËZ§ Á{ Y Ä¯ Ê

geneinfo

Á

d{Ä]

Ê¿cY|Ì·ÂeµÁ|m{|»M

Ê¿ÊZÀ

dm ÂmÁ

|

UniProt

¶ËZ§ Y Ã{Z¨fY ÉY]

cZÔYÉZÅ a

ÊÀÌXeÁ

PIR

~yY

|

Ã|À¿ZZÀ Y|f]Y Y§Y

dÌÅ ÉZÅ

ÉZÅ

ZÆ¿M Y

ÂÀ»Ä]

cZÔY¦¯

Ê·YÂe ÃZ´ËZaY ZÅ

cZÔYÉZÅ

¾ÌÀr¼Å ,

|¯

|ÄWYYz»Ì¨eÅÉY]

¶°

d«{

Ã|ÄWYY{¯Z¯¹Z¼eÄ¯{¯d]Zi|»ÉZÅ

½ZÌ] ÉZÅ

|

Ç ÃZ´ËZa { ËZ»M ¾ËY

Ì¨e Y Ê¿ ÊZÀ

Ê°Ì¿Áf°·Y ÉZÅ

Y ¹Y|¯ pÌÅ Á Ã|»M ,ISS

,RCA

,IPI

dYÃ|¿¶Zu

¶°

cZÔYÃÂ^¿YÊ]ZËYZ]Y§Y È ÊnÀZ^fY Á dZ´¿

ZÆ¿M tÌv

¶]Z« Á ¾Ëe Ä «ÉY]

Ê·YÂe

½ZÌ]ÉZÅ

\¿cZÔY¹Z¼eÄ¯{Y{½Z¿

½ZÌ]

|

Ç Ä ·Z» ¾ËY

UniProtKB

d{ Ä]

¸u» Á{ Y ¶Zu

yZ

\¿sÂËÂe½Âr¼Å¦¸fz»ÉZÅ

¼¿ËÂe,Ê¿

Ç

\¿

Ê·YÂeÉY]

Ã|Ì¨eÉZÅ

Ã{Y{ÉZÅÌ¨eYÊ¸¯

d{Ä]

ËÄ]Á|»M

®

µÁ|m

Ê·Z¼fuY {¯Z¯

dm ÂmÁ

\¿É ÁÊ¿ÊZÀ

ºÅ] ¹Zn¿Y Z]

À¯

¿Â¸¯ µÂ { ¦¸fz» ÉZÅ

Ä¿YÂmµZu{Á~]

ËÁÊ¿

T. harzianum T7 DDRT-PCR

½ É{Y| e

Á¨Â»bY ÄË

ÃZ³

½ZÌ]

¾ÌXeÁa Z] Ã|

ËZ { Ã|

oZ« ÄZy cY{ÂmÂ»

¶°

Ä¿Â³ÊfÅZ^

ZÅ

distribution

¹¿ ,|ÀËY§ ¾ËY {

dÌÅ ÃY¼Å cZÔY Y§Y

¼mªËÄYYdÔ]

Z¼

Ç Êf{

¸u»ÉZÅ

µÁ|m

DBXRef

\¿ cZÔY ÃZ´ËZa

dm ÂmÁ

|

¹Z¿

ZÅ Ë dZ´¿ ¶ËZ§ Á{ Y Ä¯ Ê

gene2accession

d{Ä]

\¿cZÔYÃZ´ËZa

Ê¿ÊZÀ

Ã|À¿ZZÀ

ÉZÅ

UniProt

ÃZ´ËZadZ´¿

cZÔYÉZÅ

¾Ë|]

¹¿ ,\Ìee

Ã|À¿ZZÀ Y|f]Y Y§Y

Á{¯Ê]ZË{YdÔ]

ZÆ¿M

Ä «Z]^e»É{¯Z¯

Ê·YÂe

|»

|ÄWYYz»Ì¨eÅÉY]

|¯{

Ã|ÄWYY{¯Z¯¹Z¼eÄ¯{¯d]Zi|»ÉZÅ

Ä « ÉY]

Ê·YÂe

½ZÌ] ÉZÅ

\¿ cZÔY

Ì¨e Y Ê¿ ÊZÀ

IEA

d{ Ä]

Y ¹Y|¯ pÌÅ Á Ã|»M

,IDA

,IC

,IMP

IGI

dYÃ|¿¶Zu

¸u»{

È Ì¨e

¹¿,

cZÔYÃÂ^¿YÊ]ZËYZ]Y§Y

¼m

¸u» { Ã| ÉÁM È

(9)

Ç|

{

Ä]Ze À » Z

|¿{Y|¿½Z¿ÉY{

yZ

E

Ye Ä «Á Ê·YÂe ÉZÅ

½ZÌ]

Ã|

{ÉY

|ÀËZ¼¿ Ä¯ |¿| Äf§³ ¿

Ç

½

Ë|] Á |Ë|m ÉZÅ

Ìv»Ä]Ã|½ZÌ]Ê·YÂe

BLAST2GO

ÉZÅY{Â¼¿

ÉY]Ä¯|Å{

fÌ]

Ä «

Ê·YÂe Ã|½ZÌ]ÉZÅ

Ì¨eÂ¿YcZ

dYÊ°Ì¿Áf°·YÉZÅ

,ND No

\¿tY{Â¼¿

Ê»½Z¿Ê¿ÊZÀ

Ä¯|Å{

Ê·Â¸LmÁ

C

dYÃ|ÄWYY

½YZ°¼ÅÁ

\¿

Ä «ÉY]Ê¿ÊZÀ

Ê·YÂe

Ç|

Ä «Ä¿

Ê·YÂe

½ZÌ]

¾ÌXeÁaZ]Ã|

ÉZÅ

] cY{ÂmÂ» ËZ { Ã| ÊÀÌ]

Ä ÃËÁ

|¿|ÄfyZÀ^e»ZÅ

,¾ÌÀr¼Å Ã{YÁ{

Y{|

½ZÌ] ÉZÅ Ã|

Ê·YÂe Z]

Á ÊÀÌXeÁa ÉZÅ

ÃZ´ËZa{µZuÄ

¹Â¿cZÔYÉZÅ dYÃ|ÄËZ¼¿

Á P

±]

Ye

|ÀËZ¼¿ Ä¯ |¿| Äf§³ ¿

Z»{Â°Ëe

|ÀË

È Ê§ »Y| ]Ì¨eÁdZ´¿

Ä «

½ZÌ]Ê·YÂe

·YÂeÉY]|»ÉZÅ Ê

Ê§ »ÉZÅ

dÌÅÁÃ|

dÔ]ÉZÅ Ê»½Z¿

ÉY]Ä¯|Å{

|¼Á{Y{{ÂmÁf{{|»|¯Ê¿ÊZÀ

Ç

ÔY¾ËY

Ì¨eÂ¿YcZ

biological Data available

Á ,IEA Inferred from Electronic Annotation

\¿tY{Â¼¿

\¿ÉZÅÌ¨e

¨ÌÁtÄ{ÊZÀ

È Ê·Â°·Â»

F

¸u», ÊfËÈ P

Ê·Â¸LmÁ

Ê°Â¯Ê]YÆ»

|¿|

µÁ|m Ä «Ä¿

Ìa ZË Ê§

] cY{ÂmÂ» ËZ { Ã| ÊÀÌ]

oZ«

|¿|ÄfyZÀ^e»ZÅ Ä « ¾ËY Ê·YÂe

½ZÌ] ÉZÅ

]ZeÄ¯É|ÌeÂX¸¯Â¿

ÃZ´ËZa{µZuÄ

¶°

|¯ËÂe

·YÂeÉY]|»ÉZÅ

\¿cZÔY

|¼Á{Y{{ÂmÁf{{|»|¯Ê¿ÊZÀ

biological Data available

\¿ÉZÅÌ¨e

(10)

ÃZÌ³¿Y{

Ê°a

½YËY ÃÁ{

ÃZ¼,

½Zf]ZeÁZÆ],

Ä «¾ËY Ê·YÂe

ÉZÅ

½ZÌ]

Ã|

¶»Z

ÃZ¼

¿Â¼¿ÉZÅ È

JK813926

,

JK813927

,

JK813929

Ze

JK813933

,

JK813935

Ze

JK813937

,

JK813939

Á ,

JK813940

|¼

0Ze )

YÌ£Ä]

JK813939

(

Ì¿Â¸¯µÂ{

Ã

½|

Á~]

Ä¿YÂmµZu{

|¿|Ê]ZË{Ê¿

.

¹|¾ËY ÄmÂeZ],Ä]Ze

ºÅ]Â¿¾ËY½{Â]Ë|]Ä]

ÁÀ¯

{Â^¿

·Z»

È Ê¸^«

{Â^¿Zf¿YYÁ{

.

YÃ{Z¨fYZ],Ä ·Z»¾ËY{

Á

DDRT-PCR

½ Y É{Y| e , ZÅ

Ã| ½ZÌ] É ]

Ä

Â

ºÅ]µÂ{ËZ¼f»

À¯

Ì·ÁYÉZÅ È Z]Z»{Â°ËeoZ«

Ä¿YÂm µZu { Á~]

ÄË Á Ê¿

ÄmÂ³ ÉZÅ Ê´¿§

ZZÀ

Ë

| Ê .

½ ¾ËY fÌ]

ÃÁ³ Z] ZÅ É{¯Z¯ ÉZÅ

oZ« Ä¸¼m Y ¦¸fz» cY{ÂmÂ» { ¦¸fz»

^e» ZÅ

|¼Ä¯|¿|ÄfyZÀ

0Ze

{

dyÂ

ZÁ µZÀ´ÌµZ¬f¿Y,

¾Ì]Á½Á{

Ê·Â¸

ºÅ], XeÁaµZ¬f¿Y,½Z]Ì»Z]À¯

,¾Ì

¼me È

¾ÌXeÁa ,Z£ ¶yY{ Ä] {YÂ» {ÁÁ ,ZÅ ZËÂa

Ë Ê

¾Ìf¯Y µZ §Ì£ ªË Y ˺

¾ÌXeÁa ½{¯

ÉZÅ

ADF/cofilin

Z¬] Á | µfÀ¯ , É

d¯u ,Ê·Â¸

¾ÌXeÁa Z£ ½Á{ ÉZ§ ¶yY{ ZÅ Ë

,É|À¯ÂfÌ» Ê

ÉZ¼Ì]

YË ÉZ¼Ì] c| Á Ê]Á°Ì» Ê YË

Ä] c{Z ,Ê

,cYuÄm{½Âr¼ÅÊÌv»cYÌÌ¤e ,ÄfË|ÌY,Z§

Y~£ dÌ Á Á Ê¿ÂË c|«

Ë

¶¬¿ ¶ÌÆe ,Ê

¾Ì] µZ¬f¿YÁ

µÂ°·Â» µZ¬f¿Y ,ÄfÅ Á ºÔaÂfÌ

¾Ì] ÊfË ÉZÅ

¾ÌXeÁa{¯Z¯ºÌÀe,ºÔaÂfÌÁÄfÅ ºÌ¬e,ZÅ

À¯YÁ { Ëe ,Ê·Â¸

Ì¼ e ,±Â·Z¿M ÉZÅ

µÂ°·Â»

\ÌMÉZÅ

|Ë{

Ç DNA

{ÊeZÌu{¯Z¯´Ë{Á

fz»cY{ÂmÂ»

|¿Y{¬¿¦¸

.

½Z¿Ê¸^« cZ ·Z»{

½¾ËYYÊ ]Ä¯dYÃ|Ã{Y{

ºÅ]{ZÅ

À¯

ÉZÅ

ºÅ]Ä¸¼mYÄ]Z»

ÃZÌ³Z]Z»{Â°ËeÀ¯

)

Samolski

et al., 200Rubio et al., 2012 Chacon et al.,

(2007

ºÅ]Á

À¯

oZ«

- ºÅ{ÃZÌ³ YËÂ°Ì»ÊfË

Ë Ê

)

Menotta et al 5HTXHQDet al

Voiblet et al., 2001

( Ê¿ÉÓZ]½ZÌ]ÁºÌÀeÉYY{

Ã{Â]

|¿Y ) µÁ|m .(

¾ÌXeÁa

secretion-related GTPase

Ã|nÅ ÄËZ»Y| ]dZ

µZu{Á~]Ä]Z»{Â°ËeÊ¿

Ä¿YÂm ÄmÂ³Ê¿

Ë{Ê´¿§

|Ê]Z . Ê]{

Ê¸^«ÉZÅ

)

Chacon et al., 2007

( Ê¿Z»

Ë Ä¯

È ÄrÅZÌ³ ÉZÅ

1. Actin dynamics

ÄmÂ³ Z] Ê´¿§

ÈËÂ

ÄËZ»

|Ê¿

, Ì·ÁY¶uY»{½M½ZÌ]t

È

Ì¿Â¸¯

Ã

|

½

d§ZË ËY§Y ]Y] Á{ Y Ì] ÄË

. ºÅ] {

À¯

YËÂ°Ì»

Ë oZ« Ê

Glomus mosseae

Ë Z]

È ÃZÌ³

É¨ m )

Requena et al., 2002

( ºÅ Ê ] Ä¿Z

ÉZÅ

Z]^e»

GTPase

ÓZ]t

Ë Y½½ZÌ]ÁºÌÀeYÊ

{

¹ÂÌ¸Ì»

ÃZÌ³Z]Z¼eY¶^«¶uY»{Ì³{ÉZÅ

Ê» d]Zi ¾ËY Á {Y{ ½Z¿

{ ¾ÌXeÁa ¾ËY Ä¯ |À¯

µZÀ´Ì

Ê·Â¸ ±» Á | ¦«Âe µfÀ¯ dÆm ÊÅ{

Ä»Z¿]

Ã| ÉË

{ ºÅ] Â»

®Ë [ZÌ£ { À¯

{Y{ d·Zy{ ½Z]Ì» ÃZÌ³ Y µZÀ´Ì

. Ê]

½ ¬¿

CDC42

)

®Ë

small GTPase

(

¶°{

ÂeÁÉÌ³ È

]Y

È YËÂ°ËZ»Âf¯Y Ë

oZ« Ê

Tuber borchii

ÃZÌ³ Z]

)

Menotta et al., 2007

( {Y{½Z¿

{½¾ËY½ZÌ]Ä¯

vf»{YÂ»Á½Z]Ì»Âu È

Ë

È Ä§ZY

Ìv»Ä]Ã|

d§ZË ËY§Y ]Y] lÀa Á Á{ \Ìee Ä] d¯

.

¾ËY

Ê]

{YÂ¿Zy ¾ËY Ê·Z¼fuY ¬¿ ZÅ Ç

{ZnËY { Ê¿

dÆm YmYÊÅ{

É Ê·Â¸¶yY{

ÄË|¨u,˻

ÁÉY

¶°

Ì³ ºÅ] É oZ« À¯

- oZ« { Y ÄË

ÉZÅ

ÃÌ¿Â¸¯

|ÀÀ¯

Ç Ê»½Z¿ÊÅZÌ³

|Å{

.

¾ÌXeÁa ÉZÅ

fatty acid desaturase

,

lipid

phosphate phosphatase

Á

phospholipase A2

Ã|nÅ

ÄËZ»Y| ]dZ

µZu{Á~]ÁÄËÄ]Z»{Â°ËeÊ¿

Ä¿YÂm

| Ê]ZË{ Ê´¿§ ÄmÂ³ Ê¿

. Ê¸^« cZ ·Z» {

)

Chacon et al 5XELRet al., 2012

(

Ì¿

¾Ë|Àq Ä «

Ã| ½ZÌ] Ê·YÂe Á

Z] ^e»

dyÂ

ZÁ

|ÌbÌ·

Ä¸¼m Y ZÅ

fatty acid hydroxylase

,

sterol

desaturase

,

acetyl-CoA acetyl transferase

,

lipoic

acid synthetase

Á

3-ketoacyl-acyl carrier protein

reductase

Ì·ÁY¶uY»{

È ºÅ]

ËZ]Z»{Â°ËeÀ¯

È

ÄrÅZÌ³ ÄmÂ³ ÉZÅ

| Z¬·Y Ê´¿§

.

¾ËY Y Êy]

¾ÌXeÁa ] ÃÁÔ ZÅ ÉZfyZ ÉYmY Y Ä°ÀËY

Z£ ÉZÅ|ÌbÌ·Â¨§

É Ê·Â¸

¿Y µZÀ´Ì µZ¬f¿Y { |

,µÂ¸ Ä] µÂ¸ cZZ^eY ºÌÀe ,Ê·Â¸

dyÂ

ZÁ

¶yY{

{½{¯¶¼ªËYcmZÆ»,Ê]qÊ·Â¸

2. Cell polarity

نسب‏شناسی ژنی برای قطعه ‏توالی‏های افتراقی بیان‌شده Trichoderma harzianum در طول کلونیزه‌شدن اسپرموسفر و سطح ریشة گوجه‏ فرنگی

\¿

Ä «ÉY]Ê¿ÊZÀ

Ê·YÂe

½ZÌ]Ê«Yf§YÉZÅ

|

Ç

µÂ{

Ì¿Â¸¯

Ã

½|

ËtÁ¨Â»bY È

ÄmÂ³ Ê´¿§

.

.

\¿

Ä «ÉY]Ê¿ÊZÀ

½ZÌ]Ê«Yf§YÉZÅ

|

µÂ{

Ì¿Â¸¯

½|

ËtÁ¨Â»bY È

ÄmÂ³ Ê´¿§