A Comparison Survey on Native and Denaturation Conditions for Solubilization and Purification of Toxocara canis C-type Lectin Recombinant Protein

(1)

Journal of Veterinary Research 157

J Vet Res, Volume 78, Number 3, 2023, 157-165

A Comparison Survey on Native and Denaturation Conditions for Solubilization and Purification of Toxocara canis C-type Lectin Recombinant Protein

Parmida Malekzadeh^1, Seyed Hossein Hosseini^2, Fateme Jalousian^2, Mohammad Akrami^3, Narges Amini Nia^2

1 Graduated from the Faculty of Veterinary Medicine, University of Tehran, Tehran, Iran

2 Department of Parasitology, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tehran, Tehran, Iran

3 Department of Pharmaceutical Biomaterials and Medical Biomaterials Research Center, Faculty of Pharmacy, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran

Received: 15 March 2023, Accepted: 22 May 2023

Abstract

BACKGROUND: Toxocara canis C-type lectin (T. canis-CTL) is the main protein part of the secretory-excretory product secreted by Toxocara canis infective larvae. T. canis-CTL can stimulate immune response-mediated regulatory T lymphocytes, increase the FOXP3+ cells population, and reduce severe inflammatory responses. T. canis-CTL is a promising candidate for immune modulation in some autoimmune diseases, deserving further investigation.

OBJECTIVES: The current research aimed to purify the recombinant T. canis-CTL under denaturation and native condition to increase exploration and maintain biological activity.

METHODS: The expression vector, pET32a was constructed with the partial sequence 660bp of T. canis-CTL and expressed in E. coli BL21 (DE3). T. canis-CTL protein expression was induced by IPTG (1 mM) at 37C after 6 h. In this study, different buffers were used for cell explosion and recombinant protein solubilization, including lysis buffer with urea (8 M, pH=8) and lysozyme enzyme as well as lysis buffer with Imidazole (0.01 M) and lysozyme enzyme, and previous buffers in addition to sonication. The effect of these buffers was evaluated in bacterial cells explosion, using Gram-staining and microscopic examination. Recombinant T. canis-CTL protein was extracted and purified under denaturation and native condition using Ni-NTA affinity chromatography by agarose and sepharose resin. A New Zealand male rabbit was immunized with the recombinant protein to evaluate the bioactivity of the protein.

RESULTS: Lysis buffer with urea (8 M, pH=8) and lysozyme enzyme, in addition to sonication, provided acceptable results, and an additional amount of recombinant T. canis-CTL protein was secreted in the buffer. Protein purification under denaturation conditions with Ni-NTA agarose affinity chromatography also provides further recombinant protein. Most of the induction of recombinant T. canis-CTL with 41 KDa molecular weight was collected 6 h after induction at 37C. Dot-blot results illustrate the brown dot, which showed a 1:500 titer of specific IgG polyclonal antibody has developed in the sera of rabbits immunized with T. canis-CTL recombinant protein.

CONCLUSIONS: The denaturation condition did not affect the biological activity of the T. canis-CTL recombinant protein and can recover a further amount of recombinant proteins.

Keywords: C type Lectin, Denaturate, Extraction of protein, Native conditions, Toxocara canis

Publisher: University of Tehran Corresponding author: Seyed Hossein Hosseini, Tel/Fax: +9821-61117073 How to cite this article:

Figure Legends and Table Captions

Figure 1. The SDS-PAGE results of T. canis-CTL expression with 41 KDa molecular weight in E. coli strain BL21(DE3) during first to sixth hours after induction with IPTG (1 mM).

Figure 2. The results of microscopic examination after cell destruction of T. canis-CTL recombinant protein in E. coli strain BL21(DE3) (Gram staining, 100x).

Figure 3. The SDS-PAGE results of T. canis-CTL recombinant protein extraction and purification, 41 kDa MW.

Figure 4. Dot blot analysis of immunized and non-immunized rabbit sera against T. canis-CTL with DAB substrate.

10.22059/jvr.2023.353071.3316 20.1001.1.20082525.1402.78.3.1.7

Malekzadeh P, Hosseini SH, Jalousian F, Akrami M, Amini Nia N. A Comparison Survey on Native and Denaturation Conditions for Solubilization and Purification of Toxocara canis C-type Lectin Recombinant Protein. J Vet Res, 2023; 78(3): 157-165. doi: 10.22059/jvr.2023.353071.3316

(2)

هرود 87 هرامش ، 3 ، 2041 ، 261 - 218

سررب ی اقم هسی یا ارش طی بط یعی لولحم رد هتشرساو و زاس

ی لخت و صی ئتورپ نی کرتون ی ب

تکل نی س عون ی نک اراکوسکوت سی

مراپ ادی کلم

2هداز

، س نیسحدی سح

1ینی

، سولاج همطاف

1نای

، مرکا دمحم

3ی

، ما سگرن ینی

1این

کشزپماد هدکشناد هتخومآ شناد8

،ی ا ،نارهت ،نارهت هاگشناد ناری

لگنا هورگ2

سانش

،ی کشزپماد هدکشناد

ز هورگ3

تسی وراد داوم

،یی زاسوراد هدکشناد

،ی کشزپ مولع هاگشناد ی

ا ،نارهت ،نارهت ناری

:تفایرد خیرات 22

دنفسا هام 8248 ، شریذپ خیرات :

8 دادرخ هام 8242

هدیکچ

هنیمز هعلاطم : یس عون نیتکل سینک اراکوسکوت

تیسوفنل کیرحت و ینمیا متسیس لیدعت یلصا لماع یاه

یم نابزیم رد یمیظنتT دشاب

تیعمج شیازفا ثعاب و

لولس

+یاه Foxp3

Forkhead box P3) یم باهتلا شهاک و(

یم و دوش یرامیب نامرد رد ییوراد یادیدناک ناونع هب دناوت .دوش یفرعم نمیادوخ یاه

فده : یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ صیلخت هسیاقم سینک اراکوسکوت

یعیبط و هتشرساو طیارش ود رد شیازفا روظنم هب

یم نآ یتسیز تیلاعف ظفح و یبایزاب دشاب

.

شور راک : لوط هب یلاوت کی 664

تفج یس عون نیتکل زا زاب سینک اراکوسکوت

دیمسلاپ رد pET32-a

یرتکاب رد و زتنس یلک ایشیرشا

BL21(DE3) یامد رد

33 هجرد

یتناس تدم هب دارگ 6

اب تعاس اتب لیپورپوزیا -

ید - 8 - دیزوناریپوتکلااگویت (

)IPTG 8 یلیم زیل رفاب رضاح هعلاطم رد .دش نایب و اقلا رلاوم هروا هدننک

1 رلاوم (pH=8) رفاب و

لوزادیمیا یواح 48

/ 4 میزوزیل اب هارمه رلاوم 8

یلیم یلیم/مرگ لولس نتسکش یارب رتیل لولحم و ییایرتکاب یاه

اب هارمه قوف یاهرفاب .تفرگ رارق هدافتسا دروم نیئتورپ یزاس

ک هکینوس لولس نتسکش روظنم هب ،ندر ملا و دش هدافتسا یرتکاب یاه

گنر اب و هیهت یپوکسورکیم یاه طیارش تحت هدش جارختسا بیکرتون نیئتورپ .دندش یسررب مرگ یزیمآ

زا هدافتسا اب یعیبط و هتشرساو زر

ی ن لکین - یرتولیرتین کیتسا و زوراگآ دیسا زر

ی ن لکین - یرتولیرتین کیتسا زورافس دیسا پ هتیسینژونومیا یبایزرا .دش صیلخت

اب بیکرتون نیئتور

تاد شور .دش ماجنا بیکرتون نیئتورپ اب هدش شلاچ شوگرخ مرس اب تلاب

جیاتن : یلوکلوم نزو اب نیئتورپ نایب رادقم نیرتشیب 28

یامد رد اقلا زا سپ مشش تعاس رد نوتلادولیک 33

یتناس هجرد اب دارگ 8IPTG یلیم ش لصاح رلاوم هروا رفاب .د

1 رلاوم

(pH=8) میزوزیل یواح 8

یلیم یلیم/مرگ زا هدافتسا اب هتشرساو طیارش تحت نیئتورپ صیلخت .دش جارختسا بیکرتون نیئتورپ زا یدایز رادقم ،ندرک هکینوس اب هارمه رتیل ر

ز ی ن

لکین - زوراگآ تاد شیامزآ جیاتن .دش یبایزاب زورافس لکین نیزر هب تبسن یرتشیب نیئتورپ رادقم یتنآ روضح زین تلاب

یداب (IgG Immunoglobulin G هیلع یصاصتخا )

یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ سینک اراکوسکوت

تقر ات هدش نمیا شوگرخ مرس رد 8:544

.داد رارق دییأت دروم ار

هجیتن یریگ ییاهن : رب هتشرساو شور زا هدافتسا یتسیز تیلاعف

ئتورپ .دیدرگ یبایزاب ییایرتکاب متسیس رد نیئتورپ یرتشیب رادقم شور نیا اب و تشادن یفنم ریثأت نیئتورپ نی

یس عون نیتکل بیکرتون سینک اراکوسکوت

یم شور نیا اب هدش صیلخت .دریگ رارق هدافتسا دروم فلتخم فادها اب دناوت

تاملک یدیلک : ئتورپ جارختسا ی

ن نک اراکوسکوت ، ی

س

، ارش ی ط بط ی ع ی

، ارش ی ط هتشرساو

، تکل ی ن س عون ی

پک ی ار ی

©ت هلجم قحت ی تاق کشزپماد ی : سرتسد ی

؛دازآ پک ی رادرب ی

، زوت ی ع و رشن ارب ی هدافتسا لماک اب رکذ عبنم دازآ تسا

.نارهت هاگشناد تاراشتنا هسسؤم :رشان

ون ی هدنس لوئسم س : نیسحدی سح ینی

، لگنا هورگ سانش

،ی کشزپماد هدکشناد

همدقم

سینک اراکوسکوت مرک

درگ گس یم یناهج راشتنا اب زا نارادناتسپ زا یدایز دادعت هک ،دشاب

یم هدولآ زین ار ناسنا هلمج .دنک

مهم زا سیزایراکوسکوت یرامیب نیرت

کرتشم یلگنا یاه یم ماد و ناسنا

یفرعم هعماج یمومع تشادهب یارب یدیدهت ناونع هب و دشاب

تسا هدش (

8 ) . مخت اه ی تنوفع دازون یواح از

م ی نابز اه ی ( لماح نتاراپ )کی هرب ،واگ ،غرم لماش ،

کوخ ، ار شوم و ناسنا زین

م هدولآ ی

،دننک

اما اهدازون نابزیم رد لماح یاه

من غلاب ی دنوش ط زا و ر ی ق م ترجاهم مرن تفاب ی

دننک و ارب ی نلاوط تدم ی

یتح لاس ات اه ندب رد قاب ی

م ی دننام ( 2 ) سینک اراکوسکوت . ناونع هب

ی ک تامن و د ارب ی نلاوط تدم ی

رد تفاب اه و یگدنز ندب ی س زا

ی متس ا ی نم ی م ی نابز ارف یم ر .دنک

10.22059/jvr.2023.353071.3316 20.1001.1.20082525.1402.78.3.1.7

(3)

هلجم یکشزپماد تاقیقحت هرود▐

87 هرامش 3 ، 2041

859 یس عون نیتکل ی

ک ی لگ زا ی ئتورپوک ی ن اه یی تسا یم حشرت دایز رادقم هب لگنا نیا یدازون هلحرم رد هک لگنا یاهدازون .دوش

ت اراکوسکو

سینک م تفاب رد ی

نابز اه ی لماح

، ئتورپ ی ن اه یی هداوناخ زا لگ

ی ئتورپوک ی ن اه هلمج زا تکل ی ن عون یس توک زا ار ی لوک م عفد دوخ ی

دننک ( 3 ).

یعفد تلاوصحم -

یحشرت هنوگ اراکوسکوت یاه

نیتکل زا ًاتدمع هدش لیکشت اه

هک ،دنا فده هدنریگ یارب یبسانم یاه ل یاه

نیتک

ناسنا یس عون یم

دنشاب نیا اب ، نریگ زا یعیسو فیط ،لاح هد

یاه نابزیم یس عون نیتکل هنوگ هک اه

اراکوسکوت یاه م صیخشت ار

ی ،دنهد

تسا هتخانشان زونه (

2 ).

ل تک ی ن یاه عون ،یس هداوناخ ا ی لگ زا ی ئتورپوک ی ن اه ی سلک هب هتسباو ی

م یم ورملق رد هک دنشاب خشت

ی ص هوبرک ی تارد

( Carbohydrate-Recognition Domains هب )

ونوم لا و ی راکاسوگ ی اهد م لصتم ی وش نیئتورپ نیا .دن یم اه

ناوت ن ازیرامیب لماوع د ار

و ییاسانش رد

لباقتم شنکاو لولس

اه ک تکرش ن دن . هداوناخ ئتورپ ی ن اه ی اراد ی ورملق تکل ی ن عون

،یس نارادناتسپ رد هک ی

ب م ناونع ه ی

نابز

هدش یفرعم لماح دنا

، رد خساپ اه ی ا ی نم ی دنراد شقن .

تکل ی ن عون سینک اراکوسکوت یس (

T.canis-CTL ی )

ک ی لگ زا ی ئتورپوک ی ن اه ی

هدش حشرت ب دوتامن نیا دازون زا

ا 289 دیسا هنیمآ و واح ی ی ک ورملق خشت ی ص هوبرک ی تارد تسا لاح رد ، ی هک نیتکل اه رد یس عون ی

خرب ی تامن و دننام اهد موکینلایس اموتسولیکنآ

سوناکیرما روتاکن ، سوتروتنوک سوکنومه ،

سناگلا سیتیدبارونس ، اراد

ی د و یا دنچ ورملق

خشت ی ص هوبرک ی تارد یم دنشاب ا . ی ن هداوناخ نیئتورپ زا لگنا رب هولاع اه

یاهدوتامن و یمرک یاه زدازآ

ی ریاس رد ح ی تاناو ب ی رهم ه و

هرهم ناراد ی تفا هدش .دنا تکل ی ن یس عون سینک اراکوسکوت هب

ناونع ی ک ئتورپ ی ن ا رد مهم ی نم ی از لباقتم شنکاو و یی م

ی بز نا - رد لگنا

تسا هدش هتفرگ رظن .

لاوت ی اه ی تکل ی ن یس عون سینک اراکوسکوت اب

لاوت ی اه زا یی ئتورپ ی ن اه ی اراد ی تکل ی ن عون هک یس د ر خساپ اه ی

ای نم ی نارادناتسپ مه ،دنراد شقن

هاگیاج رد ار هدش تظافح رایسب قطانم لصاح جیاتن و دندش فیدر راهچ

س ی ئتس ی ن ناشن دنداد د هک و

پ ی دنو د ی فلوس ی د یم یتایح ،نیئتورپ راتخاس لیکشت یارب و دنداد لیکشت ار ی .دنشاب

نیئتورپ یس عون نیتکل کوت

سینک اراکوس راهچ

تسا عون

، نیئتورپ راهچ و کی عون یعفد یاه

- یحشرت یم دنشاب نیئتورپ نیب رد کی عون تظلغ . یعفد یاه

- تسا رتشیب یحشرت نیا .

نیئتورپ لیدعت رد اه متسیس

شنکاو شهاک ببس و دنراد شقن ینمیا رد یباهتلا یاه

یم نابزیم .دنوش

هدننکدک نژ ل نیئتورپ

عون نیتک

نک اراکوسکوت یس سی

تنوفع دازون رد یصاصتخا روط هب و تسا هدش تظافح رایسب یلاوت یاراد یم نایب از

دوش ( 8 ) ، نیا نیئتورپ یم ناوت د

لولس شیازفا روظنم هب یاه

رد یمیظنتT یرامیب

نمیادوخ یاه یباهتلا یاهروتکاف شیازفا زا یشان

ب ه ناونع ینامرد نیئتورپ کی م

درو

یگرارق هجوت .در

نیئتورپ مامت صیلخت یارب ب ناسکی شور کی اه

ه راک یمن فده هب هتسب و دور هعلاطم

صلاخ لحارم و طیارش ، تورپ کی یزاس

نیئ

هنیهب یتسیاب دشاب توافتم رگید نیئتورپ اب نیئتورپ کی صیلخت دنیآرف تسا نکمم ،نیاربانب .دوش یزاس

( 5 ) . هب یبایتسد روظنم هب

نیئتورپ صولخ یلااب حطس

ًلاومعم ، کینکت نوینآ و ینویتاک لدابت دننام سرتسد لباق یاه ی

هدودحم رد و فلتخم یاهpH

یفارگوتامورک

ب یلیامت ه یم راک .دنور نوی زا هدافتسا یلیامت یفارگوتامورک ساسا نیئتورپ صیلخت یارب یزلف یاه

یه هلابند یاراد بیکرتون یاه ینیدیتس

.تسا نیدیتسیه بیقر لوکلوم ناونع هب لوزادیمیا تظلغ بیش زا یعیبط تلاح رد نیزر هب هدش لصتم بیکرتون نیئتورپ یزاسادج یارب

رییغت زا هتشرساو طیارش رد و یاربpH

یم هدافتسا رظن دروم نیئتورپ یزاسادج دوش

( 6 ) تظافح و یبایزاب شیازفا رضاح هعلاطم رد .

تیلاعف یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ یتسیز سینک اراکوسکوت

و هتشرساو طیارش ود رد تفرگ رارق یبایزرا دروم یعیبط

.

داوم و راک شور

نیئتورپ نایب یس عون نیتکل بیکرتون

سینک اراکوسکوت :

یرتکاب رضاح هعلاطم رد E.coli BL21(DE3)

دیمسلاپ یواح

نژ یاراد یس عون نیتکل

سینک اراکوسکوت دیمسلاپ یواح یرتکاب نیا .دش هدافتسا بیکرتون نیئتورپ صیلخت و نایب روظنم هب

بیکرتون رد

یاراد یناترب ایرول عیام طیحم یپمآ

نیلیس 844 یلیم/مرگورکیم رتیل

( ناریا ،اناد یزاسوراد تکرش )

سپ و دش هداد تشک

زا 81 تعاس 2444 هب نآ زا رتیلورکیم 24

یس یناترب ایرول عیام طیحم یس یپمآ یاراد

نیلیس رادرکیش روتابوکنا رد و هفاضا (

344

~

)هقیقد رد رود یامد رد

33 یتناس هجرد تشذگ زا سپ و دش هداد رارق دارگ

5 / 8 ات 2 یرون بذج تعاس نآ

هب 6 / 4 ات 3 / 4 دیسر

(OD600nm= 0.6-0.7)

؛ سپس 244 لولحم زا رتیلورکیم 844IPTG

یلیم رلاوم ( Sigma-Aldrich, Germany )

طیحم هب تشک

ییاهن تظلغ( هدوزفا هدافتسا درومIPTG

8 یلیم رلاوم تدم هب و )دوب 6

یامد رد تعاس 33

یتناس هجرد رادرکیش روتابوکنا رد دارگ

(4)

مراپ ادی کلم هداز ناراکمه و لخت\

صی ئتورپ نی کرتون بی تکل نی س عون ی نک اراکوسکوت سی

( 344 .دش هداد رارق )هقیقد رد رود~ سپ

زا نامز تدم 6

تشک طیحم همه تعاس هلول نورد ار

نوکلاف یاه 85

یلیم و هتخیر یرتیل

تدم هب 24 تحت هقیقد 2444

هقیقد رد رود بوسر و دندش ژوفیرتناس

عمج لصاح .دیدرگ یروآ

8444 رد تشک طیحم رتیلورکیم

تعاس عمج نایب فلتخم یاه میدس لژ اب یسررب نامز ات و یروآ

لیسدود تافلوس - یلپ لیرکا رزیرف رد دیمآ 24

- یتناس هجرد دارگ

.دش یرادهگن یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ جارختسا سینک اراکوسکوت

: یرتکاب تشک زا لصاح بوسر تون دیمسلاپ یواح

اقلا بیکر

تدم هب ،هدش 24

بوسر هب سپس .دش جراخ دامجنا تلاح زا ًلاماک و هداد رارق قاتا یامد رد هقیقد لصاح

زا 85 یلیم تشک طیحم رتیل

8544 هروا هدننکزیل رفاب رتیلورکیم 1

بوسر هب نینچمه و )تافسف نژوردیه ید میدس ونوم ،سیب سیرت ،هروا( رلاوم زین رگید

8544

لوزادیمیا هدننکزیل رفاب رتیلورکیم 48

/ 4 و دیدرگ هفاضا )تافسف نژوردیه ید میدس ونوم ،دیارلک میدس ،لوزادیمیا( رلاوم رد سپس

تدم هب قاتا یامد 24

میزوزیل نآ زا سپ .دنتفرگ رارق دیدش ناکت دروم ،دوش یریگولج نآ ندرک فک زا هک یروط هب هقیقد 8

یلیم یلیم/مرگ ( رتیل

DNA Biotech, Iran لولحم هب )

هفاضا لصاح یاه هب و دش

تدم 34 لقتنم خی یور هب هقیقد دش

رد سپس و

سد زا هدافتسا اب خی ترواجم کینوسارتلوا هاگت

(Hielscher, Germany) 6

لکیس 84 هیناث تردق اب یا 844

و تاو 84 تحارتسا هیناث

یرتکاب هراوید ندش هتسکش زا ات تفرگ تروص هکینوس لکیس ره نیب هراوید ندش هتسکش دییأت روظنم هب .دوش لصاح نانیمطا اه

نیئتورپ لماک یزاسدازآ و یرتکاب من ،هدش دیلوت لولحم یاه

هنو ریز رد اه تفرگ رارق یسررب دروم پوکسورکیم

پویتورکیم سپس . هب اه

تدم 82 رد هقیقد 82444

یامد رد هقیقد رد رود 2

هجرد یتناس ار دوب لولحم نیئتورپ یواح هک ییور عیام و دندش ژوفیرتناس دارگ

میدس لژ اب یسررب تهج لیسدود

تافلوس - یلپ لیرکا دیمآ 82 عمج ،دصرد د و یروآ

رزیرف ر 24 - یتناس هجرد بوسر و هداد رارق دارگ

یاه

یرتکاب هشلا زا لصاح .دندش هتخیر رود اه

زا هدافتسا اب هتشرساو طیارش تحت نیئتورپ صیلخت نیزر

Ni-NTA agarose

و

Ni-NTA Sepharose

: بوسر هب یواح یاه

هدننکزیل رفاب هروا

1 رلاوم ( 1

= )pH

،جارختسا هلحرم رد نیزر

Ni-NTA agarose

(

Qiagen, Germany

) و

Ni-NTA Sepharose

(

Noavaranzist, Iran

) دش هفاضا تدم هب و

34 سپس .دندش کیش یمارآ هب خی یور هب هقیقد 644

نوتس هب لولحم نیا زا رتیلورکیم

تدم هب و هدرک لقتنم 5

تحت هقیقد 234

نوتس .دندش ژوفیرتناس هقیقد رد رود تسش رفاب زا هدافتسا اب اه

وش ( 3 / 6

= ) pH

تدم هب 2 هقیقد

تحت 194 لح رفاب تیاهن رد .دندش ژوفیرتناس هقیقد رد رود هدنوش

( 5 / 2

= )pH

نوتس هب تشذگ زا سپ و دش هفاضا اه 5

یور رب هقیقد

تحت خی 194 هقیقد رد رود تدم هب

2 لولحم .دندش ژوفیرتناس هقیقد ره زا هدش جراخ یاه

هلحرم ره زا سپ نوتس ،

عمج و یروآ ب یور ر

میدس لژ لیسدود تافلوس - یلپ لیرکا دیمآ 82 یساموک یزیمآ گنر اب و هدش زروفورتکلا دصرد یسررب ولب

دش .دن

زا هدافتسا اب یعیبط طیارش تحت نیئتورپ صیلخت نیزر

Ni-NTA agarose

و

Ni-NTA Sepharose

: بوسر هب یواح یاه

لوزادیمیا هدننکزیل رفاب 48

/ 4 هلحرم رد رلاوم جارختسا

نیزر

Ni-NTA agarose

(

Qiagen, Germany

) و

Ni-NTA Sepharose

(

Noavaranzist, Iran

) دش هفاضا تدم هب و

34 سپس .دندش کیش یمارآ هب خی یور هب هقیقد 644

نوتس هب لولحم نیا زا رتیلورکیم

نوتس و هدش لقتنم تدم هب اه

84 تحت هیناث 8444

پ .دندش ژوفیرتناس هقیقد رد رود نوتس نآ زا س

وشتسش رفاب زا هدافتسا اب اه

لوزادیمیا 42

/ 4 رلاوم تدم هب 84 تحت هیناث 8444

لح رفاب تیاهن رد .دندش ژوفیرتناس هقیقد رد رود هدنوش

/ 4 رلاوم هب

نوتس دش هفاضا اه تشذگ زا سپ و

5 خی یور رب هقیقد 84

تحت هیناث 8444

دندش ژوفیرتناس هقیقد رد رود لولحم .

زا هدش جراخ یاه

ره هلحرم ره زا سپ نوتس

، عمج و یروآ یور رب میدس لژ لیسدود

تافلوس - یلپ لیرکا دیمآ 82 یساموک یزیمآ گنر و دصرد یسررب ولب

دش .دن نیئتورپ اب شوگرخ ندرک نمیا :هدش صیلخت بیکرتون

هتفه هد یدنلزوین دیفس رن شوگرخ ود هیهت یا

دیدرگ . رادقم

نیئتورپ جوم لوط رد دروفداربورکیم شور اب یعیبط و هتشرساو شور اب هدش صیلخت یاه 595

رتموتفورتکپسا ورکیم هاگتسد اب رتمونان

(

Bio-Rad, USA

هزادنا ) .دش یریگ پ زا

یس عون نیتکل بیکرتون نیئتور اراکوسکوت

سینک هتشرساو شور اب هدش صیلخت ب

نازیم ه 544

رتیلورکیم (

254 مرگورکیم رد هدش صیلخت بیکرتون نیئتورپ

544 رفاب رتیلورکیم (

2 / 3

= )pH

و هدامآ (PBS

مجح اب ربارب ( 8:8 ) اب

م( دنورف لماک تناوجدا ؤ

مرس و نسکاو تاقیقحت هسس )ناریا ،یزار یزاس

.دش هیهت زا هدافتسا اب قیرزت ره یارب هدش هیهت تایوتحم

یاهرتلیف 25

/ 4 دش لیرتسا یرتمورکیم ( دن

Membrane, USA

ود رد یدلجریز تروص هب سپس .) ماجنا قیرزت شوگرخ فتک تشپ هیحان

(5)

87 هرامش 3 ، 2041

868 رد .دش هلصاف 82 موس و مود قیرزت ،زور )قیرزت کی مادکره موس و مود هتفه(

اب 825 مرگورکیم شور اب هدش صیلخت بیکرتون نیئتورپ

هتشرساو رد

544 رفاب رتیلورکیم (

2 / 3

= )pH

وPBS

544 صقان تناوجدا رتیلورکیم م( دنورف

ؤ مرس و نسکاو تاقیقحت هسس ،یزار یزاس

.دش ماجنا )ناریا قیرزت و دوب هدش هتفرگ رظن رد لرتنک ناونع هب مود شوگرخ

اه دننام ًاقیقد شوگرخ

یلبق اب لیرتساPBS

.دش ماجنا زا

یریگنوخ قیرزت نیرخآ زا سپ هتفه کی شوگرخ ود ره ،دمآ لمع هب

مرس اه نامز ات و ادج آ ماجنا

تاد شیامز تلاب

یامد رد 14 - هجرد

یتناس دش یرادهگن دارگ دن

.

ی دنورف لماک تناوجدا ک

ندعم نغور ی

یم دشاب واح هک ی سناپسوس ی نو ی ام زا ی رتکابوک ی مو زولکربوت ی س هدش هتشک ب

ترارح ا

لولحم اب هارمه هک تسا ی

تنآ زا ی نژ T.canis-rCTL ، کی لکش هب

سلوما ی نو نغور رد بآ شوگرخ هب

نیا ،دش قیرزت اه سلوما

ی نو

ثعاب وقت ی ت خساپ ینمیا لولس ی هب لاروموه و یتنآ

نژ رزت ی ق ی یم ددرگ ام . ی رتکابوک ی اه ی رد دوجوم لماک تناوجدا

دنورف ، کام اهژافور

اس و ی ر لولس رزت لحم هب ار اه ی

ق م بذج ی نک ن هک د شنکاو تیوقت ثعاب ای

نم ی یم رگا ینغور نویسلوما نیا .دوش یرتکاب نودب

دشاب

یم هدیمان دنورف صقان تناوجدا ا .دوش

دنورف تناوجد (

لوا ی ن ههد رد دنورف لوژ طسوت راب 6222

دش هتخاس ات و )

ی نونک ک ی زا

فرصمرپ رت ی ن تناوجدا یم تاعلاطم رد هدافتسا دروم یاه هک دشاب

ارب ی زاسدازآ هتسویپ ی تنآ

ی نژ اه روظنم هب رحت

ی ک ا خساپ ی نم ی

وق ی اپ و ی راد یتنآ ربارب رد نژ

یم هدافتسا اه .دوش

ع ی ب لصا ی ا دنورف تناوجدا ی

ن م هک تسا ی

ا ثعاب دناوت ی

داج مولونارگ و ا هتلا رد با

قلت لحم ی ح دوش

، هب مه ی ن لد ی ل ارب ی رزت ی تاق لوا ی ه دنورف لماک تناوجدا زا و

ارب ی بناج ضراوع ندناسر لقادح هب روآدای زود ی

)رتسوب(

، صقان تناوجدا زا م هدافتسا دنورف

ی دوش ( 3 ).

تاد :تلاب 8 یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ زا رتیلورکیم نکاراکوسکوت

سی تظلغ اب هتشرساو طیارش تحت هدش صیلخت 892

مرگورکیم یلیم/

رتیل اب هتشرساو شور زا هدمآ تسد هب زر

ی ن لکین - یرتولیرتین کیتسا

زورافس دیسا ولسورتین یاهذغاک یور رب

زل

8 8

یتناس عبرم رتم (

،USA Bio-Rad

) هکل تدم هب و یراذگ 34

رفاب اب وشتسش هبترم ود .دش هبوکنا قاتا یامد رد هقیقد

TBST (Tris

Buffer Salin+Tween20)

45 / 4 تدم هب دصرد 84

یور رب دوجوم یصاصتخاریغ طاقن .تفرگ تروص یگتسهآ هب رکیش یور رب هقیقد

رفاب طسوت ذغاک 5 TBST

/ 4 یبرچ نودب کشخریش یواح دصرد 3

هب دصرد تدم

8 کیش یمارآ هب تعاس و

دودسم زا سپ .دندش

تشذگ 8 و هتخیر رود ار رکلاب عیام تعاس 2

رفاب اب راب 45TBST

/ 4 تدم هب راب ره و دصرد 84

مرس .تفرگ تروص وشتسش هقیقد

نمیا شوگرخ هک یشوگرخ مرس( لرتنک شوگرخ مرس و هدش

نیئتورپ اب

T.canis-CTL

تسا هدشن شلاچ تقر اب )

544 8:

هدش هفاضا

تدم هب و 8

یتنآ سپس .دش ماجنا لبق لحارم دننام وشتسش .دیدرگ هبوکنا مارآ تعرس اب رکیش یور رب قاتا یامد رد تعاس یداب

Goat

anti-Rabbit IgG

میزنآ اب هدش هگوژنک

HRP (RaziBiotech, Iran)

تقر اب 2444 8:

کیش یمارآ هب قاتا یامد رد و هفاضا اهذغاک هب

ا .دندش نی راب 3 هبترم ره( وشتسش هبترم 84

هک یلکش هب )هقیقد 2

رفاب لوا هبترم

TBST

45 / 4 رفاب اب رخآ هبترم و دصرد .دش ماجناTBS

زا 3 / 3 ید نیدیزنبونیمآ

DAB (Sigma-Aldrich, Germany)

دیسکارپ روضح رد هجیتن و هدافتسا میزنآ یارتسبوس ناونع هب نژوردیه

گنر هکل روضح مدع ای روضح زا سپ ی

85 - 5 .دیدرگ هدافتسا شنکاو ندرک فقوتم روظنم هب رطقم بآ زا نایاپ رد و دش هدهاشم هقیقد

.دنوش کشخ ًلاماک ات هداد رارق قاتا یامد رد ار اهذغاک سپس

جیاتن

لژ یور رب رضاح هعلاطم جیاتن میدس

لیسدود تافلوس - یلپ لیرکآ آ دیم 82 گنر اب دصرد یساموک یزیمآ

تنایلرب ولب هک داد ناشن

یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ نایب نازیم نیرتشیب سینک اراکوسکوت

یم لصاح اقلا زا سپ مشش تعاس رد ددرگ

( ریوصت 8 .)

اقلا زا سپ بیکرتون نیئتورپ جارختسا و

یس عون نیتکل سینک اراکوسکوت

، لولس زا هورگ کی رد صیلخت یارب یاه

ییایرتکاب زا

رفاب هروا 1 رلاوم ( 1

= )pH

رگید هورگ رد و رفاب زا

/ 4 رلاوم ناونع هب زیل رفاب

هدننک دش هدافتسا و

میزوزیل سپس 8

یلیم یلیم/مرگ رتیل

لولس ندرک هکینوس اب هارمه و دیدرگ هفاضا و هتسکش یرتکاب یاه

دراو هدش نایب بیکرتون نیئتورپ م

دش لولح .

فلتخم لحارم زا یرتکاب یلولس هراوید نتسکش

دش هیهت ملا هجیتن و

اب گنر هک داد ناشن مرگ یزیمآ رد

هروا یواح زیل رفاب 1

رلاوم

( 1

= )pH

میزوزیل و 8

کینوس اب هارمه

،ه یرتکاب مامت اه

هتسکش ( دندش ریوصت 2 - 2 ) و لوزادیمیا یواح زیل رفاب

48 / 4 رلاوم میزوزیل و 8

ندرک هکینوس اب هارمه

، ندش هتسکش ببس یرتکاب زا یدایز دادعت

اه ( دش یوصت ر 2 - 2 .)

(6)

رد اما ملا یرتکاب زا هدش هیهت یاه هروا یواح زیل رفاب رد اه

1 رلاوم ( 1

= )pH

و میزوزیل 8 یلیم یلیم/مرگ ( رتیل

ریوصت 8 - 2 ) زیل رفاب و

لوزادیمیا یواح 48

/ 4 و رلاوم میزوزیل 8 یلیم یلیم/مرگ رتیل

ندرک هکینوس نودب (

ریوصت 3 - 2 ) لولس زا یدایز دادعت رییغت نودب اه

.دندنام یقاب بیکرتون نیئتورپ جارختسا رضاح هعلاطم جیاتن رد تکل

ی ن عون س سینک اراکوسکوت ی اب

ل رفاب ی هدننکز هروا 1 رلاوم و ل رفاب ی هدننکز

/ 4 رلاوم ل طسوت ی زوز ی م ندرک هکینوس و یلپ لژ یور رب ،

لیرکا دیمآ 82 جارختسا نیئتورپ نازیم هک داد ناشن دصرد

رد هدش ل رفاب ی هدننکز هروا 1 رلاوم دوب رتشیب .

رد شور طیارش تحت صیلخت هتشرساو

زین رتشیب لصاح نیئتورپ رادقم دوب

( ریوصت 3 )

و رد هزادنا ورکیم شور اب یریگ زین دروفدارب

هک دش دییأت جیاتن نیا نیئتورپ

صیلخت زوراگآ نیزر اب هدش رساو طیارش تحت

هتش 335

رتیل یعیبط طیارش تحت و 853

و رتیل زورافس نیزر زا هدافتسا اب هتشرساو طیارش تحت

892

رتیل یعیبط طیارش تحت و 842

رتیل دمآ تسد هب رد بیکرتون نیئتورپ جارختسا جیاتن هسیاقم .

رارکت شور هک داد ناشن لقتسم یاه رارکت رضاح هعلاطم رد هدافتسا دروم صیلخت یاه

یم ریذپ ( دشاب وصت ری 3 - نوتس 3 و 2 .)

نمیا جیاتن یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ اب شوگرخ یزاس

سینک اراکوسکوت ب هتشرساو طیارش تحت هدش صیلخت

شور ا

تاد تقر ات شوگرخ مرس و دیدرگ یبایزرا تلاب 8:544

یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ اب سینک اراکوسکوت

تظلغ 892

رتیل ( داد شنکاو ریوصت

2 .)

ریوصت 2 . جیاتن SDS-PAGE نایب

نیئتورپ بیکرتون تکل ی ن عون س سینک اراکوسکوت ی یلوکلوم نزو اب

28 ولیک نوتلاد رد رتکاب ایشیرشا ی یلک BL21(DE3)

رد تعاس یاه مشش ات لوا (1h-6h)

اب اقلا زا سپ (IPTG

8 یلیم .)رلاوم

ریوصت 1 . ملا یپوکسورکیم یسررب جیاتن بیرخت زا هدش هیهت یاه

رتکاب ایشیرشا ی یلک BL21(DE3) گنر(

،مرگ یزیمآ ()100X

8 و 2 ییور لولحم بیترت هب )

یواح رفاب هدننکزیل هروا 1 رلاوم و ندرک هکینوس اب هارمه نامه و میزوزیل هتشرساو طیارش تحت

( ، 3 و 2 ) رفاب یواح ییور لولحم بیترت هب هدننکزیل

لوزادیمیا

/48 4 رلاوم و میزوزیل ندرک هکینوس اب هارمه نامه و .یعیبط طیارش تحت

(7)

87 هرامش 3 ، 2041

863

ریوصت 3 . جیاتن SDS-PAGE لخت و جارختسا

ی ص ئتورپ ی ن کرتون ی ب تکل ی ن س عون سینک اراکوسکوتی دناب ،

28 ولیک ،نوتلاد زا :تسار هب پچ نوتس

رکرام )M

نیئتورپ (9KDa Sinaclon, Iran )،

8 ) ئتورپ ی ن کرتون ی ب لخت ی ص هدش هتشرساو طیارش تحت زر زا هدافتسا اب

ی ن لکین - زوراگآ

، 2 ) ئتورپ ی ن کرتون ی ب لخت ی ص

هدش یعیبط طیارش تحت زر زا هدافتسا اب

ی ن لکین - زوراگآ

، 3 ) ئتورپ ی ن کرتون ی ب ل رفاب اب هدش جارختسا ی

هدننکز لوزادیمیا 48 / 4 رلاوم ل طسوت ی زوز ی م هکینوس و

ندرک

، 2 ) ئتورپ ی ن کرتون ی ب ل رفاب اب هدش جارختسا ی

هدننکز هروا 1 رلاوم ل طسوت ی زوز ی م و ندرک هکینوس .

ریوصت 0 . جیاتن تاد یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ اب هدش نمیا شوگرخ مرس تلاب سینک اراکوسکوت

گنر اب هدش صیلخت یزیمآ

.DAB :تسار هب پچ زا 8

)

یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ سینک اراکوسکوت

( شوگرخ تبثم مرس اب 8:544

یتنآ و ) یداب Goat anti- Rabbit IgG ،

2 نیئتورپ دقاف یفنم لرتنک )

یس عون نیتکل بیکرتون سینک اراکوسکوت

( تبثم شوگرخ مرس اب 8:544

یتنآ و ) یداب Goat anti- Rabbit IgG اتن هسیاقم .

یفنم لرتنک و تبثم لرتنک جی

شنکاو هک داد ناشن لقتسم رارکت هس رد یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ

اراکوسکوت

،نیئتورپ نیا اب هدش شلاچ شوگرخ مرس اب سینک رکت

.تسا ریذپرا

ثحب

لاپ س دیم pET32a یرس زا

یمسلاپ د نودب یاه لانگیس

یم دشاب ب ار نیئتورپ هک ه

نژولکنا ماسجا تروص (

لولحمان لکش هب )

نایب

یم ود ،نیا رب هولاع ،دنک هلابند

دیسا شش لماش ب ،نیسکودرویت و نیدیتسیه هنیمآ

ه یاهتنا رد بیترت وC

عون نیتکل ینایب یلاوتN

سینک اراکوسکوت یس یم رارق

دهد . گت نیا ب اه ه هفرص روظنم رد ییوج

ت و تسا بیکرتون نیئتورپ صیلخت هنیزه و نامز أ

یث ر یفنم رب

تیلاعف درادن نیئتورپ یتسیز یاه .

لاپ رضاح هعلاطم رد س

دیم pET-32a لاپ زا یکی هک دش باختنا لیلد نیا هب

س ییاهدیم یم

دشاب هک

یارب یصاصتخا روط هب نولک

صلاخ و نایب ،یزاس نیئتورپ یزاس

رد بیکرتون یاه یلک ایشیرشا

ب هک تسا ههد نیدنچ و هدش یحارط ه

عیسو روط نایب یارب

نیئتورپ یاه تسا هتفرگ رارق هدافتسا دروم بیکرتون .

نیا لاپ س دیم pET-32a نژ یواح

( Lactose Inhibitor )

یمlacI دشاب نژ نایب عنام هک یلپRNA

زارم رتومورپ لرتنک تحتT7 lacUV5

و رتومورپ T7lac یم دوش . یرتکاب BL21(DE3) کی

ینایب نابزیم یم

دشاب و نژ لماح RNA یلپ زارم روتومورپ طسوت هک تساT7 lacUV5

اب و لرتنک یم اقلاIPTG

دوش ( 1 ).

وYari ناراکمه لاس رد 2483 ب ه و نایب روظنم دیمسلاپ زا یناسنا دیئوریتاراپ بیکرتون نومروه صیلخت

pET-32a ود و

هیوس

یرتکاب ایشیرشا یلک لماش وBL21 Rosetta-gami و

نوتس یاه Ni-NTA دندرک هدافتسا

رد و جیاتن دوخ دندرک ملاعا نیئتورپ هک

ب بیکرتون ه

فده نیئتورپ دصرد اما هدش نایب هیوس ود ره رد لوبق لباق روط ب

یرتکاب رد نیئتورپ لک ه ایشیرشا

یلک Rosetta-gami

زا رتشیب ایشیرشا یلک دوبBL21 ( 9 ).

(8)

هعلاطم جیاتن لاس رد ناراکمه وFong

2443 نایب روظنم هب TES-120

یرتکاب رد E.coli

زا سپ مود تعاس رد هک داد ناشن

نیئتورپ نینچمه .دش لصاح نایب نازیم نیرتشیب اقلا بیکرتون

TES-120 اب هدش نایب

25 تبثم شنکاو سیزایراکوسکوت یناسنا مرس

داد ( 84 ).

رضاح هعلاطم رد شلات نیدنچ زا سپ

هنیهب طیارش نییعت یارب

، م نیرتلااب نایب رادق

یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ ت

اراکوسکو

سینک یرتکاب رد ایشیرشا

یلک BL21(DE3) اب ییاقلا شور هب

8 یلیم رلاوم یامد ردIPTG

33 یتناس هجرد تعاس شش تدم هب دارگ

دش لصاح (

ریوصت 8 .) لاطم هع Shahbakhsh و

ناراکمه لاس رد 2428 یور هب نیئتورپ یس عون نیتکل بیکرتون سینک اراکوسکوت

د ر

یرتکاب ایشیرشا یلک BL21(DE3) ایشیرشاو

یلک داد ناشنBL21

هک نیئتورپ نایب نازیم یرتکاب رد

ایشیرشا یلک BL21(DE3)

دوب رتشیب اقلا زا سپ مراهچ تعاس رد (

88 ) هسیاقم . زروفورتکلا جیاتن هتشرساو طیارش ود رد یس عون نیتکل بیکرتون نیئتورپ صیلخت

یعیبط و ره اب هک داد ناشن

ود طیارش تحت شور یم ماجنا صیلخت یعیبط و هتشرساو

و دوش دناب 28 ولیک ب نوتلاد ر یور لژ

میدس لیسدود تافلوس - یلپ لیرکآ آ دیم 82 گنر دصرد یساموک اب هدش یزیمآ

تنایلرب هدهاشم لباق ولب یم

ریوصت( دشاب 3

اما ) نیئتورپ رادقم

طیارش تحت صیلخت رد لصاح هتشرساو

رتشیب یعیبط زا تسا

و هزادنا ورکیم شور اب یریگ زین دروفدارب

ؤم دی دوب جیاتن نیا .

نیئتورپ بلغا یم عمجت نژولکنا ماسجا رد بیکرتون یاه

شور زا هدافتسا اب و دنبای صلاخ و لولحم یبیکرت یاه

یم یزاس ش

دنو . رد

رضاح هعلاطم اقلا زا سپ

بیکرتون نیئتورپ جارختسا و یس عون نیتکل

سینک اراکوسکوت گنر و هیهت یپوکسورکیم ملا

رد و دش یزیمآ

رتکاب ایشیرشا ی یلک BL21(DE3) واح

ی پ لا مس ی د بیکرتون تکل

ی ن عون س سینک اراکوسکوت ی زا یمک نازیم میزوزیل زا هدافتسا اب

یرتکاب زا یدایز دادعت نانچمه و دش لولحم شخب دراو رظن دروم نیئتورپ ب اما دندرک ظفح ار دوخ یرهاظ لکش اه

هارمه میزوزیل شور ا

یرتکاب ،ندرک هکینوس اب هلیم لکش اه

شخب دراو رظن دروم نیئتورپ زا یدایز رادقم و هدش هتسکش یلولس هراوید ،هداد تسد زا ار دوخ یا

دش لولحم (

ریوصت 2 .)

رد هعلاطم Abbaszadeh و

ناراکمه لاس رد

2489 اب هک شور نیرتهب باختنا فده بیکرتون نیئتورپ صیلخت و جارختسا

یرت نابزیم رد دیتاراپ یشیرشا

ا یلک لولس ندرک هل یارب عیام نژورتین شور زا زین دوب لکین یلیامت یفارگوتامورک زا هدافتسا اب یاه

فده اما دندرک هدافتسا ییایرتکاب هعلاطم

ت ار أ ک هکینوس اب هارمه ییایمیش رفاب اب رامیت زا اذل درکن نیم ک دندرک هدافتسا ندر

نیا اب ه

زا شیب شور 93

دش لولحم زاف دراو نیئتورپ دصرد و بولطم هجیتن و

لوبق لباق رضاح هعلاطم اب هباشم ،

دیدرگ لصاح (

82 ).

تاد شجنس جیاتن هک داد ناشن تلاب

یلپIgG یم ،هدش شلاچ شوگرخ رد هدش دیلوت یصاصتخا لانولک دناوت

بیکرتون نیئتورپ

یس عون نیتکل سینک اراکوسکوت

رد هدش نایب ایشیرشا

یلک BL21(DE3) دهد صیخشت ار

( ریوصت 2 ) نیا ناشن هتفای داد

هک نیا

بیکرتون نیئتورپ صیلخت

تیلاعف ،هدش ب ار دوخ یتسیز

ه هدرک ظفح یتسرد و

ت هتشرساو طیارش رد صیلخت نیاربانب أ

رب یبولطمان ریث

ینمیا تسا هتشادن نیئتورپ ییاز .

هجیتن یریگ ییاهن : حلاصا شور کی رضاح هعلاطم یارب هدش

لولحم یزاس و صیلخت بیکرتون نیئتورپ یس عون نیتکل

ت اراکوسکو

سینک یرتکاب رد ار ایشیرشا

یلک BL21(DE3) درک یفرعم

. ون نیئتورپ دیمسلاپ اب نژولکنا ماسجا لکش هب بیکرت

pET-32a دش نایب

.

ب ه لولحم روظنم رفاب زا یزاس

لوزادیمیا و هروا هدننکزیل یاه یلیامت یفارگوتامورک زا صیلخت یارب و ندرک هکینوس اب هارمه میزوزیل یواح

زر اب ی ن لکین - یرتولیرتین کیتسا

زوراگآ دیسا و

زر ی ن لکین - یرتولیرتین کیتسا

زورافس دیسا دش هدافتسا

و ئتورپ نازیم هدش یبایزاب نی

تشاد لوبق لباق یهدزاب .

بیکرتون نیئتورپ یس عون نیتکل

سینک اراکوسکوت ینمیا تیصاخ ،

ناونع هب و هدرک ظفح ار دوخ ییاز کی

هدافتسا لباق فلتخم فادها یارب یتسیز لوکلوم .تسا

هنیهب شور دروم یزاس

یم رضاح هعلاطم رد هدافتسا ریاس صیلخت رد دناوت

نیئتورپ رد هک بیکرتون یاه ایشیرشا

یلک یم نایب نژولکنا ماسجا لکش هب رارق هدافتسا دروم زین دنوش

دریگ .

یرازگساپس

تیامح اب رضاح هعلاطم لپیتلام تاقیقحت زکرم یلام یاه

مولع هاگشناد ،باصعا مولع هدکشهوژپ ،سیزورلکسا نارهت یکشزپ

ب دک ا

قلاخا IR.TUMS.NI.REC.1400.033 دک ،

حرط یرایشهوژپ 52938

- 233 - 8 - 8244 هدکشناد یروانف و شهوژپ تنواعم و

نارهت هاگشناد یکشزپماد لگنا هورگ یلوکلوم هاگشیامزآ رد نآ یهاگشیامزآ لحارم و دش ماجنا

رهت هاگشناد یکشزپماد هدکشناد ،یسانش نا

(9)

87 هرامش 3 ، 2041

865 ،دیسر ماجنا هب یم زاربا ،نایماح زا ار دوخ ینادردق بتارم بیترت نیدب ناگدنسیون

.دنراد

عفانم ضراعت

بی ن ون ی ناگدنس تسا هدشن شرازگ عفانم رد ضراعت .

References

1. Etebar F, Hosseini SH, Jalousian F, Ranjbar MM. Phylogenetic analysis of C type lectin from Toxocara canis infective larvae and comparison with the C type lectin family in the immune system of mouse and human. Iran J Parasitol. 2018;13(1):49. PMID:

29963085

2. Eslahi AV, Badri M, Khorshidi A, Majidiani H, Hooshmand E, Hosseini H, et al. Prevalence of Toxocara and Toxascaris infection among human and animals in Iran with meta-analysis approach. BMC Infect Dis. 2020;20(1):1-17. doi: 10.1186/s12879-020-4759- 8 PMID: 31910815

3. Loukas A, Doedens A, Hintz M, Maizels RM. Identification of a new C-type lectin, TES-70, secreted by infective larvae of Toxocara canis, which binds to host ligands. Parasitology. 2000;121(5):545-54. doi: 10.1017/S0031182099006721 PMID:

11128806

4. Raulf MK, Lepenies B, Strube C. Toxocara canis and Toxocara cati somatic and excretory-secretory antigens are recognised by C-type lectin receptors. Pathogens. 2021;10(3):321. doi: 10.3390/pathogens10030321 PMID: 33803269

5. Wang Y, Van Oosterwijk N, Ali AM, Adawy A, Anindya AL, Dömling ASS, et al. A systematic protein refolding screen method using the DGR approach reveals that time and secondary TSA are essential variables. Sci Rep. 2017;7(1):9355. doi:

10.1038/s41598-017-09687-z PMID: 28839267

6. Bornhorst JA, Falke JJ. Purification of proteins using polyhistidine affinity tags. Methods Enzymol. 2000;326:245-254. doi:

10.1016/S0076-6879(00)26058-8 PMID: 11036646

7. Noh AS, Chuan TD, Khir NA, Zin AA, Ghazali AK, Long I, et al. Effects of different doses of complete Freund’s adjuvant on nociceptive behaviour and inflammatory parameters in polyarthritic rat model mimicking rheumatoid arthritis. PLoS One.

2021;16(12):1-24. doi: 10.1371/journal.pone.0260423 PMID: 34879087

8. Matthey B, Engert A, Klimka A, Diehl V, Barth S. A new series of pET-derived vectors for high efficiency expression of Pseudomonas exotoxin-based fusion proteins. Gene. 1999;229(1-2):145-53. doi: 10.1016/S0378-1119(99)00038-4 PMID:

10095114

9. Yari S, Behzadian F, Nejad HR, Masoumian M, Karimi M. Expression and purification of soluble form of human parathyroid hormone (rhPTH1-34) by trx tag in E. coli. Res Mol Med. 2017;5(3):26-31. doi: 10.29252/rmm.5.3.26

10. Fong MY, Lau YL, Init I, Jamaiah I, Anuar AK, Rahmah N. Recombinant expression of Toxocara canis excretory-secretory antigen TES-120 in Escherichia coli. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 2003;34(4):723-6. PMID: 15115078

11. Shahbakhsh M, Jalousian F, Hosseini SH, Shayan P, Moghadasi AN. Optimization of expression and extraction of Toxocara canis recombinant C-type lectin protein in Escherichia coli BL21 (DE3). J Vet Res. 2021;76(2):162-70. doi:

10.22059/JVR.2020.287488.2966 (In Persian)

12. Abbaszadeh AS. Optimized solubilization and purification of recombinant teriparatide fusion protein expressed in E. coli. Modares J Biotechnol. 2019;10(1):1-7. (In Persian)