Investigating the IGSF2 and TNFα Genes Polymorphism and the Risk of Inhibitor Development in Patients with Hemophilia A

(1)

59

Investigating the IGSF2 and TNFα Genes Polymorphism and the Risk of Inhibitor Development in Patients with Hemophilia A

Afsaneh Seyed Mikaeili¹, Azam Bolhassani^2,3,

Nikoo Nasouhi⁴

1 MSc Student in Molecular and Cellular Sciences, Faculty of Advanced Sciences and Technology, Islamic Azad University, Pharmaceutical Sciences Branch, Tehran, Iran

2 Associate Professor, Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran.

3 Associate Professor, Iranian Comprehensive Hemophilia Care Center, Tehran, Iran

4 Assistant Professor, Department of Molecular and Cellular Sciences, Faculty of Advanced Sciences and Technology, Islamic Azad University, Pharmaceutical Sciences Branch, Tehran, Iran

(Received October 3, 2017 ; Accepted January 15, 2018)

Abstract

Background and purpose: Hemophilia is a hereditary X-linked disorder. Females are carriers and males have the disorder. Hemophilia A is caused by deficiency in the production of factor VIII. In some hemophilia patients, inhibitors including IgG1 and IgG4 antibodies are expressed against this factor.

These inhibitors interact with factor VIII and suppress its function. The current study aimed at investigating the relationship between single nucleotide IGSF2 and TNFα genes polymorphism and development of inhibitors in patients with hemophilia A.

Materials and methods: In this case-control study, 100 patients with hemophilia A were selected (55 with inhibitor and 45 without inhibitor). Recognition of inhibitor was performed by Bethesda test. DNA was extracted from whole blood samples. A single-nucleotide polymorphism of IGSF2 and TNFα genes was performed using Tetra ARMS-PCR assay.

Results: Hardy-Weinberg equilibrium was investigated in both groups. Comparing the IGSF2 and TNF-α genotypes in these groups indicated a significant correlation between single-nucleotide polymorphism of IGSF2 and development of inhibitors (p= 0.018, odds ratios for AA and AG genotypes were 1.39 and 0.37, respectively). A significant association was seen between incidence of inhibitors and consanguineous marriages and viral infection (p<0.05). Moreover, the association between response to treatment and Bethesda test was significantly different between the two groups (p= 0.002).

Conclusion: According to these results, the risk of development of inhibitors has a direct relationship with mutation in IGSF2 gene.

Keywords: hemophilia A, inhibitor, polymorphism, IGSF2 gene, TNF-α gene

J Mazandaran Univ Med Sci 2018; 28 (162): 59-68 (Persian).

* Corresponding Author: Azam Bolhassani - Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran and Iranian Comprehensive Hemophilia Care Center, Tehran, Iran (Email: A_bolhasani@pasteur.ac.ir , azam.bolhassani@yahoo.com)

[ Downloaded from jmums.mazums.ac.ir on 2022-10-31 ]

(2)

جم ــ ل ــ ـ ـ ناد هـ ـ ع هاگـــش ــ لـ ـ ـ پ موـ ــ شز ـ ـ ـ ـــك ـ م يـ ــ نزا ـــ ناردـ

هرود هرامش متشه و تسيب 261

ريت لاس 2931 ( 66 - 93 )

سررب ی لپ ی فروم ی مس

نژ اه ی

IGSF2

و و TNFα

راهم هعسوت رطخ هدننک

رد ب ی نارام لاتبم

هب فومه یل

ی

A

هناسفا س ی د م ی ئاک ی ل

1ی

مظعا نسحلاوب

2ی

و

3

نی وک حوصن

4ی

هدیکچ

هقباس :فده و یراميب يليفومه یراميب تسا سنج هب هتسباو يتثارو

هک اهدرم نز و لاتبم يم نآ لقان اه

ننشاب . يليفونمه

A

روتکاف يلوت رد صقن زا يشان يمVIII

يليفومه ناراميب زا يضعب رد . شاب

ه ننکراهمA

یاه ي يتنآ عون زا یداب

انه ی

IgG1

و يم نايب ،IgG4

و هتشاد شنکمه رب روکذم یداقعنا روتکاف اب هک دوش عنام

يم نآ درکلمع زا . نوش

نیا ن نه انب هنعلاطم

يلپ نيب طابترا يسررب يتوئلکون کت مسيفروم

نژ ی یاه

IGSF2 TNFαو

ه ننکراهم هعسوت اب عونن يليفونمه ناراميب رد اه

تفریذپ ماجناA

.

شور و داوم :اه

ا رد ی ن هعلاطم دروم هاش-

،ی 011 اراد درف ی فومه يل ي عون (A

55 اراد رفن ی و ه ننکراهم 55

نو نب رنفن

نکراهم ن ش باختنا )ه ن و

خشت ي ص ه ننکراهم

، نآ لماک نوخ هنومن زا . ش ماجنا ا ستب تست اب اه

، جارختساDNA

و نیدرگ

سررب ي لپ ي فروم ي مس توئلکون کت ي

ی نژ اه ی

IGSF2 TNFα و

اب شور

Tetra ARMS-PCR

.تفرگ ماجنا

هتفای هداد:اه دراه لداعت ظاحل زا هعلاطم دروم هورگ ود رد اه ی

- او ی گربن نسررب ي درگ نی اقم . ی هنس توننژ يپ ي نژ انه ی

IGSF2 TNFα و

نعم توافت رگناشن ي

ب راد ي ن لپ ي فروم ي مس توئلکون کت ني

ی نژ

IGSF2

دونب ه نننکراهم هعنسوت و تنسا ه

( 100 / 1

=

، p

اربOR

ی تونژ ي پ اه ی وAA

، AG

هب ترت ي ب ربارب 93 / 0 و 93 / 1 ب .) ه راداننعم طانبترا ،هولاع ی

نب ي ن روتکانف ود

دزا ماف جاو يل ي و تنوفع و ی

سور ي ( ش ه هاشم ه ننکراهم اب 15

/

>1 نب طانبترا .)p

ي ن ن ا نستب نونمزآ و نانمرد هنب نساپ ني

ز

توافت نعم ي راد ی داد ناشن تسا ه ( 110 / 1 = .)p

:جاتنتسا اتن هب هجوت اب ی

ج ب ه م ه مآ تسد ي

ناوت ه نننکراهم هعسوت رطخ هک تفگ نژ رد شنهج انب انه

IGSF2

هنطبار

قتسم ي م ي .دراد

:یدیلک یاه هژاو فومه

يل ي

، A

راهم لپ ،ه ننک ي فروم ي

،مس نژ

IGSF2

،

TNFα نژ

همدقم

فومه يل ي ی ک ب ي رام ی ثرا ي ينم نشاب تنلع هنب هنک

رد صقن ی ک ي نژ زا انه ی انهروتکاف ی

دانقعنا ی ور هنک ی

موزومورک ا ،دراد دوجوX

ی داج م ي ددرگ ا هب نادرم . نی

ن بي

رام ی لقان نانز و هتشگ لاتبم بي

رام ی . نتسه 31 نصرد

فومه يل ي اه فومه ءزج يل ي م باسح هبA

ي آ ی ن فونمه . يل ي

A

روتکاف دوبمک تلع هب اVIII

ی داج يم ددرگ

( 0

رد.)

لاح ي هک

لوئسم فلوم -

مظعا :ینسحلاوب نارهت - و ناریا روتساپ وتیتسنا زکرم

نامرد عماج فومه يل ي ا ی نار A_bolhasani@pasteur.ac.ir

E-mail:

0 . وجشناد ی سانشراک ي شرا لولس ي و لوکلوم ي

، ه کشناد مولع و روانف ی اه ی ون ی

،ن حاو مولع وراد يی هاگشناد دازآ ملاسا ي

،

،نارهت ا ی نار

0 . شناد ي

،را شخب تاپه ي ت و ا ی

،ز تسنا ي وت روتساپ ا ی

،نار

9 . شناد ي

،را زکرم نامرد عماج فومه يل ي ا ی

،نار

5 . داتسا ی

،را هورگ لولس ي و لوکلوم ي

، ه کشناد مولع و روانف ی اه ی ون ی

،ن حاو مولع وراد يی هاگشناد دازآ ملاسا ي

،

: تفایرد یرات 00

/ 3 / 0931 : تاحلاصا تهج عاجرا یرات 00

/ 3 / 0931 : بیوصت یرات 05

/ 01 / 0931

(3)

ناراکمه و یلیئاکیمدیس هناسفا

ناردنزام يكشزپ مولع هاگشناد هلجم

هرامش ،متشه و تسيب هرود 261

، ت ري 2931 62

یشهوژپ

فومه يل ي هب و هدوب ردانB

لع روتکاف دوبمک ت مIX

ي شاب .

بي ناراننم فوننمه يل ي ننش ی ر ررننعم رد ی

کننس ااننب يی زا

رنوخ ی ز ی اه ی دوخ هب دوخ

،ی لنخاد اانخ رونو هنب و

لصفم هام و اه ي هچ اه ب زا ثعاب هک نتسه ي

ن درکلمع نتفر

نآ غت و اه يي ر انپ پزونق و ،وزانب ،وناز رد لکش ی

نآ انه

م ي ددرگ ش دراوم رد . ی

رت ب ي نارام انناوت يی ار نتنفر هار

م تسد زا ي نهد لمع هب و اه ی پوترا ی وعت و ی ض لنصفم

ني زا پ ي ا م ي ننک رنونخ . ی ز ی س لنخاد ي متنس بنصع ي و نی ا

ناگرا اه ی د ی رگ م ي نناوت نشاب ه ننشک

( 0

. )

روتکانف نژ

ورVIII

ی موزومورک تسا هتفرگ رارقXq28

هک لماش 01

نوزگا و هدوب دو ح 0950 مآ ي ون نسا ي نم نک ار ي ک نن .

ئتورننپ ي ن اراد دلاننب ی 1 ننمود ي ن

A1-A2-B-A3-C1-C2

م ي شاب . مود ي ن اه ی ،C2

وA2

قوانمA3

ي هنک نتنسه

تنآ ي داب ی اه م ي نناوت نآ اب هنب و ننهد نانشن شننکاو اه

سآ داقعنا راشبآ ي

ب ننانسرب

( 9 ، 5

ه نننکراهم ).

انه زا عونن

تنآ ي داب ی اه ی وIgG1

نمود هنب هک نتسهIgG4

ي ن انه ی

لمع درک ی روتکاف اه ی وVIII

لصتمIX

لاعف و هتشگ ي

ت انه ی

داقعنا ی نآ ثنخ ار اه ي م ي نننک

( 5

. )

بي نارانم ي تنحت هنک

اهروتکاف اب نامرد ی

داقعنا ی ارب نتسه ی نسررب ي م ني ناز

اب ه ننکراهم ی

رگلابرغ دروم ی

گ رارق ي نر ات اومعم . يی

م و ه ننکراهم روضح ي

ناز ت ي رت امزآ رد نآ ی

هاگش

، طسوت

ست سررب دروم ا ستب ت ي

نم رارنق ي گ ني در

( 1

، 3

.)

تنژ ني ک و

اهروتکاف ی حم ي نط ي رد ا ی دانج ا نی ن ه نننکراهم انه

شنقن

نراد . اهروتکاف ی حم ي ط ي لماش ب ي رام ی

،انه ننسکاو

،انه

تننوفع اننه و ننحارج ي اننه

، و اننهروتکاف ی

تنژ ي ننک ي لماننش

رات ی هچخ گداوناخ ي

، شهج اه ی تنژ ي ک ي

، نژ اه ی نساپ

ای نم ي

، لپ ي فروم ي مس نژ اه ی س ي کوت ي ن اه موق و داژن و ني

ت

يم شاب

( 0

. )

د رو زا ی

رگ لپ ي فروم ي مس نی ا لکنش ننچ ي

نژ اه ی خد ي ل س و باهتلا رد ي

متس ا ی نم ي لنماع ناونع هب

ای داج خرب رد ه ننکراهم ي

ارنب .تنسا ه ش حرطم دارفا ی

،هنومن ئتورپ ي ن

IGSF2

ناوننع هب هک

CD101

و نV7

ني ز

م هتخانش ي

،دوش ی ک لگ ي ورپوک ئت ي ن ءانشغ زا ه ننکروبع

ور هننک تننسا ی

ننسونوم ي

،ت ننسولونارگ ي

،ت لولننس اننه ی

ر ند یت ي ک لولس و اه ی لولنس لمانش هنک ،لانعفT

انه ی درکلمع

ی لولس و اه ی ظنتT

ي نم ي

+ (

Foxp3 CD25+

CD4+

)

م ي

، نشاب ب ني نا نم ي ددرنگ . لولنس انه ی ظنتT

ي نم ي شنقن

ح ي تا ي انهروتکاف هب لمحت ءاقلا رد ی

دانقعنا ی کنشت و ي ل

ب رد ه ننننکراهم ي

ناراننم فوننمه يل ي نننراد

( 3

ننب .)

ه ،هولاننع

روتکاف ثعابTNFα

داجیا نقورع لنخاد زونبمورت

،ي هنب

و نتفر تسد زا تلع ی

گژ ي داقعنا ض ی

لتو نا لامرن ي

مو

م ي دوش

TNFαو

، بي نا تفانب روتکاف ي

لولنس طنسوت انه

ی

لتو نا ي لا رحت ار ی ک م ي

، نک مه ننچ ي ن ب ني نا لو نموبمورت ي

ن

عون(

ي هم لولس طسوت )داقعنا ه ننکرا انه

ی لتو ننا ي لا ار

م راهم ي نک

( 01

.)

ه ننکراهم اه

ی روتکاف ناوننع هنبVIII

رارنق هنجوت درونم نانمرد انب طبترم رراوع و تلاکشم هتفرگ ب رگا . نا ي رانم رونضح هنب نه ن نساپ نانمرد هنب

م کش ه ننکراهم ي

،دوش و هب نی هژ عقاونم رد ي ب هنک ي رانم

اپ نامرد هب لابق ا رد . نشاب هداد نس

نی ن دونبهب تنلاح ی

ن و راظتنا لباق ي

هم داقعنا روتکاف رمع ی

م هنب ني ناز ز نی دا ی

شهاک ی هتفا .تسا ه ننکراهم اه

نب ي ش رنت رد دارنفا ی هنک

فومه يل ي ش ی نراد رد اقم ی هس اب دارفا ی هنک فونمه يل ي

فخ ي ف و ی ا طسوتم

، نراد د ی ه ه ش تسا . رد فونمه يل ي

ش ی مA

ي گنا ي ن وت نامز هنس دو نح رد ه نننکراهم هعس

لاس یا منک تنسا رنت و

فونمه رد يل ي طنسوتم نی ا فخ ني ف

دزن ی ک س ي نحارج اب بقاعتم بلغا هک تسا لاس ي

انه و

م خر روتکاف نتفرگ ي

هد

( 00

، 00

. )

ه نننکراهم دونجو انه

شت ثعاب ی

راميب ی فونمه يل ي ا و ی دانج رنونخ ی ز ی انه ی

ش ی ا ينامرد نور رد و ه ش ی

ن راميب ی للاتخا ا ی دانج

يم ا رب هولاع ، نک ی

ن زه ی هن اه ی ز ی دا ی ارنب ار ی نارانميب

مها هب هجوت اب .تشاد هاوخ لابند هب ي

ت ه نننکراهم ،انه

ا رد ی ن هعلاطم

، ارب ی لوا ي ن راب نب طابترا ي ن نلپ ي فروم ي منس

توئلکون کننت نني

ی نژ اننه ی

IGSF2 TNFα و

رننطخ و

ه ننکراهم هعسوت ب رد اه

ي نارام فونمه هنب لاتنبم يل

ي ردA

ای نار دروم زرا ی با ي تفرگ رارق .

اه شور و داوم

ا رد ی ن هعلاطم دروم هاش-

،ی اب دارفا دا عت هب هجوت

هعجارم فونمه عمانج نانمرد زنکرم هنب ه ننک يل

ي ا نی نار و

(4)

ناوارف ي غتم ي اهر ی هتشذگ تاعلاطم زا هدافتسا اب رظندروم

ن و ي ز عم ي اهرا ی ارب رظن دروم ی

ننام هعلاطم هب دارفا دورو

نتشاد یا رات نتشا ن ی

هچخ گداوناخ ي و تنوفع هب لاتبا و

انطخ نتفرگ رظن رد اب ی

15 / 1 هننومن منجح دا نعت ، 011

عت رفن يي ن درگ ی هک ب زا ي ن ا ی ن 011 ،رفن 55 نآ زا رفن اه

اراد ی راهم و ه نننک 55 نآ زا رنفن ه نننکراهم نو نب انه

. ندوب سپ زا ذخا لانخا ک

IR.IAU.PS.REC.139567

،

زا ره ی ک انضر هنعلاطم درونم دارنفا زا ی

ت هنمان هنناهاگآ

ش هتفرگ رو نوخ هنومن.

ی ی ب ي نارانم تبنسن انب 3

هنب 0

س اب ي تارت س ی م )نونخ دانقعنا نض هدانم(

0 / 9 رنب مرنگ

سد ي لي رت بونخ هب ي درگ طونلخم نی

ارنب . ی ندرنک ا نج

هنومن ،امسلاپ رود انب انه

5111rpm

هنب ت نم 01 قد ي هنق

رتناس ی ژوف ن ش .

ت خنننش ي ص ه نننننکراهم انننه

ی روتکانننف ب ردVIII

ي نارانننم

فومه يل ي

A

هب روظنم عت يي ن دونجو نی ا م نع دونجو رانهم ه نننک

تنآ(

ي داب ی داقعنا روتکاف ) ی

هزا ننا و گ ي ر ی رد نآ طنس

ب ن ننب ي راننم

، ا ننستب اننسا . ننش هدافتننسا ا ننستب شور زا

طولخم زاس ی امسلاپ ی امسلاپ و لامرن ی

ب ي رام و زرا ی با ي

روتکاف م ي ب شا م ا ستب حاو . ي

نناز ي تنسا ه نننکراهم زا

ارب هک ی غ ي ر لاعف ندرنک 51 نصرد روتکانف زا ردVIII

امسلاپ ی ن لامرن ي زا تسا

( 09

ارب .)

ی هزا ننا گ ي ر ی ه نننکراهم

روتکاف شور زاVIII

Nijmegen

هدافتسا زا نآ رد هنک نش

موبلآ ي ن واگ ی ئتورپ ظفح تهج(

ي ن اه ا رفاب و ) ی م ي لوزا

امسلاپ و ی ن درگ هدافتسا لامر ی

( 05

اهن رد .)

ی ت زا سپ 0

سابوکنا تعاس ي

نو هنومن امد رد اه ی 93 هدافتسا اب ،هجرد

ک زا ي ت

BIOPHEN

، هاگتنسد کمک هب

Coagulation

،

نحنم ي هنومن سپس و مسر هووبرم رارنق هاگتسد لخاد اه

م ات ش هداد ي

ناز قد ي ق روتکاف هووبرم هزا نا گ ي ر ی دوش .

جارختسا

DNA

هب جارختسا روظنم هنومن زاDNA

اه ی زا ،رظن دروم

مونننژ جارختننسا تننيک ي

ننش هدافتننساGF-1

و هننب 011 مي

ورک ل ي رت اهرفاب ،نوخ هنومن زا ی

ل تنهج رنظن دروم ني

ز

لولس ي هفاضا درگ ی مه . نچ ي ن زنآ ی م ئتورپ ي زانن تنهجK

ب زا ي ن ئتورپ ندرب ي

ن اه هدافتسا ش امد رد و ی 15 هنجرد

تناس ي ت م هب دارگ 01

قد ي هق هبوکنا نیدرگ نوتنس زا . انه ی

ک ي ت اراد هک ی صاخ ي ت فارگوتانمورک ي

ونعت ی ض نی نو ي

ننلخت ماننجنا تننهج نتننسه ي

ص هدافتننسا . ننش اهن رد ننی ت

موننژDNA

ي رد 011 م ي ورنک ل ي رنت درگ لنح ،رفانب نی

و

اولخ و تظلغ مونژDNA

ي اردونانن هاگتسد طسوت

هزا نا گ ي ر ی . ش

حارو ي ارپ ی رم

هننب زآ ماننجنا روننظنم اننم

ی ش

Tetra ARMS-PCR

،

ارپ ا ننتبا ی اننهرم ی نژ هننب طوننبرم اننه

ی اننب ار رننظن دروننم

اپ ی هاگ تانعلاوا ي

primer1

، نحارو ي

،هدرنک و سپنس انب

اپ زا هدافتننسا ی

هاننگ اننه ی

Primer BLAST NCBI

و

Oligo analyzer

و هب مرن کمک رازفا

gene

لاوتSnap

ي

ارپ ی اهرم سررب ي . ش

سررب ي لپ

ي فروم ي مس اه ی رم طبت اب راهم ه ننک

تهج سررب ي لپ ي فروم ي مس انه ی کنت توئلکون ني ی

( لانننمتحا )SNP

ي نژ رد انننه ی ،رنننظن درونننم شننننکاو

Tetra ARMS-PCR

عت رنب هولاع ات تفرگ تروص يني

ن

لپ دوجو ي فروم ي

،مس اج ی هاگ ن نآ ي ز صخشم دونش . نی ک

ارپ تفج ی رنم ب ونلج هنب ور رگزانغآ(

ي ننور ي ونکعم و

لخاد ي ثکت ثعاب ) ي

ر هعطق ا ی م ي دوش وانح هک ی لنلآ

G

د تفج و تسا ی

رگ ارپ ی رم نلخاد ولج هب ور رگزاغآ(

ي و

ب وکعم ي نور ي ثکت ثعاب ) ي

ر هعطق ا ی م ي دوش واح هک ی

لننلآ ارپ .تننساA

ی اننهرم ی ب ي نننور ي ارننب ی تننلاح اننه ی

زومه ی توگ زورته و ی توگ ی ک هعطق ی ناسک م ي هد و

ای ن ارنب لرنتنک ناوننع هب هعطق ی

هننومن مانمت انک هنب انه

ر

ننم ي دور

( 05

ا .)

ننی ن ارپ راننهچ زا هدافتننسا اننب شور ی

رننم ( 0

ارپ ی رم و لرتنک 0 ارپ ی رم ارب ی اتونژ عون ود ره ی

پ ماجنا )

رد و ش ی ک عت هلحرم يي ن اتونژ ی پ درگ نی لو نج رد .

هرامش 0 و 0 ارپ تانصخشم ی

انهرم ی نژ انه ی

IGSF2

و

(5)

، ت ري 2931 69

یشهوژپ

ترت هننبTNFα

نني ب ننلک مننجح .تننسا ه ننش هدروآ ي

رننه

شنننکاو 01

م ي لورک ي رننت و زا لکننشتم 01

م ي ورننک ل ي رننت

(

Taq DNA Polymerase

، ،dNTP MgCl2

،

Tris-Hcl

)

Master mix 2X

، 5 / 1 م ي ورننک ل ي رننت زا ما ننک رننه زا

ارپ ی اهرم تظلغ اب 01 پ ي وک لوم انب هارنمه 3

م ي ورنک ل ي رنت

،بآ 0 م ي لورک ي رت موننژDNA

ي تنظلغ انب 01

مرگونانن

دوب تسا ه ارش . ی ط شننکاو

Tetra ARMS-PCR

لمانش

لحارم ت نم هب ن ش هروتاند 91

ناث ني ه انمد رد ی

˚C

35 ،

ت م هب لاصتا 91

ناث ي ه امد رد ی

˚C

15 وو و نی ل زانس ی

ت ننم هننب 91

ناث نني ه اننمد رد ی

˚C

30 ( 95 ننس ي لک ارننب ) ی

اسومرت هاگتسد ی

رلک ل م

Peltier

ظنت ي م ارب . ش ی نسررب ي

اننتن تحننص ی

ج شنننکاو

Tetra ARMS-PCR

شور زا

زراگآ لژ اب زروفورتکلا 0

تسا صرد . ش هداف

ب ه

،هولاع

ات تهج نيی شننکاو

ARMS-PCR Tetra

، هننومن انه ی

زورته ی توننگ و زومه ی توننگ هورننگ اننه ی ه ننننکراهم و

نو ب ه ننکراهم هب

شور رگنس يبانی يلاوت نش

و انتن ی ج

لاوننت ي ننی با ي زا رننظن دوننجو ننلپ ي فروم ي مننس رظندروننم اننب

همانرب

Snap gene

و

Blast

سررب ي درگ ی .

لودج هرامش 1 ارپ: ی اهرم ی حارو ي ه ش تاصخشمو نآ

اه ارب ی TNFαنژ

IGSF2 (rs2296449) لاوت

ي ارپ ی هزا نا رم

لوصحم (bp) امد ی بوذ

°C

Forward inner primer (G allele) AGCTGATTGCTCAAGTTGGTTAAATGTATG

009 10

Reverse inner primer (A allele) AGACAGGGAGGGTCTCCTGGGAACGT

950 31

Forward outer primer (5' - 3') AAAGTGACAGGAGGGTTTTATGGGGTGA

505 13

Reverse outer primer (5' - 3') AGAGAATCTTGGATGGACTCTGCTGCAG

13

لودج هرامش 2 ارپ: ی اهرم ی حارو ي ه ش تاصخشمو نآ

اه ارب ی TNFαنژ

TNFα (rs1800629) لاوت

ي ارپ ی هزا نا رم

لوصحم (bp) امد ی بوذ

°C

Forward inner primer (G allele) GGAGGCAATAGGTTTTGAGGGGCAGGG

013 35

Reverse inner primer (A allele) GTAGGACCCTGGAGGCTGAACCCCGTACT

950 35

Forward outer primer (5' - 3') GTCTGTGAATTCCCGGGGGTGATTTCACT

515 35

Reverse outer primer (5' - 3') GGCCCTGCACCTTCTGTCTCGGTTTCTT

35

طابترا راهم ه ننک اه اب هداد اه ی نامرد ي

ننب طاننبترا ي ن ماننف جاودزا يل

ي و اننب تنننوفع و ننی

ور

تاپه ي ت م ابC

ي ناز راهم ه ننک

، ب طابترا رب هولاع ي

ن ساپ

م و نامرد هب ي

ناز رامآ رظن زا ا ستب حاو ی

زرا دروم ی با ي .تفرگ رارق

ارب ی سررب ي تونژ ي پ انه درانه لدانعت زا ی

-

او ی گربن ش هدافتسا ارنب . ی نسررب ي نناوارف ي و لنلآ رنه

تونژ ي پ نلپ ي فروم ي منس نژ انه ی

IGSF2 TNFα و

رد ود

نومزآ زا هورگ انه

ی

Chisquare

و

Logistic regression

سررب و ي ب طابترا ي ن م ي ناز نانمرد هب ساپ و ا ستب تست

نومزآ طسوت

Mann-Whitney

هدافتسا ارب . ش ی لانآ ي ز

هداد زا انه مرننن رازننفا هخنسنSPSS

09 هدافتننسا و ننیدرگ

ارب ی مامت ي لانآ ي انهز

، شزرا 15 / 1

<

ننعمp

ي راد رد رنظن

هتفرگ ش .

اه هتفای

عت يي ن ه ننکراهم اه

ی روتکاف طسوتVIII

ا ستب تست

رد ا ی ن هت رونظنم هب شور ني

ه زانسا ج و ی

،امنسلاپ

هنومن رود اب اه 5111rpm

ت م هب 01 قد ي هنق ارنب ی ا نج

رتناس امسلاپ ندرک ی

ژوف تقر . ن ش اه

ی هت بسانم ي ه نش

و مي ناز هاگتنسد طنسوت ه نننکراهم

Coagulation

هبنساحم

یدرگ . نشک و هاگتنسد ن نش هدانمآ زا نعب ي

ن رادونمن

موا و طوبرم ي

نانن هننومن ،نآ درنکلمع زا انه

رد هاگتنسد

رارننق پننسآ و هداد ي

هر ن ننش . تبننسن ه ننناوخ ه ننش هنننومن

لرتنک / هنومن ب ي رام رد هدو حم 05 انت 35

، نصرد هدو نحم

لباق لوبق ارب ی هزا نا گ ي ر ی ه ننکراهم رد

هتفرگرظن ش

.

اتن ی ج ثکت زا لصاح ي

ر نژ انه ی

IGSF2 TNFα و

طنسوت

شنکاو

Tetra-primer ARMS-PCR

ور ی زراگآ لژ

سپ جارختسا زا مونژDNA

ي

، تظلغ و انهDNA

مه نچ ني نآ اونلخ لونو رد بذنج تبنسن طنسوت انه

جوم اه ی 001 / 011 ت ع نيي مانمت . نش ي

هننومن تنظلغ انه

بسانم ي دو ح( نتشاد 511

- 911 ونان م/مرگ رتيل ورکي و )

هدو حم رد بذج تبسن 0

- 0 / 0 دوب تنسا ه رگنانشن هنک

هنومن اولخ اه

ی بذنج تبنسن هنتبلا .تسا هعلاطم دروم

رد جوم لوو اه

ی 091 / 011 ن زي سررب ي ب هک ش شي رت زا

0 دوب تسا ه . هنب نسررب رونظنم ي

انتن تحنص ی

ج شننکاو

Tetra ARMS-PCR

ارب ی نژ اه ی

IGSF2 TNFα و

زا

نش هدافتنسا نصرد ود زرانگآ لژ اب زروفورتکلا شور

(6)

رد هک ریوصت هرامش 0 و 0 .تنسا ه نش هداد ناشن انتن

ی ج

ارننبPCR

ی نژ

IGSF2

، يیاه ننناب هزا نننا اننب

اننه ی 950

ارب زاب تفج ی

للآ ،A

009 ارب زاب تفج ی

للآ ناب وG

لرتنک 505 ب تفج .داد ناشن ار زا ب

ه انتن ،هولاع ی

ج

PCR

ارب ی

TNFα نژ

، يیاه ناب هزا نا اب انه ی 950 زانب تنفج

ارب ی للآ ،A

013 ارب زاب تفج ی

لنلآ لرنتنک نناب وG

515 داد ناشن ار زاب تفج تسا ه

.

اتن ی ج ناوارف ي نژ اه ی

IGSF2 TNFα و

رد سررب ا تبا ي ناوارف ي تونژ ي پ اه ی نژ انه ی

IGSF2

TNFα و دراننه لداننعت طننسوت ی

- او ی گرننبن ماننجنا ننش و

نآ تحننص ات دروننم اننه

ننيی ننناوارف ،سپننس .تننفرگ رارننق ي

تونژ ي پ اه للآ و اه ی لپ ي فروم ي مس توئلکون کت ي

ی نژ اه ی

لانننآ دروننم روکذننم ي

ز ننناوارف .تننفرگ رارننق ي

تونژ نني پ اننه ی

نژ اه ی

IGSF2 TNFα و

ن و ي ز آ لنل اراد هورنگ ود رد انه ی

نو ب و ه ننک راهم لو ج رد ه ننکراهم

هرامش 9 هداد ناشن

اننتن هننب هننجوت اننب .تننسا ه ننش ی

ج ننب ه تواننفت ،ه ننمآ تننسد

نعم ي راد ی ب ي ن ا ی ن نژ اب طابترا رد هورگ ود

IGSF2

دونجو

( دراد 15 / 1

p <

ننلو ) ي نژ اننب طاننبترا رد

TNF-α

تواننفت ي

( شن ه هاشم 15

/ 1

p >

.)

لانآ ي ز اس ی ر هداد اه ی نامرد ي

سررب ي ب طابترا ي ن دزا جاو مانف يل ي و م ني ناز ه نننکراهم

رد دارفا دروم هعلاطم نعم ي راد دونب تنسا ه ( 101 / 1

= ).p

لانآ ي ز رامآ ی ب ين ن فع ن و اب تنو ین ور تاپه ي ت م وC

ين ناز

ریوصت هرامش 1 لونصحم زرونفورتکلا لژ: نژPCR

IGSF2 : نوتنس یانه

5 - 0 ( هنومن اه ی اراد ی راهم نوتنس .)ه نننک انه

ی 3 - 5 ( هننومن انه ی نب نو

راهم ه ننک .) نوتس 0 طوبرم فنم لرتنک هنومن هب ي

( نم )NC ي ننشاب .

ارنب لونصحم هزا نا ی

لنلآ ،A 950 ارنب و زانب تنفج ی

لنلآ 009G

لرتنک ناب و زاب تفج 505

.زانب تنفج لونکلوم نزو رکرانمMW

ي

م ي شاب ( 51 تفج زروفورتکلا لژ .)زاتنمرف ،زاب 0

م صرد ي شاب

ریوصت هرامش 2 لوصحم زروفورتکلا لژ: نژPCR

:TNFα نوتنس یانه

5 - 0 هنومن(

اه ی اراد ی نوتنس .)ه نننکراهم انه

ی 1 و 3 ( هننومن انه ی

نوتس .)ه ننکراهم نو ب 5

نفنم لرنتنک هننومن هب طوبرم ي

( نم )NC ي

شاب ارب لوصحم هزا نا . ی

للآ

، A 950 ارنب و زانب تنفج ی

لنلآ

، G

013 تفج لرتنک ناب و زاب 515

زانب تفج . لونکلوم نزو رکرانمMW ي

م ي شاب ( 51 .)زاتنمرف ،زاب تفج لژ

زروفورتکلا 0

صرد يم شاب .

لودج هرامش 3 : زوت ی تونژع ي پ و ناوارف ي للآ اه ی لپ ي فروم ي مس کت توئلکون ي ی نژ اه ی IGSF2 و ردTNFα ود هورگ

تونژ ي پ و

للآ لکدا عت رامي بدا عت

اب راهم ه ننک ) صرد(

دا عت ب ي رام

نو ب راهم ه ننک

) صرد( p value Genotype p value Allele

Odd ratio, 95% CI*

(Lower-Upper, P value)

IGSF2 011 55 55 1/100 1/035

AA 59 )90/3 (00 )55/1 (05 0/903 )1/5-533/190، 1/551(

AG 93 )53/0 (03 )00/0 (01 1/931 )1/0-003/051، 1/103(

GG 01 )00/0 (01 )00/0 (01 سنرفرهورگ

A 009 )53/9 (19 )11/3 (11 0/53 )1/0-093/11، 1/035(

G 33 )50/3 (53 )99/9 (91 سنرفرهورگ

TNFα 011 55 55 1/039 1/590

AA 01 )00/0 (55 )33/0 (95 1/100 )1/0-055/530، 1/519(

AG 00 )01/3 (1 )00/0 (5 1/113) 1/9-009/303، 1/155(

GG 3 )3/9 (5 )00/0 (5 سنرفرهورگ

A 030 )03/9 (31 )09/9 (35 1/303 )1/0-990/115، 1/590(

G 03 )00/3 (05 )01/3 (05 سنرفرهورگ

CI: confidence interval

*

(7)

، ت ري 2931 69

یشهوژپ

ننعم طانبترا هورنگ ود رد ه ننکراهم ي

راد ی داد نانشن ار

( 111 / 1

= )p

. رد لو ج هرامش 5 ا ی ن نسررب ي انه نانشن هداد

تسا ه ش . ب طابترا ي ن م و نامرد هب ساپ ني

ناز ا نستب نحاو

ه ننکراهم هورگ رد

، رتماراپان نومزآ اب ی

نم و ی نت ي دروم

سررب ي م تفرگ رارق ي

گنا ي ن تما ي زا نامرد هب ساپ و ا ستب

59 / 00 و م ي گنا ي ن تما ني زا ا نستب و م نع نساپ هنب نانمرد

10 / 90 دوب تسا ه هک ب ي ن ا ی ن ود لنماع

، طانبترا ننعم ي راد ی

دوجو تشاد ( 110 / 1 = .)p

هرامش لودج :4

اقم هسی هداد اه ی نامرد ي اراد هورگود رد ی

ه ننکراهم

راهم نو ب و ه ننک

رتماراپ هورگ

راهم ه ننک

( 55 رفن ) هورگ

نو ب راهم ه ننک

( 55 رفن ) طس

یراد ينعم

جاودزا ماف يل ي

دا عت )رفن(

هلب 00 خ ي ر 03 هلب 09 خ ي ر 90 101 / 1

تنوفع و ی سور ي

دا عت رفن(

) هدولآ

09 پوکشم

01 ملاس

01 هدولآ

00 پوکشم

9 ملاس

05 111 / 1

ثحب

نیا هعلاطم

، ارب ی نلوا ي ن ور رنب رانب ی

تونژ ني پ انه ی

نژ اه ی

IGSF2 TNFα و

و سررب ي م ي ناز ه نننکراهم رد

بي نارام اب فومه يل ي ا ردA

نی نار

، انب .تنسا هنتفرگ مانجنا

اقم ی هس اوارف ن ي تونژ ي پ اراد هورنگ ود رد انه ی

و ه نننکراهم

هب هجوت اب ه ننکراهم نو ب 100

/ 1 = ننعم لاتنخاp

ي راد ی

نژ رد

IGSF2

ب ه لاننآ رد . نمآ تسد ي

ز

TNFα نژ توانفت

نننعم ي راد ی اقم رد ی هننس تونژ نني پ لننلآ و اننه هورننگ ود رد اننه

ه هانشم درگن نی ( 15 / 1

p>

.) رد نسررب ي م ني ناز ر ی کنس

رطخ ( )OR

تونژ ي پ اه و للآ اه رد اقم ی هنس انب تونژ ني پ و

للآ هورگ

،سنرنفر نه ي چ رنترب ی ارنب ی ا نی ن تونژ ني پ انه

تبسن هب ی ک ی رگ رد ود هورگ دروم هعلاطم انب هنجوت هنب

15 / 1

p>

ب ه ن تسد ي ما لانب تانعلاطم هنب هجوت اب . ين

ي

، رد

ب نامرد ي نارانم ي نه ود ننراد ه نننکراهم هنک

، ينکی

رنوخ لرتنک ی

ز ی اه ی ش داح ی رگید و ی ا ی دانج لنمحت

ای نم ي ی ا بت لقا ح ی

ل ندرک ی ک ساپ ونق ه ننهد ی

هنب

ی ک ساپ عض ه نهد ي

ف نب زا اب ي ن نتنآ ندرنب ي دانب

ی انه ،

دراد دوجو لصا ه .

ي رنوخ نامرد رد ی

ز ی انه ی ،دانح ننسر

ي ن هننظحلام لننباق طننس هننب ا

ی روتکاننف زا ردVIII

رج ی نا م نوخ ي شاب هک تنآ تظلغ ي

دانب ی ب ي رانم لنماع

مهم ي د ا ر نی ن نم اونصخ ي

نشاب ب . ي نارانم ي هنک یاراد

انپ ساپ اب ه ننکراهم يی

ن اب نتنسه نانمرد هنب نی

ت انب ي رنت

ااب ی داقعنا روتکاف ی

لاعف ات نوش نامرد ني

ت ه نننکراهم

ثنخ ي رنوخ و ی ز ی ب رد .دوش نامرد ي

نارانم ي شننکاو هنک

ای نم ي ش ی ماگنه نراد ي

ت هک ي رت تنآ ي داب ی اپ يی ن مک(

رت زا

5 تب حاو م ،تسا )ا س ي

ناوت ی ک س هدانم ي نسکوتوت ي ک

س ننام ي مافسفولک ي زود هارنمه هنب انه

ی اانب ی روتکانف

رزت ی ق هاگ و دومن زين ي

بمورنتورپ سکلپنمک هرتنانسنک زا ي

ن

و لاعف یا کرتون تفه روتکاف ني

ب هدافتنسا درنک ارانک . يی ود

کرتون تفه روتکاف زود ي

ب و ی ک بمورتورپ زود ي

ن لاعف

سا ربارب مه اب ه ش ارب هک ت

ی ب نامرد ي نارانم ه نننکراهم انب

نم هدافتسا ي دونش

( 01

ب رد .)

ي نارانم فونمه انب يل ي نش ی

A

ارب ی ب زا ي ن ا لنمحت ءاقلا شور زا ه ننکراهم ندرب ی

ننم ي

نم هدافتسا ي دونش

( 03

.)

رد هنعلاطم ا ی طنسوت هنک وDing

لاس رد ناراکمه 0105

چ رد ي ن تفرگ ماجنا

، لولس اه ی

ظنتT

ي م

+ي

+CD25

طس وCD4

لولنس انه ی نونوم و رونئلک

حم نوننننخ ي

ننننط ي ونور روتکاننننف و ی

ننننس

+ي

Foxp3

اننننب

اسولف ی رتموت ی ش هتفرگ هزا نا و

+ مهس

+CD25

ردCD4

بي نارام راهم اب ب ه ننک ي ش رت دوب تسا ه

( 00

.)

هعلاطم رد ا ی طنسوت هک

El-Asrar

رد نارانکمه و

لاس 0101 ش ماجنا رصم رد

، 55 اراد پدونک ی

فونمه يل ي

وA

55 پدونک فونمه نو نب يل

ي رارنق هنعلاطم درونمA

اسولف طسوت و تفرگ ی

رتموت ی م ي ناز لولس انه ی ظنت ي نم ي

CD25+ CD4+

م . ش هتفرگ هزا نا ي

ناز ا نی ن لولنس رد انه

بي نارام فومه يل ي اراد ی رد ه ننکراهم اقم

ی هس ب انب ي نارانم

فومه يل ي ب و ه ننکراهم نو ب ي

نارام ملاس گمشچ شهاک ي

ر ی

داد ناشن ار

( 03

اطم رد .)

اتم هعل لانآ ي ز طنسوت هنتفرگ ماجنا

Astermark

لاس رد ناراکمه و 0109

ور رنب ی ب ي نارانم

فومه يل ي

، اتن هب هجوت اب ی

ج ،لصاح 55 صرد ب ي نارانم نی ا

اراد ی ندوب ه ننکراهم یا

مز ي هن گداوناخ ي اتن . نتشاد ی

ج

ای ن قحت ي ق نعم لاتخا ي

راد ی تونژ رد ار ي پ نژ

IGSF2

اراد هورگ ود رد ی

راهم نانشن ه نننکراهم نو ب و ه ننک

(8)

داد

( 01

هعلاطم رد .)

ا ی طنسوت هک

Walsh

رد نارانکمه و

لاس 0105 رمآ رد ی اک تفرگ تروص

، طونبرم تاعلاوا

هننب 3901 فوننمه اننب درننم يل

ي ننش ی لوننو ردA

09 لاننس

پ ات ش هعلاطم ي

نب طانبترا هنب ي

ن کنشت ي ل رانهم و ه نننک

مي ناز م و گرم ي ر لاب مئلاع . نربب ين

ي ب هک و گرنم ثنعا

م نني ر ازننفا :لماننش دوننب ه ننش ی

ش رنوننخ ی ز ی

،اننه مننئلاع

بي رام ی اه ی بک ی

، گدولآ ي اب یHCV

ا رونضح وHIV

دوب ه ننکراهم مه و

نينچ م ي ناز م و گرنم ني ر ب رد ي نارانم انب

ه ننکراهم 31

صرد نب ي ش رنت ب زا ي نارانم ه نننکراهم نو نب

دوب تسا ه

( 00

هعسوت رطخ هک تسا هداد ناشن تاعلاطم .)

راهم ب رد ه ننک ي

نارام رات اب ی هچخ گداونانخ ي نب ي ش رنت زا

اس ی ر ی ن م ي شاب هعلاطم رد . ا

ی طنسوت هک

Astermark

و

لاس رد ناراکمه 0115

، نش ماجنا ئوس رد 30

نصرد

اراد دارفا ی ه ننکراهم

، رات ی هچخ گداونانخ ي تنشاد ه ا نن

( 00

.)

هننعلاطم رد ا

ی طننسوت هننک

Chaves

لاننس رد ناراننکمه و

0101 زرب رد ننی ل ننلپ طاننبترا تننفرگ تروننص ي

فروم ي مننس

رد ه نننکراهم هعنسوت انب

IL-10

، ،IL-5

وIL-4 TNFα

(A-308G)

، سررب ي م . ش ي ناز راهم شور طنسوت ه ننک

ان ی نگم تن . نش هنتفرگ هزا نا ي

هنج نسررب ي تونژ ني پ نه ي چ

وابترا ي نب ار ي ن رانهم هعنسوت تونژ و ه نننک

ني

TNFαپ ،

،IL-5

، IL-4

دا ننن ناننشن تننسا ه

( 09

م رد .)

هننعلاط ا ی هننک

طسوت

Pergantou

رد نارانکمه و ی

ناننو لانس رد 0109

ب طابترا تفرگ تروص ي

ن نگنوراو شهج ي

ا ی نورنتن 00

روتکانننف نژ

، VIII

اتولپاه و لنننلآ نننی

پ انننه ی وHLA

لپ ي فروم ي مس اس ی اکوت ی ن اه ی هنلمج زا اانخ

، TNFα

انب

رد ه ننکراهم هعسوت رطخ 50

فونمه هب لاتبم پدوک يل

ي

ش ی ف اب هکA

اهروتکا ی کرتون ي ب نندوب ه نش نانمرد

سررب دروم ي

ننعم توانفت .تنفرگ رارق ي

اد ر ی درونم رد

لپ ي فروم ي مس نژ

(A-308G)

اقم ردTNFα

ی هس هورگ ود

اراد ی شن ه هاشم ه ننکراهم نو ب و ه ننکراهم

( 05

انب .)

ا هب هجوت ی ن هک نژ

IGSF2

ور ی لولس انه ی ظنتT

ي نم ي

بي نا م ي ددرگ م ي ناوت هعلاطم تفگ

،رضاح هنعلاطم انب قفاوم

(Ding 00

و) Astermark (

01

هننننعلاطم اننننب لننننباقت رد و)

El-Asrar (

03

دوب)

تسا ه پ تاعلاطم هب هجوت اب . ي

نش ي ن رد لپ دروم

ي فروم ي منس

TNFα نژ

، ننیا اتنسار رد هنعلاطم ی

قحت ي تاق

Chaves ( 09

و ) Pergantou (

05

رد .تفرگرارق)

گداوناخ هقباس نتشاد رضاح هعلاطم ي

و گدونلآ ي

HCV

ب رد رطخ روتکاف ناونع هب ي

نارام شرازنگ ه نننکراهم انب

درگ ی هک ی هنتفا انه ی

Walsh ( 00

و) Astermark (

00

ار)

ات يی درک تسا ه . اب نانمز هزاب هب هجوت ي

، ژتارتنسا ی انه ی

نامرد ي

، امزآ زکارم دا عت ی

هاگش ي ارب دو حم ی

نسررب ي

بي نارام فومه يل ي اراد ی اپ و ه ننکراهم ی

ش م ي ناز روتکانف

غت و يي ر اب نآ ن و نامز تشذگ ي

ز ا ناکما ی دانج شنهج انه ی

ج هتخانشان ی

ثات لامتحا و ي

ر اس ی ر نژ س و اه ي کوت ي ن اه ی

س ي متننس ا ی نننم ي غ لننماوع و نني

ر تنژ ي ننک ي ا رد هننک ی داننج

م ه ننکراهم ي

منه ، ننشاب هتنشاد شنقن ننناوت ننچ

ي ن رانب

گنس ي ن زه ی هن اه ی نامرد ي ارب ی ب ي

،نارانم ا نی ن هنب هنعلاطم

پ شهوژ اه ی هدرتسگ رت ی ن ي نمزا م ي قح رد . شاب ي

،تق اب

مها هب هجوت ي

ت راهم عوضوم تاعلاوا نا قف و اه ه ننک

فاک ي ثأت اب طابترا رد ي

ر تنژ لماوع ي ک ي ب رد ي نارام فومه ني ل

ای ننننار ي اب ی تنننس ي قحت ي تانننق هدرتنننسگ رنننت ی ور ی دا نننعت

هنومن اه ی ب ي ش رت فونمه هنب لاتنبم دارنفا يل

ي رانکمه انب ی

زکارم د ی رگ تروص گ ي در هک ی ک ي زا دو نحم ی ت انه رد

رثکا هژورپ اه ی قحت ي تاق ي تسا . ب ه رونو

،هنصلاخ انتن ی ج

ا ننی ن هننعلاطم ناننشن داد هننک طاننبترا نننعم ي راد ی ننب ي ن

لپ ي فروم ي مس نژ

IGSF2

رد ه نننکراهم هعنسوت رنطخ انب

بي نارانم فوننمه يل ي مننه .دراد دونجو ننچ

ي ن هقباننس نتننشاد

گداوناخ ي گدولآ و ي اب

، HCV

ونع هب رد رطخ روتکاف نا

بي نارام راهم اب مها لباق ه ننک ي

ت .تسا

یرازگساپس

ققحم ي ن ا ی ن هعلاطم رنب دونخ مزا نم ي ننناد هنک زا

مامت ي دارفا تکرش ه ننک رد هعلاطم و زکرم نامرد عماج

فومه يل ي ا ی نار هب رواخ تکرانشم و

رانکمه ی منص ي هنام

ای ناش رد ا ی ن قحت ني ق و منه ننچ ي ن کنمک انه ی نکت ي نک ي

مناننخ ن ي رفوننل رداننن ی

، رننتکد ننلع ي

،روماننن رننتکد ناننگژم

مي لروخآر ي

، رتکد محم بذاج ي

، رتکد لع ي اضر زع ی ز ی و

مناخ مس ي ه ززعم ی رکشت و نادر ق ي امن ی ن .