ﯽﺳرﺮﺑ ﻣ
ﻮ اﺪﺟ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ياﺰﯾرﺎﻤﯿﺑ يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﯽﻟﻮﮑﻟ هﺪﺷ
ﯽﺘﺑﺎﯾد داﺮﻓا يﺎﭘ ﻢﺧز ﺎﺑ
هدﺎﻔﺘﺳا زا
شور Nested PCR
هداز لﺎﻤﮐ ارﺎﺳ
1
- *
رﺎﺑ ﮏﺒﺳ رذآ
2
1 - جﺮﮐ ﺪﺣاو ﯽﻣﻼﺳا دازآ هﺎﮕﺸﻧاد ،ﻪﯾﺎﭘ مﻮﻠﻋ هﺪﮑﺸﻧاد ،يژﻮﻟﻮﯿﺑوﺮﮑﯿﻣ هوﺮﮔ ،ﺪﺷرا ﯽﺳﺎﻨﺷرﺎﮐ .
ناﺮﯾا ،زﺮﺒﻟا .
2 - ،ﯽﺼﺼﺨﺗ يﺮﺘﮐد ﯿﻣ هوﺮﮔ
جﺮﮐ ﺪﺣاو ﯽﻣﻼﺳا دازآ هﺎﮕﺸﻧاد ،ﻪﯾﺎﭘ مﻮﻠﻋ هﺪﮑﺸﻧاد ،يژﻮﻟﻮﯿﺑوﺮﮑ .
ناﺮﯾا ،زﺮﺒﻟا .
* لﻮﺌﺴﻣ هﺪﻨﺴﯾﻮﻧ :
جﺮﮐ ﺪﺣاو ﯽﻣﻼﺳا دازآ هﺎﮕﺸﻧاد ،ﻪﯾﺎﭘ مﻮﻠﻋ هﺪﮑﺸﻧاد ،يژﻮﻟﻮﯿﺑوﺮﮑﯿﻣ هوﺮﮔ ،ﺪﺷرا ﯽﺳﺎﻨﺷرﺎﮐ .
ناﺮﯾا ،زﺮﺒﻟا .
ﯽﮑﯿﻧوﺮﺘﮑﻟا ﺖﺴﭘ :
هﺪﯿﮑﭼ
ﻪﻨﯿﻣز و فﺪﻫ شور: ﯽﮔﮋﯾو و ﺖﯿﺳﺎﺴﺣPCR
ﻻﺎﺑ ﻦﯿﯿﻌﺗ ﺖﻬﺟ ار ﯽﯾ ﻊﯾﺎﺷ يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﺐﻠﻏا ﻊﯾﺮﺳ ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ و ﯽﭼرﺎﻗDNA
ﺪﻫﺪﯿﻣ ﻪﺋارا ار سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﯽﮑﯿﻨﯿﻠﮐ .
شور ﺎﺑ ﺖﺸﮐ ﻪﺴﯾﺎﻘﻣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦﯾا زا فﺪﻫ nestedPCR
ﺲﯾزﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﻦﯿﯿﻌﺗ ياﺮﺑ ﻢﺧز زا
يﺎﭘ دﻮﺑ ناﺮﻬﺗ ﯽﻨﯿﻤﺧ مﺎﻣا نﺎﺘﺳرﺎﻤﯿﺑ ﻪﺑ هﺪﻨﻨﮐ ﻪﻌﺟاﺮﻣ ﯽﺘﺑﺎﯾد نارﺎﻤﯿﺑ .
شور 65 : ﻪﻧﻮﻤﻧ يﺎﻫ ﻢﺧز رد دﻮﺟﻮﻣ ﺲﯾزﻮﻠﯾزﺮﭙﺳآ ﻪﺑ كﻮﮑﺸﻣ
ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ ﻢﺧز و ﺖﺸﮐ ﻂﯾاﺮﺷ ﺖﺤﺗ
ﺪﻨﺘﻓﺮﮔ راﺮﻗ PCR .
ﻂﯿﺤﻣ يور ﺮﺑ ﺲﻨﺟ ﺪﺣ رد سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ يﺎﻫ ﻪﻟوﺰﯾا ﺪﻧﺪﺷ ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷSGA
. جاﺮﺨﺘﺳا ﺲﭙﺳ ﺎﻬﺸﻨﮐاو و مﺎﺠﻧاDNA
ي وPCR
Nested PCR ﺪﺷ مﺎﺠﻧا
. ﺪﺷ مﺎﺠﻧا ﻪﻧﻮﮔ و ﺲﻨﺟ ﺪﺿ يﺎﻫ يدﺎﺑ ﯽﺘﻧآ ﻦﺘﻓﺎﯾ ﺖﻬﺟ اﺰﯿﻟا ﺶﻨﮐاو و ﻪﯿﻬﺗ مﺮﺳ ﻪﻧﻮﻤﻧ نارﺎﻤﯿﺑ زا .
و ﺪﻧﺪﺷ ﻞﯿﻠﺤﺗ و ﻪﯾﺰﺠﺗ ﺲﻧﺎﯾراو ﺰﯿﻟﺎﻧآ يرﺎﻣآ نﻮﻣزآ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ ﺞﯾﺎﺘﻧ P<0.05
ﺪﺷ ﻪﺘﻓﺮﮔ ﺮﻈﻧ رد راد ﯽﻨﻌﻣ .
ﺎﻫ ﻪﺘﻓﺎﯾ عﻮﻤﺠﻣ زا :
65 ﻪﻧﻮﻤﻧ
؛ 39 ﻧﻮﻤﻧ ﻪ ﺪﻧﺪﺷ هداد ﺺﯿﺨﺸﺗ ﺖﺸﮐ شور زا ﻪﻠﺻﺎﺣ ﺲﯾزﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ناﻮﻨﻌﺑ .
شور رد PCR
و Nested PCR ﯽﺻﺎﺼﺘﺧا يﺎﻫﺮﻤﯾاﺮﭘ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ
41 سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ناﻮﻨﻌﺑ درﻮﻣ زا ﻪﮐ ﺪﻧﺪﺷ هداد ﺺﯿﺨﺸﺗ
ﺺﯿﺨﺸﺗ رد ﺮﻈﻧ
و نﺎﺴﮑﯾ ﻢﻫ ﺎﺑ ﻪﻧﻮﮔ د ﯽﻟ
ﺪﻧدﻮﺑ توﺎﻔﺘﻣ ﻢﻫ ﺎﺑ ﺲﻨﺟ ﺺﯿﺨﺸﺗ ر .
داﺪﻌﺗ ﻪﮐ داد نﺎﺸﻧ اﺰﯿﻟا ﺞﯾﺎﺘﻧ 39
ﺪﻧدﻮﺑ ﺖﺒﺜﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ .
يﺮﯿﮔ ﻪﺠﯿﺘﻧ :
ﻪﭼﺮﮔا ﺶﺠﻨﺳ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ يﺮﺘﻤﮐ ﺖﯿﺳﺎﺴﺣPCR
Nested PCR اﺰﯾرﺎﻤﯿﺑ يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﻦﯾﺮﺘﻌﯾﺎﺷ اﺮﺜﮐا ﯽﻟو دراد
سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﯽﻨﻌﯾ ﻣﻮﻓ
ﺪﻨﮑﯿﻣ ﻦﯿﯿﻌﺗ ار سﻮﺗﺎﮕﯿ .
ﺎﻣ ﺞﯾﺎﺘﻧ و ﺖﺸﮐ ﺞﯾﺎﺘﻧ ﻦﯿﺑﺎﻣ يراد ﯽﻨﻌﻣ توﺎﻔﺗ ﻪﮐ ﺪﻨﻫﺪﯿﻣ نﺎﺸﻧ ﺞﯾﺎﺘﻧ
nPCR رد
ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ ﺲﻨﺟ ﻮﺟو سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﺪﻧراد د
.
ﺎﻫ هژاوﺪﯿﻠﮐ :
Nested PCR -
سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ -
ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ ﻢﺧز -
ﺖﺸﮐ
ﻪﻣﺎﻨﻠﺼﻓ ﯽﻤﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد مﻮﻠﻋ ﯽﮑﺷﺰﭘ ﺖﺑﺮﺗ ﻪﯾرﺪﯿﺣ ي هرود،
،لوا هرﺎﻤﺷ 4
، نﺎﺘﺴﻣز 1392
ﻪﻣﺪﻘﻣ نآ ﺎﺑ مﺎﮕﻤﻫ ﯽﮑﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ ﺖﻓﺮﺸﯿﭘ و يژﻮﻟﻮﻨﮑﺗ ﺪﺷر ﺎﺑ هزوﺮﻣا
ﻬﺑ ﺢﻄﺳ ﻦﺘﻓرﻻﺎﺑ و ﯽﻋﺎﻤﺘﺟا ﻂﯾاﺮﺷ دﻮﺒﻬﺑ ﺰﯿﻧ و رد ﯽﻣﻮﻤﻋ ﺖﺷاﺪ
ﺑ ﻪﺘﻓﺮﺸﯿﭘ ﻊﻣاﻮﺟ ﻪ
ﻪﻌﺳﻮﺗ لﺎﺣ رد يﺎﻫرﻮﺸﮐ رد و ﺮﯿﮕﻤﺸﭼ ﻮﺤﻧ
ﯽﭼرﺎﻗ ًﺎﺻﻮﺼﺧ و ﯽﻧﻮﻔﻋ يﺎﻬﯾرﺎﻤﯿﺑ لﺮﺘﻨﮐ ﺐﺟﻮﻣ ،بﻮﻠﻄﻣ ﺪﺣ رد ،زﺪﯾا نﻮﭼ ﯽﻠﻣاﻮﻋ هراﻮﻤﻫ ﺪﻧور ﻦﯾارد ﻪﻧﺎﻔﺳﺄﺘﻣ ﯽﻟو هﺪﯾدﺮﮔ ﺪﻧا هدﻮﻤﻧ لﻼﺘﺧا دﺎﺠﯾا ﺖﺑﺎﯾد و ﺎﻬﻧﺎﻃﺮﺳ )
1 (.
رد ﻪﻠﺻﺎﺣ يﺎﻬﺘﻓﺮﺸﯿﭘ ﻞﻣاﻮﻋ ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ
ﯿﻣ ﯽﺑوﺮﮑ ياﺰﯾرﺎﻤﯿﺑ
نﺎﺴﻧا و لﺮﺘﻨﮐ ﻦﯿﻨﭽﻤﻫ ﻬﯾرﺎﻤﯿﺑ نﺎﻣرد
ﺎﻬﻧآ زا ﻪﻠﺻﺎﺣ يﺎ رد
ود
ﺮﺑ ﺮﯿﺧا ﻪﻫد و ﻪﺘﺴﺟ
ﯿﺴﺤﺗ ﺖﺳا هدﻮﺑ ﺰﯿﮕﻧا ﺮﺑ ﻦ .
ﻦﯾا دﻮﺟو ﺎﺑ
ﯽﭼرﺎﻗ يﺎﻬﯾرﺎﻤﯿﺑ بﻮﮐﺮﺳ يﺎﻫ يرﺎﻤﯿﺑ شﺮﺘﺴﮔ ﺎﺑ ﺐﻠﻃ ﺖﺻﺮﻓ
ﺪﻨﺘﺴﻫ حﺮﻄﻣ ﯽﻧﺎﻣرد ﻞﻀﻌﻣ ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ ﯽﻨﻤﯾا ﻢﺘﺴﯿﺳ هﺪﻨﻨﮐ )
2 (.
رد ﻤﮐ يﺎﻫ ﺖﯿﻘﻓﻮﻣ ﻪﮑﯿﻟﺎﺣ ﺎﻬﯾرﺎﻤﯿﺑ ﻞﯿﺒﻗ ﻦﯾا لﺮﺘﻨﮐ رد ﯽ
ﻣا ﺖﺳا هﺪﺷ ﻞﺻﺎﺣ ﺪﻧﻮﺸﻧ ﻊﻗاو ﻪﺟﻮﺗ درﻮﻣ ﺖﺳا ﻦﮑﻤﻣ ﺎ
و
ﺪﻨﻧاﻮﺘﯿﻣ ﻞﺋﺎﺴﻣ ﻪﻨﯿﻣز رد ار ﯽﺘﺷاﺪﻬﺑ تﻼﮑﺸﻣ ﻦﯾﺮﺘﮔرﺰﺑ ﻼﻤﻋ
ﯽﺘﺑﺎﯾد داﺮﻓا ﺪﻧروآ دﻮﺟﻮﺑ
) 1 (.
ﺚﻋﺎﺑ ﺪﻌﺘﺴﻣ داﺮﻓا رد ﻻﻮﻤﻌﻣ ﺐﻠﻃ ﺖﺻﺮﻓ ﯽﭼرﺎﻗ يﺎﻫ ﺖﻧﻮﻔﻋ ددﺮﮔ ﯽﻣ هﺪﻨﺸﮐ و دﺎﺣ يﺎﻫ يرﺎﻤﯿﺑ دﺎﺠﯾا )
3 .(
ﺮﮐذ ﻪﮐ رﻮﻄﻧﺎﻤﻫ
ﯽﭼرﺎﻗ يﺎﻬﺘﻧﻮﻔﻋ ﻪﺑ ﻼﺘﺑا رد يا ﻪﻨﯿﻣز يﺎﻬﯾرﺎﻤﯿﺑ ﻪﻠﻤﺟ زا ﺪﺷ ﺖﺳا ﺖﺑﺎﯾد ﺐﻠﻃ ﺖﺻﺮﻓ .
يرﺎﯿﺴﺑ ﺶﻫﺎﮐ و لﺮﺘﻨﮐ ﻢﻏﺮﯿﻠﻋ هوزﺮﻣا
ﺎﻬﯾرﺎﺘﻓﺮﮔ زا ﺐﻠﻃ ﺖﺻﺮﻓ ﯽﭼرﺎﻗ يﺎﻬﺘﻧﻮﻔﻋ ،يرﺎﻤﯿﺑ ﻦﯾا ضراﻮﻋ زا ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ ﯽﺘﺑﺎﯾد نارﺎﻤﯿﺑ ﻢﻬﻣ يﺎﻬﺘﻤﺣاﺰﻣ و .
رﻮﮐﻮﻣ لﺎﺜﻣ رﻮﻄﺑ
ﯽﮑﯾ ﻪﮐ ﺲﯾزﻮﮑﯾﺎﻣ و ﻊﯾﺮﺳ ﯽﻠﯿﺧ ﺖﻓﺮﺸﯿﭘ ﺎﺑ ﯽﭼرﺎﻗ يﺎﻬﯾرﺎﻤﯿﺑ زا
زا ﺶﯿﺑ ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ هﺪﻨﺸﮐ 90
% ﯽﻣ هﺪﯾد ﯽﺘﺑﺎﯾد نارﺎﻤﯿﺑ رد دراﻮﻣ
دﻮﺷ ) 3 (.
سﻮﺘﯿﻠﻣ ﺖﺑﺎﯾد ﻪﮐ ﺖﺳا ﻦﯾا زا ﯽﮐﺎﺣ يدﺎﯾز يﺎﻬﺷراﺰﮔ يﺎﻬﯾرﺎﻤﯿﺑ ﻪﺑ ﻼﺘﺑا ياﺮﺑ يا ﻪﻨﯿﻣز ﻢﻬﻣ يﺎﻬﯾرﺎﻤﯿﺑ زا ﯽﮑﯾ ناﻮﻨﻌﺑ
ﺷﺎﺑ ﯽﻣ ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ ﻢﺧز يﺎﻬﺘﻧﻮﻔﻋ صﻮﺼﺨﺑ ﯽﭼرﺎﻗ ﺪﻨ
) 4،
5 ( اﺮﯾز
يﺎﻬﯾرﺎﻤﯿﺑ ﻪﺑ ﻼﺘﺑا ياﺮﺑ يﺮﺘﺸﯿﺑ ﺲﻧﺎﺷ فﺮﻃ ﮏﯾ زا نارﺎﻤﯿﺑ ﻦﯾا ترﻮﺼﺑ يرﺎﻤﯿﺑ ،ﻼﺘﺑا ترﻮﺻ رد ﺮﮕﯾد فﺮﻃ زا و ﻪﺘﺷاد ﯽﭼرﺎﻗ باﻮﺟ ﻢﻫ ﯽﭼرﺎﻗﺪﺿ نﺎﻣرد ﻪﺑ و ﺪﯾآ ﯽﻣرد هﺮﺸﺘﻨﻣ ﺎﯾ ﻦﻣﺰﻣ ﺪﻫد ﯽﻤﻧ ﺐﺳﺎﻨﻣ )
6،
7 (.
نﺎﯿﻣ رد ﻞﻣاﻮﻋ
ﯽﭼرﺎﻗ
، ﻊﯾﺎﺷ ﺎﻬﻧآ ﻦﯾﺮﺗ ﺲﯾزﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ
و
زﺎﯾﺪﯾﺪﻧﺎﮐ نﺎﻣرد ﻪﺑ داﺮﻓا ﻦﯾا ﻻﻮﻤﻌﻣ ﻪﮐ ﺪﺷﺎﺒﯿﻣ ﺎﭘ ﻢﺧز رد ﺲﯾ
ﮕﯿﻣ ﻦﻣﺰﻣ ﺮﯿﺳ يرﺎﻤﯿﺑ و ﺪﻨﻫﺪﯿﻤﻧ ﺦﺳﺎﭘ ﯽﮑﯿﺗﻮﯿﺑ ﯽﺘﻧآ ﯿ
دﺮ ) 8
،9 (.
سﻮﺗﺎﮕﯿﻣﻮﻓ ﺲﯾزﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ (A.fumigatus )
سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآو
سووﻼﻓ (A.flavus) ﺲﯾزﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ هﺪﻨﻨﮐدﺎﺠﯾا ﯽﻠﺻا ﻞﻣﺎﻋود
ﯽﺘﺑﺎﯾد ﯽﻣ ﺪﻨﺷﺎﺑ . ﻪﻠﺧاﺪﻣ ﺖﺳا ﻦﮑﻤﻣ يﺮﮕﯾد يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﻪﺘﺷاد
ﻞﻣﺎﺷ ﻪﮐ ﺪﻨﺷﺎﺑ A.nigrescens A.amstelodami
,A.niger, A.nidulans, A.glaucus, A.terreus ﯽﻣ
ﺪﻧﻮﺷ ) 10
، 12 (.
اﺪﺟ كﻮﮑﺸﻣ يﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ زا رﺮﮑﻣ رﻮﻃ ﻪﺑ چرﺎﻗ ﻦﯾا ﻪﮐ ﯽﻣﺎﮕﻨﻫ دﻮﺷ دﻮﺸﯿﻣ هداد ﺺﯿﺨﺸﺗ ﺲﯾزﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ .
ﻪﮑﻨﯾا ﻞﯿﻟد ﻪﺑ
ﺎﻬﻨﺗ ﺪﻧراد رﻮﻀﺣ ﺎﺟ ﻪﻤﻫ رد ﺎﺒﯾﺮﻘﺗ چرﺎﻗ ﻦﯾا يﺎﻫرﻮﭙﺳا ﻪﺴﯾﺎﻘﻣ ﺎﺑ
و نﺎﺴﮑﯾ شور ﺎﺑ و تﺎﺸﯾﺎﻣزآ زا يﺮﺴﮑﯾ ﺞﯾﺎﺘﻧ ناﻮﺘﯿﻣ نﺎﻣﺰﻤﻫ
دﻮﻤﻧ ﺺﺨﺸﻣ ار ﻪﻧﻮﮔ عﻮﻧ .
ياﺮﺑ اﺬﻟ ﺪﯿﯾﺎﺗ ﻞﻣﺎﻋ ﯽﺳﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ رد
زا ﺪﯾﺎﺑ ،ﻢﺧز ﺖﻧﻮﻔﻋ ﻞﻤﻋ ﻪﺑ يرادﺮﺑ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻪﻠﺣﺮﻣ ﺪﻨﭼ ﯽﻃ ﻢﺧز
سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ عﻮﻧ ﮏﯾ ﺪﯾﺎﺑ ﻞﺣاﺮﻣ مﺎﻤﺗ رد هﺪﺷاﺪﺟ ﻞﻣﺎﻋ و ﺪﯾآ ﻧآ ناﻮﺘﺑ ﺎﺗ ﺪﺷﺎﺑ ﻨﻋ ﻪﺑ اﺮ
دﺮﮐ حﺮﻄﻣ ﺖﻧﻮﻔﻋ ﻞﻣﺎﻋ ناﻮ )
3 (.
ﻦﯿﯿﻌﺗ
ﯽﺼﺼﺨﺗ و ﻖﯿﻗد تﺎﺸﯾﺎﻣزآ ﻪﺑ ﻪﻧﻮﮔ عﻮﻧ ﻞﻣﺎﺷ ﻪﮐ ﺖﺳا ﺪﻨﻣزﺎﯿﻧ
ﺳرﺮﺑ ﺎﯾ ﺖﺸﮐ ﯽ
ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ مﻮﻧژ .
ﺳرﺮﺑ ﻦﯿﺑ ﻦﯾا رد ﯽ
ﯽﺷور مﻮﻧژ
ﺪﺷﺎﺒﯿﻣ ﺮﺗ ﻖﯿﻗد و ﺮﺗ ﻦﺌﻤﻄﻣ .
ﯽﺳرﺮﺑ ﺮﺿﺎﺣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ مﺎﺠﻧا زا فﺪﻫ
ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ ﻢﺧز زا هﺪﺷ اﺪﺟ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﯽﻟﻮﮑﻟﻮﻣ ﺳﻮﺗ شور ﻂ Nested PCR ﺎﺑ نآ ﺖﯿﺳﺎﺴﺣ ﻪﺴﯾﺎﻘﻣ و
وPCR
دﻮﺑ ﺖﺸﮐ .
شور ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ
ﻄﻘﻣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦﯾا رد ي هرود ﮏﯾ ﯽﻃ ؛ﯽﻌ
9 ﻪﺳ ، هﺎﻣ
ﻞﺼﻓ ) ﺰﯿﯾﺎﭘ - نﺎﺘﺴﻣز 91 رﺎﻬﺑ– نﺎﺘﺴﺑﺎﺗ ﻞﯾاوا– 92
( زا 65 رﺎﻤﯿﺑ
مﺎﻣا نﺎﺘﺳرﺎﻤﯿﺑ ﯽﻧﻮﻔﻋ ﺶﺨﺑ ﻪﺑ هﺪﻨﻨﮐ ﻪﻌﺟاﺮﻣ ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ ﻢﺧز ﺎﺑ ﺑ نﺎﺸﯾﺎﻫ ﻢﺧز ﻪﮐ ناﺮﻬﺗ ﯽﻨﯿﻤﺧ ﻪ
ﺦﺳﺎﭘ ﯽﮑﯿﺗﻮﯿﺑ ﯽﺘﻧآ نﺎﻣرد
ﺪﻧ ﭻﯿﻫ ﻦﻤﺿ رد و ﺪﻧدﻮﺑ هدا ﺖﻓﺎﯾرد ﯽﭼرﺎﻗ ﺪﺿ نﺎﻣرد ﻪﻧﻮﮔ
مﺎﺠﻧا ﺖﻬﺟ يﺮﯿﮔ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺪﻧدﻮﺑ هﺪﺸﻧ ﯽﺣاﺮﺟ ﺎﯾ و ﺪﻧدﻮﺑ هدﺮﮑﻧ ﺪﺷ مﺎﺠﻧا ﯽﺳﺎﻨﺷ جرﺎﻗ تﺎﺸﯾﺎﻣزآ .
ﻮﻤﻧ ﺖﺳﻮﭘ ﺢﻄﺳ نﺪﯿﺷاﺮﺗ شور ﻪﺑ يﺮﯿﮔ ﻪﻧ )
ﮓﻨﯿﭘاﺮﮑﺳا (
و ﺎﭘ
ﻦﯿﺑ ﺎﯾد نارﺎﻤﯿﺑ ﺎﭘ نﺎﺘﺸﮕﻧا ﺘﺑﺎﯾد ﻢﺧز ﺎﺑ ﯽﺘﺑ
ﺖﻓﺮﮔ مﺎﺠﻧا ﯽ .
و تﺎﻌﯾﺎﺿ ﺢﻄﺳ مارآ نﺪﯿﺷاﺮﺗ ﻎﯿﺗ ﻞﭙﻟﺎﮑﺳا ﻪﺒﻟ ﺎﺑ رﺎﺘﻓﺮﮔ ﺖﻓﺎﺑ
هرﺎﻤﺷ يرﻮﺘﺴﯿﺑ 11
زا ﺖﺳﻮﭘ ﺢﻄﺳ نﺪﯿﺷاﺮﺗ و ﻢﺧز ﻞﺤﻣ زا
و ﻢﻟﺎﺳ ﺖﻓﺎﺑ ﻓﺮﮔ ﺮﯿﻏ
ﺪﺷ مﺎﺠﻧا رﺎﺘ .
ﺖﯿﻠﭘ رد ﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ يروآ ﻊﻤﺟ
ﺪﺷ . مﺎﻧ و مﺎﻧ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ رﺎﻤﯿﺑ ي هﺪﻧوﺮﭘ ﯽﺳرﺮﺑ ﺲﭙﺳ
ﯽﮔداﻮﻧﺎﺧ ﻦﺳ –
ﺲﻨﺟ – ﻬﯾرﺎﻤﯿﺑ – هاﺮﻤﻫ يﺎ ﻣ يﺎﻫوراد –
فﺮﺼ
هﺪﺷ ﮏﺷﺰﭘ ﺺﯿﺨﺸﺗ – ﻪﺟرد ﺮﻈﻧ زا و يﺮﯿﮔ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺦﯾرﺎﺗ –
يﺮﯿﮔرد ) 1.
،ﯽﻧﻮﻔﻋ ﯽﺤﻄﺳ ﻢﺧز 2.
،ﯽﻧﻮﻔﻋ ﻖﯿﻤﻋ ﻢﺧز 3
. ﻪﺴﺑآ
دﺎﺣ ﻖﯿﻤﻋ
، 4 . بﻮﻃﺮﻣ ﯽﮑﺗ ﺖﺸﮕﻧا نﺪﺷ ﺪﺳﺎﻓ ،
5 . نﺪﺷ ﺪﺳﺎﻓ
ﺎﭘ ﻞﻣﺎﮐ ( ﻞﻘﺘﻨﻣ ﯽﺳﺎﻨﺷ چرﺎﻗ هﺎﮕﺸﯾﺎﻣزآ ﻪﺑ ﻊﯾﺮﺳ و ﺪﯾدﺮﮔ ﯽﺳرﺮﺑ
ﺪﺷ . تﺎﺸﯾﺎﻣزآ ﺖﻬﺟ نﺎﻣﺰﻤﻫ ﺖﺷادﺮﺑ و ﯽﺴﭘﻮﯿﺑ ؛يژﻮﻟﻮﯿﺑﻮﺗﺎﭘ
ﺎﺑ يﺰﯿﻣآ ﮓﻧر ياﺮﺑ ﻪﮐ ﺪﯾدﺮﮔ مﺎﺠﻧا رﺎﻤﯿﺑ زا ﺖﻓﺎﺑ ﻪﺑ PAS
ﺪﺷ ﻞﻘﺘﻨﻣ هﺎﮕﺸﯾﺎﻣزآ .
ﺸﺗ ﻨﯿﻟﺎﺑ ﻢﺋﻼﻋ سﺎﺳا ﺮﺑ يرﺎﻤﯿﺑ ﺺﯿﺨ ،ﯽ
ﯽﺘﻓﺎﺑ يرادﺮﺑ ﻪﻧﻮﻤﻧ ،
و ﻪﯿﻬﺗ ﻮﺴﻧ يﺎﻬﻣﻻ ﺶﯾﺎﻣزآ ﻊﯾﺮﺳ ﺪﯿﯾﺎﺗ رد هﺪﺷ يﺰﯿﻣآ ﮓﻧر ج
ﮏﯿﺘﭙﺳآ ﻂﯾاﺮﺷ )
ﺖﯿﻓوﺮﭘﺎﺳ ﻢﯿﺴﻧﺎﮔرا ﻪﮑﻨﯾا ﺖﻠﻌﺑ دﻮﺑ
(،
هﺪﻫﺎﺸﻣ
ﻔﯾﺎﻫ ﻬ يﺎ چرﺎﻗ ، ﺘﻧآ ﺎﺑ هاﺮﻤﻫ ﺖﺸﮐ زا ندﺮﮐ اﺪﺟ ﯽﯾﺎﻬﻧ ﺺﯿﺨﺸﺗ ﯽ
ﻣ و ﯽﯾﺎﯾﺮﺘﮐﺎﺑ ﺪﺿ ﮏﯿﺗﻮﯿﺑ ،اﻮﻫ ﺖﺸﮐ زا نﺎﻣﺰﻤﻫ يﺎﻬﭼرﺎﻗ ﻪﺴﯾﺎﻘ
دﻮﺑ ﺪﯿﯾﺎﺗ ﻞﺑﺎﻗ .
ﯽﭘﻮﮑﺳوﺮﮐﺎﻣ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ :
ﻪﮐ هﺪﺷ يروآ ﻊﻤﺟ يﺎﻫ ﻪﺷاﺮﺗ
ﻘﺘﻨﻣ هﺎﮕﺸﯾﺎﻣزآ ﻪﺑ ﺪﻧدﻮﺑ رﺎﺘﻓﺮﮔ و ﻢﻟﺎﺳ ﺖﻓﺎﺑ ﻞﻣﺎﺷ ﺮﺑ و ﺪﺷ ﻞ
ﺎﺳ ﻂﯿﺤﻣ يور زوﺮﺘﺴﮐدوﺮﺑ
يﺎﻣد رد و ﺪﻧﺪﺷ هداد ﺖﺸﮐ رﺎﮔآ 25
ﺪﯾدﺮﮔ ﻪﺑﻮﮑﻧا ﻪﺘﻔﻫ ﮏﯾ تﺪﻣ ﻪﺑ داﺮﮔ ﯽﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد ﻦﯾا زا ﺲﭘ و ﺪﻧ
ﻪﮐ ﯽﺗرﻮﺻ رد تﺪﻣ ﻠﮐ
ﻮ ﺖﻧﺎﻣ تو شور زا ،ﺪﺷ هﺪﻫﺎﺸﻣ ﯽﻧ
ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا .
،پﻮﮑﺳوﺮﮑﯿﻣ ﺮﯾز رد ﯽﺳرﺮﺑ و ﺖﻧﺎﻣ تو مﺎﺠﻧا رد
ﺪﻧﺪﺷ هداد قاﺮﺘﻓا ﯽﺘﯿﻓوﺮﭘﺎﺳ چرﺎﻗ زا يﺮﻤﺨﻣ لﻮﻠﺳ .
ﻮﺻ رد تر
ﺪﻫﺎﺸﻣ سﺎﺘﭘ ﻂﺳﻮﺗ ﺖﯿﻓوﺮﭘﺎﺳ چرﺎﻗ ي ه 10
%،
ﻮﺘﮐﻻ زا ياﺮﺑ ﻞﻨﻓ
ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا ﺺﯿﺨﺸﺗ .
ﯽﺳﺎﻨﺷ ﺖﻓﺎﺑ تﺎﺸﯾﺎﻣزآ :
ﺖﻓﺎﺑ كﻮﻠﺑ ،ﺖﻓﺎﺑ زﺎﺳﺎﭘ زا ﺲﭘ
ﻪﺑ مﻮﺗوﺮﮑﯿﻣ هﺎﮕﺘﺳد ﻂﺳﻮﺗ ﺲﭙﺳ و ﻪﯿﻬﺗ ﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ زا ﯽﺳﺎﻨﺷ هزاﺪﻧا 5 - 4 ﺪﯾدﺮﮔ ﻪﯿﻬﺗ يژﻮﻟﻮﺗﺎﭘ مﻻ و هداد شﺮﺑ ﯽﻧوﺮﮑﯿﻣ .
زا ﺲﭘ
نﺪﺷ ﺲﮑﯿﻓ
، ﯿﻣآ ﮓﻧر ﻂﺳﻮﺗ يﺰ ﺪﺷ مﺎﺠﻧا PAS
. شور ﻦﯾا رد
ﻦﯾﺮﮔ ﺖﯾﻻ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺐﺴﺣ ﺮﺑ ﻪﻨﯿﻣز و ﯽﺗرﻮﺻ ﮓﻧر ﻪﺑ ﺎﻬﭼرﺎﻗ زا ﺎﯾ H&E ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ ﺰﻣﺮﻗ ﺎﯾ ﺰﺒﺳ ، .
ﯽﻟﻮﮑﻟﻮﻣ تﺎﺸﯾﺎﻣزآ :
جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ چرﺎﻗ DNA
، مﻮﯿﻠﺴﯿﻣ
ﺲﭙﺳ ﺪﻧﺪﺷ اﺪﺟ ﯽﻣارآ ﻪﺑ ﺖﺸﮐ يﺎﻫ ﻂﯿﺤﻣ زا ﺎﻫ 500
وﺮﮑﯿﻣ
جاﺮﺨﺘﺳا ﺮﻓﺎﺑ زا ﺮﺘﯿﻟ )
ﻞﻣﺎﺷ 100 ﯽﻠﯿﻣ رﻻﻮﻣ Tris-HCl و
40
رﻻﻮﻣ ﯽﻠﯿﻣ (EDTA
و 60 تﺎﻔﻟﻮﺳ ﻞﯿﺳدود ﻢﯾﺪﺳ ﺮﺘﯿﻟ وﺮﮑﯿﻣ
20 % و 300 ﺪﺷ هدوﺰﻓا ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺮﻫ ﻪﺑ ﺪﯾاﺮﻠﮐ ﻞﯾﺰﻨﺑ ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ .
ﻦﯾا
تﺪﻣ ﻪﺑ نﺪﺷ ﺲﮑﺗرو زا ﺲﭘ طﻮﻠﺨﻣ 40
ﻪﻘﯿﻗد و يﺎﻣد رد 50
ﺲﭙﺳ و ﺪﺷ ﻪﺑﻮﮑﻧا ﻪﺟرد ﻪﺑ
تﺪﻣ 10 هداد نﺎﮑﺗ تﺪﺷ ﻪﺑ ﻪﻘﯿﻗد
زﺎﻓ ود ﻪﮑﻨﯾا ﺎﺗ ﺪﺷ دﻮﺷ دﺎﺠﯾا اﺰﺠﻣ
.
ﺲﭙﺳ 60 تﺎﺘﺳا ﻢﯾﺪﺳ ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ 3
و ﺪﯾدﺮﮔ ﻪﻓﺎﺿا رﻻﻮﻣ
تﺪﻣ ﻪﺑ ﺦﯾ يور ﺮﺑ ﺎﻫ بﻮﯿﺗ وﺮﮑﯿﻣ 20
ﺪﻧﺪﺷ يراﺪﻬﮕﻧ ﻪﻘﯿﻗد .
بﺎﺘﺷ ﺎﺑ ژﻮﻔﯾﺮﺘﻧﺎﺳ زا ﺲﭘ 3,500 x g
يﺎﻣد رد 4 تﺪﻣ ﻪﺑ ﻪﺟرد
15 و ﺪﺷ اﺪﺟ ﯽﯾور ﻊﯾﺎﻣ ﻪﻘﯿﻗد ﻪﺑ لﻮﻧﺎﭘوﺮﭘوﺰﯾا ﻂﺳﻮﺗ DNA
ﺷ هداد بﻮﺳر ﮏﯾ ﻪﺑ ﮏﯾ ﺖﺒﺴﻧ ﺪ
. يوﺎﺣ بﻮﺳر ادﺪﺠﻣDNA
رد 300 ﺮﻓﺎﺑ زا ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ ﺪﺷ ﻞﺣ TE
. و 5/
1 ﺮﺘﯿﻟ وﺮﮑﯿﻣ
) 10 ﺮﺘﯿﻟ ﯽﻠﯿﻣ ﺮﻫ رد مﺮﮔ ﯽﻠﯿﻣ (
ﻪﻓﺎﺿا لﻮﻠﺤﻣ ﻦﯾا ﻪﺑ ﺪﺷ
. زا DNA ﺶﻨﮐاو ياﺮﺑ هﺪﻣآ ﺖﺳﺪﺑ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ PCR
ﺪﯾدﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﺲﻨﺟ ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ .
ﺶﻨﮐاو :PCR ﺶﻨﮐاو ﻂﯾاﺮﺷ ﻮﻤﻧ ﯽﻣﺎﻤﺗ ياﺮﺑPCR
ﺎﻫ ﻪﻧ
ﺪﺷ مﺎﺠﻧا نﺎﺴﮑﯾ ترﻮﺻ ﻪﺑ .
يوﺎﺣ ﺎﻫ ﺶﻨﮐاو زا ﮏﯾ ﺮﻫ 5/
2
ﺮﻓﺎﺑ ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ
، PCR 15 رﻻﻮﻣ ﯽﻠﯿﻣ MgCl2
، 5 /0 ﻢﯾﺰﻧآ U
Taq polymerase ،
1 ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ وdNTP
20 زا لﻮﻣ ﻮﮑﯿﭘ
ﺎﻫ ﺮﻤﯾاﺮﭘ زا ﮏﯾ ﺮﻫ )
و Asp1 Asp2 ( دﻮﺑ . ﺮﺑ ﺎﻫ ﺮﻤﯾاﺮﭘ ﻦﯾا
ﻪﻌﻄﻗ سﺎﺳا 360
ﻪﯿﺣﺎﻧ رد هﺪﺷ ﻆﻔﺣ زﺎﺑ ﺖﻔﺟ 16s rRNA
رد
ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ ﺎﻫ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﺲﻨﺟ .
ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ ﯽﻟاﻮﺗ ﻦﯾا زا
ﺖﺳا هﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا نآ ﺪﯿﯾﺎﺗ و ﺲﻨﺟ .
رﻮﻓوﺮﺘﮑﻟا ز:
تﻻﻮﺼﺤﻣ لژ يور ﺮﺑ زرﻮﻓوﺮﺘﮑﻟا ﻂﺳﻮﺗ PCR
رﺎﮔآ ز 2 ﺖﻈﻠﻏ ﺎﺑ ﺪﯾﺎﻣوﺮﺑ مﻮﯾﺪﯿﺗا ﺎﺑ هﺪﺷ يﺰﯿﻣآ ﮓﻧر ﺪﺻرد 5/
0
ﺪﻧﺪﺷ ﯽﺳرﺮﺑ ﺮﺘﯿﻟ ﯽﻠﯿﻣ ﺮﻫ يازا ﻪﺑ مﺮﮔوﺮﮑﯿﻣ .
ناﺰﯿﻣ 10
لﻮﺼﺤﻣ زا ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ ﺎﺑ هاﺮﻤﻫ PCR
2 ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ Loading
Buffer 6X و ﺪﻧﺪﺷ يراﺬﮔ رﺎﺑ زرﺎﮔآ لژ يﺎﻫ ﮏﻫﺎﭼ نورد
تﺪﻣ ياﺮﺑ 45
ژﺎﺘﻟو ﺎﺑ ﻪﻘﯿﻗد 100
يوﺎﺣ ﮏﻧﺎﺗ نورد ﺖﻟو TAE
Buffer 0.5X ﺪﻧﺪﺷ يزاﺪﻧا هار
. ﺮﯾز رد لژ تﺪﻣ ﻦﯾا زا ﺲﭘ
هﺎﮕﺘﺳد ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﯽﺳرﺮﺑ درﻮﻣUV
.
ﺶﻨﮐاو nested PCR :
لوا ﻪﻠﺣﺮﻣ :
ﺲﻨﺟ ﺪﯿﯾﺎﺗ زا ﺲﭘ
سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﻪﻧﻮﮔ ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ ﻞﺒﻗ ﻪﻠﺣﺮﻣ رد سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﺶﻨﮐاو زا دﻮﺷ ﯽﻣ هدﺎﻔﺘﺳا nPCR
. ﺶﻨﮐاو ﻦﯾا لوا ﻪﻠﺣﺮﻣ رد
ﺶﻨﮐاو ﺪﻨﻧﺎﻤﻫ تﺎﺒﯿﮐﺮﺗ ﯽﻣﺎﻤﺗ ﻪﺑ ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ ﻞﺒﻗ ﻪﻠﺣﺮﻣ PCR
ﺮﻤﯾاﺮﭘ زا ﺮﯿﻏ Reverse
يﺎﺟ ﻪﺑ ﻪﮐ زاAsp2
هدﺎﻔﺘﺳا Asp3
ﺖﺳا هﺪﺷ .
لﻮﻃ ﻪﻠﺣﺮﻣ ﻦﯾا رد هﺪﺷ ﺮﯿﺜﮑﺗ ﻪﻌﻄﻗ 740
زﺎﺑ ﺖﻔﺟ
ﻒﻠﺘﺨﻣ يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ رد يﺮﯿﻐﺘﻣ ﯽﺣاﻮﻧ ﻪﻌﻄﻗ ﻦﯾا نورد ﻪﮐ هدﻮﺑ ﺪﻧراد دﻮﺟو .
زا زرﻮﻓ وﺮﺘﮑﻟا ﺎﺑ ﻪﻌﻄﻗ ﻦﯾا ﺮﯿﺜﮑﺗ ﺪﯿﯾﺎﺗ زا ﺲﭘ
ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ ﻪﻠﺣﺮﻣ ﻦﯾا لﻮﺼﺤﻣ يﺪﻌﺑ ﻪﻠﺣﺮﻣ رد ﻪﻧﻮﻤﻧ DNA
ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا .
مود ﻪﻠﺣﺮﻣ :
ﻣ زا ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺮﻫ يازا ﻪﺑ ﻪﻠﺣﺮﻣ ﻦﯾا رد ﻪﻠﺣﺮ
زا ﮏﯾ ﺮﻫ ﻪﺑ ﯽﻟو ﺪﺷ هدﺎﻣآ لوا ﻪﻠﺣﺮﻣ ﻪﺑﺎﺸﻣ طﻮﻠﺨﻣ ﻪﺳ ﯽﻠﺒﻗ ﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا ﺮﯾز حﺮﺷ ﻪﺑ ﯽﺗوﺎﻔﺘﻣ يﺎﻫ ﺮﻤﯾاﺮﭘ ﺎﻫ بﻮﯿﺗوﺮﮑﯿﻣ :
1. Afl1,Afl2 , يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ سووﻼﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ
2. Afu1,Afu2 يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ سﻮﺗﺎﮕﯿﻣﻮﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ
3. Ani1.Ani2 يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ ﺮﺠﯾﺎﻧ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ
ﻪﻌﻄﻗ ﺮﯿﺜﮑﺗ زا ﺲﭘ و هدﻮﺑ لوا ﻪﻠﺣﺮﻣ ﺪﻨﻧﺎﻣ ﺶﻨﮐاو ﻂﯾاﺮﺷ ﯽﻧورد 120 راﺮﻗ زرﻮﻓوﺮﺘﮑﻟا نﻮﻣزآ ﺎﺑ ﯽﺳرﺮﺑ درﻮﻣ يزﺎﺑ ﺖﻔﺟ
ﺪﻨﺘﻓﺮﮔ . بﻮﯿﺗوﺮﮑﯿﻣ ﻪﮐ ﯽﺗرﻮﺻ رد 1
ﻪﻧﻮﮔ ﺪﺷﺎﺑ ﺖﺒﺜﻣ
ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ سووﻼﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ .
بﻮﯿﺗوﺮﮑﯿﻣ ﻪﮐ ﯽﺗرﻮﺻ رد 2
ﺗﺎﮕﯿﻣﻮﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﻪﻧﻮﮔ ﺪﺷﺎﺑ ﺖﺒﺜﻣ
،ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ سﻮ ﯽﺗرﻮﺻ رد
بﻮﯿﺗوﺮﮑﯿﻣ ﻪﮐ 3
،ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ ﺮﺠﯾﺎﻧ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﻪﻧﻮﮔ ﺪﺷﺎﺑ ﺖﺒﺜﻣ و
ﺮﮕﯾد يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﺎﻫ ﺶﻨﮐاو ﯽﻣﺎﻤﺗ ندﻮﺑ ﯽﻔﻨﻣ ترﻮﺻ رد ﺎﺘﯾﺎﻬﻧ ﺪﻨﺘﺴﻫ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ .
ELISA :
زا اﺪﺘﺑا اﺰﯾﻻا ﺖﺴﺗ مﺎﺠﻧا ياﺮﺑ نارﺎﻤﯿﺑ
نﻮﺧ ﻪﻧﻮﻤﻧ
ﺪﺷ اﺪﺟ نﻮﺧ مﺮﺳ و ﺪﯾدﺮﮔ اﺪﺟ .
ﺎﺑ ﻪﻧﻮﮔ ﺺﯿﺨﺸﺗ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ
رد سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ دراﺪﻧﺎﺘﺳا يﺎﻫ ﻪﯾﻮﺳ اﺪﺘﺑا اﺰﯾﻻا شور زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺪﺷ هداد ژﺎﺳﺎﭘ هﻮﺒﻧا ﺖﺸﮐ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ ﻊﯾﺎﻣ ﻂﯿﺤﻣ .
هﻮﺒﻧا ﺖﺸﮐ
رد ﻞﯾﺮﺘﺳا ﺮﻄﻘﻣ با ﺎﺑ ﻮﺸﺘﺴﺷ و نداد بﻮﺳر زا ﺲﭘ ار ﻪﻠﺻﺎﺣ 2
هراﻮﯾد ﻪﻠﺣﺮﻣ 28
ﺎﻫ لﻮﻟ ﻪﺘﺴﮑﺷ ﯽﮑﯿﻧﺎﮑﻣ ﺶﯾﺎﺳ شور ﻪﺑ ار و
اﺪﺟ ار ﯽﻟﻮﻠﺳ تﺎﯾﻮﺘﺤﻣ ﻢﯾدﺮﮐ
) ﻪﺑﺎﺸﻣ جاﺮﺨﺘﺳا شور ﻪﺑDNA
لوا شور (
ﺶﻨﮐاو رد نژ ﯽﺘﻧآ ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ ﻞﺻﺎﺣ ﯽﻟﻮﻠﺳ پﻮﺳ زا
هدﺎﻔﺘﺳا اﺰﯾﻻا ﺪﺷ
. ناﺰﯿﻣ ﻪﺑ ار ﯽﻟﻮﻠﺳ پﻮﺳ 50
نورد ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ
نآ ﻢﺠﺣ ﻢﻫ و ﻪﺘﺨﯾر اﺰﯾﻻا ﺖﯿﮐ يﺎﻫ ﮏﻫﺎﭼ Coating Buffer
ﻪﻓﺎﺿا ﻢﯾدﻮﻤﻧ . نورد رد نژ ﯽﺘﻧآ ندﺮﮐ ﺲﮑﯿﻓ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ رﺎﮐ ﻦﯾا
ﺰﯾﻻا يﺎﻫ ﮏﻫﺎﭼ ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ ا
.
ﺷ ﻪﻠﺣﺮﻣ ﻪﺳ زا ﺲﭘ ﺴ
ﺎﺑ ﻮﺸﺘ Wash buffer يوﺎﺣ
Twin
يﺎﻫ ﺖﻗر ﺎﺑ ﺎﻫ ﮏﻫﺎﭼ نورد ﺮﺑ ار هﺪﻣا ﺖﺳد ﻪﺑ مﺮﺳ يﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ 1:1 ، 1:10 ، 1:100 و 1:1000 ﻢﯾدﻮﻤﻧ ﻪﻓﺎﺿا
. رﻮﻀﺣ ترﻮﺻ رد
يدﺎﺑ ﯽﺘﻧآ و نژ ﯽﺘﻧآ ﻦﯿﺑ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ يﺎﻫ ﻪﯾﻮﺳ ﻪﯿﻠﻋ نژ ﯽﺘﻧآ دﻮﺷ ﯽﻣ راﺮﻗﺮﺑ لﺎﺼﺗا مﺮﺳ رد دﻮﺟﻮﻣ .
ﻪﺳ ﺰﯿﻧ ﻪﻠﺣﺮﻣ ﻦﯾا زا ﺲﭘ
ﺖﯿﮐ رﺎﺑ ﻮﺸﺘﺴﺷ ﺪﺷ هداد . مﺮﺳ ﯽﺘﻧآ ﺲﭙﺳ ﯽﻧﺎﺴﻧا
هﺪﺷ ﻪﮔوﮋﻧﺎﮐ
ﺎﻫ ﮏﻫﺎﭼ ﻪﺑ ﺪﯾدﺮﮔ ﻪﻓﺎﺿا
. نژ ﯽﺘﻧآ ﺲﮑﻠﭙﻤﮐ ﻪﮐ ﯽﺗرﻮﺻ رد -
ﯽﺘﻧآ
مﺮﺳ ﯽﺘﻧآ ﺪﺷﺎﺑ هﺪﺷ ﻞﯿﮑﺸﺗ ﻞﺒﻗ ﻪﻠﺣﺮﻣ يدﺎﺑ ﯽﻧﺎﺴﻧا
ﻦﯾا ﻪﺑ
ندوﺰﻓا ترﻮﺻ رد و هﺪﺷ ﻞﺼﺘﻣ يدﺎﺑ ﯽﺘﻧآ ﻖﯾﺮﻃ زا ﺲﮑﻠﭙﻤﮐ ﮓﻧر ﺮﯿﯿﻐﺗ اﺮﺘﺴﺑﻮﺳ دﻮﺷ ﯽﻣ دﺎﺠﯾا
. اﺰﯾﻻا هﺎﮕﺘﺳد ﻂﺳﻮﺗ ﺞﯾﺎﺘﻧ
راﺮﻗ ﯽﺳرﺮﺑ درﻮﻣ رﺪﯾر ﺖﻓﺮﮔ
.
يرﺎﻣآ ﺰﯿﻟﺎﻧآ :
ﺪﺷ مﺎﺠﻧا راﺮﮑﺗ رﺎﺑ ﻪﺳ ترﻮﺻ ﻪﺑ ﺎﻫ ﺖﺴﺗ ﻪﯿﻠﮐ
ﺲﭙﺳ و mean±SD ﺪﯾدﺮﮔ ﻪﺒﺳﺎﺤﻣ
. نﻮﻣزآ ﻪﻠﯿﺳو ﻪﺑ ﺎﻫ هداد
ANOVA يرﺎﻣآ راﺰﻓا مﺮﻧ و
يﺎﻫرﺎﯿﻌﻣ ﺎﺑ ﻪﺴﯾﺎﻘﻣ رد SPSS
اﺮﻗ ﻞﯿﻠﺤﺗ و ﻪﯾﺰﺠﺗ درﻮﻣ دراﺪﻧﺎﺘﺳا ر
ﺖﻓﺮﮔ . راﺪﻘﻣ p value
<0.05 ﺪﺷﺎﺒﯿﻣ .
ﺎﻫ ﻪﺘﻓﺎﯾ
ﻢﯿﻘﺘﺴﻣ ﺮﯿﻤﺳا و ﺖﺸﮐ ﺞﯾﺎﺘﻧ :
زا 65 ﺖﻓﺎﺑ ياراد ﻪﮐ رﺎﻤﯿﺑ
ﺎﺑ ﯽﺳرﺮﺑ رد ﺪﻧا هدﻮﺑ رﺎﺘﻓﺮﮔ 35KOH
هﺪﺷ هﺪﻫﺎﺸﻣ ﺖﺒﺜﻣ ﺮﻔﻧ
و ﺪﻧا 30 ﺪﻧا هﺪﺷ شراﺰﮔ ﯽﻔﻨﻣ ﺮﻔﻧ .
ﺞﯾﺎﺘﻧ ﺰﯿﻧ ﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺖﺸﮐ
ﺖﺷاد ﯽﻬﺑﺎﺸﻣ .
ﺞﯾﺎﺘﻧ آ ز نﻮﻣ : PCR زا نﻮـﻣزآ ﻦـﯾا ﺞﯾﺎـﺘﻧ سﺎﺳا ﺮﺑ 65
رﺎـﻤﯿﺑ
اﺪﻌﺗ 41 و ﺪﺷ هداد ﺺﯿﺨﺸﺗ ﺖﺒﺜﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ 24
شراﺰﮔ ﯽﻔﻨﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ
ﺪﻧﺪﺷ . راﺮـﻗ زا ﺎـﻫ ﻪـﻧﻮﮔ ﯽﻧاواﺮﻓ ﺎـﺑ سﻮﺗﺎـﮕﯿﻣﻮﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙـﺳآ
35
درﻮــﻣ ) 36 / 85 (%
نآ لﺎــﺒﻧد ﻪــﺑ و هﺪــﺷ ﻪــﻟوﺰﯾا ﻪــﻧﻮﮔ ﻦﯾﺮﺘــﺸﯿﺑ
ﺎـﺑ سووﻼﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ 3
درﻮـﻣ ) 32 /7 (%
ﺎـﺑ ﺮﺠﯾﺎـﻧ سﻮﻠﯾژﺮﭙـﺳآ
2 رﻮﻣ د) 88 /4 (%
ﺎﺑ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﺮﮕﯾد و 1
درﻮـﻣ ) 44 /2 (%
ﺪﻧدﻮﺑ يﺪﻌﺑ يﺎﻫ ﻪﺒﺗر رد رادﻮﻤﻧ)
1 و 2 .(
ﺮﯾﻮﺼﺗ 1 : تﻻﻮﺼﺤﻣ زرﻮﻓوﺮﺘﮑﻟا وPCR
Nested PCR يور ﺮﺑ
زرﺎﮔآ لژ .
ﮏﻫﺎﭼ 1 : ﺖﺒﺜﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﺲﻨﺟ ياﺮﺑPCR
. ﮏﻫﺎﭼ
2 : ﺖﺒﺜﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ Nested-PCR
سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﺲﻨﺟ ياﺮﺑ .
ﮏﻫﺎﭼ 3 : ﺶﮐ ﻂﺧ 100
يزﺎﺑ ﺖﻔﺟ .DNA
ﮏﻫﺎﭼ 4 : ﻪﻧﻮﻤﻧ
ﺖﺒﺜﻣ Nested-PCR سﻮﺗﺎﮕﯿﻣﻮﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ياﺮﺑ
. ﮏﻫﺎﭼ 5 :
ﺖﺒﺜﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ Nested-PCR
سووﻼﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ياﺮﺑ .
ﮏﻫﺎﭼ
6 : ﺖﺒﺜﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ Nested-PCR
ﺮﺠﯾﺎﻧ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ياﺮﺑ .
ﮏﻫﺎﭼ 7 : ﯽﻔﻨﻣ لﺮﺘﻨﮐ ﻪﻧﻮﻤﻧ
اﺰﯿﻟا نﻮﻣزآ ﻪﺠﯿﺘﻧ :
يور ﺮﺑ ﻪﮐ اﺰﯿﻟا نﻮﻣزآ ﻖﺒﻃ 65
ﻪﻧﻮﻤﻧ
يﺎﻫ نارﺎﻤﯿﺑ مﺮﺳ ﺖﻓﺮﮔ ترﻮﺻ
داﺪﻌﺗ 39 ﻪﻧﻮﻤﻧ ناﻮﻨﻌﺑ درﻮﻣ
ﺪﻧﺪﺷ ﯽﻘﻠﺗ ﺲﯾزﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﺖﺒﺜﻣ .
32 ﺮﭙﺳآ درﻮﻣ سﻮﻠﯾژ
سﻮﺗﺎﮕﯿﻣﻮﻓ )
05 / 82 (%
، 4 درﻮﻣ ) 25 / 10 (%
،سووﻼﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ
2 درﻮﻣ ) 12 /5 (%
و ﺮﺠﯾﺎﻧ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ 1
ﺰﯿﻧ درﻮﻣ ) 56 /2 (%
ﺮﯾﺎﺳ
ﺪﻧﺪﺷ ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ ﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ رادﻮﻤﻧ)
1 و 2 (.
رادﻮﻤﻧ 1 : ﻊﯾزﻮﺗ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ درﻮﻣ ﻒﻠﺘﺨﻣ يﺎﻫ شور رد ﯽﻔﻨﻣ و ﺖﺒﺜﻣ ﺐﺴﺣﺮﺑ ﯽﺘﺑﺎﯾد نارﺎﻤﯿﺑ يﺎﭘ ﻢﺧز زا هﺪﺷ اﺪﺟ يﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﯽﻧاواﺮﻓ .
ﺖﺳا ﺮﺘﻤﮐ ﯽﺼﯿﺨﺸﺗ يﺎﻬﺷور ﺮﯾﺎﺳ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﻢﯿﻘﺘﺴﻣ مﻻ و ﺖﺸﮐ شور رد ﯽﻔﻨﻣ و ﺖﺒﺜﻣ يرﺎﺒﺧا شزرا .
ﻢﯿﻘﺘﺴﻣ مﻻ و ﺖﺸﮐ PCR Nested-PCR اﺰﯿﻟا
ﺖﺒﺜﻣ 35 41 41 39
ﯽﻔﻨﻣ 30 24 24 26
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
41 درﻮﻣ 65 عﻮﻤﺠﻣ زا هﺪﺷ مﺎﺠﻧا nPCR نﻮﻣزآ سﺎﺳا ﺮﺑ :nPCR نﻮﻣزآ ﻪﺠﯿﺘﻧ ﻪﮐ ﺪﯾدﺮﮔ ﺖﺒﺜﻣ ﯽﺻﺎﺼﺘﺧا يﺎﻫ ﺮﻤﯾاﺮﭘ ﺎﺑ ﻪﻧﻮﻤﻧ
37 ﺮﭙﺳآ درﻮﻣ سﻮﺗﺎﮕﯿﻣﻮﻓ سﻮﻠﯾژ
) 24 / 90 (%
، 2 درﻮﻣ ) 88 /4 (%
،سووﻼﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ 1
درﻮﻣ ) 44 /2 (%
و ﺮﺠﯾﺎﻧ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ 1
ﺰﯿﻧ درﻮﻣ
) 44 /2 (%
ﺪﻧﺪﺷ ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ ﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﺮﯾﺎﺳ رادﻮﻤﻧ)
1 و 2 (
ﻧ رادﻮﻤ 2 : ﻪﻧﻮﮔ ﯽﺒﺴﻧ ﯽﻧاواﺮﻓ ﻊﯾزﻮﺗ ﺺﯿﺨﺸﺗ شور سﺎﺳا ﺮﺑ ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ ﻢﺧز ﻪﻧﻮﻤﻧ زا هﺪﺷ اﺪﺟ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ يﺎﻫ
. شور ﻪﺳ ﺮﻫ رد
ﺖﺳا هداد صﺎﺼﺘﺧا دﻮﺧ ﻪﺑ ار ﯽﻧاواﺮﻓ ﻦﯾﺮﺘﺸﯿﺑ سﻮﺗﺎﮕﯿﻣﻮﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ ﯽﻗاﺮﺘﻓا .
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
PCR Nested-PCR ELISA
Asp. Fum Asp.Fla Asp.Nij Other Sp
ﺚﺤﺑ
ﺒﻣ نارﺎﻤﯿﺑ ﻪﮐ ﺖﻬﺟ نآ زا ﺖﺑﺎﯾد ﻪﺑ ﻼﺘ
ﺖﺑﺎﯾد ﻂﯾاﺮﺷ ﻪﻨﯿﻣز و
ﺑا ياﺮﺑ ار ﺪﻋﺎﺴﻣ صﻮﺼﺧ ﻪﺑ ﺮﮕﯾد ﯽﻧﻮﻔﻋ يﺎﻫ يرﺎﻤﯿﺑ ﻪﺑ ﻼﺘ
ﻪﺑ ﺖﯿﻤﻫا زا ﺪﻨﮐ ﯽﻣ ﻢﻫاﺮﻓ ﺐﻠﻃ ﺖﺻﺮﻓ ﯽﭼرﺎﻗ يﺎﻫ يرﺎﻤﯿﺑ ﺖﺳا رادرﻮﺧﺮﺑ ﯽﯾاﺰﺳ .
هﺪﻨﯾاﺰﻓ ﻒﻌﺿ ﻪﻠﻤﺟ زا ﻒﻠﺘﺨﻣ ﻞﯿﻟد ﻪﺑ و ﺎﻫ ﺖﻓﺎﺑ ،طﺎﺨﻣ ﺎﺸﻏ رد ﺰﮐﻮﻠﮔ ﺖﻈﻠﻏ ﺶﯾاﺰﻓا ﯽﻨﻤﯾا ﻢﺘﺴﯿﺳ
ﺨﻣ لﺎﻣﺮﻧ رﻮﻠﻓ ﺮﯿﺜﮑﺗ ﺶﯾاﺰﻓا ،نﺪﺑ ﻒﻠﺘﺨﻣ تﺎﻌﯾﺎﻣ نﺪﺑ يﺮﻤ
،
نارﺎﻤﯿﺑ ﯽﭼرﺎﻗ يﺎﻫ يرﺎﻤﯿﺑ ﻪﺑ ﻼﺘﺑا ياﺮﺑ ار ﯽﺘﺑﺎﯾد و
...
ﺪﻌﺘﺴﻣ
دزﺎﺳ ﯽﻣ . تﺪﺷ و عﻮﯿﺷ ﺶﯾاﺰﻓا ﺎﺑ ﻪﻄﺑار رد يدﺎﯾز يﺎﻫ شراﺰﮔ
ﺎﻧ ،ﯽﻠﺳﺎﻨﺗ هﺎﮕﺘﺳد ،نﺎﻫد رد ﯽﭼرﺎﻗ يﺎﻫ ﺖﻧﻮﻔﻋ هﺎﮕﺘﺳد ،ﺎﻫ ﻦﺧ
و ،ﺪﻧﻮﺷ ﯽﻣ نﺎﻣرد ﺺﻗﺎﻧ رﻮﻃ ﻪﺑ ﻪﮐ ﯽﯾﺎﻬﻧآ دراد دﻮﺟ
. نﻮﯿﺳاﺰﯿﻨﻠﮐ
،ﺎﻫ ﯽﺘﺑﺎﯾد رد هﺪﯾد ﺐﯿﺳآ يﺎﻫ ﺖﻓﺎﺑ ﺎﺻﻮﺼﺧ ﺎﻫ ﺖﻓﺎﺑ رد يﺮﻤﺨﻣ ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ ﻊﯾﺎﺷ ﺪﻨﻗ دﻮﺟو ﻞﯿﻟد ﻪﺑ .
لﺎﻤﺘﺣا ﺎﺑ ﯽﺣاﻮﻧ ﻪﻠﻤﺟ زا
ﻼﺘﺑا ضﺮﻌﻣ رد ﻪﮐ ﺖﺳا ﯽﺘﺑﺎﯾد داﺮﻓا يﺎﭘ ﯽﺗﺎﭘورﻮﻧ و ﺎﻣوﺮﺗ يﻻﺎﺑ دراد راﺮﻗ ﯽﭼرﺎﻗ ﺖﻧﻮﻔﻋ ﻪﺑ .
ﺮﭘﺎﺳ زا ﯽﮑﯾ سﻮﺗﺎﮕﯿﻣﻮﻓ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ چرﺎﻗ و
ﺖﺻﺮﻓ يﺎﻫ ﺖﯿﻓ
و ﺶﻔﮐ ﻖﯾﺮﻃ زا ﺪﻧاﻮﺘﯿﻣ ﯽﺘﺣار ﻪﺑ و ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ يﺰﮐﺎﺧ ﺐﻠﻃ دزﺎﺳ هدﻮﻟآ ار ﯽﺘﺑﺎﯾد دﺮﻓ هﺪﯾد ﻪﻣﺪﺻ يﺎﭘ هدﻮﻟآ كﺎﺷﻮﭘ .
ﺞﯾﺎﺘﻧ
ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ ﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺖﺸﮐ ﻪﮐ داد نﺎﺸﻧ ﺮﺿﺎﺣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﺖﺴﺗ ﯽﻟو ﺪﺷﺎﺑ نﺎﻨﯿﻤﻃا ﻞﺑﺎﻗ دﺎﯾز ﺪﻧاﻮﺘﯿﻤﻧ هﺪﻨﻨﮐ هدﻮﻟآ ﺲﻨﺟ ﯽﻟﻮﮑﻟﻮﻣ يﺎﻫ و PCR
nested PCR ﺎﺑ ﺲﻨﺟ ﺺﯿﺨﺸﺗ رد
ﺪﻧدﻮﻤﻧ ﻞﻤﻋ نﺎﺴﮑﯾ ﺖﻗد و ترﺪﻗ .
رد ﻪﻧﻮﮔ ﻦﯿﯿﻌﺗ ﺖﺴﺗ ﯽﻓﺮﻃ زا
شور ود و PCR
nested PCR هاﺮﻤﻫ ﺞﯾﺎﺘﻧ رد ﯽﺗﺎﻓﻼﺘﺧا ﺎﺑ
دﻮﺒﻧ راد ﯽﻨﻌﻣ يرﺎﻣآ ﺮﻈﻧ زا ﻪﮐ دﻮﺑ )
يراد ﯽﻨﻌﻣ ﺢﻄﺳ 05
/ 0 P<
.(
رد ﺪﻨﻧاﻮﺘﯿﻣ يﺪﺣ ﺎﺗ ﻼﺘﺒﻣ داﺮﻓا ﻪﮐ داد نﺎﺸﻧ اﺰﯿﻟا ﺞﯾﺎﺘﻧ ﻦﯿﻨﭽﻤﻫ دﻮﺧ نﻮﺧ ﺪﯿﻟﻮﺗ هﺪﻨﻨﮐ هدﻮﻟآ ﻪﻧﻮﮔ ﯽﺘﺣ و ﺲﻨﺟ ﻪﯿﻠﻋ يدﺎﺑ ﯽﺘﻧآ
ﺎﺠﻧآ زا ﺎﯾ و ﯽﻧژ ﯽﺘﻧآ يرﺎﺘﺧﺎﺳ ﺖﻫﺎﺒﺷ ﻞﯿﻟد ﻪﺑ ﻻﺎﻤﺘﺣا ﯽﻟو ﺪﻨﻨﮐ ﺎﻣﺮﻧ رﻮﻠﻓ ترﻮﺻ ﻪﺑ ﻞﻣاﻮﻋ ﻦﯾا ﺖﺳا ﻦﮑﻤﻣ ﻪﮐ يدﺎﺑ ﯽﺘﻧآ ﺪﯿﻟﻮﺗ ل
ﺪﻨﻨﮐ ﮏﯾﺮﺤﺗ ار ،
دﻮﺑ ﺪﻫاﻮﺨﻧ نﺎﻨﯿﻤﻃا ﻞﺑﺎﻗ نآ ﺞﯾﺎﺘﻧ .
تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ
ا ﻪﺘﻓﺮﮔ ترﻮﺻ ﻪﻄﺑار ﻦﯾا رد ﯽﻬﺑﺎﺸﺘﻣ ﻪﺘﻓﺎﯾ ﺎﺑ ﺎﻬﻧآ ﺞﯾﺎﺘﻧ ﻪﮐ ﺖﺳ
ﺖﺳا ﻪﺘﺷاﺪﻧ ﯽﻫاﺮﻤﻫ ﺎﻣ يﺎﻫ .
ﺖﺳا ﺮﯾﺎﻐﻣ نارﺎﮑﻤﻫ و ﺮﯿﻧ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﺎﺑ ﺮﺿﺎﺣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﺞﯾﺎﺘﻧ .
رد
نﺎﻧآ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﺲﻨﮑﯿﺒﻟآ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ
49
% ﺲﯿﻟﺎﮑﯿﭘوﺮﺗ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ،
23
% ﺲﯾزﻮﻠﯿﺴﭘارﺎﭘ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ،
18
% هزوﺮﮐ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ و ﺎﺗاﺮﺑﻼﮔ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ،
يا ماﺪﮐ ﺮﻫ 5 % عاﻮﻧا ﺪﻧدﻮﺑ سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ
هﺪﺷ اﺪﺟ
% 0.72 دﻮﺑ ) 16 (.
رد ﺮﺴﮐﺎﺧ ﺮﻐﺻا ﯽﻠﻋ و ﯽﻣﺮﻬﺟ يﺮﯿﺼﺑ ﺖﺧد ﻦﯿﻬﺷ ﯽﺳرﺮﺑ رد لﺎﺳ 2005 د رﺪﻨﺳ رد ﯽﭼرﺎﻗ يﺎﻫ ﺖﻧﻮﻔﻋ ﯽﺳرﺮﺑ ر ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ م
رﻮﻀﺣ ﻪﺟﻮﺘﻣ
% 4/
69 و ﺲﻨﮑﯿﺒﻟآ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ
% 9 / 13 يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ
و سﻮﻠﯾژﺮﭙﺳآ
% 2 /4 ﺲﻨﻣﺮﻓﻮﺌﻧ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ ،1
% 8/
2 مﻮﯾرازﻮﻓ
ﺪﻧﺪﺷ ) 17 .(
ﻟﺎﻄﻣ ﻖﺒﻃ ﺮﺑ ﻦﯿﻨﭽﻤﻫ هﺪﻫﺎﺸﻣ ﺶﻧارﺎﮑﻤﻫ و سﻼﮔود ي ﻪﻌ
ﻪﮐ ﻢﯾدﺮﮐ ﺲﻨﮑﯿﺒﻟآ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ
لﺎﺳ رد هﺪﺷ اﺪﺟ 2000
رد يدﻼﯿﻣ
يﺮﺗﻻﺎﺑ لﺎﺼﺗا ترﺪﻗ ﺪﻨﺘﺴﻫ ﺎﭘ ﻢﺧز ياراد ﻪﮐ ﺖﺑﺎﯾد نﺎﯾﻼﺘﺒﻣ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ هﺪﺷ اﺪﺟ يﺎﻫاﺪﯾﺪﻧﺎﮐ ﺮﯾﺎﺳ و دراد ﺲﻨﮑﯿﺒﻟآ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ
زا
ﺪﻨﻧﺎﻣ ﺪﻧرادرﻮﺧﺮﺑ يﺮﺘﻤﮐ لﺎﺼﺗا ترﺪﻗ ،ﺲﯿﻟﺎﮑﯿﭘوﺮﺗ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ
وﺮﮐ ﺲﯾزﻮﻠﯿﺴﭘارﺎﭘ و يا هز .
مﺪﻋ ﺪﻧﺪﺷ ﻪﺟﻮﺘﻣ دﻮﺧ ﯽﺑﺮﺠﺗ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ رد نارﺎﮑﻤﻫ و لوﺪﻧاﺮﮔ
ﺶﻫﺎﮐ ﺚﻋﺎﺑ ﻪﺘﻓﺎﯾ نﻮﯿﺳﺎﺗﻮﻣ ﺲﻨﮑﻨﯿﺒﻟآ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ رد زﺎﺌﺗوﺮﭘ ﺪﯿﻟﻮﺗ دﻮﺷ ﯽﻣ ﺖﺳﻮﭘ ﺢﻄﺳ ﻪﺑ ﺮﻤﺨﻣ ﻦﯾا لﺎﺼﺗا .
لﺎﭘورﺎﮑﯿﻟﻮﭽﻨﯿﭼ تﺎﻘﯿﻘﺤﺗ درﻮﻣ رد
رد ﯽﭼرﺎﻗ يﺎﻫ نژﻮﺗﺎﭘ دﻮﺟو
نﺎﺸﻧ ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ ﻢﺧز يﺎﻫ ﺖﻓﺎﺑ ﻧآ ﻦﯿﺑ رد ﻪﮐ داد
اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ عاﻮﻧا ﺎﻬ
ﺖﺳا هدﻮﺑ ﺮﺘﺸﯿﺑ )
18 (.
ﻨﯿﻠﻣ ﺎﯿﻠﯿﻤﯾا لﺎﺳ رد نارﺎﮑﻤﻫ و يﺮ
2005 يدﻼﯿﻣ ﯽﺸﻫوﮋﭘ ﯽﻃ
ﻪﮐ ﺪﻧﺪﺷ ﻪﺟﻮﺘﻣ ﺲﯾزﻮﻠﯿﺴﭘارﺎﭘ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ
ﺗراﺮﮑﺗ ﺮﭘ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻦﯾﺮ
رﺪﻨﺳ زا هﺪﺷ اﺪﺟ ﯽﭼرﺎﻗ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ رد ﻪﮐ ﺖﺳا هدﻮﺑ ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ م
ﺎﻬﻧآ ي
% 59 و دﺮﻣ
% 9 / 40 ﻨﺳ ﻦﯿﮕﻧﺎﯿﻣ رد نز ﯽ
52 ﺎﺗ 80 لﺎﺳ
ﺪﻧدﻮﺑ ﺖﺷاد دﻮﺟو نارﺎﻤﯿﺑ ﻪﻤﻫ رد ﯽﺒﺼﻋ يﺎﻫ ﺐﯿﺳآ ﻪﮐ .
ﻪﻤﻫ
شراﺰﮔ يﺮﺘﮐﺎﺑ ﺎﺑ هاﺮﻤﻫ ﺮﻤﺨﻣ ﺎﯾ ﺮﻤﺨﻣ ﻢﺧز زا هﺪﺷ اﺪﺟ دراﻮﻣ ﻪﮐ ﺪﺷ
% 5/
45 و ﺲﯾزﻮﻠﯿﺴﭘارﺎﭘ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ
% 7/
22 اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ
و ﺲﯿﻟﺎﮑﯿﭘوﺮﺗ
% 1/
9 ﺎﺗاﺮﺑﻼﮔ و ﺲﻨﮑﻨﯿﺒﻟآ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ ﺪﻧدﻮﺑ
. اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ
ﯿﻔﮐ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ و يا هزوﺮﮐ ﻪﺑ ﺮ
اﺪﺟ يوﺎﺴﻣ رﻮﻃ ﻪﺑ ﻢﮐ ناﺰﯿﻣ
ﺪﻧﺪﺷ ) 11 .(
يﺎﻫ ﻢﺧز ﺎﺑ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ ﯽﻫاﺮﻤﻫ ﻢﻫ ﺶﻧارﺎﮑﻤﻫ و ﺪﻠﻫ
ﻪﮐ ﺪﻨﻨﮐ ﯽﻣ ﺪﯿﯾﺄﺗ دﻮﺧ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ رد ار ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ رد ﯽﻧﻻﻮﻃ ﺪﺸﺨﺑ ﯽﻣ دﻮﺒﻬﺑ ار ﯽﭼرﺎﻗ ﺪﺿ نﺎﻣرد )
19 (.
رد هﺪﺷ شراﺰﮔ ﻢﺧز ﺎﺑ ﯽﺘﺑﺎﯾد نارﺎﻤﯿﺑ رد اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ عاﻮﻧا دﻮﺟو ﯽﻧﻮﺴﯿﻣ ﻂﺳﻮﺗ ﺎﭘ يﺎﻫﺎﻀﻓ ﺪﺷ شراﺰﮔ
) 20 .(
ﺶﻧارﺎﮑﻤﻫ و ﺮﺘﭘ مﺎﺳ
لﺎﺳ رد 2006 ﯽﻟا 2007 ﺪﻨﻫ رد يدﻼﯿﻣ 74
ار ﺖﺑﺎﯾد رﺎﻤﯿﺑ عﻮﻧ
ﻪﮐ ،ﺪﻧدﺮﮐ بﺎﺨﺘﻧا ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ يﺎﻫ ﺖﻧﻮﻔﻋ ﺎﺑ 49
و دﺮﻣ ﺮﻔﻧ 25
ﻦﯿﻨﺳ ﻦﯿﺑ نز ﺮﻔﻧ 48
ﺎﺗ 69 هﺪﺷ اﺪﺟ يﺎﻫ چرﺎﻗ عاﻮﻧا ،ﺪﻧدﻮﺑ لﺎﺳ
ﺎﻬﻧآ يﺎﭘ ﻢﺧز زا
% 93 ناﺮﮕﺸﻫوﮋﭘ ﻪﮐ دﻮﺑ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ ﺪﻧﺎﮐ
اﺪﯾ
ﺎﺗاﺮﺑﻼﮔ اﺪﯾﺪﻧﺎﮐ و ﺲﯾزﻮﻠﯿﺴﭘارﺎﭘ رد ار
و ،ﺪﻧدﻮﻤﻧ هﺪﻫﺎﺸﻣ ﻖﯿﻘﺤﺗ
ﻮﺗﺎﻣرد دﻮﺟو ﻖﯿﻘﺤﺗ ﻦﯾا رد ناﻮﺗ ﯽﻣ ﻓ
دﺮﮐ ﺪﯿﯾﺄﺗ ﻢﻫ ار ﺎﻫ ﺖﯿ .
يﺮﯿﮔ ﻪﺠﯿﺘﻧ
يﺎﻫ ﯽﺳرﺮﺑ موﺰﻟ ،ﻪﺑﺎﺸﻣ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ و ﺮﺿﺎﺣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ چرﺎﻗ
رﺪﻨﺳ ﻪﺑ نﺎﯾﻼﺘﺒﻣ رد ﯽﺳﺎﻨﺷ و ﺺﯿﺨﺸﺗ ﺖﻬﺟ ﯽﺘﺑﺎﯾد يﺎﭘ م
ﻊﻗﻮﻤﺑ نﺎﻣرد بﻮﻠﻄﻣ ﻮﺤﻧ ﻪﺑ ضراﻮﻋ زا ناﻮﺘﺑ ﺎﺗ ﺪﯾﺎﻤﻨﯿﻣ يروﺮﺿ
ﺖﺳﺎﮐ .
ﯽﻧادرﺪﻗ و ﺮﮑﺸﺗ
رد ؛ﺪﻧدﻮﻤﻧ يرﺎﯾ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦﯾا مﺎﺠﻧا رد ار ﺎﻣ ﻪﮐ ﯽﻧاﺰﯾﺰﻋ ﻪﯿﻠﮐ زا جﺮﮐ ﺪﺣاو ﯽﻣﻼﺳا دازآ هﺎﮕﺸﻧاد و ناﺮﻬﺗ ﯽﻨﯿﻤﺧ مﺎﻣا نﺎﺘﺳرﺎﻤﯿﺑ ﺪﯾﺂﯿﻣ ﻞﻤﻋ ﻪﺑ ﯽﻧادرﺪﻗ و ﺮﮑﺸﺗ .
References:
1. Sarkar P, Balantyne S, Management of Diabetic leg Ulcer. Postgrad Med J, 2000 Novembar, 76 ( 901) ,674 - 82.
2. Mandell G, Bennet J, Dolin R . Cellulitis and soft tissue infection. Principles and Practice of infectious diseases. Sixth edition, Pennsylvania , Churchill living stone , 2005 , volume 2 , ( 86 ), 1046 – 47.
3. Shadzi shahla. Medicine mycology, Laboratory diagnostic and treatment. Isfahan, Jahad daneshgahi, 1386
4. Aly F2, Blackwell Cc, Mackenzie Da , Weir Dm . Ehon Ra , Cumming Ca, Et Al M Chronic Atrophic Orod Candidiasis Amany Patients With Diabetes Mellitus – Role Of Secretor Status Epidemiol Infect 1m91, 14 (Suppl 1) : 48-53
5. Schuberts, Heesemann J. [Infection In Diabetes Mellitus ] Imnun Infelct. 1995. 23:200
6. Danowslo- Toset Al 1966 Shin Spots And Diabete , Mellitus Am . 7. Of Med .Science.107 Uay 1966 P.704-105.
7. St Georgier V.Infection Diseases In Immunocopromised Host . Crc 1997 ; 739-1148.
8. Vazquez Ja.Sobel Jb. Fungal Infection In Diabetics . Infect Dis .Clin. Nerth Am 25 9(97:97- 116;Mar 1995.
9. Ross- Flanigan , Nancy,2002 Antifungal Drays Systemic. Qale Encyaopedia Of Medicine.
10. Kahn Cr, Weir Gc, Eds,Joslin’s Diabetes Memites,13 Th Ed. Media: Williams & Willkins, 1994.
11. EmilijaMlinari-Missoni.Smilija
Kalenic,M.V,D.S.2005.Candida infection foot
ulcer.Department of clinical Mycology,Creation National 34:29-35.
12. Gerding Dn. Foot Infection In Diabetic Patients The Role Of Anaerobes . Clin Infect Dis. 1995;20 Csuppl2):S283-S8.
13. Hart Pd, Rusell E Jr, Remington Js,The Compromised Host And Deep Fungal Infection. J Infect Dis 1969;120c2:169-97
14. Heald Ahm O’halloran Dj, Richards Km Et Al , Fungal In Fection Of The Diabetic Foot : Two Distinct Syndromes . Diabet Med . 2001;18c7:567- 72
15. Saba Fata.mohammad Hadi Saeed
Mohaghegh.Rabeeh Fazlizadeh,Mohammad javad Najafzadeh.M.A,M.G,2006-2008.Macotic infection in diabetic foot ulcers in Emam Reza hospital Mashhad.Jundishapur journal of
Microbilogy.4(1):11-16
16. Seema Nair,Abliash Sasidharan,Sujatha Sistia.2006-2007.Incidence of Mycotic Infection in diabetic foot tissue.Journal of culture collections.pp:85-89
17. Shahindokht Bassiri Jahromi,Aliasghar Khaksar.2005.Deep-seated Fungal Infection in Immunocompromised patients in Iran.IRANIN journal of Allergey.4:27-32.
18. Chinckolikar Dam Pal Rb.Stady Of Fengal And Bacterial In Fectian Of Diabetic Foot . Indian J Pathol Microbial 2002, 45:15-22
19. Heald Ahm O’halloran Dj, Richards Km Et Al , Fungal In Fection Of The Diabetic Foot : Two Distinct Syndromes . Diabet Med . 2001;18c7:567- 72.
20. Mlinariae- Missoni Em Kaleniae S. Vuleeliae M.
De Syo Dm Belicza M. Candida Infection Diabetic Foot Ulcers. Diabetologia Evoatica. 2005:34-1.
Molecular Survey of Pathogen Species of Aspergillus Isolated from Diabetic Foot Lesion Using Nested PCR Method
Kamalzadeh S1*, Sabokbar A2
1- MSc, Department of Microbiology, College of Basic Sciences, karaj Branch, Islamic Azad University, Alborz, Iran 2-PhD, Department of Microbiology, College of Basic Sciences, karaj Branch, Islamic Azad University, Alborz, Iran
*Corresponding author: Department of Microbiology, College of Basic Sciences, Karaj Branch Islamic Azad University, Alborz, Iran.
Email: [email protected]
Abstract:
Background and Aim: PCR has high sensitivity and specificity for the determination offungal DNA. It is also useful for rapid identification of the most common species of Aspergillus. The purpose of this study was to compare culture method with nested PCR method to determine Aspergillesion in diabetic foot patient in Imam Khomeini Hospital, Tehran.
Material and Methods:Sixty-five cases of suspicious diabetic foot lesion Aspergillusis were examined under culture and molecular method. Aspergillus isolates were identified to genus level on the SGA. DNA extraction performed and PCR and Nested PCR reactions were done. Serum samples were collected and ELISA for anti bodies against all species were performed. Results were analyzed using ANOVA and P was considered significant at P<0.05.
Results: Of the total of 65 samples, 39 were diagnosed as Aspergillos is obtained from cultures. In PCR and Nested PCR using specific primers, 41 samples were diagnosed as Aspergillus.PCR and Nested PCR for species recognition were equal but differences in gender were recognized. ELISA results showed that 39 samples were positive.
Conclusion: Although PCR is less sensitive than nested PCR, but we can recognize the most common pathogenic species, Aspergillus fumigatus. Our results showed significant differences between the results of culture and nested-PCR in the identification of the Aspergillus genus.
Keywords : Nested PCR - Sprzhylvs- foot Dyabty- culture