Isolation and and and Identification and Identification Identification of Identification of of of Antioxidant Antioxidant Antioxidant Constituents Antioxidant Constituents Constituents Constituents from. Division of of Ocean of Ocean Ocean Science, Ocean Science, Science, Science, Korea Korea Korea Maritime Korea Maritime Maritime University, Maritime University, University, University, Busan, Busan, Busan, Busan, 606-791,. The collected samples of Sargassum thunbergii were briefly shade-dried and extracted repeatedly for 2 days with a mixture (1:1) of acetone-CH2Cl2 (1.5 L X 2) and MeOH (1.5 L X 2), respectively.
MeOH, n-BuOH, and water fractions including crude extracts of Sargassum thunbergii were evaluated using 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) radical, authentic ONOO- and ONOO- generated from SIN-1 . These results suggest that the antioxidative activity in the crude extract of Sargassum thunbergii can be partially attributed to these compounds.
따라서 본 연구에서는 이러한 해조류 추출물이 인간의 노화와 밀접한 관련이 있는 활성산소종과 활성질소종을 소거하는데 미치는 항산화 효과를 조사하고, 항산화 물질을 분리, 정제하여 그 구조를 규명하고자 하였다. 여기에 새로운 항산화제를 찾는 방법으로 시험관 내에서 과산화물 음이온(․O2-)과 산화질소(NO․)를 동시에 생성하는 3-모르폴린 시드노니민(SIN-1)과 진성 퍼옥시니트라이트(ONOO-)와 항산화제 등이 있다. 안정적인 자유 라디칼로 알려진 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH)을 찾고 있습니다. 부산 및 제주도 연안에서 채취한 해조류 시료 약 30종을 대상으로 항산화 활성 스크리닝을 실시한 결과, 그 중 갈조류속인 Sargassum thunbergii 추출물이 좋은 활성을 나타냈을 뿐만 아니라 채취량도 . 도 의미가 있어 이 해조류 시료를 주요 연구 대상으로 선택한 이유이다.
갈조류인 Sargassum은 바다에서는 이용이 어려운 다년생 식물로 해안을 따라 지중해 숲을 형성하는 대표적인 종이다. 갈조류(Phaeophyta)의 Sargassaceae과에 속하는 Sargassum thunbergii는 우리나라 전 연안에 흔하며 조간대 하부에 뚜렷한 군체를 형성하는 해조류이다.
추출, 분별, 컬럼 크로마토그래피에 사용되는 모든 용매는 프리미엄 시약으로 구매되었습니다. Varian RI 검출기와 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC, Dionex P580)를 이용하여 정제 및 분리하였다. DPPH(1,1-디페닐-2-피크릴-히드라질 라디칼), 3-모르폴린시드노이민(SIN-1), 디히드로로다민 123(DHR 123) 및 페니실라민(DL-2-아미노-3-메르캅토-3-메틸부탄산)은 Sigma(미국 미주리주 세인트 루이스)에서 구입했습니다.
그리고 peroxynitrite(ONOO-)는 Cayman(Ann Arbor, MI, USA)에서 구입하여 항산화 실험에 사용하였다. 선광도는 편광계(ATAGO, POLAX-2L)를 사용하여 측정하였다.
H HHH 2222 OOOO
Isolation Isolation Isolation of the of the compounds compounds compounds compounds 1-8 compounds 1-8 1-8 from 1-8 from from from Sargassum Sargassum Sargassum Sargassum thunbergii. NMR NMR NMR NMR spectral spectral spectral Assignments spectral Assignments Assignments for Assignments for for for compounds Compounds Compounds Compounds 4 4 4 4 in and and 5in 555aaaa. 1H and 13C NMR spectra were recorded in CDCl3 solution at 300 and 75 MHz, respectively. 13131313C C C C NMR NMR NMR spectral NMR spectral spectral spectral Assignments Assignments Assignments Assignments for for for for Compounds Compounds Compounds Compounds aaaa.
항산화 항산화 항산화 활성 항산화 활성 활성 실험 활성 실험 실험. 1) (1) DPPH DPPH DPPH DPPH 라디칼 라디칼 소거 라디칼 소거 활성 활성 활성 활성. 1,1-디페닐-2-피크릴-히드라질(DPPH) 제거는 특히 페놀과 방향족 아민의 항산화 활성을 측정하는 데 널리 사용되는 간단한 항산화 스크리닝 방법입니다(Blois, 1958).
또한, 기증된 전자는 비가역적으로 결합하여 그 수에 비례하여 DPPH의 짙은 보라색이 점차 옅어지고 흡수도 감소하여 반응액의 색이 노란색으로 변하는데, 이는 감소로 측정할 수 있다. 흡수중. 소거활성을 확인할 수 있다(Fig. 시료를 첨가하지 않은 음성대조군과 비교하여 프리라디칼 소거활성을 백분율로 표시하여 50% 저해농도(IC50)를 계산하였다. EDA(전자(전자(전자(전자) ) 기부 기부 기부ability)(ability)(ability)(ability 대조그룹 대조그룹 흡광도조절그룹 대조그룹 흡광도흡수---실험군 -실험군 실험군 실험군 흡광도흡수흡수.
대조군 대조군 대조군 흡광도 흡광도 흡광도 흡광도. 2) (2) peroxynitrite peroxynitrite peroxynitrite peroxynitrite 삭제 삭제 삭제 활성 활성 활성 활성 활성. 정품 퍼옥시니트라이트 대신 SIN-1을 첨가한 경우 샘플을 실온에서 1시간 동안 방치한 후 측정을 수행했습니다.
Oxidation
Dihydrorhodamine 123
Rhodamine 123
1111H H H H NMR NMR NMR NMR spectrum spectrum spectrum of of of of compound compound compound compound 1 1 1 1 in in in in CDClCDClCDClCDCl3.3.3.3. DEPT DEPT DEPT DEPT spectrum spectrum of spectrum of of compound of compound compound 1 compound 1 1 in 1 in in CDClin CDClCDClCDCl3.3.3.3. 1111H H H H NMR NMR NMR spectrum NMR spectrum of spectrum of of compound of compound compound 2 compound 2 2 in 2 in CDClin CDClCDClCDCl3.3.3.3.
TOCSY TOCSY TOCSY spectrum spectrum spectrum compounds compounds compounds compounds compounds 2 2 2 in 2 in and in CDClCDClCDClCDCl3.3.3.3. DEPT DEPT spectrum DEPT spectrum spectrum spectrum of of of of of of of compound compounds compound compound 2 2 2 2 in and in and CDClCDClCDClCDCl3.3.3.3. 1111H H H H NMR NMR NMR spectrum NMR spectrum spectrum compounds compounds compounds 3 compounds 3 3 in 3 in CDClin CDClCDClCDCl3.3.3.3.
13131313C C NMR C C NMR spectrum NMR spectrum NMR spectrum of spectrum of compound spectrum of compound 3 3 3 in 3 in in in in CDClCDClCDClCDCl3.3.3.3. DEPT spectrum DEPT spectrum spectrum DEPT spectrum spectrum spectrum of 3 3 3 3 3 in in in in CDClCDClCDClCDCl3.3.3.3. 1111H H H NMR Spectrum NMR NMR Spectrum NMR spectrum spectrum spectrum of compound compound 4 compound 4 4 in 4 in in CDClCDClCDClCDCl3.3.3.3.
TOCSY TOCSY TOCSY spectrum spectrum spectrum of spectrum of of a compound compound compound compound 4 4 4 in 4 in in CDClCDClCDClCDCl3.3.3.3. DEPT DEPT spectrum DEPT spectrum spectrum spectrum of of of of compound compound compound compound 4 4 4 4 in in in CDClCDClCDClCDCl3.3.3.3. 1111H H H H NMR NMR NMR spectrum NMR spectrum spectrum of spectrum of compound of compound compound 5 compound 5 5 in 5 in in CDClin CDClCDClCDCl3.3.3.3.
13131313C C NMR C C NMR NMR spectrum NMR spectrum spectrum of spectrum of of compound compound compound 5 compound 5 5 in 5 in in CDClCDClCDClCDCl3.3.3.3. DEPT DEPT spectrum DEPT spectrum spectrum spectrum of of of of compound compound compound compound 5 5 5 5 in in CDClCDClCDClCDCl3.3.3.3.
OCH3H
활성산소종(ROS)과 활성질소종(RNS)에 의한 손상으로 인한 노화과정은 신체노화와 관련된 퇴행성질환의 원인 중 가장 합리적인 이론으로 인식되고 있다. MeOH 분획을 RP 플래쉬 컬럼 크로마토그래피, 역상 HPLC, 실리카 프렙 TLC로 분리하여 그 구조를 밝혀냈습니다. 효율적이고 안정적인 새로운 항산화제임을 확인하기 위해 과산화물 음이온(․O2-)과 산화질소(NO...)를 in vitro에서 동시에 반응시켰습니다. 안정한 자유 라디칼로 알려진 3-모르폴린시드 노니미닌(SIN-1), 진성 퍼옥시니트라이트(ONOO-) 및 1,1-디페닐-2-피크릴-히드라질(DPPH)에 대한 소거 효과를 조사했습니다. 이러한 결과는 지렁이퇴비가 우수한 항산화 물질을 함유하고 있음을 확인시켜 줍니다.
참고문헌 참고문헌 참고문헌 참고문헌
2001. Peroxynitrite scavenging and cytoprotective activity of 1,3,6-tribromo-4,5-dihydroxybenyl methyl ether from the marine alga Symphocladia Iatiuscula. The chemistry of peroxynitrite: a product of the reaction between nitric oxide and the superoxide anion. Peroxynirite-induced apoptosis in epithelial (T84) and macrophage (RAW 264.7) cell lines: Effect of legume-derived polyphenols (phytolens) NITRIC OXIDE.
