컬럼 크로마토그래피 1에 사용된 모든 용매. ROS DCFH-DA는 Molecular Proves Inc.의 제품입니다. 측정에 사용된 PMA(Phorbol myristate Acetate)는 Sigma에서 구입하였고, MMP-2와 MMP-9는 R&D Systems Inc.에서 구입하였습니다.
Varian RI 검출기(HPLC, Dionex p580)를 갖춘 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 화합물을 정제 및 분리하였다. 감태(감태)를 제주 귀덕에서 구입하여 그늘에서 건조시킨 후 상온에 보관한 후 분쇄기로 분쇄하여 추출에 사용하였다. 가열 맨틀을 사용하여 용매를 끓는점까지 가열하여 추출 과정을 반복합니다.
조추출물을 용매의 극성에 따라 순차적으로 분별하였다. 첨가하고 실온에서 1분간 반응시킨다. 탄닌산을 사용하여 작성한 표준 곡선으로부터 총 폴리페놀 함량을 구했습니다.
샘플이 추가되지 않은 음성 대조군과 비교하여 측정이 이루어졌습니다.
Oxidation
Dihydrorhodamine 123
Rhodamine 123
Incubation at 37 ℃ for 1 min Sample
SIN-1 200 μM or peroxynitrite 5 μM
모든 세포는 이것을 함유한 배지로 성장시켰다. 부착 세포를 분리하고 계대배양하였다. 감메이트 2차 대사산물이 사용에 미치는 영향.
생성된 흡광도는 . 세포 자유 라디칼의 생성은 DCFH-DA 분석법으로 측정되었습니다 (Okimotoa., 2000). 로 측정한 흡광도를 이용하여 흡광도를 측정하였다.
각 NO 농도별 흡광도를 구하기 위해 표준곡선을 작성하였고, 실험 결과를 위해 표준곡선을 이용하여 생성된 NO의 함량을 정량화하였다. 합성된 유전자를 이용하여 합성하였다. 중합효소연쇄반응(PCR) 방법(표 1)과 interanl에 의해 증폭되었습니다.
각 제품은 젠으로 사용되었습니다. MMP-2 및 MMP-9에 대한 감태 2차 대사산물의 효소 활성을 알아보기 위해 수행되었습니다. 시료를 처리하지 않은 대조군과 시료와 PMA를 모두 처리하지 않은 블랭크를 대조군으로 사용하였다.
농도별로 처리된 시료의 상층액을 동결건조하고 농축한 후 자이모그래피를 실시하였다. 전기영동 후 SDS를 제거하기 위해 겔을 변성 완충액(2.5% 아세트산 10%)으로 탈색시켰는데, 이는 변성되어 투명하게 나타났습니다. 의 활동은 의 크기에 따라 관찰되었다.
3) MMP-2 MMP-9 RT-PCR
Phlorofucofuroeckol A
Dieckol
- MMP-2 MMP-9 RT-PCR
L-아스코르브산과 BHT(부틸화 하이드록시톨루엔)를 대조군으로 사용했습니다. ONOO 소거 활성은 시료를 첨가하지 않은 대조군과 비교하여 백분율(%)로 표시되었습니다. L-아스코르빈산과 페니실라민을 대조군으로 사용하였다.
소거활성 측정 결과, 정품 퍼옥시니트라이트가 대조군으로 사용되었습니다. 측정에서 얻은 측정 결과를 기반으로 합니다. 특히, 농도 의존적으로 생산량이 감소하는 것을 확인하였다.
50 μg/mL 미만의 MeOH 분획 농도에서도 농도 의존적으로 NO 생성이 감소했습니다. GAPDH는 하우스키핑 유전자로 사용되었으며, 발현량은 밀도로 측정하여 iNOS/GAPDH에 대한 %로 표시하였다. 표현의 함량이 현저히 감소한 것을 확인하였다.
하우스키핑 유전자로는 GAPDH를 사용하였으며, 그 발현량은 밀도로 측정하여 %MMP-2.9/GAPDH로 표시하였다. HT-1080 세포의 n-BuOH 분획물에서 분리된 5가지 화합물의 세포를 측정하였다. 큰 효과가 없는 것으로 나타났습니다.
상기 언급한 세포 생존성을 나타내는 것으로 확인되었다. 통해 얻은 결과를 바탕으로 실험해 보세요. 모든 화합물이 농도 의존적으로 MMP-2와 9의 활성을 억제하는 것을 확인하였다.
하우스키핑 유전자로는 GAPDH를 사용하였으며, 그 발현량은 밀도로 측정하여 %MMP-2.9/GAPDH로 표시하였다. 둘 다 높은 수준으로 억제되고 있는 것으로 확인됐다.
