해양바이러스 병원체 진단키트 실용화 기술 개발

LAMP 기반 해양바이러스 진단키트 시제품 생산 한글 해양병원체, 해양바이러스, 진단키트.

개발기술의 국내외 기술동향

기술의 특징

또한 PCR에 비해 진단 효율이 약 1000배 증가한 것으로 보고되었으며, SYBR 녹색형광염색으로 실시간으로 확인할 수 있는 장점이 있어 현장 적용 면에서도 유리하다. 그 결과, 재조합 단백질 scFv를 이용한 병원성 해양 바이러스의 검증에서 항체와 같은 칩을 이용하여 신속하게 검출할 수 있고, 특이도도 높아져 추적을 능가하는 시스템 구축이 가능하다. 지금까지 방법.

연구개발의 필요성

LAMP 기반 해양바이러스 병원체 진단키트 시제품 제작 LAMP 기반 해양바이러스 병원체 진단키트 상용화 및 기술이전

세부목표

해양 바이러스 유전자 프라이머의 합성. 양식어류를 이용한 실시간 LAMP PCR 진단키트 테스트. 지난 8월 양식어류 진단 결과 해양병원성 바이러스 3종 중 MABV가 가장 많이 검출됐으며 RSIV, VNNV 순이었다.

볼락의 경우 3종의 해양병원성 바이러스에 모두 감염되지 않았다. 10월 양식어류 진단 결과 해양병원성 바이러스 3종 중 MABV가 가장 많이 검출되었고 VNNV, RSIV 순이었다. 제주도 넙치 양식장의 해양 바이러스 모니터링.

RSIV와 NNV는 Patho Gene-spin™ DNA/RNA Extraction Kit(iNtRON)을 이용하여 균질화된 조직으로부터 바이러스 핵산을 추출한 후 실시간 LAMP PCR을 수행한 결과 검출되었다. 섹션 2 scFv 기반 해양 바이러스 진단 시제품 키트 제작. 선별된 scFv 파지 디스플레이를 이용한 진단키트 시제품 제작

Marine Pathogens Research Project를 통해 선별된 바이러스에 특이적으로 결합하는 Phage display scFv를 사용하여 ELSIA 키트 생산을 위한 검증 실험을 수행했습니다. 바이러스 특이적 파지 디스플레이 scFv 키트를 이용한 바이러스 진단. 신경 괴사 바이러스에 대한 항체 및 이의 용도.

바이러스 cDNA 합성과정 간소화

검출에 사용되는 형광시약

어종별로 비교했을 때, 은어에 감염된 바이러스가 가장 많았고, 그 다음으로 볼락 감염률이 가장 높았다. 현장 샘플을 이용한 반복 실험을 통해 RSIV와 MABV의 실시간 LAMP PCR 현장 적용 가능성을 확인했습니다. 제작된 Phage-displayed scFv 키트의 현장 적용 가능성을 확인하기 위해 바이러스 감염이 의심되는 양식 어류 시료를 대상으로 바이러스 진단 실험을 수행하였다.

RSIV 진단 결과 등 근육 조직에서 바이러스가 가장 많이 검출되었고 장 조직에서 바이러스가 가장 적게 검출되었다. 현장 검체를 이용하여 Phage display scFv 키트의 현장 적용성을 확인한 결과, RSIV 진단키트를 사용하여 진정으로 의심되는 검체에서 감염 여부를 확인하는데 문제가 없을 것으로 판단되었다. 진단키트 시제품 성능평가 현장에서 현장시료 검증

진단 키트의 비특이적 반응 제거 형광 시약 변경 검출 조건 설정 이번 연구과제에서 제작된 진단키트 시제품은 SYBR의 단점을 보완하고 실시간 모니터링이 가능한 SYTO-9를 이용한 실시간 LAMP PCR 방식을 사용한다. 정부 차원의 해양병원체 저감 정책수립에 활용 - 해양병원체 해양생물진단 시장 진출

진단키트를 이용한 해양병원체 종합정보관리 진단키트의 안정적 납품을 위한 양산 기반을 마련합니다. 수요업체에서 시제품 진단키트를 이용한 해양바이러스 검출 실험 진행 - (주)서린바이오사이언스 부설 서린생명과학연구원에서 추가 검증

양식장 어류를 이용한 진단키트 테스트

제주도 넙치 양식장 해양바이러스 모니터링

통영 폐사 어류 RSIV 검출

ELISA 키트 프로토콜을 확립하기 위해 RSIV 특이 파지 중 D2 파지와 NNV 특이 파지 중 G7 파지를 이용하여 ELISA 조건을 검색하였다.

그림 21. Phage scFv를 이용한 Antigen ELISA 모식도

바이러스 특이 phage display scFv kit를 이용한 바이러스 진단

NNV의 경우 실제 검체에서 비신경조직의 감염 가능성이 적고 전체적인 감염률이 낮은 것으로 알려져 있어 다른 진단으로 감염이 확인된 다른 검체를 제공할 필요가 있어 보인다. 방법 및 추가 시도를 수행합니다.

Ÿ 음성 : 검사선(T)에 색띠가 나타나지 않고 대조선(C)에만 색띠가 나타나면 음성으로 판정한다. Ÿ 양성: 검사선과 대조선 모두에 색띠가 나타나면 양성으로 본다. 기업실적 소비기업에 기술이전을 통해 달성할 수 있는 실적(매출 등).

LAMP-PCR은 실험을 진행하기 위해 3단계 이상의 온도 설정 단계가 필요한 기존 PCR 방법과 달리 모든 실험이 등온선에서 수행된다는 장점이 있다. 해양 바이러스와 밀접한 관련이 있는 양식장과 같은 장소에서 현장 적용 가능성을 높이기 위해 이전 과제에서 LAMP PCR 방법을 확립했습니다. 다만, 이전 실험에서 사용한 SYBR은 real-time PCR 과정을 방해하여 검출 특이도 및 민감도에 영향을 미칠 수 있으므로 기존 검출 방식을 개선하였다.

해양 병원체의 지속적인 모니터링에 사용됩니다. 기술적 파급효과와 기술의 기대효과. 복잡한 사용으로 고가의 검사실 장비를 대체하는 효과 - 진단키트의 소형화로 현장 활용성 증대.

참돔 이리도바이러스에 대한 항체 및 이의 용도.

해양바이러스 진단시스템 비교