그러나 그 역할은 아직 잘 정의되어 있지 않습니다. 그리고 T2D는 전 세계적으로 주요 건강 문제가 되었습니다. 원치 않는 부작용은 제거되지 않습니다.
200 µl의 클로로포름을 추가하고 20초 이상 완전히 vortex합니다. 그런 다음 RNA DNA와 단백질 및 지질층으로 분리됩니다. 그런 다음 RNA와 동일한 양의 이소프로판올을 첨가하고 뒤집었습니다.
PCR이 완료된 후 agarose gel을 실행하고 8 µl의 샘플을 추가합니다. 그런 다음 기계에서 젤만 제거하고 Etbr 버퍼에 15분 동안 담가두고 UV로 사진을 찍습니다. 그리고 Q-PCR 기계에 넣고 검체를 세팅하고 기계를 반납합니다.
그리고 24시간 굶은 뒤 혈당계로 포도당을 측정했다.
그런 다음 에너지 소비의 차이를 확인했습니다. 두 쥐 사이의 에너지. 결과 대조군 마우스와 비교하여 DRG2 KO 마우스의 혈당 수치가 더 낮았다(그림 2-C). 놀랍게도 DRG2 KO 생쥐의 혈중 인슐린 수치도 대조군 생쥐보다 낮은 것을 확인하였다(Figure 2-D).
대조군 마우스 및 DRG2 전신 KO 마우스에서 실시간 PCR을 사용하여 베타-산화와 관련된 유전자를 확인하였다. 대조 마우스와 DRG2 전신 KO 마우스의 간 조직에서 베타 산화 관련 유전자의 mRNA 발현량이 DRG2 KO 마우스의 간 조직에서 감소하였다. 다음으로 대조군 마우스와 DRG2 전신 KO 마우스의 간조직에서 지방산 및 TG 합성 관련 유전자의 mRNA 수준을 확인하였다.
대조군과 전신 DRG2 KO 마우스 사이의 백색 지방 조직에서 베타 산화, 지방 분해 및 열 발생과 관련된 유전자가 확인되었습니다. 먼저, 대조군 마우스와 전신 DRG2 KO 마우스에서 실시간 PCR을 이용하여 베타-산화와 관련된 유전자를 확인하였다. 다음으로 대조군 마우스와 DRG2 전신 KO 마우스의 백색지방조직에서 지방분해 관련 유전자의 mRNA 수준을 Q-pcr을 통해 확인하였다.
결과 지방분해 관련 유전자의 발현은 DRG2 KO 생쥐의 모든 백색지방조직에서 증가하였다. 대조군 마우스에 비해 DRG2 KO 백색 지방 조직의 열 발생과 관련된 모든 유전자가 몸 전체에서 증가했습니다. 대조군 마우스와 DRG2 전신 KO 마우스 사이의 갈색 지방 조직에서 베타-산화 및 지방분해와 관련된 유전자가 확인되었다.
결과 대조군과 전신 DRG2 KO 생쥐의 갈색 지방 조직에서 베타 산화 관련 유전자에는 차이가 없었다. 결과 대조군 마우스와 전신 DRG2 KO 마우스의 갈색 지방 조직에서 지방 분해와 관련된 유전자인 Lipe 유전자는 차이가 없었다. 대조군 마우스의 혈청 FGF21 양과 비교할 때, DRG2 전신 KO 마우스의 혈청 FGF21 양이 더 높았다.
먼저 대조군 마우스와 DRG2 전신 KO 마우스의 간 조직에서 ATF4의 mRNA 수준을 Q-PCR을 이용하여 확인하였다. DRG2 전신 KO 마우스의 체중이 대조군 마우스보다 낮은 것을 확인하였다.
또 다른 원인이 될 수 있는 에너지 소비량의 차이도 확인됐다. 그런 다음 혈당 수치를 확인했습니다. 그러나 낮은 포도당을 가진 DRG2 KO 생쥐에서는 낮은 양의 인슐린이 관찰되었습니다.
그래서 당내성검사를 통해 포도당 처리능력을 확인하였다. 그 결과, DRG2 KO 마우스가 대조군 마우스보다 포도당을 더 잘 처리함을 알 수 있다. 그 결과, 두 마우스 사이에 인슐린 감수성에 차이가 없음을 확인하였다.
첫째, 간 조직에서 베타 산화, 지방산 및 TG 합성과 관련된 유전자를 확인하였다. 다음으로 백색 지방 조직에서 베타 산화, 지방 분해 및 열 발생과 관련된 유전자를 확인했습니다. 모든 관련 유전자는 대조군에 비해 DRG2 KO 마우스에서 증가했습니다.
먼저, FGF21의 발현이 가장 높은 것으로 알려진 간 조직에서 FGF21 mRNA 수준을 확인하였다. DRG2 전신 KO 생쥐의 간 조직에서 FGF21 mRNA 수준이 대조군 생쥐에 비해 유의하게 증가함을 확인하였다. 따라서 혈청 내 FGF21 수준을 확인하였다.
따라서 다른 경로를 통해 FGF21 수준이 증가했을 수 있다고 생각되었습니다. 따라서 P53의 표적 유전자인 P21의 mRNA 발현량을 확인하였다. 그 결과 대조군 마우스에 비해 DRG2 KO 마우스의 간 조직에서 p21 발현이 증가한 것으로 나타났습니다.
Potthoff MJ, Kliewer SA, Mangelsdorf DJ (2012) Endocrine fibroblast growth factors 15/19 and 21: from feast to famine. Markan KR, Naber MC, Ameka MK, Anderegg MD, Mangelsdorf DJ, Kliewer SA, Mohammadi M, Potthoff MJ (2014) Circulating FGF21 is liver-derived and increases glucose uptake during refeeding and overfeeding. Kharitonenkov A, Shiyanova TL, Koester A, Ford AM, Micanovic R, Galbreath EJ, Sandusky GE, Hammond LJ, Moyers JS, Owens RA et al. (2005) FGF-21 as a novel metabolic regulator.
Coskun T, Bina HA, Schneider MA, Dunbar JD, Hu CC, Chen Y, Moller DE, Kharitonenkov A (2008) Fibroblast growth factor 21 corrects obesity in mice. Berglund ED, Li CY, Bina HA, Lynes SE, Michael MD, Shanafelt AB, Kharitonenkov A, Wasserman DH (2009) Fibroblast growth factor 21 controls glycemia through regulation of hepatic glucose flux and insulin sensitivity. Xu J, Lloyd DJ, Hale C, Stanislaus S, Chen M, Sivits G, Vonderfecht S, Hecht R, Li Y-S, Lindberg RA et al (2009a) Fibroblast growth factor 21 reverses hepatic steatosis, increases energy expenditure, and improves insulin sensitivity in diet-induced obese rats.
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Autophagy deficiency leads to protection from obesity and insulin resistance by inducing Fgf21 as a mitokine. Fibroblast growth factor 21 is regulated by the IRE1α-XBP1 branch of the unfolded protein response and counteracts endoplasmic reticulum stress-induced hepatic steatosis. Induction of fibroblast growth factor 21 by activating transcription factor 4 is regulated through three amino acid response elements in its promoter region.
Abstract
