МЕТОДЫ АНАЛИЗА НА ВЫЯВЛЕНИЕ ТОКСОПЛАЗМОЗА У ЧЕЛОВЕКА Мухамедьярова М.Б.
Евразийский национальный университет им. Л.Н.Гумилева, г.Астана, Республика Казахстан, email: [email protected]
Научный руководитель - к.м.н., доцент Мукашева Г.К.
По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) паразитарными болезнями в мире заражено более 4,5 млрд. человек. 95% людей на Земле заражены паразитами. И эта статистика включает в себя не только бедные и неблагополучные страны «третьего мира». К примеру, в Европе поражен каждый третий житель. 85-95% взрослого населения США имеет паразитов, но не знает об этом.На долю паразитарных заболеваний приходится 14 млн. смертей в год, что составляет, примерно, 25% от общемирового показателя смертности.95% людей носят в себе от 1 до 5 видов паразитов! А у кого есть домашние животные, эта цифра возрастает до 99,9%.
Одной из таких болезней является токсоплазмоз. Это широко распространенное паразитарное заболевание человека и животных, которое вызывается простейшими микроорганизмами(Toxoplasma gondii). Распространенность токсоплазмоза в мире невероятно высока, в основном за счет стран Африки, а также Латинской и Южной Америки, в которых инфицированность населения доходит до 90%. Показатели в Европе и Северной Америке ниже — 25—50% населения.[3]
В Казахстане суммарная заболеваемость токсоплазмозом в 10 раз выше заболеваемости острыми кишечными инфекциями и по своей частоте только сопоставима с показателями заболеваемостью гриппом. При этом подавляющее большинство инфицированных людей никогда не испытывали и не испытывают каких-либо проблем и трудностей, связанных с болезнью (токсоплазмоз), и даже не знают о ее существовании.
Остро стоит проблема перед беременными женщинами. Так как токсоплазмоз – это одна из TORCH-инфекций, инфекций которые связаны одним единственным признаком - возбудители могут передаваться внутриутробно: от матери к ребенку. Данные инфекции нередко являются причиной проблем с вынашиванием беременности и виновниками врожденных пороков развития у малыша. Плацента инфицированной женщины не фильтрует токсоплазмы. При беременности мать заражает плод. Исходя из вышесказанного, актуальность данной темы очевидна.[4]
Сегодня в Казахстане более 77 % людей страдает от токсоплазмоза. К сожалению, современные врачи – паразитологи не могут полноценно обследовать человека своими традиционными методами. Так как симптомы токсоплазмоза могут отличаться крайним разнообразием и не являются специфичными, поставить диагноз только на основании жалоб больного практически невозможно. Поэтому при диагностике токсоплазмоза возрастает значимость лабораторных методов исследования и диагностики. Лабораторные методы диагностики токсоплазмоза включают в себя паразитологические и иммунологические методы.
Паразитологические методы диагностики токсоплазмоза основаны на непосредственном обнаружении и обследовании токсоплазмы в организме больного человека. При паразитологическом исследовании возбудителя-токсоплазму можно выделить в чистом виде, можно
увидеть ее при прямой микроскопии окрашенного препарата нативного материала, либо обнаружить его генетический материал методом полимеразно цепной реакции-ПЦР.[1]
ПЦР обладает уникальной чувствительностью и специфичностью. С ее помощью можно анализировать различные клинические образцы. ПЦР - диагностика состоит из 3 основных процедур:
подготовки исследуемой пробы материала, которая сводится к выделению ДНК или РНК, собственно полимеразной цепной реакции и детекции продукта ПЦР. Суть ПЦР заключается в идентификации специфического участка молекулы ДНК с последующим копированием или амплификацией этого участка с целью получения достаточного количества копий, которые могут быть выявлены доступными методами детекции (чаще всего с помощью электрофореза). Позволяет обнаружить ДНК токсоплазм в крови, ликворе и биопрепаратах; обладает наиболее высокой чувствительностью и специфичностью.[5]
Метод ПЦР имеет высокое диагностическое значение, особенно при остром и врожденном токсоплазмозе. Ограничения связаны с кратковременной паразитемией. ПЦР преимущественно используется для установления активности инфекционного процесса у лиц с позитивными серологическими реакциями, а также для диагностики приобретенного (при выраженных иммунодефицитах, в том числе при СПИДе) и врожденного токсоплазмоза (у серонегативных по токсоплазмозу новорожденных). Использование его для скрининга беременных как метод выбора нецелесообразно. В настоящее время такой метод диагностики токсоплазмоза применяется при врожденном токсоплазмозе у детей до 1 года, при токсоплазмозе у больных СПИДом, а также при поражении токсоплазмами глаз — то есть в тех случаях, когда давность инфицирования не играет роли и важно просто ответить на вопрос: есть ли в организме токсоплазмы. Диагностическая ценность ПЦР повышается при сочетании с серологическими методами.[1]
Однако паразитологическое исследование имеет и существенные недостатки, снижающие его ценность и ограничивающие применение на практике. Дело в том, чтотоксоплазмы, обнаруженные в биоматериале, говорят только о том, что человек был инфицирован токсоплазмозом, но не дают никаких сведений о том, насколько давно это было. С другой стороны, отсутствие в исследуемом препарате токсоплазмы не говорит о том, что токсоплазмоза у человека нет.
Во-первых, токсоплазмы, уже проникшие внутрь тканей, не живут в жидкостях, которые можно взять на анализ, поэтому в исследуемый материал возбудитель может просто не попасть.
Во-вторых, для того, чтобы токсоплазма сохранилась живой в биоматериале, нужны определенные условия, а при их несоблюдении возбудитель токсоплазмоза просто не доживает до микроскопии. Поэтому результаты паразитологических исследований всегда должны соотноситься с клинической картиной заболевания.[1]
Более точную информацию может дать иммунологическое исследование на токсоплазмоз.
Существует несколько иммунологических методов диагностики.На сегодняшний день лидирующее положение среди них занимает иммуноферментный анализ. ИФА является лабораторным методом обнаружения и измерения количества специфических антигенов в плазме крови. Они представляют собой белки-иммуноглобулины. Антигены вырабатываются в организме как ответ на внедрение чужеродных веществ, клеток и вирусов. Каждый микроорганизм вызывает образование определенного иммуноглобулина, степень специфичности достигает 99%. Таким образом, выявление антигена позволяет судить о виде чужеродных агентов и, следовательно, поставить правильный диагноз заболевания. Количество образовавшихся иммуноглобулинов характеризует стадию патологического процесса.[1]
Суть этого метода — определение специфических антител к токсоплазме, при этом не только определяется присутствие или отсутствие этих антител, но и их количество. Для исследования на антитела могут использоваться не только сыворотка крови, но и спинномозговая жидкость, содержимое стекловидного тела, околоплодные воды. ИФА помогает определить и давность заражения человека токсоплазмозом. Дело в том, что человеческий организм вырабатывает антитела (иммуноглобулины) двух типов: ранние антитела IgM появляются в крови непосредственно после заражения и сохраняются не дольше года. Затем они исчезают и не появляются уже никогда.
Через некоторое время после заражения токсоплазмозом, вслед за IgM, в крови появляются другие антитела — IgG, которые сохраняются в ней в течение всей последующей человеческой жизни.[2]
Следовательно, при определении антител к токсоплазмозу, можно сделать вывод о том, насколько давно произошло заражение: если обнаруживаются только антитела IgM, это значит, что человек заразился токсоплазмозом совсем недавно. Если же при проведении ИФА обнаруживается только IgG, а IgM отсутствует, то это говорит о том, что заражение произошло больше года назад, и организм уже выработал иммунитет к токсоплазме. Эти данные особенно важны при обследовании беременных женщин или женщин, планирующих беременность. Дело в том, что перенесенный в прошлом токсоплазмоз никаким образом не влияет на плод, а «свежая» инфекция может быть губительна для ребенка.[2]
В Казахстане разработка и внедрение данного направления исследований в производство по существу находится на недостаточно высоком уровне. В связи с этим разработка методов выявления токсоплазмоза у человека является весьма актуальной в деле оздоровления населения Республики Казахстан.
В настоящее время, в нашей стране остро стоит проблема диагностики токсоплазмоза. Методы выявления данного заболевания с помощью иммунологических анализов дорогостоящи и часто информативны лишь в 60-70% случаев.Как видно, диагностика паразитарных заболеваний затруднена. А учитывая, невнимательность к этой проблеме на государственном уровне, многие люди болеют и не знают, что причиной их бед часто являются паразиты.
Успешным решением данной проблемы может быть применение и внедрение методов ПЦР анализа и ИФА, которые улучшат результаты исследования протекания и лечения токсоплазмоза.
Список используемой литературы:
1. Грачёва Л.И. и др. Эпидемиология, клиника, диагностика и лечение токсоплазмоза. Москва, 1996 г.
2. Руководство по инфекционным болезням под ред. проф. Ю.В. Лобзина СПб,1996 г.
3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни. Москва, 1995 г.
4. Клиническая патология беременности и новорожденного, под ред. М.Н. Кочи и др. М., 1986;
5. http://www.1september.ru/
УДК 576.3:612.017
ХЕМОКИНДЕРДІҢ ЖІКТЕЛУІ, СИПАТТАМАСЫ ЖӘНЕ ОЛАРДЫҢ ҚЫЗМЕТІ
Ж. А. Нұрбекова, Т.Д. Укбаева
Л.Н.Гумилев атындағы Еуразия Ұлттық Университеті, Астана қ., ҚР
Түйінді сөздер: Цитокиндер, химокиндер, рецепторлар, моноциттер, гранулоциттер,
эотаксиндер, лимфоциттер.
1992жылы Венада(Австрия) халыкаралык, симпозиумде ең алғаш а(СХС) және в(СС) болып 2 тұқымдacқa белiнген 12 хемотоксикалык, цитокиндер туралы мәселе қаралды.Термиология пiкiрталасы өте курделi болды. Хемотаксикалык, цитокиндерге сипаттама беру ушiн әpтурлi терминдер ұсынылды: "интеркриндер", SIS(Smаll-inuсiblерrоtеins ), "РF4-кажеттi цитокиндер". Нәтижесiнде "chemoattractant" және "cytokines" деген eкі сөзден құралған
"хемокиндер"(сhеmоkinеs) терминi кабылданды. Қазiргi уақытта 50-ден астам әp түрлi молекуладан саналатын барлық, тұқымдастардың aнықтамасы үшiн бұл термин әлi де қолданылып жүр.
Хемокиндер - гепарин және өзара 20-70%-тiк гомологияны *2,7,8+ байланыстырып тұратын өлшемi бойынша ұcaқ: (5-20KД) катиондык, ақуыздар. Хемокиндер бiрiншiсi үшiншiмен, екiншiсi төртiншiмен өзара дисульфидтiк байланысқан, 4 консервативтi цистеиндермен орнын басатын үлкен цитокиндер тұқымдасынан тұрады. Caны мен орнына байланысты консервативтi цистеин қалдықтары хемокиндердiц 4 класына жiктеледi: СС, С, СХС және СХХХС. Үшеуiнiң iшiнен (СС, СХС және СХХХС) 4 цистеин бойынша құралады , ал 4 класс(С)-басқа топтағы 1-шi және 3-шi цистеинмен сәйкес келетiн тек қана екеу. СС- хемокиндер молекуласында цитокиндердiң бiрiншi eкi қалдығы бiр-бiрiне қосылады. СХС және СХХХС хемокиндер 1-шi мен 2-шi цитокиндердiң қалдығымен бiрге 1 және 3 аминқышқылды құрайды. Хемокиндердiң негiзгi мөлшерi СХС және СС кластарына жатады, осы кезде С және СХХХС хемокиндер сияқты тек қана бiр таныстырушы бойынша болады.
СХС хемокиндер нейтрофилдер мен Т-лимфоциттер қатынасында белсендi, ал СС хемокиндер моноциттер, базофильдер және эозинофилдер арасында белсендi болып келедi. Адамда СХС хемокиндерiнiц гені төртiншi хромосомада орналасқан, ал СС хемокиндердiң гені он жетiншi хромосомада орналасқан. Хемокиндердi таныстырушы С және СХХХС(СХ3С) гендерi 1-шi және 16-шы хромосомалармен сәйкес келедi. Кейбiр жаңа таныстырушы СС хемокиндерi осындай аймақта болады. Сонымен, LARC(liver and activation- regulated chemokine) және TARC(tymus and activation-regulated chemokine) және SLC(secondary lymphoid-tissue chemokine) 9-шы хромосомада орналасқан.
СХС хемокиндері
СХС хемокиндерінің тұқымдасы ЕLR(Glu-Lеu-Arg) жалғастырушы бола алатын және бола алмайтын болып бөлінеді. ELR- құрамды хемокиндер IL-8, GRO α, β , γ ,NAP2, ЕNА78-ді қосады. ЕLR-реттейтін құрамды емес хемокиндерге ІР-10, Mig, І-ТАС, SDF-l жатады. ІР-10 және Mig белсендірілген IL-2 қатысуымен Т-клеткаларға әсер етеді, ал SDF1 белсендірілген Т клетка жадына, моноциттер және гранулоциттер қатысымен кең ауқымды қамтиды.
Ең алғаш рет хемокиндердің арасында тромбацитарлы фактор(РF 4) суреттелген, ал реттілік 1997 жылы белгіленді. РР4 қан тромбоциттерінің а-грануласынан құралады. Бұл гранулалар да СХС хемокиндерінің екі әр түрлі хемокиндерінен тұрады: негізгі белок тромбоциттері (РВР - platelet basic protein) және ІІІ пептид, белсендіруші жалғастырушы ұлпа (СТАР-ІІІ - connective tissue-activating protein ІІІ).
Тек он жыл өткен соң ғана РР4 реттілігі анықталған соң IL-8 ашылды. Қазіргі уақытта бұл хемокиндер СХС-ның негізгі және меңгерілген класына жатады. Қазіргі уақытта ІL-8ді екі негізгі формаға бөледі моноциттер және макрофагтар культурасына жататын 72 аминқышқылдан (SAKELRC ... ) және ұлпалық клеткалар, фибробластар, эндотелиоциттер культурасы, т.б. болатын 77 аминқышқылдан (AVLPRSAКELRC ... ) тұрады.*2,7,8+
СХЗС хемокиндері
Бұл топтың ішіндегі жалғыз өкіл фракталкин - муцин және хемокиннен тұратын, бірегей
трансмембраналық молекула-гибрид. Фракталкин эндотелияның жоғарғы қабатында
дамып, IL-l және ТNP белсенділігі әсерінен СС хемокиндерімен үлкен дәрежеде гомологті,
алайда NН
2-соңдық цистеиндерінен тұратын 3 аминоқышқылы бар, қорытынды ретінде СХХХС хемокин болғандықтан, оны СХЗС хемокины деп те атайды. In vitro фракталкин СХЗСRl рецепторымен қатынас кезінде белсенділігі артады. Аталған форма моноциттерде адгезия шақырса, NK және Т-ұлпаларында, ерітінді форма- сол ұлпалардың хемотаксисын шақырады .
.
Эндоцелиоциттарға жататын фракталкин моноциттерді, CD8+ Т - ұлпалары және CD16+/
CD56+ NK ұлпаларын өздігінен мықты адгезиямен қамтамасыз ете алады. Әдeттe лейкоцитгер эндотелимен қатынасқанда бірнеше деңгейден өтеді: роллинг, фиксация және мықты адгезия. Бұл процесстер адгезия молекулаларының лейкоциттер және эндолейкоцитгер, xeмoaттpaктaнтеapымен қамтамасыздандырылады. Айтылғандай фракталкин жалғыз өзі жоғарыдағылармен қамтамасыз ете алады. Бұл құбылыс механизмі айқын түсінікті емес. Фракталкин құрамында муцин бар молекула болғандықтан,О- гликозировандалған бөлімдер селектиндермен әpeкеттeceдi. Мысалға, L селектині, ол муцин іспетті молекулаларды таниды. Сонымен қатар ,фрокталкин хемокиндер арсындағы шaшыраңқы жүретін лейкоцитгерді жинай алу қабілеті бар, бірден - бір хемокин. Т ARC немесе ELK екеуіде мұндай қасиетке ие емес, мүмкін олардың құрамында муциннің болмағанынан болар.
Тышқандарда фракталкинның ұқсас хемокины нейроктин. Ол ми қан тамырларының эндотелиясында орналасқан. Мидағы ісік қаупінен қорғаушы. Бұл оның лейкоцитгерді цереброспинальді сұйықтығының кезіндегі нейроактин қызметін дәлелдейді. Сонымен бірге, вирус жұқтырылған нейроинфекциялар тышқанның миындағы лимфоцитгердің антител және интегриндерге қарсы одақтасуын әкеледі,β1(VLA-4) және β2(LFA-l).
Хемокин рецепторлары
Трансмембраналық доменалармен құрылымы бойынша жасалған рецепторлар арқылы хемокиндер әрекет жасайды. Барлық рецепторлар екі консервативті цистеиндерге ие. Олар:
бірі NН
2-соңдық доменде, ал екіншісі үшінші деңгейлі түйінде. Бұл екі цистеин конформацияны анықтау үшін өте қажет бір бірмен дисульфидтық қатынаспен байланысады. Барлық рецепторлар сигналды GTP- байланыс нәруыздары арқылы береді.
СХС хемокиндерінің рецепторлары IL-8-re арналған рецепторлардьщ екі түрі бар: CXCR1 және CXCR2.
Қолданылған әдебиеттер тізімі: