Saran - Analisis senyawa berberin pada ekstrak ultrasonik tanaman Anting-anting (Acalypha indic

BAB V PENUTUP

5.2 Saran

1. Perlu dilakukan validasi metode KCKT sistem gradien yang meliputi presisi, stabilitas, dan spesifitas dalam pemisahan senyawa berberin agar dapat digunakan untuk analisis secara rutin dan berkala.

2. Perlu adanya penambahan asam pada saat ekstraksi untuk meningkatkan kadar senyawa target, khususnya alkaloid berberin.

3. Perlu adanya peningkatan konsentrasi standar untuk meningkatkan intensitas puncak senyawa berberin.

4. Perlu dilakukan metode sistem isokratik pada hasil yang optimum untuk lebih membuktikan munculnya puncak senyawa berberin.

5. Perlu dilakukan identifikasi menggunakan LC-MS untuk mengetahui senyawa-senyawa yang ada dalam ekstrak etil asetat tanaman anting-anting.

DAFTAR PUSTAKA

Al-Maraghi, A. M. 1992. Tafsir Al-Maraghi (Terjemah). Semarang: Toha Putra. Aburjai, T., Alzweiri, M., Al-Hiari, Y. M. 2011. Temperature and Pressure

Behaviours of Methanol, Acetonitrile/Water Mixture on Chromatographic Systems. American Journal of Analytical Chemistry, 2: 934-937.

Ariani, Ni Luh Kasih., Suaniti, Ni Made., dan Sibarani, James. 2015. Perbandingan Analisis Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Elusi Gradien dengan Isokratik pada Penentuan Vitamin B1, B2, dan B6 dalam Sediaan Sirup Multivitamin Secara Simultan. Cakra Kimia Indonesia E-Journal

of Applied Chemistry, 3(1).

Arsyad, M. N. 2001. Kamus Kimia Arti dan Penjelasan Ilmiah. Jakarta: Gramedia.

Ashwini, U., Asha, S. 2017. In Vitro Antibacterial Activity of Acalypha Indica Linn Leaves Extract Against Gram Negative Bacteria. International

Journal of Research in Ayurveda & Pharmacy, 8(3): 195–198.

Cimetiere, N., Soutrel, I., Lemasle, M., Laplanche, A., dan Crocq, A. 2013. Standard Addition Method for the Determination on Pharmaceutical Residues in Drinking Water by SPE-LC-MS/MS.

Fadhilah, Ulum Sholihatul. 2016. Uji Aktivitas Fraksi Etil Asetat dan Ekstrak Kasar Alkaloid Tanaman Anting-Anting (Acalypha indica Linn) sebagai Antimalaria pada Parasit Plasmadium Falciparum. Skripsi Tidak

Diterbitkan. Malang: UIN Maulana Malik Ibrahim Malang.

Falleh, H., Ksouri, R., Lucchessi, M. E., Abdelly, C., dan Magne, C. 2012. Ultrasound-Assisted Extraction: Effect of Extreaction Time and Solvent Power on the Levels of Polyphenols and Antiocidant Activity of

Mesembryanthemum edule L. Aizoaceae Shoots. Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 11(2): 243-249.

Feng, Zhang., Qi, Yang., Lian-Na, Sun., Hong, Gao S., Xia, Tao., dan Sheng, Chen W. 2014. Fingerprint Analysis of Zhimu-Huangbai Herb Pair and Simultaneous Determination of its Alkaloids, Xanthone Glycosides and Steroidal Saponins by HPLC-DAD-ELSD. Chinese Journal of Natural

Medicines, 12(7): 0525-0534.

Garcia, J. L. L., Castro, M. L. L. 2004. Ultrasound-assisted Soxhlet Extraction: an Expeditive Approach for Solid Sample Treatment, Application to the Extraction of Total Fat from Oleaginous Seeds. Journal of

Gandjar, I. G., Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar.

Gilpin, R. K. 2003. Liquid Chromatography Problem Solving and Troubleshooting. Journal of Chromatographic Science, 4(1): 223-224. Godipurge, S. S., Biradar, J. S., Mahurkar, N. 2015. Phytochemical and

Pharmacological Evaluation of Acalypha indica Linn in Experimental Animal Models, 6(4): 7.

Gondaliya, A. V., Vikani, K., Kapupara, P. P. 2014. Development and Validation of Analytical Method for Simultaneous Estimation of Berberine Hydrochloride And Embelin in Polyherbal Formulation, 11.

Grycova, L., Dostál, J., Marek, R. 2007. Quarternary Protoberberine Alkaloids.

Phytochemistry, 68: 150-175.

Harris, Daniel C. 2007. Quantitave Chemical Analysis Seventh Edition. W. H. New York: Freeman and Company.

Hartuti, S., Supardan, M. D. 2013. Response Surface Methodology (RSM), 33(4): 9.

Harvey, David. 2000. Modern Analytical Chemistry. New York: Mc Graw Hill. Hayati, E. K., Halimah, N. 2010. Against Artemia salina Leach of Anting-Anting

(Acalypha indica Linn) Plant Extract. Alchemy, 1(2): 8.

Hayati, E. K., Jannah, A., Ningsih, R. 2012. Identifikasi Senyawa dan Aktivitas Antimalaria in Vivo Ekstrak Etil Asetat Tanaman Anting-Anting (Acalypha indica L.). Molekul, 7(1): 20.

Husna, A. N. 2011. Identifikasi Senyawa Ekstrak Etil Asetat Tanaman Anting-Anting (Achalipa Indica Linn) dan Uji Aktifitas Antimalaria in Vivo pada Hewan Uji. Skripsi Tidak Diterbitkan: UIN Maulana Malik Ibrahim Malang.

Hutapea, J. R. 1993. Inventaris Tanaman Obat Indonesia (II). Jakarta: Departemen Kesehatan RI Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan.

Ibnu Katsir, Al-Imam Abu Fida Isma'il. Terjemahan Tafsir Ibn Katsir. 2004. Jakarta: Sinar Baru Al-Gensindo.

Ishak, F. D. 2013. In Vitro Study of Antimicrobial Activity of Acalypha Indica Linn Extract. The Open Conference Proceedings Journal, 4(1): 57–60.

Jambrak, A. R. 2012. Application of High Power Ultrasound and Microwave in Food Processing: Extraction. Journal of Food Processing & Technology, 03(12).

Kementrian Agama RI. 2010. Al-Quran dan Tafsirnya (Edisi yang Disempurnakan). Jakarta: Ikrar Mandiriabadi.

Khan, M. K., Abert-Vian, M., Fabiano-Tixier, A.S., Dangles, O., Chemat, F. 2010. Ultrasound-Assisted Extraction of Polyphenols (Flavanone Glycosides) from Orange (Citrus sinensis L.) Peel. Food Chemistry, 119(2): 851–858.

Lenny, S. 2006. Senyawa Flavonoida, Fenilpropanoida, dan Alkaloida. Karya

Ilmiah: USU Repository.

Lisiyana, N. 2016. Isolasi Senyawa Alkaloid Fraksi Etil Asetat Tanaman Anting-Anting (Acalypha Indica L.) dengan Variasi Kecepatan Laju Alir menggunakan Kromatografi Kolom. Skripsi Tidak Diterbitkan. Malang: UIN Maulana Malik Ibrahim Malang.

Luliana, S., Purwanti, N. U., dan Manihuruk, K. N. 2016. Pengaruh Cara Pengeringan Simplisia Daun Senggani (Melastoma malabathricum L.) Terhadap Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil). Pharm Sci Res, 3(3).

Meyer, V. R. 2010. Practical High-Performence Liquid Chromatography Fifth

Edition. Switzerland: Wiley.

Mohan, M. C., Abhimannue, A. P., Kumar, B. P. 2017. Identification and Characterization of Berberine in Tinospora cordifolia by Liquid Chromatography Quadrupole Time of Flight Mass Spectrometry (LC MS/MS Q-tof) and Evaluation of its Anti Inflammatory Potential.

Pharmacognosy Journal, 9(3): 350–355.

Ningrum, R., Purwanti, E., Sukarsono, S. 2017. Alkaloid Compound Identification of Rhodomyrtus tomentosa Stem as Biology Instructional Material for Senior High School X Grade. Jurnal Pendidikan Biologi

Indonesia, 2(3): 231.

Nurhamidah. 2005. Penentuan Kondisi Optimum HPLC untuk Pemisahan Residu Pestisida Imidakloprid, Profenofos dan Deltametrin pada Cabai (Capsicum annum). Jurnal Ilmu-Ilmu Pertanian Indonesia, 7 (2): 87-93. Owen, Sonia. 2006. Material Safety Data Sheet. Spectrum.

Pambudi, A., Noriko, N., Swandari, R., Azura, P. R. 2014. Identifikasi Bioaktif Golongan Flavonoid Tanaman Anting-Anting (Acalypha indica L.), 3(10).

Pfoze, N., Myrboh, B., Kumar, Y., Rohman, R. 2014. Isolation of Protoberberine Alkaloids from Stem Bark of Mahonia manipurensis Takeda Using RP-HPLC, 2(2): 10.

Putra, E. D. L. 2004. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi dalam Bidang Farmasi. Medan: USU.

Qoriati, Y. 2018. Optimasi Ekstraksi Ultrasonik dengan Variasi Pelarut dan Lama Ekstraksi terhadap Kadar Alkaloid Total pada Tanaman Anting-Anting (Achalypha Indica L.) Menggunakan Spektrofotometri UV-Vis. Skripsi

Tidak Diterbitkan. Malang: UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

Rahmawan, A. Z. F., Hayati, E. K. 2018. Optimasi Laju Alir dan Fase Gerak pada Pemisahan Senyawa Berberin dalam Tanaman Anting-Anting (Acalypha

Indica Linn) dengan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Skripsi Tidak Diterbitkan. Malang: UIN Maulana Malik Ibrahim Malang.

Rivai, H., Nurdin, h., Suyani, H., dan Bakhtiar, A. 2010. Pengaruh Cara Pengeringan Terhadap Perolehan Ekstraktif, Kadar Senyawa Fenolat dan Aktivitas Antioksidan dari Daun Dewa (Gynura pseudochina (L.) DC.).

Majalah Obat Tradisional, 15(1): 26-33.

Rosyidah, H. 2016. Standarisasi Ekstrak Etil Asetat Tanaman Anting-Anting (Achalypha Indica Linn) Sebagai Herba Antimalaria. Skripsi. Malang: UIN Maulana Malik Ibrahim Malang.

Safitri, E.W. 2018. Optimasi Variasi Pelarut dan Lama Ekstraksi Ultrasonik Senyawa Aktif Alkaloid pada Tanaman Anting-Anting (Acalypha indica L.) serta Identifikasi Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis. Skripsi

Tidak Diterbitkan. Malang: UIN Maulana Malik Ibrahim Malang.

Sayuti, M. 2017. Pengaruh Perbedaan Metode Ekstraksi, Bagian dan Jenis Pelarut Terhadap Rendemen dan Aktifitas Antioksidan Bambu Laut (Isis

Hippuris), 1(3): 10.

Schellinger, Adam P., dan Carr Peter W. 2006. Isocratic and Gradient Elution Chtomatography: A Comparison in Terms of Speed, Retention Reproducibility and Quantitation. Journal of Chromatography A, 1109(2006): 253-266.

Schramm, A., Baburin, I., Hering, S., Hamburger, M. 2011. hERG Channel Inhibitors in Extracts of Coptidis rhizoma. Planta Medica, 77(07): 692– 697.

Shigwan, H., Saklani, A., Hamrapurkar, P. D., Mane, T., Bhatt, P. 2013. HPLC Method Development and Validation for Quantification of Berberine from Berberis aristata and Berberis tinctoria, 9.

Shihab, Q. 2002. Tafsir Al-Mishbah Pesan, Kesan, dan Keserasian Al-Quran. Jakarta : Penerbit Lentera Hati.

Shirsath, S. R., Sonawane, S. H., Gogate, P. R. 2012. Intensification of Extraction of Natural Products Using Ultrasonic Irradiations—A Review of Current Status. Chemical Engineering and Processing: Process Intensification, 53: 10–23.

Singh, R., Katiyar, C., Pasrija, A. 2010. Validated HPLC-UV Method for the Determination of Berberine in Raw Herb Daruharidra (Berberis aristata DC), its Extract, and in Commercially Marketed Ayurvedic Dosage forms. International Journal of Ayurveda Research, 1(4): 243.

Skoog, D. A., West, D. M. Holler, F. J., dan Crouch, S. R. 2004. Fundamental of

Analitycal Chemistry Eighth Edition. Beltmont (CA): Thomson Learning

Inc.

Syarifah, V. B. 2017. Analisis Sidik Jari Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Untuk Kendali Mutu Brotowali (Tinospora crispa), 36.

Tambun, R., Limbong, H. P., Pinem C., dan Manurung, E. 2016. Pengaruh Ukuran Partikel, Waktu, dan Suhu pada Ekstraksi Fenol dan Lengkuas Merah. Jurnal Teknik Kimia, 5(4): 53-56.

Vankar, P. S., Srivastava, J. 2010. Ultrasound-Assisted Eztraction in Different Solvents for Phytochemical Study of Canna indica. International

Journal of Food Engineering, 6(3).

Vipul, U., Neeru, S., Amit, T. K., Joshi, H. M., Amreesh, M., Brijpal, S., dan Bahadur., K. S. 2013.Standardization of HPLC Method of Scopoletin in Different Extracts of Convolvulus pliricalus. International Journal of

Pharmaceutical Sciences and Drug Research, 5(1): 28-31.

Yasmin, C., Eriani, K., Sari, W. 2010. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Akar Anting-Anting ( Acalypha Indica L), 9.

52 Lampiran 1. Skema Kerja

Tanaman Anting-Anting

Preparasi Sampel

Ekstraksi Ultrasonik Menggunakan Etil Asetat

Optimasi Pemisahan Senyawa Berberin Menggunakan KCKT

Penentuan Senyawa Berberin dalam Tanaman Anting-Anting Ekstrak Etil Asetat Tanaman

Anting-anting

53 Lampiran 2. Diagram Alir

2.1 Preparasi Sampel

- Ditimbang sebanyak 4 kg - Dipisahkan batang dan daunnya - Dipotong kecil-kecil

- Dikeringanginkan

- Dihaluskan dengan blender

- Dilakukan pengayaan dengan ayakan 90 mesh

2.2 Ekstraksi Sampel

- Ditimbang 6 gram

- Dilarutkan dengan 30 ml pelarut etil asetat dalam erlenmeyer - Diultrasonikkan pada frekuensi 42 KHz dengan suhu kamar

selama 20 menit - Disaring

2.3 Preparasi Larutan Standar Berberin

- Dipipet 0,1 mL

- Dimasukkan dalam labu takar 10 mL - Ditandabataskan dengan pelarut metanol - Dihomogenkan

Tanaman Anting-anting

Serbuk Anting-anting

Ektrak Etil Asetat Ampas

Standar Berberin 10.000 ppm

54 2.4 Pembuatan Fase Gerak KCKT

- Diultrasonikkan sebanyak 500 mL selama 20 menit

- Diambil sebanyak 0,5 mL - Dimasukkan labu takar 500 mL

- Ditandabataskan menggunakan akuabides - Dihomogenkan

Hasil

Metanol KCKT Grade

0,1% Buffer Asam Format Asam Format

Asetonitril KCKT Grade

2.5 Optimasi Pemisahan Menggunakan KCKT

- Diinjeksikan sebanyak 20 L ke dalam injector alat KCKT - Disiapkan fase gerak metanol : as. format (0,1%) dan

asetonitril : as. format (0,1%) dengan laju alir 1,0 mL/min - Divariasi sistem eluen

NO WAKTU (MENIT) SISTEM ELUSI 1. 0 – 6 7 – 11 12 – 14 15 – 20

100% As. format : 0% Metanol 50% As. format : 50% Metanol 12% As. format : 88% Metanol 100% As. format : 0% Metanol 2. 0 – 10

10 – 20 20 – 25 25 – 26 26 – 30

80% As. format : 20% Metanol 50% As. format : 50% Metanol 50% As. format : 50% Metanol 80% As. format : 20% Metanol 80% As. format : 20% Metanol

3. 0 – 5

5 – 30 30 – 55 55 – 60

90% As. format : 10% Metanol 40% As. format : 60% Metanol 10% As. format : 90% Metanol 90% As. format : 10% Metanol

4. 0 – 6

7 – 11 12 – 14

5 – 18

100% As. format: 0% ACN 50% As. format : 50% ACN 12% As. format : 88% ACN 100% As. format : 0% ACN 5. 0 – 10

10 – 20 20 – 25 25 – 26 26 – 30

80% As. format : 20% ACN 50% As. format : 50% ACN 50% As. format : 50% ACN 80% As. format : 20% ACN 80% As. format : 20% ACN

6. 0 – 5

5 – 30 30 – 55 55 – 60

90% As. Format : 10% ACN 40% As. Format : 60% ACN 10% As. Format : 90% ACN 90% As. Format : 10% ACN

- Dicatat waktu retensi pada masing-masing fase gerak Hasil

2.6 Identifikasi Senyawa Berberin dalam Tanaman Anting-Anting

- Diinjeksikan kedalam alat KCKT sebanyak 20 L - Kondisi kromatografi sesuai hasil optimasi

- Diamati puncak yang muncul

- Ditambah larutan standar berberin

- Diinjeksikan kedalam alat KCKT sebanyak 20 L - Kondisi kromatografi sesuai hasil optimasi

- Diamati puncak yang muncul Hasil

Ekstrak Etil Asetat Tanaman Anting-Anting

Hasil

57 Lampiran 3. Pembuatan Larutan

3.1 Pembuatan Larutan Standar Berberin Diketahui : M1 = 10.000 ppm M2 = 100 ppm V2 = 10 mL Ditanya : V1 ? M1 x V1 = M2 x V2 10.000 ppm x V1 = 100 ppm x 10 mL V1 = 1000 mL 10.000 V1 = 0,1 mL

3.2 Pembuatan Larutan Buffer Asam Format (0,1%) (v/v) Diketahui : M1 = 100% M2 = 0,1 % V2 = 500 mL Ditanya : V1 ? M1 x V1 = M2 x V2 100% x V1 = 0,1% x 500 mL V1 = 0,5 mL 100% V1 = 0,5 mL

Lampiran 4. Perhitungan Nilai Signal to Noise (S/N)

4.1 Kondisi Fase Gerak Metanol : Asam Format (0,1%) pada Standar Sistem Elusi 1 S/N = 0,48 Sistem Elusi 2 S/N = 4,21 Sistem Elusi 3 S/N = 0,10

4.2 Kondisi Fase Gerak Metanol : Asam Format (0,1%) pada Sampel Sistem Elusi 1 S/N = 0,307 Sistem Elusi 2 S/N = 3,166 Sistem Elusi 3 S/N = 1,550

4.3 Kondisi Fase Gerak Asetonitril : Asam Format (0,1%) pada Standar Sistem Elusi 1 S/N = 1,49 Sistem Elusi 2 S/N = 0,24 Sistem Elusi 3 S/N = 0,24

4.4 Kondisi Fase Gerak Asetonitril : Asam Format (0,1%) pada Sampel Sistem Elusi 1 S/N = 0,037 Sistem Elusi 2 S/N = 0,367 Sistem Elusi 3 S/N = 1,111

Lampiran 5. Perhitungan Nilai Resolusi Pemisahan Senyawa Berberin 5.1 Sistem Elusi 1 Fase Gerak Metanol : Asam Format (0,1%)

Standar

R = 0,889

Sampel

R = 2,55

5.2 Sistem Elusi 2 Fase Gerak Metanol : Asam Format (0,1%) Standar

R = 2,527

Sampel

R = 2,867

5.3 Sistem Elusi 3 Fase Gerak Metanol : Asam Format (0,1%) Standar

R = 1,016

Sampel

5.4 Sistem Elusi 1 Fase Gerak Asetonitril : Asam Format (0,1%) Standar

R = 2,47

Sampel

R = 1,73

5.5 Sistem Elusi 2 Fase Gerak Asetonitril : Asam Format (0,1%) Standar

R = 3,04

Sampel

R = 2,15

5.6 Sistem Elusi 3 Fase Gerak Asetonitril : Asam Format (0,1%) Standar

R = 0,133

Sampel

R = 2,17

5.7 Sistem Elusi Adisi

Lampiran 6. Perhitungan Kadar Senyawa Berberin

Luas area puncak sampel = 1327 Luas area puncak adisi = 5279

Luas area puncak standar = Luas area adisi – Luas area sampel = 5279 – 1327 = 3952

Konsentrasi standar = 100 ppm Luas area puncak standar Konsentrasi standar Luas area puncak sampel Konsentrasi sampel

3952 100 ppm 1327 Konsentrasi sampel

Konsentrasi sampel = 1327 x 100 ppm 3952 = 33,578 ppm

63 Lampiran 7. Dokumentasi Penelitian

7.1 Preparasi Sampel Tanaman Anting-Anting

Gambar 1. Anting-anting Gambar 2. Anting-anting setelah dikeringkan Gambar 3. Serbuk Anting-anting 7.2 Ekstraksi Ultrasonik Gambar 1. Proses ekstraksi ultrasonik

Gambar 2. Ekstrak etil asetat

Gambar 3. Penyaringan ekstrak

7.3 Optimasi menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

Gambar 1. Penyaringan sampel dengan membran

filter

Gambar 2. Preparasi fase gerak

Gambar 3. Proses elusi menggunakan KCKT

74 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 min -250 0 250 500 750 1000 1250 1500 1750 2000 2250 2500 2750 uV

Lampiran 8. Jumlah Noise dan Luas Area Puncak Berberin 8.1 Standar

Metanol : As. Format (0,1%) Asetonitril : As. Format (0,1%) Metode 1 Metode 2 Metode 3 Metode 1 Metode 2 Metode 3

Noise 9251 1714 48012 2008 22191 29945

Luas Area

4508 7221 7202 3001 5413 7201

8.2 Sampel

Metanol : As. Format (0,1%) Asetonitril : As. Format (0,1%) Metode 1 Metode 2 Metode 3 Metode 1 Metode 2 Metode 3

Noise 93003 4201 7203 4514 3603 7203

Luas Area

9792 1327 4647 122991 9810 6486

Dalam dokumen Analisis senyawa berberin pada ekstrak ultrasonik tanaman Anting-anting (Acalypha indica Linn) menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) sistem gradien (Halaman 62-92)