Ardiansyah, Nuraida L, Andarwulan N. 2003. Aktivitas antimikroba daun beluntas (Pluchea indica Less) dan stabilitas aktivitasnya pada berbagai konsentrasi garam dan tingkat pH. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan 14(2) : 90-97.
Baéza E. 2006. Effects of Genotype, Age and Nutrition on Intramuscular Lipids and Meat Quality. In : Symposium COA/INRA Scientific Cooperation in Agriculture, Tainan, 7-10 November 2006. Taiwan : ROC.
Banu C et al. 1985. Folosirea Aditivilor in Industria Alimentara, editor. France : Tehnica. Bucuresti.
Carvajal AK, Rusrad T, Mozuraityte R, Storro I. 2009. Kinetic studies of lipid oxidation induced by hemoglobin measured by consumption of dissolved oxygen in a liposome model system. Journal of Agricultural and Food Chemistry 57 : 7826–7833.
Choe JH et al. 2011. Oxidative and color stability of cooked ground pork containing lotus leaf (Nelumbo nucifera) and barley leaf (Hordeum vulgare) powder during refrigerated storage. Meat Science 87 : 12–18.
Cowan MM. 1999. Plant product as antimicrobial agents. Journal of Microbiology Reviews 12(4) : 564-582.
Dalimarta S. 2003. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia, Jakarta : Trubus Agriwidya. Dehkharghanian M, Adenier H, Vijayalakshmi MA. 2010. Analytical methods study of flavonoids in aqueous spinach extract using positive electrospray ionisation tandem quadrupole mass spectrometry. Food Chemistry 121 : 863–870. [FAO] Food and Agriculture Organization of the United Nations. 2006. FAO Statistical Yearbook 2005/2006 Vol. ½. http://www.fao.org/statistics/yearbook.[8 Februari 2007].
Farrell D. 2000. Meat Type Ducks Self-Selection of Diets. UQ-Australia : Rural Industries Research and Development Corporation.
Ganhao R, Morcuende D, Estevaz M. 2010. Protein oxidation in emulsified cooked burger patties with added fruit extracts : Influence on colour and texture deterioration during chill storage. Meat Science 85 : 402-409.
Gatellier P et al. 2007. Use of a fluorescence front face technique for measurement of lipid oxidation during refrigerated storage of chicken meat. Meat Science 76 : 543–547.
Houghton PJ, Raman A. 1998. Laboratory Handbook for the Fractionation of Natural Extracts. New York : Chapman & Hall.
Huang B et al. 2010. Antioxidant activity of bovine and porcine meat treated with extracts from edible lotus (Nelumbo nucifera) rhizome knot and leaf. Meat Science 87(1) : 46–53.
Hustiany R. 2001. Identifikasi dan karakterisasi komponen off odor pada daging itik [tesis]. Bogor : Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor.
Juntachote T, Berghofer E, Siebenhandl S, Bauer F. 2007. Antioxidative effects of added dried holy basil and its ethanolic extracts on susceptibility grounds pork to lipid oxidation. Food Chemistry 100 : 129-135.
Kim GD et al. 2009. Effects of muscle fibre type on meat characteristics of chicken and duck breast muscle. http://www.perbandingan_ayam_dan_itik.pdf. [14 Mei 2009].
Kubola J, Siriamornpun S. 2008. Phenolic contents and antioxidant activities of bitter gourd (Momordica charantia L.) leaf, steam, and fruit fraction extracts in vitro. Food Chemistry 110 : 881-890.
Kochhar SP. 1993. Oxidative pathway to the taints and off flavour compounds in desiccated coconut. Journal of Science Food Agriculture 36 : 415-420.
Lawrie RA. 1998. Meat Science. Sixth Edition. England : Woodhead Publishing Ltd.
Liu J et al. 2011. The antioxidant and free-radical scavenging activities of extract and fractions from corn silk (Zea mays L.) and related flavone glycosides. Food Chemistry 126 : 261–269.
Moein S et al. 2007. Antioxidant properties and prevention of cell cytotoxicity of
Phlomis Persica Boiss. DARU 15(2) : 83.
Navarro JM, Flores P, Garrido C, Martinez V. 2006. Changes in the contents of antioxidant compounds in pepper fruits at different ripening stages, as affected by salinity. Food Chemistry 96 : 66–73.
Oteku IT, Igene JO, Yessuf IM. 2006. An assessment of the factors influencing the consumption of duck meat in Southern Nigeria. Pakistan Journal of Nutrition
5(5) : 474-477.
Pignoli G, Bou R, Rodriguez-Estrada MT, Decker EA. 2009. Suitability of saturated aldehydes as lipid oxidation markers in washed turkey meat. Meat Science 83 : 412-416.
Plutowska B, Wardencki W. 2007. Analytical, nutritional and clinical methods aromagrams–aromatic profiles in the appreciation of food quality. Food Chemistry 101 : 845–872.
Qian H, Nihorimbere V. 2004. Antioxidant power of phytochemicals from
Rukmiasih. 2011. Penurunan bau amis (off-odor) daging itik lokal dengan pemberian daun beluntas (Pluchea indica Less) dalam pakan dan dampaknya terhadap performa [disertasi] Bogor : Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor.
Skerget M et al. 2005. Phenols, proanthocyanidins, flavones and flavonols in some plant materials and their antioxidant activities. Food Chemistry 89 : 191-198. Sujana E, Wahyuni S, Burhanuddin H. 2009. Efek pemberian ransum yang mengandung tepung daun singkong, daun ubi jalar, dan eceng gondok sebagai sumber pigmen karotenoid terhadap kualitas kuning telur itik Tegal. http://www.efek_pemberian_ransum.pdf. [14 Mei 2009].
Valentão P et al. 2010. Codium tomentosum and Plocamium cartilagineum: Chemistry and antioxidant potential. Food Chemistry 119 : 1359–1368.
Varlet V, Prost C, Serot T. 2007. Analytical, nutritional and clinical methods volatile aldehydes in smoked fish : Analysis methods, occurence and mechanisms of formation. Food Chemistry 105 : 1536–1556.
Yu Lin H, Kuo YH, Lin YL, Chiang W. 2009. Antioxidative effect and active component from leaves of lotus (Nelumbo nucifera). Journal of Agricultural and Food Chemistry 57 : 6623-6629.
Lampiran 1. Prosedur analisis kadar air tepung daun beluntas
Tepung daun beluntas kering suhu kamar ditentukan kadar airnya dengan metode gravimetri (AOAC 1990). Sampel tepung daun sebanyak 2 g dimasukkan dalam botol kosong yang sudah diketahui beratnya. Sampel dikeringkan dalam oven vakum suhu 70 oC selama 24 jam. Kemudian didinginkan dalam desikator dan ditimbang. Selisih berat sampel setelah pemanasan merupakan jumlah kadar air yang terkandung dalam sampel.
Lampiran 2. Hasil analisa varians (Anova) kadar air ketiga kelompok daun beluntas Descriptives Sampel N Mean Std. Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound
Daun 1-3 2 14.67 0.01 0.01 14.54 14.80 14.66 14.68 Daun 4-6 2 14.02 0.15 0.11 12.68 15.35 13.91 14.12 Daun >6 2 15.38 0.01 0.01 15.31 15.44 15.37 15.38 Total 6 14.69 0.61 0.25 14.04 15.33 13.91 15.38
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 1.85 2 0.93 124.47 0.00
Within Groups 0.02 3 0.01
Total 1.87 5
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Duncana Daun 4-6 2 14.02
Daun 1-3 2 14.67
Daun >6 2 15.38
Sig. 1.00 1.00 1.00
Lampiran 3. Prosedur analisis rendemen
Ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi-fraksinya yang diperoleh ditentukan rendamennya secara gravimetri berdasarkan metode Ljubuncic et al. (2005), dengan cara membandingkan berat ekstrak metanolik daun beluntas atau fraksi-fraksi terhadap berat sampel yang digunakan, sehingga diperoleh persen ekstrak atau fraksi (b/b).
Lampiran 4. Hasil analisa varians (Anova) rendemen ketiga kelompok daun beluntas
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound
ruas 1-3 2 22.37 0.78 0.55 15.38 29.36 21.82 22.92 ruas 4-6 2 19.08 0.00 0.01 19.01 19.14 19.07 19.08 ruas >6 2 16.44 0.46 0.33 12.31 20.57 16.11 16.76
Total 6 19.29 2.69 1.10 16.47 22.12 16.11 22.92
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 35.37 2 17.68 64.99 0.00
Within Groups 0.826 3 0.27
Total 36.18 5
Duncana
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Ruas >6 2 16.44
Ruas 4-6 2 19.08
Ruas 1-3 2 22.37
Sig. 1.00 1.00 1.00
Lampiran 5. Prosedur analisis total fenol
Total fenol dari ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi-fraksinya ditentukan dengan metode spektrometri (Sahreen et al. 2010). Sampel EMB dan fraksi-fraksinya ( 1000 mg/L) sebanyak 1 mL ditambahkan 4 mL larutan natrium karbonat (75 g/L) kemudian dikocok. Pereaksi Folin-Ciocalteu Fenol sebanyak 0.2 mL ditambahkan dan dikocok lagi. Setelah homogen ditambahkan akuades hingga volume 10 mL dan dikocok kembali. Campuran dibiarkan pada suhu kamar selama 1 jam. Lalu campuran disaring dengan kertas whatmann no 42 dan absorbansi supernatan diukur pada 760 nm. Total fenol ditentukan dengan menggunakan larutan asam gallat. Hasil yang diperoleh dinyatakan dengan ekuivalen asam gallat (GAE).
Lampiran 6. Hasil analisa varians (Anova) total fenol (TP) ketiga kelompok daun beluntas
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum
Sampel Lower Bound Upper Bound
Daun 1-3 2 415.11 4.06 2.87 378.64 451.58 412.24 417.98 Daun 4-6 2 146.33 3.42 2.42 115.57 177.09 143.90 148.75 Daun >6 2 38.27 1.02 0.72 29.10 47.43 37.54 38.99 Total 6 199.90 173.58 70.86 17.74 382.06 37.54 417.98
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 150624.34 2 75312.17 7727.58 0.00
Within Groups 29.24 3 9.75
Total 150653.58 5
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Duncana Daun >6 2 38.27
Daun 4-6 2 146.33
Daun 1-3 2 415.11
Sig. 1.00 1.00 1.00
Lampiran 7. Prosedur analisis total flavonoid
Total flavonoid ditentukan dengan metode kolorimetri melalui pengukuran warna aluminium klorida (Sahreen et al. 2010). Ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi-fraksinya ( 1000 mg/L) sebanyak 1 mL dimasukkan dalam labu takar 10 mL yang berisi 4 mL akuades. Selanjutnya campuran ditambahkan 0.3 mL larutan NaNO2 5% (b/v). Sesudah 5 menit ditambahkan 0.3 mL larutan AlCl3 10% (b/v), lalu sesudah 6 menit ditambahkan 2 mL larutan 1 mol/L NaOH dan diencerkan hingga volume 10 mL dengan akuades. Larutan dicampur dan absorbansi diukur pada 510 nm. Total flavonoid ditentukan berdasarkan kurva standar kuersetin, sehingga hasilnya dinyatakan dengan ekuivalen katekin (CE).
Lampiran 8. Hasil analisa varians (Anova) total flavonoid ketiga kelompok daun beluntas
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum
Sampel Lower Bound Upper Bound
Daun 1-3 2 287.39 0.04 0.03 287.06 287.72 287.36 287.41 Daun 4-6 2 118.65 1.52 1.08 104.97 132.33 117.57 119.72 Daun >6 2 32.22 1.70 1.20 16.92 47.52 31.02 33.43 Total 6 146.09 116.08 47.39 24.27 267.90 31.02 287.41
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 67367.94 2 33683.97 19358.83 0.00
Within Groups 5.22 3 1.74
Total 67373.16 5
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Duncana Daun >6 2 32.22
Daun 4-6 2 118.65
Daun 1-3 2 287.39
Sig. 1.00 1.00 1.00
Lampiran 9. Prosedur analisis kemampuan menangkap radikal bebas DPPH
Analisis menggunakan spektrofotometer UV-Vis
Aktivitas antioksidan ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi-fraksinya diukur berdasarkan modifikasi metode Sahreen et al. (2010). Sampel EMB dan fraksi-fraksinya sebanyak 1 mL pada berbagai variasi konsentrasi dalam pelarut metanol ditambahkan 3 mL larutan radikal DPPH (60 μM) dan metanol hingga volume 10 mL. Ketika radikal DPPH bereaksi dengan senyawa antioksidan maka kemampuan senyawa ini mendonorkan hidrogen berkurang. penurunan kemampuan absorbansi diukur pada 517 nm setelah 30 menit. Kemampuan menghambat radikal bebas DPPH dinyatakan dengan % penghambatan = [(A0-At) / A0] x 100%, dimana A0 adalah absorbansi kontrol pada saat t = 0 detik dan At adalah absorbansi antioksidan pada saat t. Nilai IC50
ditentukan dari grafik hubungan antara aktivitas menangkap radikal bebas versus konsentrasi EMB atau fraksi-fraksinya. Nilai tersebut menyatakan kemampuan total antioksidan menurunkan radikal bebas stabil sebesar 50%.
Analisis menggunakan spektrofotometer stop flow UV-Vis
Aktivitas antioksidan dari ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi-fraksinya diukur berdasarkan kemampuan mendonorkan atom hidrogen atau menangkap radikal bebas yang stabil (DPPH) (Brand-Williams et al. 1995). Sampel sebanyak 150 µL diberbagai konsentrasi 0.05–0.20 mg/mL ditempatkan dalam kuvet dan 75 µL (1 x 10-4) mmol/L larutan DPPH˙ditambahkan. Campuran diukur absorbansinya dengan spektrofotometer stop flow UV-Vis (MOS-200/M Spectrometer. Belgium). Penurunan absorbansi diukur pada 517 nm selama 0.5 detik (kondisi steady state tercapai). Metanol digunakan untuk mengkalibrasi spektrofotometer. Absorbansi larutan DPPH˙ tanpa sampel (kontrol) diukur setiap analisa. Konsentrasi DPPH dalam medium reaksi ditentukan dengan kurva kalibrasi sebagai berikut : A517nm = 10.111 [DPPH]T – 0.011, dimana : [DPPH˙]T dinyatakan dalam mmol/liter; dengan r = 0.9995. Kemampuan penghambatan DPPH (%) ditentukan berdasarkan Yen dan Duh (1994) dengan persamaan : %
Penghambatan = [(A0-At) / A0] x 100%, dimana A0 adalah absorbansi kontrol pada saat t = 0 detik dan At adalah absorbansi antioksidan pada saat t. Nilai EC50 ditentukan dari grafik hubungan antara aktivitas menangkap radikal bebas versus konsentrasi ekstrak metanolik daun beluntas atau fraksi-fraksinya per gram DPPH, nilai tersebut menyatakan kemampuan efektif antioksidan menurunkan radikal bebas stabil dengan konsentrasi 50%. Nilai TEC50 ditentukan berdasarkan waktu
steady state yang dicapai oleh berdasarkan grafik hubungan antara absorbansi sampel versus waktu pengukuran.
Lampiran 10. Hasil analisa varians (Anova) IC50 kemampuan menangkap radikal bebas DPPH dari ketiga kelompok daun beluntas
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum
Sampel Lower Bound Upper Bound
ruas 1-3 2 2.62 0.085 0.06 1.86 3.38 2.56 2.68
ruas 4-6 2 6.55 0.00 0.00 6.55 6.55 6.55 6.55
ruas >6 2 41.76 3.01 2.13 14.71 68.80 39.63 43.89
Total 6 16.98 19.32 7.89 -3.30 37.25 2.56 43.89
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 1857.84 2 928.92 307.28 0.00
Within Groups 9.07 3 3.02
Total 1866.91 5
Duncana
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2
ruas 1-3 2 2.62
ruas 4-6 2 6.55
ruas >6 2 41.76
Sig. 0.11 1.00
Lampiran 11. Hasil analisa varians (Anova) total fenol (TP) pada ekstrak metanolik daun beluntas dan fraksinya
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Sampel Lower Bound Upper Bound Ekstrak metanolik daun beluntas 2 314.01 16.14 11.41 169.03 458.98 302.60 325.42
Fraksi etil asetat 2 126.97 1.61 1.14 112.51 141.44 125.83 128.11 Fraksi air 2 48.06 3.87 2.74 13.28 82.83 45.32 50.80 Fraksi n-butanol 2 55.63 0.41 0.29 51.91 59.34 55.33 55.92 Total 8 136.17 114.77 40.58 40.22 232.11 45.32 325.42
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 91922.83 3 30640.94 440.70 0.00
Within Groups 278.11 4 69.53
Total 92200.94 7
Duncana
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Fraksi air 2 48.06
Fraksi n-butanol 2 55.63
Fraksi etil asetat 2 126.97
Ekstrak metanolik daun beluntas
2 314.01
Sig. 0.42 1.00 1.00
Lampiran 12. Hasil analisa varians (Anova) total flavonoid pada ekstrak metanolik daun beluntas dan fraksinya
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Sampel Lower Bound Upper Bound Ekstrak metanolik daun beluntas 2 118.12 0.20 0.14 116.31 119.92 117.97 118.26
Fraksi etil asetat 2 58.69 1.10 0.78 48.84 68.53 57.91 59.46 Fraksi air 2 41.54 5.45 3.85 -7.43 90.51 37.69 45.39 Fraksi n-butanol 2 38.78 0.35 0.25 35.60 41.96 38.53 39.03 Total 8 64.28 34.28 12.12 35.62 92.94 37.69 118.26
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 8193.60 3 2731.20 351.54 0.00
Within Groups 31.08 4 7.77
Total 8224.68 7
Duncana
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Fraksi n-butanol 2 38.78
Fraksi air 2 41.54
Fraksi etil asetat 2 58.69
Ekstrak metanolik daun beluntas
2 118.12
Sig. 0.38 1.00 1.00
Lampiran 13. Hasil analisa varians (Anova) IC50 dari kemampuan menangkap radikal bebas DPPH oleh ekstrak metanolik daun beluntas. dan fraksinya serta antioksidan pembanding
Descriptives N Mean Std. Deviation Std. Error 95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Sampel Lower Bound Upper Bound Ekstrak metanolik daun beluntas 2 4.34 0.02 0.01 4.20 4.47 4.33 4.35
Fraksi etil asetat 2 3.33 0.02 0.01 3.19 3.48 3.32 3.34 Fraksi air 2 7.95 0.02 0.01 7.81 8.09 7.94 7.96 Fraksi n-butanol 2 3.65 0.03 0.02 3.36 3.93 3.63 3.67 Ekstrak metanolik teh hijau 2 1.91 0.06 0.04 1.39 2.44 1.87 1.96 BHT 2 5.69 0.29 0.21 3.08 8.29 5.48 5.89 Ekstrak metanolik rosemari 2 3.85 0.09 0.06 3.05 4.65 3.78 3.91 Total 14 4.39 1.86 0.50 3.31 5.46 1.87 7.96 ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 44.88 6 7.48 538.89 0.00
Within Groups 0.10 7 0.01
Total 44.98 13
Duncana
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4 5 6
Ekstrak metanolik teh hijau
2 1.91
Fraksi etil asetat 2 3.33
Fraksi n-butanol 2 3.65
Ekstrak metanolik rosemari
2 3.85
Ekstrak metanolik daun beluntas
2 4.34
BHT 2 5.69
Fraksi air 2 7.95
Sig. 1.00 1.00 0.13 1.00 1.00 1.00
Lampiran 14. Prosedur analisis kemampuan menangkap radikal hidroksil
Pengujian kemampuan menangkap radikal hidroksil berdasarkan metode Sahreen et al. (2010). Ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi etil asetat (FEA) sebanyak 0.5 mL pada konsentrasi yang berbeda ditempatkan pada tabung reaksi dan dievaporasi hingga kering. Larutan Fe-EDTA sebanyak 1 mL yang tersusun atas : 0.13% (b/v) ferro amonium sulfat dan 0.26% (b/v) EDTA), 0.5 mL larutan 0.018% (b/v) EDTA, 1 mL larutan DMSO 0.85% (v/v) dalam 0.1 mol/L buffer fosfat (pH 7.4) dan 0.5 mL larutan 0.22% (b/v) asam askorbat yang ditambahkan setiap tabung reaksi. Tabung ditutup rapat dan dipanaskan dalam penangas air pada suhu 80–90 °C selama 15 menit. Reaksi diakhiri dengan penambahan 1 mL larutan TCA dingin (17.5% b/v). Selanjutnya 3 mL reagen Nash (75 g amonium asetat, 3 mL asam asetat glasial dan 2 mL asetil aseton dicampur dan akuades ditambahkan hingga total volume 1 L) ditambahkan setiap tabung reaksi. Lalu tabung reaksi dibiarkan dalam suhu kamar selama 15 menit selama perubahan warna. Intensitas warna kuning diukur pada 412 nm. Kemampuan menangkap radikal hidroksil (%) dihitung dengan persamaan sebagai berikut : % penghambatan = [(AC-AS) / AC] x 100%, dimana : AC adalah absorbansi kontrol dan AS adalah absorbansi sampel.
Lampiran 15. Hasil analisa varians (Anova) IC50 dari kemampuan menangkap radikal hidroksil oleh ekstrak metanolik daun beluntas dan fraksinya serta antioksidan pembanding
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Sampel Lower Bound Upper Bound Ekstrak metanolik daun beluntas 2 1524.16 60.72 42.93 978.66 2069.66 1481.23 1567.09
Fraksi etil asetat 2 2402.67 33.43 23.64 2102.28 2703.07 2379.03 2426.31 BHT 2 1399.06 9.30 6.58 1315.51 1482.62 1392.49 1405.64 Alfa tokoferol 2 896.16 49.74 35.17 449.30 1343.03 860.99 931.33 Total 8 1555.52 581.02 205.42 1069.77 2041.26 860.99 2426.31
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 2355758.72 3 785252.91 426.52 0.00
Within Groups 7364.35 4 1841.09
Total 2363123.07 7
Duncana
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4
Alfa tokoferol 2 896.16
BHT 2 1399.06
Ekstrak metanolik daun beluntas
2 1524.16
Fraksi etil asetat 2 2402.67
Sig. 1.00 1.00 1.00 1.00
Lampiran 16. Prosedur analisis kemampuan menangkap radikal superoksida
Pengukuran kemampuan menangkap radikal superoksida didasarkan pada metode Sahreen et al. (2010). Larutan ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi etil asetat (FEA) sebanyak 1 mL diberbagai konsentrasi ditambahkan dengan larutan campuran yang berisi 1 mL larutan nitroblue tetrazolium (NBT) (156 mmol/L NBT dalam buffer fosfat, pH 7.4), 1 mL larutan NADH (468 mmol/L larutan NADH dalam buffer fosfat, pH 7.4). Kemudian larutan diukur absorbansinya pada 560 nm, hasil pengukurannya dinyatakan sebagai absorbansi blanko. Selanjutnya reaksi campuran tersebut ditambahkan 100 mL larutan fenazin metoksulfat (PMS) (60 mmol/L PMS dalam larutan buffer fosfat (pH 7.4) dan diinkubasi pada suhu 25 °C selama 5 menit dan absorbansi diukur pada 560 nm. Absorbansi terukur dinyatakan sebagai absorbansi sampel. Penurunan absorbansi campuran mengindikasi peningkatan aktivitas penangkap radikal superoksida. Kemampuan menangkap radikal superoksida (%) dihitung berdasarkan rumus berikut : % penghambatan = [(AC–AS) / AC] x 100%, dimana : AC adalah absorbansi kontrol dan AS adalah absorbansi sampel
Lampiran 17. Hasil analisa varians (Anova) IC50 dari kemampuan menangkap radikal superoksida oleh ekstrak metanolik daun beluntas dan fraksinya serta antioksidan pembanding
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Sampel Lower Bound Upper Bound Ekstrak metanolik aun beluntas 2 2.45 0.03 0.02 2.20 2.70 2.43 2.47
Fraksi etil asetat 2 6.19 0.19 0.14 4.45 7.93 6.05 6.32
BHT 2 9.07 0.08 0.05 8.38 9.75 9.01 9.12
Alfa tokoferol 2 3.34 0.09 0.07 2.50 4.18 3.27 3.40
Total 8 5.26 2.78 0.98 2.94 7.58 2.43 9.12
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 53.88 3 17.96 1360.25 0.00
Within Groups 0.05 4 0.01
Total 53.94 7
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4
Duncana Ekstrak metanolik daun beluntas
2 2.45
Alfa tokoferol 2 3.34
Fraksi etil asetat 2 6.19
BHT 2 9.07
Sig. 1.00 1.00 1.00 1.00
Lampiran 18. Prosedur analisis kemampuan menangkap hidrogen peroksida
Pengujian kemampuan menangkap hidrogen peroksida berdasarkan metode Sahreen et al. (2008). Larutan hidrogen peroksida (10 mmol/L) sebanyak 1 mL ditambahkan 0.1 mL berbagai konsentrasi ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi etil asetat (FEA) serta akuades hingga volume 4 mL. Kocok larutan dan biarkan 10 menit. Kemudian absorbansi larutan diukur pada 230 nm. Kemampuan menangkap hidrogen peroksida (%) ditentukan berdasarkan persamaan sebagai berikut : % penghambatan = [(AC–AS) / AC] x 100%, dimana : AC adalah absorbansi kontrol dan AS adalah absorbansi sampel.
Lampiran 19. Hasil analisa varians (Anova) IC50 dari kemampuan menangkap hidrogen peroksida oleh ekstrak metanolik daun beluntas. dan fraksinya serta antioksidan pembanding
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Sampel Lower Bound Upper Bound Ekstrak metanolik daun beluntas 2 1575.25 0.00 0.00 1575.25 1575.25 1575.25 1575.25
Fraksi etil asetat 2 3404.08 538.36 380.68 -1432.92 8241.08 3023.40 3784.76 BHT 2 608.27 0.75 0.53 601.56 614.97 607.74 608.79 Alfa tokoferol 2 666.25 4.77 3.37 623.39 709.10 662.87 669.62 Total 8 1563.46 1224.78 433.03 539.51 2587.40 607.74 3784.76
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 1.02 E7 3 3403604.90 46.97 0.00
Within Groups 289857.82 4 72464.45
Total 1.05 E7 7
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 Duncana BHT 2 608.27 Alfa tokoferol 2 666.25 Ekstrak metanolik daun beluntas 2 1575.25
Fraksi etil asetat 2 3404.08
Sig. 0.84 1.00 1.00
Lampiran 20. Prosedur analisis kemampuan mengkelat ion besi (II)
Pengujian kemampuan kelating ion besi (II) ditentukan menurut metode Dinis et al. (1994). Ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi etil asetat (FEA) sebanyak 0.5 mL berbagai konsentrasi ditambahkan akuades 2 mL dan 0.05 mL Fe(NH4)2(SO4)2 2 mM kemudian dikocok. Selanjutnya larutan ditambahkan 0.2 mL larutan ferrozin 5 mM dan dikocok. Larutan dibiarkan selama 10 menit dan diukur absorbansinya pada 562 nm. Kemampuan mengkelat ion besi (II) (%) dihitung dengan persamaan : % pengkelat = [(AC-AS) / AC] x 100%, dimana : AC adalah absorbansi kontrol dan AS adalah absorbansi sampel.
Lampiran 21. Hasil analisa varians (Anova) IC50 dari kemampuan mengkelat ion besi (II) oleh ekstrak metanolik daun beluntas. dan fraksinya serta antioksidan pembanding Descriptives N Mean Std. Deviation Std. Error 95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Sampel Lower Bound Upper Bound Ekstrak metanolik daun beluntas 2 2072.63 207.44 146.68 208.89 3936.36 1925.95 2219.30
Fraksi etil asetat 2 1436.72 2.09 1.48 1417.94 1455.50 1435.24 1438.20 EDTA 2 -278.06 2.80 1.98 -303.21 -252.91 -280.04 -276.08 Total 6 1077.10 1091.49 445.60 -68.36 2222.55 -280.04 2219.30
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 5913725.89 2 2956862.94 206.09 0.00
Within Groups 43041.62 3 14347.21
Total 5956767.50 5
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Duncana EDTA 2 -278.06
Fraksi etil asetat 2 1436.72
Ekstrak metanolik daun beluntas
2 2072.63
Sig. 1.00 1.00 1.00
Lampiran 22. Prosedur analisis kemampuan mengkelat ion besi pada hemoglobin
Pengujian kemampuan mengkelat ion besi pada hemoglobin berdasarkan metode Bate-Smith (1977). Darah ayam pedaging segar sebanyak 2 mL diencerkan dengan akuades hingga volume 100 mL. Darah yang telah diencerkan sebanyak 2 mL ditambahkan 0.5 mL ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi etil asetat (FEA) pada berbagai konsentrasi dan akuades 1.5 mL, kemudian dikocok. Larutan yang diperoleh disaring dan diukur absorbansinya pada 578 nm. Kemampuan mengkelat ion besi pada hemoglobin (%) dihitung dengan persamaan : % pengkelat = [(AC-AS) / AC] x 100%, dimana : AC adalah absorbansi kontrol dan AS adalah absorbansi sampel.
Lampiran 23. Hasil analisa varians (Anova) IC50 dari kemampuan mengkelat ion besi pada hemoglobin (Hb) oleh ekstrak metanolik daun beluntas dan fraksinya serta antioksidan pembanding
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Sampel Lower Bound Upper Bound Ekstrak metanolik daun beluntas 2 846.01 7.64 5.40 777.36 914.66 840.61 851.42
Fraksi etil asetat 2 334.26 11.50 8.13 230.97 437.55 326.13 342.39 EDTA 2 110.17 2.02 1.43 92.03 128.32 108.74 111.60 Total 6 430.15 337.41 137.75 76.05 784.24 108.74 851.42
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 569046.37 2 284523.18 4385.81 0.00
Within Groups 194.62 3 64.87
Total 569240.99 5
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Duncana EDTA 2 110.17
Fraksi etil asetat 2 334.26
Ekstrak metanolik daun beluntas
2 846.01
Sig. 1.00 1.00 1.00
Lampiran 24. Prosedur analisis kemampuan menghambat oksidasi asam linoleat--karoten
Pengujian kemampuan menghambat oksidasi asam linoleat- -karoten didasarkan metode Sahreen et al. (2010). Larutan asam linoleat- -karoten dibuat dengan melarutkan 0.2 mg -karoten dalam 1 mL kloroform dan ditambahkan 20 mg asam linoleat dengan 200 mg tween 20. Kloroform dihilangkan dengan rotary evaporator suhu 40 oC dan residu yang diperoleh ditambahkan akuades hingga volume 100 mL. Campuran sebanyak 2.5 mL ditambahkan ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi etil asetat (FEA) pada berbagai konsentrasi. Sampel diinkubasi pada air mendidih selama 120 menit, lalu ukur absorbansinya pada 470 nm. Kemampuan menghambat oksidasi asam linoleat- -karoten (%) dihitung dengan persamaan : % penghambatan = [1-(As0-As120)] / [Ab0-Ab120] x 100%, dimana : As0 adalah absorbansi sampel di 0 menit. As120 adalah absorbansi sampel di 120 menit. Ab0 adalah absorbansi kontrol di 0 menit dan Ab120 adalah absorbansi kontrol di 120 menit.
Lampiran 25. Hasil analisa varians (Anova) IC50 dari kemampuan menghambat oksidasi asam linoleat- -karoten oleh ekstrak metanolik daun beluntas dan fraksinya serta antioksidan pembanding
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Sampel Lower Bound Upper Bound Ekstrak metanolik daun beluntas 2 31.97 4.90 3.46 -12.03 75.98 28.51 35.43
Fraksi etil asetat 2 45.97 1.37 0.97 33.64 58.31 45.00 46.94
BHT 2 2.53 0.00 0.00 2.53 2.53 2.53 2.53
Alfa tokoferol 2 30.60 1.13 0.80 20.44 40.76 29.80 31.40
Total 8 27.77 16.97 6.00 13.59 41.95 2.53 46.94
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 1987.65 3 662.55 97.62 0.00
Within Groups 27.15 4 6.79
Total 2014.80 7
Sampel N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
Duncana BHT 2 2.53
Alfa tokoferol 2 30.60
Ekstrak metanolik daun beluntas
2 31.97
Fraksi etil asetat 2 45.98
Sig. 1.00 0.63 1.00
Lampiran 26. Prosedur analisis kemampuan mereduksi ion besi
Pengujian kemampuan mereduksi ion besi berdasarkan modifikasi metode Oyaizu (1986). Ekstrak metanolik daun beluntas (EMB) dan fraksi etil asetat (FEA) sebanyak 1 mL dicampur dengan 2.5 mL larutan buffer fosfat 200 mM (pH 6.6) dan 2.5 mL larutan kalium ferisianida 0.1%, kemudian campuran diinkubasi pada suhu 50 oC selama 20 menit. Larutan asam kloroasetat 10%
