Artanti N, Djamilah, Lotulung PD, Liswidowati, Minarti, Hanafi M,Kardono LBS, dan Darmawan A. 2003. Evaluasi potensi ekstrak Taxus sumatrana dan benalu sebagai anti kanker. Pemaparan Hasil Litbang. Pusat Penelitian Informatika. LIPI
Ballero M, Loi MC, van Rozendaal EL, van Beek TA, van de Haar C, Poli F, dan Appendino G. 2003. Analysis of pharmaceutically relevant 17 taxoids inwild yew trees from Sardinia. Fitoterapia 74:34-39
Cancer Chemoprevention Research Center. 2000. SOP Uji Sitotoksik metode MTT. No Dukumen: CCRC-02-010-00. Fakultas Farmasi UGM.
Croizer J, Thomas SE, Aime ME, Evan HC, dan Holmes KA. 2006. Molecular characterization of fungal endophytic morphospecies isolated from stem and pods of Theobroma cacao. Plant pathol. 55:783-791
Croteau R, Kutchan TM, dan Lewis NG. 2000. Natural products (secondary metabolites). Dalam B. Buchanan, W Gruissem, dan R. Joneas edisi Biochemistry and Molecular Biology of Plants. American Society of Plant Biologists, Rockville, MD. 1250–1268.
Curtis L, Lieberman A, Tark MS, Rea W, dan Vetter M. 2004. Adverse healt effect of indoor molds. Journal of Nutritional & Environment 14(3):261– 274.
Depkes RI 2008. Profil kesehatan Indonesia 2008. [terhubung berkala].http://www.depkes.go.id/downloads/publikasi/Profil_Kesehatan_In donesia_2008.pdf [28 Agustus 2012]
DeVita VT dan Walker JE. 2008. A history of cancer chemotherapy. Cancer Res. 68(21) : 8643-8653 [terhubung berkala] http://cancerres. aacrjournals.org/content/68/21/8643 [14 Maret 2015]
Goodman J dan Walsh V. 2001. The Story of Taxol: Nature and Politics in the Pursuit of an Anti-Cancer Drug. Cambridge University Press.
Guo BH, Wang YC, Zhou XW, Hu K, Tan F, dan Tang KX. 2006. An endophyte Taxol-producing fungus BT2 isolated from Taxus chinensis var. mairei. African Jaournal of Biotechnology 5: 875-877
Jiang H dan Gordon B. 2012. The immortal live of Henrietta Lack and beyond. [terhubung berkala] http://u.osu.edu/gordon.3/files/2012/06/Hui-Jiang-834-spr.-2012.pdf [20 juni 2014]
Kohler J. dan Goldspiel BR. 1994. Evaluation of new drug Paclitaxel (Taxol). Pharmacotherapy 14: 3-34
Kumala S, Septisetyani EP, dan Meiyanto E. 2009. Fraksi n-butanolik kapang endofit Buah Makasar meningkatkan efek apoptosis doxorubusin pada sel MCF-7. Majalah Farmasi Indonesia. 20:42-47
Margiono S. 2008. Produksi metabolit sekunder (antibiotik) oleh isolat jamur endofit indonesia. Majalah Farmasi Indonesia. 19(2): 86-94.
MassBank. 2015. High quality mass spectral database [terhubung berkala] http://www.massbank.jp/index.html [17 Maret 2015]
McNaught AD dan Wilkinson A. 1997. IUPAC. Compendium of Chemical Terminology, 2nd ed. (the "Gold Book"). Oxford: Blackwell Scientific Publications.
18
Mc Laughlin, dan Rogers L. 1998. The use of biological assays to evaluate botanicals. Drug Information Journal. 32:513-524.
[NCBI] National Centre of Biotechnology Information. 2015. PubChem [terhubung berkala] http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ [18 Maret 2015] [NCI] National Cancer Institute. 2015. Taxol [terhubung
berkala].http://dtp.nci.nih.gov/timeline/flash/success_stories/S2_taxol.htm [14 Maret 2015]
Pelczar MJ dan Chan EC. 2005. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta: UI Press PubChem. 2015. Deposited Record (SID 103271758) [terhubung berkala]
http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?sid=103271758 [18 Maret 2015]
Rahmat HH. 2008. Variasi genetik dan teknik perbanyakan vegetatif cemara sumatra (Taxus sumatrana) [Tesis]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Stierle A, Strobel G, dan Stierle D. 1993. Taxol and taxane production by Taxomyces andreanae, an endophytic fungus of pasific yew. Sci .260:214-216
Strobe G, Daisy, Castillo, dan Harper J. 2004. Natural product from endophytic microorganism. J. Nat. Prod. 67 : 257-268
Sumaryono W dan Wibowo AE. 2010. Aktivitas sitotoksik etanol daun Aglaia elliptica Blume terhadap Galur Sel Kanker Serviks (HeLa). J. Ilmu Kefarmasian Indonesia. 8(1):19-23
Tan RX dan Zou WX. 2001. Endophytes: a Rich Source of Functional Metabolites. Nat.Prod.Rep. 18:448-459.
Verpoorte R dan Alfermann AW. 2000. Metabolic engineering of plant secondary metabolism. Springer. Page.1-3
Vogaser M dan Seger C. 2008. A decade of HPLC-MS/MS in the routine clinical laboratory-goals for further development. Clinical Biochemistry Rev. 41: 649-662
Wani MC, Taylor HL, Wall ME, Coggon P, dan McPhail A. 1971. Plant antitumor agents. VI. The isolation and structure of Taxol, a novel antileukemic and antitumor agent from Taxus brevifolia. J. Am.Chem.Soc. 93:2325-2327.
[WHO] World Health Organization. 2006. Comprehensive Cervical Cancer Control. A guide to essential
practice.
Yayasan Kanker Indonesia.2009.Rangkuman Hasil Seluruh Pusat Patologi di Indonesia. Jakarta
Zhang HW, Song YS, dan Tan RX.2006 . Biology and Chemistry of Endophytes. Nat.Prod.Rep. 23:753-771
Zhao K. 2004. Study on the preparation and regeneration of protoplast from Taxol-producing fungus Nodulisporium sylvivorme. Nature and Science 2:52-59
Lampiran 1 Strategi Penelitian
Isolasi dan Pemurnian Kapang Endofit
Peremajaan Kapang Endofit dari Isolat
Produksi Metabolit Kapang Endofit pada Media Cair
Ekstraksi Metabolit Sekunder
Penapisan Potensi Kapang dengan BSLT
Uji MTT
22
Lampiran 2. Bagan alir Isolasi dan Pemurnian Kapang Endofit
Batang tanaman Taxus sumatrana (2 cm, 1 cm) dicuci dengan air
Batang tanaman disterilkan dengan etanol 70 % (1 menit), natrium hipoklorit 5.3 % (5 menit), etanol 75 % (0.5 menit)
Batang dibelah longitudinal
Batang yang telah dibelah diletakkan diatas media PDA yang mengandung kloramfenikol 0.05 mg/ml
Proses inkubasi selama 3 hari, pada suhu 25 oC.
Koloni kemudian dipindahkan ke PDA dalam cawan Petri dan diinkubasi pada 25 oC.
Masing-masing endofit di tanam pada agar miring (PDA), dan di inkubasi 25 oC.
Setiap 3 bulan sekali, diremajakan kembali, dan sebagian isolat disimpan dalam medium PDA pada suhu -80 oC.
Lampiran 3. Bagan alir proses Fermentasi dan Ekstraksi Metabolit Sekunder Kapang Endofit
Isolat kapang yang telah diremajakan
Inokulasikan pada 200 ml media PDB
Fermentasi selama 21 hari dan selanjutnya ekstraksi
Media kultur dan miselia dipisah dengan sentrifugasi, media kultur diekstrak dengan diklorometana 2 kali, miselia diresuspensi dengan 100 ml etanol kemudian disentrifugasi
untuk diambil supernatan
Supernatan miselia dicampur dengan ekstrak kultur awal, kemudian diuapkan. Residu diukur bobotnya
Ekstrak dalam botol dipindahkan ke vial yang lebih kecil dengan dilarutkan pelarut
24
Lampiran 4. Bagan alir proses Uji BSLT
Penetasan larva udang Artemia salina selama 1-2 hari dibawah penerangan lampu.
Penyiapan seri konsentrasi sampel (5000 ppm, 1000 ppm, 500 ppm, 100 ppm)
Penyiapan plate BSLT, tiap plate berisi 0.2 ml sampel, 1.8 ml air laut dan 10 ekor larva udang. Tiap sampel
dilakukan duplo. Plus 2 sumur kontrol tanpa larutan sampel
Inkubasi dalam suhu kamar selam 24 jam
Penghitungan jumlah larva yang mati tiap sumurnya
Penentuan LC 50 dengan regresi linier menggunakan grafik logaritmik Microsoft Excel
Lampiran 5. Perhitungan LC50 BSLT sampel K sampel (ppm) Log K % mati LC50 Kapang 1 10 1 0 202.7 50 1.69 5 100 2 25 500 2.69 95 Kapang 3 10 1 45 13.03 50 1.69 70 100 2 80 500 2.69 100 Kapang 5 10 1 60 3.08 50 1.69 80 100 2 90 500 2.69 100 Kapang 7 10 1 0 74.88 50 1.69 45 100 2 60 500 2.69 90
Persamaan garis Kapang 1, y = 47.101x2 - 117.32x + 69.991 Kapang 3, y = 32.535x + 13.723 Kapang 5, y = 23.948x + 38.315 Kapang 7, y= 53.096x - 49.212 Contoh perhitungan LC50 Kapang 3 y = 50 y = 32.535x + 13.723 50 = 32.535x + 13.723 36.277 = 32.535x x = 1.1150 x = Log K Log K = 1.1150 K = 101.1150 K = 13.03
K = Konsentrasi ekstrak yang dapat membunuh 50% populasi larva udang LC50 = 13.03 ppm
26
Lampiran 6. Tabel lengkap hasil uji MTT
Ektrak 3 Ulangan
Rata2 %inhibisi
Ppm ODI ODII ODIII
100 0.292 0.246 0.376 0.305 58.2 50 0.344 0.413 0.356 0.371 49 25 0.556 0.469 0.42 0.482 33.8 12.5 0.621 0.549 0.519 0.563 22.7 6.25 0.751 0.672 0.611 0.678 6.87 3.125 0.647 0.733 0.658 0.679 6.68 1.562 0.632 0.785 0.764 0.727 0.14 Ektrak 5 100 0.398 0.349 0.356 0.368 49.5 50 0.581 0.528 0.549 0.553 24.1 25 0.603 0.536 0.622 0.587 19.4 12.5 0.593 0.62 0.56 0.591 18.8 6.25 0.587 0.558 0.618 0.588 19.3 3.125 0.623 0.605 0.691 0.64 12.1 1.562 0.598 0.786 0.8 0.728 0 Ektrak 7 100 0.431 0.417 0.391 0.413 43.3 50 0.598 0.611 0.555 0.588 19.2 25 0.513 0.543 0.559 0.538 26.1 12.5 0.674 0.708 0.64 0.674 7.4 6.25 0.652 0.708 0.633 0.664 8.7 3.125 0.501 0.564 0.515 0.527 27.7 1.562 0.749 0.641 0.67 0.687 5.7 Cell Control 0.729 0.726 0.729 0.728 0
Lampiran 7 . Foto fermentasi dan ekstraksi .
Proses Fermentasi kapang endofit hasil isolasi dari batang tanaman T. sumatrana pada media PDB
Foto Media cair (PDB) setelah 3 pekan dan telah dipidahkan dari biomassanya
Foto. Campuran ekstrak diklorometana 1:1 (media PDB) dan ekstrak metanol 80 % (biomassa kapang endofit Taxus sumatrana). Yang telah diuapkan
28
Lampiran 8. Foto sel HeLa hasil MTT
Kontrol Sel HeLa Sel HeLa yang diberi perlakuan
100 ppm ekstrak kapang label 3
Sel HeLa yang diberi perlakuan 100 ppm ekstrak kapang label 5
Sel HeLa yang diberi perlakuan 100 ppm ekstrak kapang label 7
Lampiran 9. Perkiraan molekul yang terkandung pada ekstrak kapang endofit tanaman T. sumatrana No Kapang Titik Puncak
Perkiraan Senyawa Massa Molekul
Rumus Molekul Keterangan (PubChem)
3 144.1148 1-naphthylamine 143.0735 C10H9N senyawa aromatik, karsinogen,
4-Methyl-5-thiazoleethanol
143.04048 C6H9NOS molekul koenzim transport Valpromide 143.13101 C8H17NO Anticonvulsants, obat
epilepsi
5 230.8483 Asulam 230.0356 C8H10N2O4S senyawa herbisida Diazoxide 229.99168 C8H7ClN2O2S Obat Gastrointestinal,
antihipoglikemik
Naproxen 230.09429 C14H14O3 senyawa anti-inflamasi dan analgesik
257.9504
2'-O-Methylcytidine
257.10117 C10H15N3O5 agen antivirus Hepatitis C 5-Methylcytidine 257.10117 C10H15N3O5 agen inhibitor proliferasi
sel leukimia, antiherpes
9-methoxy-2,2- dimethyl-6-hydro-2H-pyrano
257.10519 C15H15NO3 belum diketahui banyak
Tolmetin 257.10519 C15H15NO3 agen anti-inflamasi,
inhibitor Siklo-Oksigenase 7 234.8545 Diuron 232.01702 C9H10Cl2N2O senyawa herbisida
Lenacil 234.13683 C13H18N2O2 senyawa herbisida, anti bakteri Vibrio chlorea Lidocaine 234.17321 C14H22N2O agen anastesi lokal Methylphenidate 233.14158 C14H19NO2 Stimulan syaraf pada
pengobatan ADHD (Attention Deficit
Hyperactivity Disorder) 207.1998 DL-Thioctic acid 206.04352 C8H14O2S2 asam lipoat, suplemen
sejens vitamin
Dimethylesculetin 206.05791 C11H10O4 agen anti - Arrhythmia (gangguan irama jantung), agen Gastrointestinal, Vasodilator
Xanthurenic acid 205.03751 C10H7NO4 Obat Hiperlipidemia 332.8254 2'-Deoxyinosine
5'-monophosphate
332.05219 C10H13N4O7P nama lain dari Hypoxanthine
deoxyriboside, turunan nukleotida
30