Jangan lepaskan alat pengumpul spesimen dari tabung spesimen setiap saat.
Untuk menghindari hasil positif palsu, penting bahwa semua bahan spesimen harus
bersentuhan dengan DNR. Pencampuran setelah penambahan DNR adalah langkah penting.
Spesimen STM yang didenaturasi menggunakan metode MST Vortexer 2 harus menggunakan metode “Hibridisasi menggunakan pelat mikro dan Microplate Heater I” pada halaman 46.
Metode “Hibridisasi menggunakan tabung mikro dan penangas air” (halaman 48) belum divalidasi dengan spesimen STM yang didenaturasi menggunakan MST Vortexer 2.
1. Lepaskan dan buang sumbat dari tabung.
Penting: Pertimbangkan sumbat yang dilepas dari tabung spesimen STM sebagai berpotensi menular (lihat “Peringatan dan Pencegahan,” halaman 20, untuk informasi tambahan).
2. Pipet volume DNR yang ditentukan (lihat Tabel 9, di bawah) ke dalam tabung menggunakan pipet berulang atau yang dapat disesuaikan.
Pastikan untuk tidak menyentuh sisi tabung atau dapat terjadi kontaminasi silang pada spesimen.
Penting: Kit 1-pelat dan 4-pelat memiliki volume berbeda untuk kalibrator HPV Berisiko Tinggi.
Pastikan untuk menambahkan volume DNR yang benar.
Catatan: Volume DNR yang ditambahkan setara dengan setengah volume cairan di dalam tabung.
Tabel 9. Penambahan DNR
Kalibrator, kendali mutu, atau spesimen STM Volume DNR yang diperlukan
Kalibrator Negatif, 2 ml 1000 µl
Kalibrator HPV Berisiko Tinggi, 1 ml 500 µl
Kalibrator HPV Berisiko Tinggi, 2 ml 1000 µl
Kendali Mutu HPV Berisiko Tinggi atau HPV Berisiko Rendah, 1 ml 500 µl
Spesimen STM, 1 ml 500 µl
3. Campurkan tabung yang menggunakan baik metode MST Vortexer 2 atau manual, metode melakukan vorteks tabung individu.
Metode MST Vortexer 2
a. Tutupi tabung dengan DuraSeal tube sealer film dengan menarik film di atas tabung pada rak spesimen.
b. Tempatkan tutup rak di atas tabung yang ditutup dengan film dan kunci di tempatnya dengan 2 klip samping. Potong film dengan alat pemotong.
c. Pindahkan tuas bergagang merah ke posisi UP (NAIK) sehingga menjadi horizontal.
d. Tempatkan rak spesimen dengan aman di dalam panduan pada MST Vortexer 2 dan dengan sudut berlekuk terbesar pada rak yang terletak di sudut kanan-depan. Amankan rak spesimen dengan menggerakkan tuas bergagang merah ke posisi "down" (turun) sehingga menjadi vertikal.
e. Pastikan bahwa pengaturan kecepatan ada pada 100 (kecepatan maksimum), dan nyalakan MST Vortexer 2.
f. Lakukan vorteks tabung selama 10 detik.
g. Matikan MST Vortexer 2.
h. Lepaskan rak spesimen dari MST Vortexer 2 dengan menggerakkan tuas bergagang merah ke posisi "up" (naik).
Metode melakukan vorteks tabung individu secara manual
a. Sumbat ulang tabung dengan sumbat berulir tabung pengumpul spesimen yang baru.
b. Campurkan setiap tabung secara menyeluruh dengan melakukan vorteks satu per satu, dengan kecepatan tinggi, selama 5 detik.
Penting: Selama pencampuran, vorteks cairan yang terlihat harus diamati yang mencuci seluruh permukaan bagian dalam tabung.
c. Balikkan setiap tabung satu kali untuk mencuci bagian dalam tabung, sumbat dan pelek.
d. Kembalikan tabung ke rak.
Cairan di dalam tabung akan berubah menjadi ungu.
4. Inkubasi tabung di dalam rak dalam penangas air 65 ± 2°C selama 45 ± 5 menit.
Untuk pengujian manual , siapkan Campuran Kuar selama inkubasi ini (lihat “Campuran Kuar,” halaman 33).
5. Lepaskan tabung dari penangas air setelah inkubasi.
Jika menggunakan rak spesimen, jangan biarkan dingin sebelum melepas tutup rak. Segera lanjutkan dengan pengujian atau lepaskan tutup rak dan DuraSeal tube sealer film.
Catatan: Jika rak spesimen mendingin, tabung dapat menempel pada tutup rak dan selanjutnya tumpah.
Kalibrator yang didenaturasi, kendali mutu, dan spesimen DNA dapat berupa:
Disimpan (lihat “Titik henti opsional dari sampel STM yang disiapkan dan sampel pelet sel pasca-gradien PreservCyt dan SurePath yang disiapkan secara manual,” halaman 45)
Segera diuji (dilanjutkan ke “Hibridisasi sampel STM yang disiapkan dan sampel pelet sel pasca-gradien PreservCyt dan SurePath yang disiapkan secara manual,” halaman 46)
Titik henti opsional dari sampel STM yang disiapkan dan sampel pelet sel pasca-gradien PreservCyt dan SurePath yang disiapkan secara manual
Penting: Jangan menyimpan atau mengirimkan spesimen yang didenaturasi pada es kering.
Semua sampel yang disiapkan, termasuk kalibrator dan kendali mutu, dapat disimpan pada 2–
8°C semalaman atau pada suhu –20°C hingga 3 bulan. Maksimum 3 siklus pembekuan/pencairan dapat dilakukan dengan maksimum 2 jam pada suhu kamar selama setiap siklus pencairan.
Untuk penyimpanan semalaman pada suhu 2–8ºC pada rak spesimen, tutupi sampel dengan DuraSeal tube sealer film dan ganti tutup rak.
Untuk penyimpanan pada suhu –20°C pada rak spesimen, lepaskan tutup rak dan DuraSeal tube sealer film dan pasang sumbat yang sesuai pada tabung.
Hibridisasi sampel STM yang disiapkan dan sampel pelet sel pasca-gradien PreservCyt dan SurePath yang disiapkan secara manual
Saat melakukan pengujian RCS otomatis dari sampel STM atau sampel pelet sel pasca-gradien PreservCyt dan SurePath yang disiapkan secara manual, rujuk ke Panduan Pengguna Rapid Capture System untuk petunjuk menyelesaikan pengujian.
Jika kalibrator yang didenaturasi, kendali mutu, atau spesimen telah disimpan, biarkan seimbang hingga 20–25°C dan, jika disimpan di dalam rak spesimen, lepaskan dan buang sumbat dari tabung.
Dua metode hibridisasi tersedia untuk sampel STM dan sampel pelet sel pasca-gradien PreservCyt dan SurePath yang disiapkan secara manual: “Hibridisasi yang menggunakan pelat mikro dan Microplate Heater I” dan “Hibridisasi yang menggunakan tabung mikro dan penangas air.”
Spesimen STM yang didenaturasi menggunakan metode MST Vortexer 2 harus menggunakan
“Hibridisasi menggunakan pelat mikro dan Microplate Heater I” pada halaman 46.
“Hibridisasi menggunakan tabung mikro dan penangas air” (halaman 48) belum divalidasi dengan spesimen STM yang didenaturasi menggunakan MST Vortexer 2.
Campuran Kuar bersifat kental. Pastikan bahwa Campuran Kuar tercampur rata dan bahwa jumlah yang diperlukan benar-benar dilepaskan ke dalam setiap sumuran pelat mikro hibridisasi atau tabung mikro hibridisasi.
Saat mentransfer sampel ke pelat mikro hibridisasi atau tabung mikro hibridisasi, hindari menyentuh sisi sumuran pelat mikro hibridisasi atau tabung mikro hibridisasi karena hasil positif palsu dapat terjadi jika sampel tidak ditransfer dengan hati-hati. Batasi pembentukan gelembung udara. Gunakan ujung pipet yang bersih dan ekstra panjang untuk setiap transfer untuk menghindari kontaminasi silang.