KESIMPULAN DAN SARAN 7.1Kesimpulan
1. Tidak ada perbedaan kadar MMP-8 CSG pada pemakaian ortodonti cekat sebagai terapi dan aksesoris dengan lama pemakaian kurang dari 6 Bulan
2. Tidak ada perbedaan kadar MMP-8 CSG pada pemakaian ortodonti cekat sebagai terapi dan aksesoris dengan lama pemakaian lebih dari 6 Bulan
7.2Saran
1. Sebaiknya pada penelitian selanjutnya digunakan teknik pengumpulan sampel yang lain untuk mengantisipasi jumlah sampel yang sedikit untuk analisa.
2. Pada pengambilan cairan sulkus gingiva sebaiknya diikuti dengan pengukuran secara kuantitatif sehingga ada standar jumlah atau berat minimal untuk dilakukan pemeriksaan.
3. Sebaiknya pada penelitian selanjutnya dilakukan pemeriksaan kondisi kesehatan gingiva untuk mengetahui apakah ada faktor inflamasi yang sedang terjadi di samping karena tekanan ortodonti.
KEPUSTAKAAN
Apajalahti S, Sorsa T, Railavo S, Ingman T. 2003. The in vivo level of Matrix Metalloproteinase-1 and -8 in Gingival Crevicular Fluid during initial orthodontic tooth Movement. Journal of Dental Research; Dec 2003; 82,12; Proquest. Pg 1018- 1022
Apajalahti S. 2004. Short Root Anomaly (SRA) Prevalence and Phenotypic Features in families- with Emphasis on matrix Metalloproteinases in Gingival Crevicular Fluid of SRA and Orthodontic Patients. Academic dissertation. Institute of Dentistry Departement of Pedodontics and Orthodontics, University of Helsinki, Finland Ariffin SHZ, Yamamoto Z, Abidin IZZ, Wahab RMA, Ariffin ZZ.2011. Cellular and
molecular Changes in orthodontic Tooth movement. TheScientific WorldJOURNAL, vol 11, pp. 1788-1803
Avellan NL et al. 2005. Painful tooth Stimulation Elevates Matrix Metalliproteinase-8 Levels Locally in Human Gingival Crevicular Fluid. Journal of Dental Research; Apr 2005; 84,4; ProQuest pg. 335
Capelli J, Fidel R, Figueredo CM, Teles RP. 2010. Change in the Gingival fluid volume during maxillary canine retraction. Dental Press J. Orthod. Vol.15.no.2
Carranza.2006. Clinical periodontology.Philadelpia.Saunders company.
Elley BM, Soory M, Manson JD. 2010. Periodontics. Sixth edition. Toronto. Churchill Livingstone. Elsevier
Gendron R,Grevier D, Sorsa T, Mayrand D. 1999. Inhibition of the activities of MMP2,8 and 9 by chlorhexidine. Clin Diag Lab Immuno.6(3); 431-9
Graber, Vanarsdall, Vig. 2000. Orthodontics- current principles and techniques. 4th ed. Elsivier Mosby. Misouri
Hassan KS, Alagi AS, Ali I. 2010. Periodontal status following self ligature versus archwire ligation techniques in orthodontically treated patients- Clinical, microbiological and biochemical evaluation. Orthodontics waves. Vol. 69(4). p 164-170. Sciencedirect.com.akses 25 Januari 2013.
Ingman T, Terrahartiala T, Ding Y, Sorsa T. 2005. Matrix metalloproteinase and their inhibitors in gingival crevicular fluid and saliva of periodontitis patients. J clin Periodontol 23 (12):1127-32
Ingman T,Apajalahti S, Mantyla P, Sorsa T. Matrix metalloproteinase-1 and -8 in gingival crevicular fluid during orthodontic tooth movement: a pilot study during 1 month of follow up after fixed appliance activation. European J Orthod.2005;27:202-07 Kerrigan JJ,Mansell Jp, Sandy JR.2000. Matriks turnover. J Orthod 2000;27 (3):227-33
Kiili M.2002. collagenase-2 and MMP13 in adult periodontitis molecular forms and levels in GCF and immunolocalization in gingival tissue. J clin periodontol 2002;29: 224- 32
Kinney JS, Ramshiera Ca, Giannobile WV. 2007.Oral fluid-based biomarkers of alveolar bone loss in periodontitis. Ann N Y Acad Sci; 1098:230-51
Krishnan V, Davidovitch Z. 2006. Cellular,molecular and tissue-level reactions to orthodontic force. Am J Orthod Dentofacial Orthop 2006 ; 129-469
Krishnan V, Davidovitch Z. 2009. On a Path to Unfolding the Biological Mechanism of Orthodontic Tooth Movement.J Dent Res.88(7) :597-608, 2009
Krizkova et al. 2011. Clinical importance of matrix metalloproteinases. Bratisl Lek Listy. 112 (80). p435-440
Lehner T.1996. Immunology of oral disease. 3rd ed. Massachusets: Blackwell Sci Publ. Ed.18-27
Meeran NA.2011. the role of gingival cevicular fluid in orthodontic tooth movement- a review. SRM University Journal of Dental Sciences. Vol 2(2). P129-133
Mieke S. 2006. The role of extra cellular matrix during orthodontic treatment. Folia Medica Indonesiana 2006; 42 (5):1-5
Meikle MC. 2006. The tissue, cellular and molecular regulation of orthodontic tooth movement :100 years after carl sandstedt.European J Orthod 2006; 28:221-40 Murphy G, Allan JA, Willenbrock F.1992. the role of C-terminal domain in collagense and
stromelysin specificity. J Biol Chem.267;9612-8
Nagase H,Visse R, Murphy G.2006. structure and function of matrix metalloproteinase and TIMP. Cardiovascular Res.69(3).562-70
Nanda R.2005. Biomechanics and Esthetics Strategies in Clinical Orthodontics. Missouri. Elsevier Saunders
Notoatmodjo, 2005. Metodologi Penelitian Kesehatan. Rineka Cipta. Jakarta
Palosaari H, Walgren j, Larmas M, ronka h.2000.The expression of MMP-8 in hman odontoblast and dental pulp cells is down regulated by TGF-beta 1. J Dent Rest; 79:77-84
Persson M. 2005. A 100th anniversary : Sanstedt’s experiment on tissue changes during tooth movement. J Orthod. 32;27-8
Radunovic VV.1999. neural Modulation of inflamatory reactions in dental tissues incident to orthodontic movement. A review of the literature. European journal of Orthodontics ;21 (231-47)
Rahardjo P. 2009. Ortodonti dasar. Surabaya. Pusat penerbitan dan Percetakan Unair. Redlich M, Reichenberg E, Harari D, Zaks B,Shshan S, Palmin A.2001. The effect of
mechanical force on mRNA levels of collagenase, collagen type I, and tissue inhibitors of metalloprpteinases in gingivae of dogs. J dent Rest 2001;80
Ribagin, Lora S;Rashkova, Maya R.2012. Matrix Metalloproteinase-8 and Interleukin- 1[Beta] in Gingival Fluid. Folia Medica; Jul-Sep 2012; 54, 3; ProQuest Medical Library. pg. 50
Sasano Y, Jing-Xu Z, Tsubota M. 2002. Gene expression of MMP-8 and MMP-13 during embryonic development of bone and cartilago in the rat mandibula and hind limb. J Histochem Cytochem 2002; 50 (30
Sodek, McKee. 2000. Molecular and Cellular biology of Alveolar Bone. Periodontology 2000.24. p 99-126
Susilowati.2010. Peran matriks metaloproteinase-8 pada cairan krevikular gingiva selama pergerakan gigi ortodontik. Dentofasial. 9 (1) 55-62
Surlin et al. 2010. Correlation beetwen the gingival crevicular fluid MMP8 levels and gingival overgrowth in patients with fixe orthodontics devices. Romanian journal of Morphology and Embryology 2010;51(3): 515-519
Takahashi, I;Nishimura, M;Onodera, K;Bae, J W;et al. Expression of MMP-8 and MMP- 13 genes in the periodontal ligament during tooth movement in rats. Journal of Dental Research; Aug 2003; 82, 8; ProQuest. pg. 646
Takahashi I et al. 2006. Expression of genes for gelatinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in periodontal tissues during orthodontic tooth movement. J Mol Hist (2006). 37:333-342
Tsatala SK, Kaklamanos E,Tsalikis L.2002. Effects of orthodontic treatment on gingival crevicular fluid flow rate and composition: Clinical implication and application.. Int J Adult Orthod orthogntic surg.17(3):191-205
Uitto VJ. 2003. Gingival crevice fluid- an introduction. Periodontology 2000. Vol.31.2003.9-11
Yamaguchi M. Kasai K. 2005. Inflammation in Periodontal tissues in response to mechanical forces. Arch immunol Ther Exp.2005, 53, 388-398
Ribagin, L. Rashkova M. 2012. Matrix Metalloproteinase-8 and Interleukin-1ß in gingival fluid of Children in the first three month of orthodontic treatment with fixed appliances. Folia medica; Jul- Sep 2012; 54, 3; ProQuest Medical Library.p 50-56 Velasco G, Pendas AM, Fueyo A, Knauper V, Murphy G, Lopez-Otin C. 1992. Cloning and characterization of human MMP-23, a new matrix metalloproteinase predominantly expressed in reproductive tissues and lacking conserved domains in other family member. J Biol Chem 1992;267:9612-8
Waddington RJ, Emberry G. 2001. Proteoglycans and orthodontics tooth movement. J orthod. 28;281-90
Williams JK, Cook PA, Isaacson Kg, Thom AR. Alat-alat ortodonti cekat: Prinsip dan praktek (Fixed orthodontics appliances; principle and practice). Alih bahasa : Susetyo B. Jakarta; EGC;2000. p.60-2
DATA INDUK KADAR MMP-8 CAIRAN SULKUS GINGIVA
KELOMPOK WAKTU PEMAKAIAN KONSENTRASI
1 Terapi Kurang 6 bulan 4228,331
14237,557 7873,028 22070,823 - 56830,941 2 Lebih 6 bulan 5993,725 - 3466,816 56830,941 197340,151 132226,127
3 Aksesoris Kurang 6 bulan 20116,876
- 3956,395 37737,355 25008,298 21091,665 4 Lebih 6 bulan 17468,785 - 354984,631 91591,059 147892,659 164048,770 Kontrol 39,762 529,341 1018,921 1508,500 3466,816 2462,937
Lampiran 2:
PROSEDUR PEMERIKSAAN KADAR MMP-8 1. Pengantar
ab100609 Human MMP8 ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent-Assay) kit adalah in vitro enzyme-linked immunosorbent assay untuk pengukuran kuantitatif MMP8 manusia dalam serum, plasma (Kumpulkan plasma menggunakan heparin sebagai antikoagulan. EDTA dan Sitrat tidak dianjurkan) dan supernatan kultur sel. Optimisation mungkin diperlukan dengan sampel urin.
Uji ini menggunakan antibodi spesifik yang dilapisi human MMP8 pada
96-sumur. Standar dan sampel dipipet ke dalam sumur dan MMP8 yang ada dalam sampel terikat pada sumur oleh immobilized antibody. Sumur dicuci dan antibodi biotinylated anti human MMP8 ditambahkan. Setelah dicuci dan dibuang antibodi yang tidak terikat biotinylated, HRP-conjugated streptavidin dipipet ke dalam sumur
kemudian cuci lagi. Larutan substrat TMB ditambahkan dan terjadi perubahan warna sesuai dengan ikatan MMP8. Stop solution merubah warna dari biru menjadi kuning dan diukur pada 450 nm.
2. Ringkasan
Siapkan semua reagen, sampel dan standar seperti yang diinstruksikan. Tambahkan standar 100μl atau sampel untuk setiap sumur. Inkubasi selama 2,5 jam di suhu kamar atau lebih malam di 4 ° C. Tambahkan 100μl siap antibodi biotin untuk setiap sumur. Inkubasi 1 jam di suhu kamar. Tambahkan 100μl disiapkan solusi Streptavidin. Inkubasi 45 menit pada suhu kamar. Tambahkan 100μl TMB Satu - Langkah Substrat Reagen untuk setiap sumur. inkubasi 30 menit pada suhu kamar. Tambahkan 50μl Stop Solution untuk setiap sumur. Baca pada 450nm segera.
3. Isi kit
lempeng MMP8 ( Butir A ) : 96 sumur ( 12 strip x 8 sumur ) dilapisi dengan MMP8 anti - manusia.
Cuci Buffer Konsentrat ( 20x ) ( Butir B ) : 25 ml 20x larutan pekat.
Assay Pengencer ( Butir E ) : 15 ml buffer 5x terkonsentrasi . untuk Standar / Sampel ( serum / plasma sampel / kultur selmenengah / urine ) p engencer.
Deteksi Antibodi MMP8 ( Butir F ) : 2 botol terbiotinilasianti-manusia MMP8 (masing-masing botol sudah cukup untuk uji setengah lempeng)
HRP - Streptavidin konsentrat ( Butir G ) : 200 ml 600x terkonsentrasi streptavidin HRP - terkonjugasi.
TMB Satu - Langkah Substrat Reagen ( Barang H ) : 12 ml 3,3 ' , 5,5' - tetramethylbenzidine ( TMB ) dalam larutan buffer.
Stop Solution ( Butir I) : 8 ml 0,2 M asam sulfat. 4. Bahan Tambahan
Diperlukan 1 lempeng pembaca mampu mengukur absorbansi pada 450nm . Presisi pipet untuk memberikan 2 ml untuk 1 volume ml .
Adjustable 1-25 ml pipet untuk persiapan reagen . 100 ml dan 1 liter silinder lulus .
kertas penyerap.
sulingan atau deionisasi air.
Log- log kertas grafik atau komputer dan perangkat lunak untuk ELISA Data analisis. 8 Tabung untuk mempersiapkan standar atau sampel pengenceran. 5. Persiapan Reagen
a. Bawalah semua reagen dan sampel untuk suhu kamar ( 18 - 25 ° C ) sebelum digunakan.
b. Pengenceran sampel : Jika sampel Anda perlu diencerkan , Assay Pengencer ( Barang E ) digunakan untuk pengenceran serum / plasma / kultur supernatan / urin . * Harap diperhatikan bahwa kadar protein target dapat bervariasi antara spesimen yang berbeda . Faktor pengenceran optimal untuk setiap sampel harus ditentukan oleh penyidik .
c. Assay Pengencer ( Barang E ) harus diencerkan 5 kali lipat dengan deionisasi atau air suling sebelum digunakan .
d. Persiapan standar : Secara singkat spin botol Item C dan kemudian tambahkan 400 ml 1x Assay Pengencer ( Barang E ) menjadi Barang C vial untuk mempersiapkana ng / ml standar 50 . Larutkan bubuk secara menyeluruh oleh lembut campuran .
Tambahkan 80 ml standar MMP8 dari botol item C, menjadi tabung dengan 586,7 ml 1x Assay Pengencer Buffer (untuk serum / plasma sampel / media kultur sel / urine ) untuk mempersiapkan 6000 pg / ml larutan standar saham . Pipet 400μl 1x Assay Pengencer ke masing-masing tabung . Gunakan larutan standar saham untuk menghasilkan serangkaian pengenceran (ditampilkan di bawah ). Campur setiap tabung secara menyeluruh sebelum berikutnya mentransfer. Lembut vortex untuk mencampur. 1x Assay Pengencer berfungsi sebagaistandar nol ( 0 pg / ml ) .
e. Jika Konsentrat Wash ( 20x ) ( Barang B ) berisi kristal terlihat, hangat untuk suhu kamar dan campuran lembut sampai larut. Mencairkan 20 ml Wash Buffer Konsentrat ke deionisasi atau suling air untuk menghasilkan 400 ml 1x Cuci Buffer .
f. Secara singkat spin Deteksi Antibodi vial ( Butir F ) sebelum digunakan . menambahkan100 ml 1x Assay Pengencer ke botol untuk mempersiapkan deteksi suatu antibodi berkonsentrasi . Pipet atas dan ke bawah untuk campuran lembut ( yang konsentrat dapat disimpan pada suhu 4 ° C selama 5 hari ) . deteksi konsentrat antibodi harus diencerkan 80 kali lipat dengan 1x Assay Pengencer dan digunakan pada langkah 4 Bagian 7 Metode Assay .
g. Secara singkat spin konsentrat vial HRP - Streptavidin ( Barang G ) sebelum digunakan . HRP - Streptavidin konsentrat harus diencerkan 600 kali lipat dengan 1x Assay Pengencer. Sebagai contoh: singkat spin botol ( Barang G ) dan pipet dan bawah untuk campuran lembut . Tambahkan 20 ml HRP - Streptavidin konsentrat ke dalam tabung dengan 12 ml 1x Assay Pengencer untuk mempersiapkan 600 kali lipat diencerkan HRP - Streptavidin solusi ( tidak menyimpan larutan diencerkan untuk digunakan hari berikutnya ).
6. Metode uji
a. Bawalah semua reagen dan sampel untuk suhu kamar ( 18 - 25 ° C ) sebelum digunakan. Dianjurkan agar semua standar dan sampel dijalankan setidaknya dalam rangkap dua.
b. Tambahkan 100 ml setiap standar (lihat Persiapan Reagen langkah4 ) dan sampel ke sumur yang sesuai . Tutup dengan baik dan inkubasi selama 2,5 jam pada suhu kamar atau lebih malam di 4 ° C dengan menjinakkannya getaran.
c. Buang solusi dan mencuci 4 kali dengan 1x Cuci Solution. Wash dengan mengisi masing-masing dengan baik dengan Wash Buffer ( 300 ml ) dengan menggunakan
multi-channel pipet atau autowasher . Penghapusan lengkap cair pada setiap langkah sangat penting untuk kinerja yang baik. Setelah terakhir menwash , menghilangkan Buffer Wash tersisa dengan aspirasi atau decanting . Balikkan piring dan menghapuskan melawan kertas yang bersih handuk.
d. Tambahkan 100 ml 1x siap antibodi biotinylated (lihat Persiapan Reagen langkah 6 ) masing-masing dengan baik. Inkubasi selama 1 jam pada ruang suhu dengan gemetar lembut.
e. Buang solusinya. Ulangi mencuci seperti pada langkah 3.
f. Tambahkan 100 ml disiapkan solusi Streptavidin (lihat Persiapan Reagen langkah 7 ) masing-masing dengan baik. Inkubasi selama 45 menit di kamar suhu dengan gemetar lembut.
g. Buang solusinya. Ulangi mencuci seperti pada langkah 3.
h. Tambahkan 100 ml TMB Satu - Langkah Substrat Reagen ( Barang H ) untuk setiap sumur . Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar dalam gelap dengan gemetar lembut
i. Tambahkan 50 ml Stop Solution ( Butir I) masing-masing dengan baik. Baca pada 450 nm segera.