BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN
5.2. Saran
Berdasarkan hasil penelitian tersebut, penulis dapat memberikan saran sebagai berikut.
a. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan waktu yang lebih lama untuk menganalisis pengaruh pemberian kitosan terhadap stabilitas nilai densitas tulang pada proses regenerasi tulang pasca ekstraksi gigi.
b. Dapat dilakukan penelitian dengan sampel tulang pada organ tubuh yang berbeda untuk mengetahui efek pemberian kitosan terhadap jaringan tulang pada tubuh secara keseluruhan.
c. Melakukan modifikasi sehingga ekstrak yang dihasilkan berbentuk mikro-kitosan atau nano-mikro-kitosan untuk meningkatkan efektivitas pemberian dan metabolisme kitosan dalam tubuh.
d. Dapat dilakukan metode pemeriksaan radiografi dengan alat microcomputed tomography (micro-CT) yang dapat memberikan gambaran tulang alveolar
pasca ekstraksi gigi secara tiga dimensi dalam resolusi tinggi.
e. Dapat dilakukan penelitian lebih lanjut dengan kriteria umur atau tingkat kesegaran dari limbah kulit udang vannamei yang berbeda untuk menganalisis dan membandingkan kualitas ekstrak kitosan yang dihasilkan dari limbah kulit udang tersebut.
DAFTAR PUSTAKA
Akbar, Y. R., G. Barqly, A. Sulistian, A. Elnisa, dan A. Wulan. 2015. Daya antibakteri kitin pada limbah kulit udang terhadap bakteri Streptococcus mutans. BIMKGI 3(2): 1-5.
Antonino, R. S. C. M. d. Q., B. R. P. L Fook, V. A. D. O. Lima, R. I. D. F.
Rached, E. P. N. Lima, R. K. D. S. Lima, C. A. P. Covas, dan M. V. L Fook.
2017. Preparation and characterization of chitosan obtained from shells of shrimp (Litopenaeus vannamei Boone). Marine Drugs 15, 141.
Ardakani, F. E., A. N. Azam, S. Yassaei, F. Fathei, dan G. Rouhi. 2011. Effects of chitosan on dental bone repair. Health 3(4): 200-205.
Barbosa, D., A. G. J Villaverde, E. A. L Arisawa, R. A Souza. 2014. Laser therapy in bone repair in rats: analysis of bone optical density. Acta Ortop Bras. 22(2): 71-4.
Barqly, G. J. K. 2016. Tingkat Kebersihan Smear Layer Gambaran Scanning Electron Microscope Saluran Akar Gigi setelah Diirigasi dengan Larutan Kitosan Limbah Kulit Udang Windu (Penaeus Monodon). Skripsi. Jember:
Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember.
Briggs, M., S. F. Smith, R. Subasinghe, dan M. Phillips. 2004. Introductions and Movement of Penaeus vannamei and Penaeus stylirostris in Asia and The Pacific. Bangkok: FAO.
Bumgardner, J. D., R. Wiser, P. D, Gerard, P. Bergin, B. Chest-nutt, dan M.
Marin. 2003 Chitosan: Potential use as a bioactive coating for orthopaedic and craniofacial/dental implants. Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition 14: 423-438.
Chrysanthakopoulos, N. A. 2011. Original Article: Periodontal reasons for tooth extraction in a group of greek army personnel. JODDD 5(2): 55-60.
Cohen, N., dan J. C. Levy. 2014. Healing processes following tooth extraction in orthodontic cases. J Dentofacial Anom Orthod 17: 304.
Croisier, F., dan C. Jérôme. 2013. Chitosan-based biomaterials for tissue engineering. European Polymer Journal 49: 780-792.
Cui, Y. Q., dan R. W Shen. 2006. Effect of N-acetylglucosamine on osteoblastic activity and expression of bone morphogenetic protein in fracture healing.
Chinese Journal of Clinical Rehabilitation 10(5): 158-160.
Daniel, W. 2005. Biostatic a Foundation for Analysis in The Health Science. 6th ed. Canada: John Wiley and Sons Inc.
Dompeipen, E. J., M. Kaimudin, dan R. P. Dewa. 2016. Isolasi kitin dan kitosan dari limbah kulit udang. Majalah Biam 12(01): 32-38.
Dong-Ju, J-Kook, Cheryl, Ahran, Jung-Seok, Ui-Won, Chang-Sung, Seung-Jong, dan Seong-Ho. 2012. Changes in periodontium after extraction of a periodontally-involved tooth in rats. J Periodontal Implant Sci 42(5): 158-165.
Filho, L. A. B., B. T. Primo, H. T. Gassen, V. R. C. Fontanella, A. N. Silva Jr.
2011. Evaluation of opticl density of bone defect filled with calcium phosphate cement and bioactive glass in rats. Acta Cirurgica Brasileira 26(1).
Flanagan, M. 2000. The physiology of wound healing. J Wound Care 9(6): 299-300.
Ganong, W. F. 2003. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Ganong. Edisi 22. Jakarta:
EGC.
Gorustovich, Steimetz, dan Nielsen. 2008. Histomorphometric study of alveolar bone healing in rats fed a boron-deficient diet. Anat Rec 291: 441-447.
Guyton, A. C., dan J. E Hall. 2007. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi 11.
Jakarta: EGC.
Haliman, R. W., dan D. S Adijaya. 2005. Udang Vannamei, Pembudidayaan dan Prospek Pasar Udang Putih yang Tahan Penyakit. Jakarta: Penebar Swadaya.
Hanifah, N., dan E. Darmawan. 2015. Efek anti inflamasi kitosan dari cangkang udang pantai trisik pada tikus model rheumatoid arthritis. Pharmaҫiana 5(2): 177-184.
Hupp, Ellis, dan Tucker. 2014. Contemporary Oral and Maxillofacial Surgery.
Sixth Edition. Missouri: Elsevier.
Igarashi, M., K. Sakamoto, dan I. Nagaoka. 2011. Effect of glucosamine, a therapeutic agent for osteoarthritis, on osteoblastic cell differentiation.
International Journal of Molecular Medicine 28: 373-379.
Kementrian Kelautan dan Perikanan (KKP). 2014. Udang Vaname dan Udang Windu Masih Andalan Ekspor Indonesia. Web Dirjen Perikanan Budidaya http://djpb.kkp.go.id/index.php/arsip/c/246/Udang-Vaname-dan-Udang-Windu-Masih-Andalan-Ekspor-Indonesia/?category_id=13. [Diakses pada 29 November 2017].
Kim, I. Y., S. J. Seo, H. S. Moon, M. K. Yoo, I. Y. Park, dan B. C. Kim. 2008.
Chitosan and its derivate for tissue engineering applications. Biotechnology Advances 26: 1-21.
Kmiec, M., L. Pighinelli, M. F. Tedesco, M. M. Silva, dan V. Reis. 2017.
Chitosan-properties and applications in dentistry. Adv Tissue Eng Regen Med Open Access 2(4): 00035.
Koerner, K. L. 2006. Manual of Minor Oral Surgery for The General Dentist.
Iowa: Blackwell Munksgaard.
Kumar, Cotran, dan Robbins. 2004. Robbins: Buku Ajar Patologi. Edisi 7.
Volume 1. Terjemahan oleh Awal Prasetyo dkk. Jakarta: EGC.
Kyrgidis, A., T. G. Tzellos, K. Toulis, dan K. Antoniades. 2011. The facial skeleton in patients with osteoporosis: a field for disease signs and treatment complications. Journal of Osteoporosis vol. 2011, Article ID 147689, 11 pages.
Larjava, H. 2012. Oral Wound Healing: Cell Biology and Clinical Management.
UK: Wiley-Blackwell.
Lertsutthiwong, P., N. C. How, S. Chandrkrachang, dan W. F. Stevens. 2002.
Effect of chemical treatment on the characteristics of shrimp chitosan.
Journal of Metals, Materials and Minerals 12(1): 11-18.
Levengood, S. L., dan M. Zhang. 2014. Chitosan-based scaffolds for bone tissue engineering. J Mater Chem B Mater Biol Med 2(21): 3161-3184.
Manrique, N., C. C. S. Pereira, L. M. G. Garcia, S. Micaroni, A. A. F. D.
Carvalho, S. H. V. Perri, R. Okamoto, D. H. Sumida, dan C. Antoniali.
2011. Alveolar bone healing process in spontaneously hypertensive rats (SHR). A radiographic densitometry study. J Appl Oral Sci 20(2): 222-7.
Martins, M. V., M. A. d. S. d. Silva, E. M. Filho, L. C. d. Moraes, J. X. d. M.
Castilho, R. F. d. Rocha. 2005. Evaluation of digital optical density of bone repair in rats medicated with ketoprofen. Brazilian Dental Journal 16(3).
Murtidjo, B. 2003. Pembenihan Udang Windu Skala Kecil. Yogyakarta: Kanisius.
Nadarajah, K. 2005. Development and Characterization of Antimicrobial Edible Films from Crawfish Chitosan. Louisiana: Lousiana State University.
Nilsson, M. 2010. The Role of Physical Activity on Bone Density and Bone Geometry in Men. Tesis. Gothenburg: Institute of Medicine at Sahigrenska Academy, University of Gothenburg, Sweden.
No, H. K, dan S. P. Meyers. 1997. Preparation of Chitin and Chitosan dalam R.
A. A. Muzzarelli, dan M. G. Peter. Grottamare: Chitin Handbook, European Chitin Soc.
Notoatmodjo, S. 2005. Metodologi Penelitian Kesehatan. Jakarta: Rineka Cipta.
Orsted., Keast, L. Forest, dan F. Megie. 2011. Basic Principles of Wound Healing.
Wound Care Canada 9(2): 4-12.
Pratama, S. M. 2016. Efek Ekstrak Thymoquinone Jintan Hitam Terhadap Proses Pembentukan Tulang Soket Gigi Pasca Ekstraksi Pada Tikus Yang Diinduksi Diabetes. Skripsi. Jember: Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember.
Puriwiyanto, A. 2013. Modul Praktikum Oseanografi Kimia. Program Studi Ilmu Kelautan Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sriwijaya.
Purwanti, A. 2014. Evaluasi proses pengolahan limbah kulit udang untuk meningkatkan mutu kitosan yang dihasilkan. J Teknologi 7(1): 83-90.
Pusat Penelitian dan Pengembangan Peternakan. 2016. Penggunaan dan Penanganan Hewan Coba Rodensia dalam Penelitian sesuai dengan Kesejahteraan Hewan. Jakarta: Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian, Kementrian Pertanian.
Rubin, B. R., J. M Talent, P. Kongtawelert, R. M. Pertusi, M. D. Forman, dan R.W Gracy. 2001. Oral polymeric N-acetyl-D-glucosamine and osteoarthritis. JAOA 101(6).
Senel, S., dan S. J McClure. 2004. Potential applications of chitosan in veterinary medicine. Adv Drug Deliv Rev 56(10): 1467-80.
Seol. Y. J., J. Y. Lee, Y. J. Park, Y. M. Lee, K. Young, I. C. Rhyu, S. J. Lee, S. B.
Han, dan C. P. Chung. 2004. Chitosan sponges as tissue engineering scaffolds for bone formation. Biotechnol Lett 26: 1037-1041.
Setyorini, A., I. K. G. Suandi, I. G. L Sidiartha, dan W. B Suryawan. 2009.
Pencegahan osteoporosis dengan suplementasi kalsium dan vitamin D pada penggunaan kortikosteroid jangka panjang. Sari Pediatri 11(1).
Shapiro, F. 2008. Bone development and its relation to fracture repair. The role of mesenchymal osteoblasy and surface osteoblast. Eur Cell Mater 15: 53- 76.
Srijanto, B. 2003. Kajian Pengembangan Teknologi Proses Produksi Chitin dan Chitosan Secara Kimiawi. Prosiding seminar Nasional Teknik Kimia Indonesia 2003. Volume I: F01-1 – F01-5.
Steiner, G. G., W. Francis, R. Burrell, M. P. Kallet, D. M. Steiner, dan R. Macias.
2008. The healing socket and socket regeneration. Compend Contin Educ Dent. 29(2): 114-6, 118, 120-4 passim.
Sugita, P., A. Sjahriza, T. Wukirsari, dan D. Wahyono. 2009. Kitosan: Sumber Biomaterial Masa Depan. Bogor: Institut Pertanian Bogor Press.
Suryono, B. Setiawan, D. Martianto, dan D. Sukandar. 2007. Pengaruh Pemberian Susu terhadap Kadar Kalsium Darah dan Kepadatan Tulang Remaja Pria.
Media Gizi & Keluarga 31(1).
Sykaras, N., dan L. A Opperman. 2003. Review: Bone morphogenetic proteins (BMPs): how do they function and what can they offer the clinician?. J Oral Sci 45(2): 57-7.
Tahir, A. M. 2009. Gambaran densitas mineral tulang vertebra lumbal akseptor KB suntik DMPA. Maj Obstetri Ginekologi Indonesia 33(2).
Taub, P. J., S. R. Buchman, P. K. Patel, dan M. N. Cohen. 2015. Ferraro's Fundamentals of Maxillofacial Surgery. New York: Springer.
U.S. Department of Health and Human Services (UDHHS). 2004. Bone Health and Osteoporosis: A Report of the Surgeon General. Rockville: U.S.
Department of Health and Human Services, Office of the Surgeon General.
Unnanuntana, A., B. J. Rebolledo, M. M. Khair, E. F. DiCarlo, dan J. M. Lane.
2011. Diseases affecting bone quality: beyond osteoporosis. Clin Orthop Relat Res 469(8): 2194–2206.
Van Steenberghe, D., R. Jacobs, M. Desnyder, G. Maffei, M. Quirynen. 2002. The relative impact of local and endogenous patient-related factors on implant failure up to the abutment stage. Clin Oral Implants Res. 13: 617-22.
Velnar, T., T. Bailey dan V. Smrkolj. 2009. The wound healing process: An overview of the cellular and molecular mechanisms. The Journal of International Medical Research 37: 1528-1542.
Vieira, A. E., C. E Repeke, S. B. F. Junior, P. M. Colavite, C. C Biguetti, R. C Oliveira, G. F. Assis, R. Taga, A. P. F. Trombone, dan G. P. Garlet. 2015.
Intramembranous bone healing process subsequent to tooth extraction in mice: micro-computed tomography, histomorphometric and molecular characterization. Plos One 10(5): 1-22.
World Wide Fund for Nature (WWF) - Indonesia. 2014. Budidaya Udang Vannamei - Tambak Semi Intensif dengan Instalasi Pengolahan Air Limbah (IPAL). Jakarta: Tim Perikanan WWF Indonesia.
Yamazaki, H., Mano H, Nakatani S, dan Wada M. 2007. The intake of glucosamine increased bone mass by pQCT in ddy mice. Glucosamine Res 3: 1-6.
Yustiawan, E. Y. 2015. Pengaruh Stresor Renjatan Listrik Terhadap Densitas Tulang Mandibula pada Tikus Spraque Dawley. Skripsi. Jember: Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember.
Zhang, H., X. Zhong, Y. Tao, S. Wu, dan Z. Su. 2012. Effect of chitosan and water-soluble chitosan micro and nanoparticles in obese rats fed a high-fat diet. International Journal of Nanomedicine 7: 4069-4076.
LAMPIRAN
Lampiran A. Surat Keterangan Ethical Clearance
Lampiran B. Surat Ijin Penelitian Laboratorium Biomedik
Lampiran C. Alat dan Bahan Penelitian
Keterangan:
A. Timbangan digital B. Dental rat chair C. Toples kedap udara D. Timbangan digital E. Papan bedah F. Sarung tangan G. Masker H. Kain lap I. Cotton pallete J. Baki stainless steel K. Disposable syringe 1 ml
L. Disposable syringe 5 ml M. Pisau malam
N. Pinset O. Artery clamp P. Gunting bedah
Q. Sonde setengah lingkaran R. Ekskavator kecil
S. Ekskavator besar T. Blade dan scalpel U. Spidol
A
B ] b B
F G H D
] b B
E ] b B C
] b B
K L M N O P Q R S T U I
] b J B ] b B
Gelas ukur dan tabung reaksi Oven
Blender Mortar dan pastle Sonde lambung
Kandang tikus beserta serbuk kayu, tempat makan + pakan standart dan tempat minum + air minum
Kulit kepala dan kulit badan udang vannamei Larutan saline 3%
Aquades Larutan NaOH dan Larutan HCl Buffer formalin 10%
Larutan asam asetat 1% Ketamin HCl Eter
Foto Thorax FCR dengan sampel tulang Pengolahan foto rontgen secara kelompok kontrol dan kelompok computed radiography perlakuan pada imaging plate
Hasil foto rontgen sampel tulang tikus yang akan dihitung densitasnya menggunakan software Adobe Photoshop CC 2018
Lampiran D. Penghitungan Besar Sampel
Besar sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah berdasarkan rumus (Daniel, 2005), yaitu:
n = jumlah sampel minimum σ = standar deviasi sampel
d = kesalahan yang masih dapat ditolerir, diasumsikan d = σ
Z = konstanta pada tingkat kesalahan tertentu, jika = 0.05 maka Z = 1,96 Pada penelitian ini, nilai σ diasumsikan sama dengan nilai d, hal ini karena nilai σ2 sangat jarang diketahui, maka penghitungan besar sampel adalah sebagai berikut :
= (1,96)2
= 3,84 (dibulatkan menjadi 4)
Berdasarkan perhitungan rumus, jumlah sampel minimal adalah 4 pada setiap kelompok.
n=Z2.σ2 d2
n = 1,96 2.σ2 σ2
Lampiran E. Penghitungan Dosis
E.1 Dosis Ekstrak Kitosan Limbah Kulit Udang Vannamei
Menurut Hanifah dan Darmawan (2012), dosis efektif ektrak kitosan limbah kulit udang vannamei pada hewan coba tikus adalah 100 mg/200 gram BB per hari.
Berat rata- rata setiap tikus berdasarkan kriteria = 180-250 gram
Dosis ekstrak pada tikus = 100 mg/kg BB x 180-250 gr 200 gr = 90 mg-125 mg/ 180-250 gr BB Konsentrasi kitosan yang digunakan adalah 5%, didapatkan dengan cara mencampurkan 0,5 gram kitosan kedalam pelarut asam asetat 1% sebanyak 10 ml.
Volume sediaan kitosan 5% yang diberikan pada tikus berdasarkan konversi dosis tikus, menggunakan perbandingan:
m1
V2
=
m2V2
Sebagai contoh untuk tikus dengan berat 180 gram, dosis kitosan yang diberikan adalah 90 mg (0,09 gr). Volume pelarut yang dibutuhkan adalah:
0,5 gr
10 ml
=
0,09 grV2 V2 = 1,80 ml.
E. 2 Dosis Ketamin
Menurut Pusat Penelitian dan Pengembangan Peternakan (2015), dosis ketamin intraperitoneal yang digunakan untuk anestesi tikus adalah 40-100 mg/kg BB. Pada penelitian ini dosis yang digunakan menggunakan dosis terendah yaitu 40 mg/ kg BB.
Dosis yang digunakan = 40 mg x 180-250 gr 1000 gr
= 7,2–10 mg
Ketamin yang digunakan dalam penelitian ini mempunyai konsentrasi 1000 mg/10 ml. Dosis ketamin yang dibutuhkan adalah:
1000 mg
10 ml
=
7,2-10 mgX ml X = 7,2-10 mg
100 ml
= 0,072 – 0,1 ml
Dosis ketamin yang digunakan berdasarkan penghitungan adalah 0,72- 0,1 ml.
Lampiran F. Hasil Penghitungan Densitas Tulang Alveolar Pasca Ekstraksi pada Tikus Wistar Jantan
Kelompok Saline 21
Apikal Medial Koronal Mean
1 108.88 90.76 57.21 85.62
2 107 92.04 55.89 84.98
3 103.79 87.78 56.23 82.60
4 101.64 87.07 54.18 80.96
5 103.16 80.54 54.18 79.29
Kelompok Kitosan 21
Apikal Medial Koronal Mean
1 119.41 90.86 67.01 92.43
2 118.9 81.42 67.35 89.22
3 117.92 83.67 57.54 86.38
4 114.8 87.07 56.97 86.28
5 110.72 90.76 57.2 86.23
Kelompok Saline 28
Apikal Medial Koronal Mean
1 117.69 86.72 69.16 91.19
2 115.26 99.01 62.12 92.13
3 111.36 98.01 63.74 91.04
4 109.19 80.26 62.58 84.01
5 111.83 89.07 66.17 89.02
Kelompok Kitosan 28
Apikal Medial Koronal Mean
1 131.52 103.57 78.65 104.58
2 127.69 107.08 76.15 103.64
3 132.65 94.75 71.40 99.60
4 116.98 80.37 67.40 88.25
5 129.52 97.74 70.37 99.21
Lampiran G. Hasil Analisis Data G.1 Uji Normalitas Shapiro-Wilk
Tests of Normality
Kelompok
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Densitas Tulang Alveolar
Kitosan 28 .309 5 .133 .843 5 .174
Saline 28 .284 5 .200* .825 5 .127
Kitosan 21 .337 5 .065 .784 5 .060
Saline 21 .205 5 .200* .944 5 .696
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
G.2 Uji Homogenitas Levene-Test
Test of Homogeneity of Variances Densitas Tulang Alveolar
Levene
Statistic df1 df2 Sig.
.883 3 16 .471
G.3 Uji One Way ANOVA
ANOVA Densitas Tulang Alveolar
Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 695.962 3 231.987 13.788 .000
Within Groups 269.211 16 16.826
Total 965.173 19