Sampel obat yang diteliti adalah tablet lepas lambat teofilin dengan pendosisan setiap 12 jam yang beredar di masyarakat. Kriteria pemilihan sampel berdasarkan tahun kadaluwarsa yang sama dan berasal dari Apotek yang sama.
3.4.2. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Teofilin
Penentuan panjang gelombang maksimum teofilin dilakukan dengan menggunakan tiga jenis pelarut, yaitu dalam pelarut NaOH 0,1 N, dapar HCl pH 1,2, dan dapar fosfat pH 6,0.
Teofilin ditimbang seksama sebanyak 50 mg dan dilarutkan dalam 100 ml pelarut, sehingga diperoleh larutan induk dengan konsentrasi 500 ppm. Dari larutan induk ini, dibuat larutan 50 ppm dengan mengambil 5 ml dan diencerkan dengan pelarut hingga 50 ml. Dari larutan 50 ppm kemudian dibuat larutan 12 ppm dengan mengambil 2,4 ml dan diencerkan dengan pelarut hingga 10 ml.
Larutan diamati absorbansinya dengan spektrofometer UV-Vis pada panjang gelombang 400-200 nm dan ditentukan panjang gelombang maksimumnya (Mariyam, R., 2011, telah diolah kembali).
3.4.3. Pembuatan Kurva Kalibrasi Teofilin
Pembuatan kurva kalibrasi teofilindilakukan dengan tiga jenis pelarut, yaitu pelarut NaOH 0,1 N, dapar HCl pH 1,2, dan dapar fosfat pH 6,0.
Kurva kalibrasi dibuat dengan larutan teofilin dengan konsentrasi 1 ppm, 2 ppm, 4 ppm, 8 ppm, 12 ppm, 16 ppm, 18 ppm, dan 20 pmm, yaitu dengan cara mengambil 0,2 ml; 0,4 ml; 0,8 ml; 1,6 ml; 2,4 ml; 3,2 ml; 3,6 ml; dan 4ml dari larutan teofilin 50 ppm; masing-masing diencerkan dengan pelarut hingga 10 ml.
Masing-masing larutan diukur serapannya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 274,4 nm untuk pelarut NaOH 0,1 N, panjang gelombang 269,8 untuk pelarut dapar HCl pH 1,2, dan panjang gelombang 271,2 nm untuk pelarut dapar fosfat pH 6,0; kemudian dibuat kurva regresi linear antara kadar teofilin dan serapannya sehingga diperoleh persamaan regresi linear y = a + bx(Mariyam, R., 2011, telah diolah kembali).
3.4.4. Penetapan Kadar Tablet Teofilin Lepas Lambat
Ditimbang 20 tablet teofilin lepas lambat dan dihitung berat rata-ratanya. Tablet diserbukkan, ditimbang setara lebih kurang 100 mg teofilin kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 100 ml dan ditambahkan NaOH 0,1 N hingga garis batas. Larutan dikocok hingga larut dan disaring. Dari filtrat hasil
penyaringan diambil 1 ml, kemudian diencerkan dengan NaOH 0,1 N hingga 100 ml. Larutan ini mengandung kurang lebih 10 µg/ml teofilin (±10 ppm). Serapan larutan diukur pada panjang gelombang 274,4 nm (Ditjem POM, 1995, telah diolah kembali). Penetapan kadar ini dilakukan tiga kali.
Tiap tablet teofilin lepas lambat mengandung tidak boleh kurang dari 90,0% dan tidak boleh lebih dari 110,0% teofilin anhidrat dari jumlah teofilin yang tertera pada etiket (USP XXX,2007).
3.4.5. Keseragaman Sediaan Tablet Teofilin Lapas Lambat
Keseragaman sediaan dapat ditetapkan dengan salah satu dari dua metode, yaitu keragaman bobot atau keseragaman kandungan. Persyaratan keragaman bobot dapat diterapkan pada produk yang mengandung zat aktif 50 mg atau lebih yang merupakan 50% atau lebih dari bobot satuan sediaan. Keseragaman dari zat aktif lain, jika dalam jumlah lebih kecil, ditetapkan dengan persyaratan keseragaman kandungan. Untuk penetapan keseragaman sediaan dipilih tidak kurang dari 30 satuan (Ditjen POM., 1995)
a. Keragaman bobot
Sebanyak 10 tablet lepas lambat teofilin ditimbang seksama satu per satu, dan bobot rata-rata dihitung. Dari hasil penetapan kadar yang diperoleh, jumlah zat aktif dalam masing-masing 10 tablet dihitung dengan anggapan zat aktif terdistribusi homogen.
b. Keseragaman kandungan
Sebanyak 10 tablet lepas lambat teofilin ditetapkan kadarnya satu per satu dengan menggunakan prosedur penetapan kadar.
Persyaratan keseragaman sediaan dipenuhi, jika jumlah zat aktif 10 satuan sediaaan seperti yang ditetapkan dari cara keragaman bobot atau dalam keseragaman kandungan terletak antara 90% hingga 110% dari yang tertera pada etiket dan simpangan baku relatif kurang dari atau sama dengan 6%. Jika satu satuan terletak di luar rentang 90% hingga 110% seperti yang tertera pada etiket, atau jika simpangan baku relatif lebih besar dari 6% atau jika kedua kondisi tidak dipenuhi, uji 20 satuan tambahan dilakukan. Persyaratan dipenuhi jika tidak lebih
dari 1 satuan dari 30 terletak di luar rentang 75% hingga 125% dari yang tertera pada etiket dan simpangan baku relatif dari 7,8%.
3.4.6. Uji Disolusi Tablet Lepas Lambat Teofilin
Uji disolusi tablet lepas lambat teofilin dilakukan sesuai cara yang tercantum dalam The United States of Pharmacopeia XXX (USP XXX) berdasarkan tes 1, karena di dalam Farmakope Indonesia edisi IV belum tercantum prosedur uji disolusi tablet lepas lambat teofilin. Uji disolusi tes 1 dilakukan menggunakan alat uji disolusi tipe 2 (tipe dayung) pada suhu 37° ± 0,5°C dengan kecepatan 50 rpm selama 8 jam. Uji disolusi dilakukan pada media 900 ml larutan dapar HCl pH 1,2 selama 1 jam pertama kemudian dilanjutkan pada medium 900 ml larutan dapar fosfat pH 6,0 selama 7 jam berikutnya.
Larutan dapar HCl pH 1,2 dimasukkan ke dalam enam wadah disolusi dan dibiarkan hingga suhu 37 ± 0,5 0C. Dari masing-masing tablet lepas lambat teofilin (obat A dan B), diambil enam tablet dan dimasukkan ke dalam wadah disolusi yang telah berisi larutan dapar HCl pH 1,2. Setelah satu jam, medium disaring dengan kertas saring berukuran 0,45μ m sehingga partikel yang belum larut dapat tersaring dan meminimalisir kadar yang hilang akibat pergantian medium. Tablet dan partikel yang tersaring kemudian dimasukkan ke dalam wadah yang telah berisi larutan dapar fosfat pH 6,0 yang suhunya 37 ± 0,5 0C dan didisolusi selama tujuh jam.
Proses pengambilan cuplikan sampel dilakukan pada menit ke 15, 30, 45, 60, 120, 240, 300, 360, 420, dan 480 sebanyak 5 ml dengan menggunakan spuit yang sebelumnya telah dikalibrasi.Setelah pencuplikan sampel dilakukan penggantian medium disolusi, yaitu dengan menambahkan 5 ml medium disolusi ke dalam wadah disolusi dengan menggunakan spuit dan kertas penyaring berukuran 0,45 μ m bekas mencuplik sampel sebelumnya. Sampel yang telah dicuplik disaring dengan memasangkan kertas penyaring ke spuit, sebanyak ±1 ml sampel awal dibuang dan sisanya di tampung di dalam tabung reaksi yang bersih. Kemudian masing-masing sampel dari tiap waktu diencerkan dengan medium HCl pH 1,2 (untuk sampel cuplikanjam pertama) dan medium fosfat pH 6,0
(untuk sampel cuplikan jam ke 2-7) hingga kadarnya masuk ke dalam rentang konsentrasi kurva baku teofilin dalam masing-masing pelarut.
Masing-masing sampel larutan yang telah diencerkan diukur serapannya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 269,8 nm untuk sampel dengan medium dapar HCl pH 1,2 dan pada panjang gelombang 271,2 nm untuk sampel dengan medium dapar fosfat pH 6,0. Jumlah kumulatif obat yang dilepaskan dihitung dengan menggunakan persamaan kurva baku teofilin dalam medium dapar HCl pH 1,2 dan dapar fosfat pH 6,0, kemudian data persen kumulatif teofilin yang terdisolusi tiap waktu dianalisa dengan uji statistik untuk mengetahui apakah terdapat perbedaan persentase pelepasan teofilin tiap waktu antara obat A dan obat B.
3.4.7. Analisa Kinetika Pelepasan Obat
Untuk mengetahui mekanisme dan kinetika pelepasan teofilin dari tablet di dalam tubuh dilakukan dengan cara memplotkan hasil disolusi dengan persamaan kinetika orde nol, kinetika orde satu, Higuchi, dan Korsmeyer-Peppas (Patel, D.M., Patel, N.M. Patel, N.N. Pandya, P.D. Jogani, 2007)
Persamaan garis regresi linear untuk setiap model kinetika dibuat dengan cara (Reza, Md Selim, M.A. Quadir, S.S. Haider, 2003):
a. Kinetikaordenol
Hubungan linear untuk pelepasan orde nol ditunjukkan antara jumlah kumulatif yang dilepaskan matriks dengan waktu.
b. Kinetikaordesatu
Hubungan linear untuk pelepasan orde satu ditunjukkan antara logaritma persentase kumulatif obat yang tersisa dengan waktu.
c. Kinetika model Higuchi
Hubungan linear untuk pelepasan model Higuchi ditunjukkan antarapersentase kumulatif obat yang dilepaskan dengan akar waktu disolusi. d. Kinetika model Korsmeyer-Peppas
Hubungan linear untuk pelepasan Korsmeyer-Peppas ditunjukkan antaralogaritma persentase kumulatif obat yang dilepaskan <60% dengan
logaritma waktu yang ditunjukkan oleh nilai koefien korelasi mendekati satu (r2> 0,98).
Untuk menentukan kinetika pelepasan suatu obat, dapat dilihat dari harga R2 dari persamaan regresi linier yang didapatkan darimasing-masing tablet. Apabila R2mendekatisatu, maka dianggap kinetikanya mengikut pelepasan dari persamaan regresi dari orde yang bersangkutan (Wicaksono, Hendradi & Radjaram, 2005).
3.4.8. Analisa Satatistik
Pengolahan data dilakukan secara statistik dengan menggunakanmetode uji komparatif Independent Sample Test dengan program SPSS 16. Analisis statistik dilakukan terhadap data persentase kadar teofilin yang terdisolusi tiap waktu dari kedua sampel obat, yaitu obat A dan obat B. Sebelum dilakukan uji komparatif Independent Sample Test, data persentase kadar teofilin yang terdisolusi tiap waktu dari kedua sampel obat di lakukan uji normalitas distribusi dengan ujiSaphiro Wilkdan uji homogenitas data antar kelompok dengan metode
Levene’s Test. Data dikatakan terdistribusi normal dan homogen jika nilai sig >0,05. Uji komparatif Independent Sample Test dilakukan pada derajat kepercayaan 0,95 (p = 0,05). Dalam hal rancangan ini dapat diuji data persentase kadar teofilin yang terdisolusi tiap antar sampel terdapat perbedaan bermakna. Hal ini dapat diketahui dengan melihat nilai signifikansi (p). Bila nilai p yang dihasilkan <0,05, maka terdapat perbedaan yang bermakna antar data persentase kadar teofilin yang terdisolusi tiap waktu antara kedua sampel obat.