Saran - KESIMPULAN DAN SARAN - Pengaruh Penambahan Ekstrak Metanol Propolis dari Sarang Lebah T

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

5.2 Saran

Penelitian terhadap aktivitas antioksidan dari propolis Trigona sp., dari Lawang, Jawa Timur masih belum sempurna. Perlu dilakukan karakterisasi lebih lanjut terhadap komposisi senyawa-senyawa dalam propolis. Selanjutnya, diharapkan dapat dilakukan penelitian lebih

lanjut mengenai aktivitas biologis lainnya dari propolis Trigona sp. di Indonesia, seperti aktivitas antibakteri, antikanker, antipembengkakan dan sebagainya. Selain itu pengolahan lebih lanjut terhadap propolis Trigona sp., hingga dapat dikonsumsi oleh masyarakat sebagai alternatif pengobatan secara alami.

DAFTAR PUSTAKA

Administration, T. U. F. a. D., 2014. The U.S Food and Drug Administration. [Online]

Available at: www.fda.gov [Accessed 20 December 2017].

Ahumada, C., Saenz, T., Garcia, D., de la Puerta, Rocio et al., 1997. The effects of triterpene fraction

isolated from Crataegus monogyna Jacq. on differen acute inflammation models in rats and mice. Leucocyte migration and phospolipase A2 inhibition. J Pharm Pharmacol, 49(3), pp. 329-331.

Alaluf, S., 2010. Kosmetische Verwendung von

Petroselinsäure. Rotterdam, Nethserland, Patent No. 0001013178.

Alimentarius, C., 1976. Codex Standard for Flavoured Yoghurt (Yogurt) and Products Heat-Treated After Fermentation. Codex Stan, Issue A-11 (b). Allgeyer, L. C., Miller, M. J. & Lee, S. Y., 2010. Sensory

and microbiological quality of yogurt drinks with prebiotics and probiotics. J. Dairy Sci., Issue 93, pp. 4471-4479.

Astawan, M., 2008. Susu Fermentasi untuk Kebugaran dan Pengobatan. Yogyakarta: Universitas Atma Jaya.

Bankova, V., 1992. Original Article Propolis Produced in Bulgaria and Mongolia ; Phenolic Compounds and Plant Origin. Apidologic, Volume 23, pp. 79-85.

Bankova, V., 2005a. Chemical Diversity of Propolis and the Problem of Standardization. J. Etnopharma, Volume 100, pp. 114-117.

Bankova, V., 2005b. Recent Trends and Important Developments in Propolis Research. Evid-Based

Comlement. Altern. Med, Volume ECAM 2, pp. 29-32.

Bankova, V., 2005. Recent Trends and Important Development in Propolis Research. Evid-Based Complement Altern. Med., pp. 29-32.

Burdock, G. A., 1998. Review of the biological properties and toxicity of bee propolis. Food Chem Toxicol, 4(36), pp. 347-363.

Campos, J., dos Santos, U., Macorini, L., Mestriner, A. Balestieri, J., Gamero, E., Cardoso, C., Souza, K. dos Sntos, E., 2014. Antimicrobial, Antioxidant and Cytotoxic Activities of Propolis from

Melipona orbignyi (Hymenoptera, Apidae). Food Chem. Toxicol., Issue 65, pp. 374-380.

Carmona-Jiménez, Y., Garcia-Moreno, M. V., Igartuburu, J. M. & Barroso, C. G., 2014. Simplification of The DPPH Assay for Estimating The Antioxidant Activity of Wine and Wine By-Products. Food Chem, Volume 165, pp. 198-204.

Chandra, J. H. & Gunasekaran, H., 2017. Screening of phytochemical, antimicobial, and antioxidant activity of Glycyrrhiza glabra root extract. Journal of Environmental Biology, 38(1), pp. 161-165.

Cunha, I., Sawaya, A. Carvalho, P., 2004. Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts. J. Braz. Chem, pp. 964-970. Czecczot, H., 2000. Flavonoidy-naturalne antyoksydanty

w naszej diecie [in Polish]. Zyw. Czlow. Metab. , Volume 27, pp. 372-382.

Deng, Y., Chen, K. L., Yu, C., Deng, Z., .et al., 2010. In Vitro Antifungal Activity of the Extract and compound from Acorus tatarinowi Against Seven Plant Pathogenic Fungi. Agricultural Sciences in China, 9(1), pp. 71-76.

Dobrowolski, JW., Vohora, SB., Sharma, K., Shah, SA., Naqvi, SA., Dandiya, PC., 1991. Antibacterial, antifungal, antiamoebic, antiinflammatory and antipyretic studies on propolis bee products. J. Ethnopharmacol, Issue 35, pp. 77-82.

Duman, M. & Ӧzpolat, E., 2015. Effect of water extract of propolis on fresh shibuta (Barbus grypus) fillets during chilled storage. Food Chemistry, Issue 189, pp. 80-85.

Ghiralverti, E., 1979. Propolis : a review. Bee World, Issue 60, pp. 59-84.

Ghisalberti, E. L., 1979. Bee World, Issue 60, pp. 59-84. Ginting, N. & Pasaribu, E., 2005. Pengaruh temperatur

dalam pembuatan yoghurt dari berbagai jenis susu dengan menggunakan Lactobacillus bulgaricus dan Steptococcus thermophillus. Jurnal Agribisnis Peternakan, 1(2).

Gjorgievski, N. et al., 2015. Determination of Antioxidant Activity in Yogurt. Journal of Hygienic

Engineering and Design, pp. 88-91.

Greenaway, W., Scaysbrook, T. & Whatley, F. R., 1990. The composition and plant origins of plant origins of propolis: a report of work at Oxford. Bee World, Issue 71, pp. 107-118.

Handa, S. S., Khanuja, S. P. S., Longo, G. & Rakesh, D. D., 2008. Extractio Techniques for Medicinal and Aromatic Plants. ICS-UNIDO.

Harborne, J. B. & Williams, C. A., 2000. Advances in Flavonoid Research. Phytochemistry, Volume 55, pp. 481-504.

Hariyanto, R. A. B., Wahyudi, A. & Nugraheni, Z. V., 2017. Penentuan Kandungan Fenolik, Flavonoid dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Propolis Trigona sp.. Jurnal Sains dan Seni POMITS.

Havsteen, B., 1983. Flavonoids, a class of natural products of high pharmacological potency. Biochem. Pharmacol, Issue 32, pp. 1141-1148. Helferich, W. & Westhoff, D., 1980. All about yoghurt

prentice-Hall. New Jersey: Mc. Engel Wood-Cliffs.

Helferich, W. & Wishoff, D. C., 1978. Food

Microbiology. 3rd ed. New York: Mc Graw-Hill Book Company.

Hendayana, 2006. Kimia Pemisahan : Metode

Kromatografi dan Elektroforesis Modern, edisi pertama. Bandung: PT Remaja Rosdakarya. Hidayati, M. D., 2015. Pemisahan dan Indentifikasi

Antioksidan, Inhibitor a-Glukosidase dan Aldosa Reduktase dari Daun Salam (Syzygium

Polyanthum Wight).

Hidayat, I. R., 2013. Total bakteri asam laktat, nilai pH dan sifat organoleptik drink yoghurt dari susu sapi yang diperkaya dengan ekstrak buah mangga. Animal Agriculture Journal, 2(1), pp. 160-167. Hosni, K. et al., 2010. Volatile Oil Constituents of Rosa

canina L. : Quality As Affected by the Distillation Method. Organic Chemistry International, Volume 2010.

Huang, S. et al., 2014. Recent Advances in the Chemical Composition of Propolis. Mol. Basel. Switz, Volume 19, pp. 19610-19632.

Kamara, D. S. et al., 2016. Pembuatan dan Aktivitas Antibakteri Yogurt Hasil Fermentasi Tiga Bakteri (Lactobacilus bulgaricus, Streptococcus

thermophilus, Lactobacilus acidophilus). Al-Kimia, 4(2), pp. 22-32.

Karadag, A., Ozcelik, B. & Saner, S., 2009. Review of Methods to Determine Antioxidant Capacities. Food Anal. Methods 2, pp. 41-60.

Kohlmunzer, S., 2003. Farmakognozja. 5th ed. Warszawa, Poland: PWN.

Leja, M. et al., 2007. Antioxidative properties of bee pollen in selected plant species. Food Chem, Issue 100, pp. 237-240.

Majewska, M. & Czeczot, H., 2009. Flavonoids in Pevention and Therapy of Diseases. Farm Pol, Volume 65, pp. 369-377.

Majiene, D., Trumbeckaite, S., Pavilonis, A., Savickas, A., Martirosyan, D. M., 2007. Antifungal and Antibacterial Activity of Propolis. Current Nutr. Food Sci, Volume 3, pp. 304-308.

Makowska-Was, J. & Janeczko, Z., 2004. Bioavailability of plant polyphenols. Post. Fitoter, Volume 4, pp. 126-137.

Marcucci, M. C., 1995. Propolis : chemical composition, biological properties and therapeutic activity. Apidologie, Issue 26, pp. 83-99.

Martysiak-Żurowska, D. & Wenta, W., 2012. A Comparison of ABTS and DPPH Methods for Assessing The Total Antioxidant Capacity of Human Milk. Acta Sci. Pol. Technol. Aliment, Issue 11, pp. 83-85.

McLean, V., 1982. Fermented dairy products. In: G. Reed, ed. Prescott and Dunn's Industrial

Microbiology. Westport: AVI Publishing Co, pp. 113-184.

McNair, H. M., 2009. Basic Gas Chromatography. 2nd ed. New Jersey: John Wiley & Sons.

Meda, A. et al., 2005. Determination of the total phenolic, flavonoid, and proline content in Burkina Fasan honey, as well as their scavenging acivity. Food Chemistry, Issue 91, pp. 571-577.

Mishima, S., Inoh, Y., Narita, Y., Ohta, S., Sakamoto, T., Araki, Y., Suzuki, K. M., Akao, Y., Nozawa, Y.,

2005. Identification of caffeoylquinic acid

derivatives from Brazilian propolis as constituents involved in induction of HL-60 cells. Bioorg. Med. Chem, Issue 13, pp. 5814-5818.

Mulja, M. & Suharman, 1995. Analisis Instrumental. Surabaya: Airlangga University Press. Mulja, M. & Syahrani, A., 1990. Aplikasi Analisis

Spektrofotometri UV-Vis. Surabaya: Mechpiso Grafika.

Nugraheni, Z. Zetra, Yulfi. Trianita, Aldila Mega. Syahputra, Muhammad Yudha. Firmany, Ahmad Rizal, 2016. Antioxidant activity in natural beehive’s (Apis mellifera) bioactive compound from Malang, Indonesia. Presented at the

INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON CURRENT PROGRESS IN MATHEMATICS AND

SCIENCES 2015 (ISCPMS 2015): Proceedings of the 1st International Symposium on Current Progress in Mathematics and Sciences, AIP Publishing, p. 20053.

Ostrowska, J. & Skrzydlewska, E., 2005. The biological activity of flavonoids. Post. Fitoter, pp. 71-79. Paulino, N., Dantas, A. P., Bankova, V. Longhi, D. T.,

Scremin, A., de Castro, S. L., Calixto, J. B.., 2003. Bulgarian Propolis Induces Analgesic and Anti-inflammatory Efects in Mice and Inhibits in vitro Contraction of Airway Smooth Muscle. J. Pharm. Sci, Volume 92, pp. 307-313.

Pederson, C., 1971. Microbiology of Feed Fermentation. West Port: The AVI Pul. Co. Inc..

Peschel, W., Rabaneda, F. S., Diekmann, W., Plescher, A., Gartzia, I., Jimenez, D., Lamuela-Raventos, R., Buxaderas, S., Codina, C., 2006. Natural Antioxidants from Vegetables and Fruit Wastes. 137-150(97).

Pietta, P. G., 2000. Flavonoids as Antioxidants. J. Nat. Prod, Volume 63, pp. 1035-1042.

Prakash, A., Rigelhof, F. & Miller, E., 2001. Antioxidant Activity. Medallion Lab Anal. Prog., Volume 19, pp. 1-4.

Rasooli, I., 2011. BIoactive Compounds in Phytomedicine. Croatia: s.n.

Rice-Evans, C. A., Miller, N. J. & Paganga, G., 1996. Structure antioxidant activity relationships of flavonoids and phenolic acid. Free Radic. Biol. Med, Issue 20, pp. 933-956.

Rouessac, F. & Rouessac, A., 1994. Chemical Analysis Modern Instrumentation Method and Techniques. 2nd ed. USA: John Willey & Sons.

Sanders, M., 1999. Probiotics. Food Technol, Issue 53, pp. 67-77.

Schnitzler, P., Neuner, A., Nolkemper, S., Zundel, C., Nowack, H., Sensch, K.H., Reichling, J., 2010. Antiviral Activity and Mode of Action of Propolis Extracts and Selected Compounds. Phytother Res., Volume 24, pp. 20-28.

Sforcin, J. M., 2016. Biological Properties and

Therapeutic Applications of Propolis. Phytoter. Res PTR, Issue 30, pp. 894-905.

Sheela, V. & Uthayakumari, F., 2013. GC-MS analysis of bioactive constituents from coastal sand dune taxon - Sesuvimportulacastrum (L.).

BiosciDiscov, Issue 4, pp. 47-53.

Silva, C. R., Baltazar, F. & Almeida-Aguiar, C., 2015. Propolis : A Complex Natural Product With A Plethora of Biological Activities that can be Explored for Drug Development. Evid Based Comp. Alter. Med, pp. 1-30.

Silva, J. C., Rodrigues, S., Feas, X. & Estevinho, L. M., 2012. Antimicrobial Activity, Phenolic Profile

and Role in the Inflammation of Propolis. Food Chem Tox., Volume 50, pp. 1790-1795.

Solomon, T. W. G., 1976. Organic Chemistry. 2nd ed. USA: John Willey & Sons.

Sulaiman, G. M. et al., 2011. Chemical Characterization of Iraqi Propolis Samples and Assesing their Antioxidant Properties. Food Chem Tox, Volume 49, pp. 2415-2421.

Sultana, B., Anwar, F. & Ashraf, M., 2009. Effect of Extraction of Solvent/Technique on the

Antioxidant Activity of Selected Medicinal Plant Extracts Molecules. Issue 14, pp. 2167-2180. Tamat, S. R., Wikanta, T. & Maulina, L. S., 2007.

Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Senyawa Bioaktif dan Ekstrak Rumput Laut Hijau Ulva reticulata Forsskal. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, 5(1), pp. 31-36.

Tapas, A. R., Sakarkar, D. M. & Kakde, R. B., 2008. Flavonoids as neutraceuticals : A review. Trop. J. Pharm. Res, Issue 65, pp. 1089-1099.

Thirugnanasampandan, R., Sayana, B. R. & Jayakumar, R., 2012. Analysis of chemical composition and bioactive property evaluation of Indian propolis. Asia Pasific Journal of Tropical Biomedicine, pp. 651-654.

Valencia, D. Alday, E., Robles-Zepeda, R., Garibay-Escobar, A., Juan, C., Galvez-Ruiz, Salas-Reyes, M., Jiménez-Estrada, M., Velazquez-Contreras, E., Hernandez, J., Velazquez, C., 2012. Seasonal Effect on Chemical Composition and Biological Activities of Sonoran Propolis. Food Chem, Volume 131, pp. 645-651.

Velazquez, C., Navarro, M., Acosta, A., Angulo, A., Dominguez, Z., Robles, R., Robles-Zepeda R, Lugo, E., Goycoolea, FM., Velazquez, E. F.,

Astiazaran, H., Hernandez, J., 2007. Antibacterial and Free Radical Scavenging Activities of Sonora Propolis. J. Appl. Microbial, Volume 103, pp. 1747-1756.

Viera, V. B., Piovesan, N. Moro, K. I. B., Rodrigues, A. S., Scapin, G., da Rosa, C. S., Kubota, E. H., 2016. Preparation and microbiological analysis of Tuscan sausage with added propolis extract. Food Sci. Tech., 36(1), pp. 37-41.

Watanabe, M. A. E., Amarante, M. K., Conti, B. J. & Sforcin, J. M., 2011. CytotoxicConstituents of Propolis Inducing Anticancer Effects : A Review. J. Pharm. Pharmacol, Volume 63, pp. 1378-1386.

Winarno, F. G., Fardiaz, S. & Fardiaz, D., 1981.

Pengantar Teknologi Pangan. 2 ed. Jakarta: PT. Gramedia.

Yuliana, N. D., Wijaya, C. H. & Nasrullah, N., 2013. Classification of Trigona sp. bee propolis from 4 regions in Indonesia using FTIR metabolomics approach. Singapore, 13th ASEAN Food Conference.

Diekstrak dengan metanol

Komposisi Karakterisasi

KG-SM Aplikasi

- Uji Total Fenolik - Uji Total Flavonoid

- Uji Total Protein

- Uji Aktivitas Antioksidan ^Ditambahkan pada yoghurt

- Uji pH

- Uji Aktivitas Antioksidan Hasil Hasil Hasil

LAMPIRAN

A. Skema Kerja Sarang Lebah Ekstrak Propolis

54 B. Diagram Alir

1. Ekstraksi Propolis 25 gram Sarang Lebah

kering

250 mL Metanol

Diaduk selama 1 jam pada suhu 60°C dengan kecepatan 450 rpm menggunakan stirrer

Residu

Disaring campuran

Didiamkan selama semalam dalam kulkas

Hasil

Filtrat

Disaring

Endapan Filtrat

Dicuci dengan

60 mL metanol

Endapan Filtrat

Dievaporasi pada suhu 50°C dengan rotary

evaporator

Dimasukkan ke dalam botol vial Disimpan dalam kulkas

2. Analisa Total Kandungan Fenolik

1 mL ekstrak propolis

5 mL Reagen Folin Ciocalteu encer (1:50)

4 mL Na2CO3 0,4 M

Diinkubasi 2 jam Pada suhu ruang dan Ruang gelap

Diukur absorbansi pada panjang gelombang 765 nm

Dihitung konsentrasi senyawa-senyawa fenolik dalam ekstrak propolis

3. Analisa Total Kandungan Flavonoid 0,4 mL ekstrak propolis

9,6 mL akuades

1,2 mL H2SO4 0,2 M

1,2 mL NaNO2 3 M

1,2 mL NaOH 10%

Diinkubasi 15 menit di suhu ruang dan ruang gelap

Diukur absorbansi pada panjang gelombang 395 nm

Dihitung Konsentrasi senyawa-senyawa flavonoid dalam ekstrak propolis

4. Analisa Aktivitas Antioksidan

1 mL ekstrak propolis

9 mL DPPH 60µM

Ditutup tabung reaksi dengan plastik wrap dan alumunium foil

Diinkubasi 30 menit pada suhu ruang dan ruang gelap

Diukur absorbansi pada panjang gelombang 517 nm

Dihitung nilai % dekolorisasi ekstrak propolis

58 5. Analisa Total Protein

1 mL ekstrak propolis

0,1 mL aquabides

5 mL Reagen Bradford

Didiamkan selama 5 menit dalm suhu ruang

Diukur absorbansi pada panjang gelombang 595 nm

59 6. Analisa dengan KG-SM

1 mL ekstrak propolis

50 μL 3-(4-hidroksifenil)-1-propanol

Dievaporasi pada atmosfer N2

Setelah kering, ditambahkan 100 μL BSTFA

Dipanaskan pada gelas beker berisi air bersuhu 70°C selama 20 menit

Diinjeksikan 1 μL pada KG-SM

Dianalisa hasil kromatogram ekstrak propolis

60 7. Pembuatan Yoghurt

Empat erlenmeyer dilabeli kontrol, A, B, dan C

Dihangatkan 150 mL susu pasteurisasi pada suhu 40-42°C selama 30 menit Ditambahkan bibit yoghurt 1,25 gram

Diinkubasi pada suhu ruang

Diukur pH menggunakan pH universal

61 8. Fortifikasi Yoghurt

1 mL ekstrak propolis

2 mL aquabides steril

150 mL yoghurt

Diaduk hingga homogen

Diukur pH menggunakan pH universal

Diukur pH dan aktivitas antioksidan pada hari ke 3, 6, 10, 14, 21, dan 30

62 C. Data dan Perhitungan 1. Ekstraksi Propolis

 Perhitungan (%) Kadar air

Diketahui: Massa Kaca Arloji (MKA) = 27,4087 g

Massa Sarang Lebah Awal (MSL0) = 0,7533 g

Massa Sarang Lebah Akhir (MSL1) = 0,7046 g (%) Kandungan Air = MSL0−MSL1 MSL0 ^{x 100%} = 0,7533 g−0,7046 g 0,7533 g ^{x 100%} = 0,0487 g 0,7533 g^{x 100%} = 0,0646 x 100% = 6,46 %

2. Analisa Total Kandungan Fenolik

 Perhitungan Pembuatan Larutan Na2CO3

0,4 M m = n x Mr = M xV x Mr = 0,4 x 0,1 x 105,99 (𝑚𝑜𝑙 𝐿 ^{x L x} 𝑔 𝑚𝑜𝑙⁾ = 4,2396 gram

*Keterangan: m: massa; Mr: Massa molekul relatif; V:

a. Pembutan larutan stok Asam Galat 100 ppm 100 ppm = 100 µ𝑔 𝑚𝐿^{= 10}^-4 𝑔 𝑚𝐿^{= 10}^-2 𝑔 100 𝑚𝐿

Jadi pembuatan larutan stok asam galat dilakukan dengan melarutkan 0,01 g asam galat dalam beberapa mL pelarut, lalu diencerkan kembali hingga tanda batas labu ukur 100 mL.

b. Pengenceran larutan stok asam galat 100 ppm menjadi konsentrasi 80,60,40 dan 20 ppm V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 100 µg/mL = 0,025 L x 80 µg/mL V1 = 0,02 L V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 100 µg/mL = 0,025 L x 60 µg/mL V1 = 0,015 L V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 100 µg/mL = 0,025 L x 40 µg/mL V1 = 0,010 L V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 100 µg/mL = 0,025 L x 20 µg/mL V1 = 0,005 L

*Keterangan: V1: Volume larutan stok; V2: Volume pelarut; M1: Konsentrasi larutan stok; M2: Konsentrasi setelah pengenceran

64 0.000 0.189 0.369 0.555 0.713 0.850 y = 0.0086x + 0.0166 R² = 0.9969 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 0 20 40 60 80 100 120 Ab so rb an si Konsentrasi (µg/mL)

Kurva Standar Asam Galat

 Kurva Standar dan Total Kandungan Fenolik

Data Absorbansi Kurva Standar Asam Galat Ekstrak Propolis dalam Pelarut Metanol

Konsentrasi (µg/mL) ^{Absorbansi Ke} Absorbansi rata rata

1 2 3 0 0 0 0 0,000 20 0,188 0,188 0,190 0,189 40 0,369 0,369 0,369 0,369 60 0,552 0,556 0,556 0,555 80 0,711 0,712 0,716 0,713 100 0,850 0,851 0,850 0,850

Contoh Perhitungan Total Kandungan Fenolik

TKF = C x V x FP x 1

𝑆𝐿𝐾

TKF = 67,256 µg/mL x 1 mL x 16 x 1

23,385 𝑔

= 46,016 µg/g

Keterangan: C=Konsentrasi sampel yang didapat dari perhitungan persamaan regresi linier; V= Volume

Ekstrak yang digunakan; FP= Faktor pengenceran; SLK= Sarang Lebah Kering; SD= Standar Deviasi; EPMe= Ekstrak Propolis Metanol

Nama Ekstrak ^{Absorbansi Ke} ^Absorbansi

rata rata ^SD

1 2 3

EPMe 0,595 0,585 0,597 0,592 0,006

Konsentrasi (µg/mL) _{Konsentrasi rata-rata} _SD

1 2 3 67,256 66,093 67,488 _66,946 _0,748 SLK (g) FP ^V (mL) Total Kandungan Fenolik (TKF) Rata-Rata ^SD TKF Akhir (µg/g) 1 2 3 23,385 16 1 46,016 45,221 46,175 45,804 0,511 45,804 ± 0,511

3. Analisa Total Kandungan Flavonoid

 Perhitungan Pembuatan Larutan NaNO2 3 M m = n x Mr = M x V x Mr = 3 x 0,1 x 69 (𝑚𝑜𝑙 𝐿 ^{x L x} 𝑔 𝑚𝑜𝑙⁾ = 20,7 gram

*Keterangan: m: massa; Mr: Massa molekul relatif; V:

Volume H2O Perhitungan Pembuatan H2SO4 0,2 M M H2SO4 = 𝑛 𝑣 M = 𝑚𝑡 (𝑔) 𝑀𝑟 (_𝑚𝑜𝑙^𝑔 )𝑥 𝑉(𝐿) M = 𝑚𝑡 (𝑔) 𝑚𝑟 (_𝑚𝑜𝑙^𝑔 ) 𝑥 𝑣 (𝐿) M = 𝑚𝑡 (𝑔)𝑥 𝜌 (_𝑚𝐿^𝑔) 𝑚𝑙 (𝑔)𝑥 𝑚𝑟 (_𝑚𝑜𝑙^𝑔 ) 𝑥 𝑣 (𝐿) M = 98 𝑥 1,84 100 𝑥 98,08 𝑥 0,1( ^𝑔𝑥 𝑔 𝑚𝐿 𝑔 𝑥_𝑚𝑜𝑙^𝑔 𝑥 𝐿 ) M = 18,38 M Pengenceran H2SO4 18,30 M menjadi 0,2 M V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 18,30 M = 0,1 L x 0,2 M V1 = 1,09 mL

* Keterangan: %: persentase konsentrasi H2SO4; M: Molar

Konsentrasi H2SO4; ρ: densitas; Mr: Massa molekul relatif;

V1: Volume H2SO4 18,30 M; V2: Volume H2O; M1:

Konsentrasi awal; M2: Konsentrasi setelah pengenceran.

 Pembuatan Larutan Standar Kuersetin  Pembutan larutan stok 100 µg/mL

100 µ𝑔 𝑚𝐿^{= 10}^-4 𝑔 𝑚𝐿^{= 10}^-2 𝑔 100 𝑚𝐿

Jadi pembuatan larutan stok kuersetin

dilakukan dengan melarutkan 0,01 g kuersetin dalam beberapa mL pelarut, lalu diencerkan kembali hingga tanda batas labu ukur 100 mL.  Pengenceran larutan stok kuersetin 100 ppm

menjadi konsentrasi 80,60,40 dan 20 ppm V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 100 µg/mL = 0,025 L x 80 µg/mL V1 = 0,02 L V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 100 µg/mL = 0,025 L x 60 µg/mL V1 = 0,015 L V1 x M1 = V2 x M2

68 V1 x 100 µg/mL = 0,025 L x 40 µg/mL V1 = 0,010 L V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 100 µg/mL = 0,025 L x 20 µg/mL V1 = 0,005 L

*Keterangan: V1: Volume larutan stok; V2:

Volume pelarut; M1:

Konsentrasi larutan stok;

M2: Konsentrasi setelah

pengenceran

 Kurva Standar dan Total Kandungan Flavonoid

Data Absorbansi Kurva Standar Kuersetin Ekstrak Propolis dalam Pelarut Metanol

Konsentrasi (µg/mL)

Absorbansi Ke Absorbansi rata-rata 1 2 3 0 0 0 0 0,000 4 0,160 0,145 0,145 0,150 8 0,318 0,299 0,298 0,305 12 0,49 0,458 0,452 0,467 16 0,708 0,606 0,601 0,638 20 0,830 0,757 0,757 0,781

69 0.000 0.150 0.305 0.467 0.638 0.781 y = 0.0395x - 0.005 R² = 0.9995 -0.200 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 0 5 10 15 20 25 Ab so rb an si Konsentrasi (µg/mL)

Kurva Standar Kuersetin

Nama Ekstrak ^{Absorbansi Ke} ^Absorbansi

rata rata ^SD 1 2 3 EPMe 0,614 0,614 0,611 0,613 0,002 Konsentrasi (µg/mL) ^Konsentrasi rata-rata ^SD 1 2 3 15,418 15,418 15,342 15,392 0,044 SLK (g) ^FP V (mL) Total Kandungan Flavonoid (TKFL) Rata-Rata ^SD TKFL Akhir (µg/g) 1 2 3 23,385 25 0,4 6,593 6,593 6,561 6,582 0,019 6,582 ± 0,019

Contoh Perhitungan Total Kandungan Flavonoid

TKFL = C x V x FP x 1 𝑆𝐿𝐾

TKFL = 15,418 µg/mL x 0,4 mL x 25 x 1 23,385 𝑔

= 6,593 µg/g

Keterangan: C= Konsentrasi sampel yang didapat dari perhitungan persamaan regresi linier; V= Volume Ekstrak yang digunakan; FP= Faktor pengenceran; SLK= Sarang Lebah Kering; SD= Standar Deviasi; EPMe= Ekstrak Propolis Metanol

4. Uji Aktivitas Antioksidan  Pembuatan larutan DPPH 60 µM 60 µM = 6 x 10-5 M m = n x Mr m = M x V x Mr m = 6 x 10-5𝑚𝑜𝑙 𝐿 ^{x 0,1 L x 394,3} 𝑔 𝑚𝑜𝑙 m = 0,0024 gram

 Data Uji Aktivitas Antioksidan

Nama Ekstrak Absorbansi

DPPH + Metanol 0,565

EpMe (1) 0,098

EpMe (2) 0,098

 Perhitungan % Dekolorisasi

Perhitungan % dekolorisasi

 % dekolorisasi = (1-0,098/0,565)*100 = 82,655%

5. Analisis Total Protein

 Pembutan larutan stok BSA 1000 ppm

1000 ppm = 1000 µ𝑔 𝑚𝐿^{= 10}^-3 𝑔 𝑚𝐿^{= 10}^-1 𝑔 100 𝑚𝐿

Jadi pembuatan larutan stok BSA dilakukan dengan melarutkan 0,025 g asam galat dalam beberapa mL pelarut, lalu diencerkan kembali hingga tanda batas labu ukur 25 mL.

Nama Ekstrak

Absorbansi

Kontrol ^{Absorbansi Sampel}

Absorbansi Rata-Rata ^SD EPMe 0,565 0,098 0,098 0,098 0,098 0 % dekolorisasi SD ^{% dekolorisasi} rata-rata ^{% dekolorisasi} 82,655 82,655 82,655 0 82,655 82,655

 Pengenceran larutan stok BSA 1000 ppm menjadi konsentrasi 50, 100, 150, 200, dan 300 ppm V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 1000 µg/mL = 0,010 L x 300 µg/mL V1 = 0,003 L V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 1000 µg/mL = 0,010 L x 200 µg/mL V1 = 0,002 L V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 1000 µg/mL = 0,010 L x150 µg/mL V1 = 0,0015 L V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 1000 µg/mL = 0,010 L x 100 µg/mL V1 = 0,001 L V1 x M1 = V2 x M2 V1 x 1000 µg/mL = 0,010 L x 50 µg/mL V1 = 0,0005 L

*Keterangan: V1: Volume larutan stok; V2: Volume pelarut; M1: Konsentrasi larutan stok; M2: Konsentrasi setelah pengenceran

73 y = 0.0015x + 0.0041 R² = 0.9959 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 0 50 100 150 200 250 300 350

Kurva Standar BSA

 Kurva Standar dan Total Kandungan Protein

Data Absorbansi Kurva Standar Bovine Serum Albumin Ekstrak Propolis dalam Pelarut Metanol

Konsentrasi (µg/mL) ^{Absorbansi Ke} Absorbansi rata rata

1 2 3 0 0 0 0 0,000 50 0.077 0.078 0.078 0.078 100 0.150 0.149 0.150 0.150 150 0.250 0.249 0.250 0.250 200 0.318 0.319 0.319 0.319 300 0.451 0.451 0.451 0.451

Contoh Perhitungan Total Kandungan Protein

TKP = C x V x 1

𝑆𝐿𝐾^{x fp}

TKP = 116,6 µg/mL x 1 mL x 1

23,385 𝑔^{x 5}

= 24,931µg/g

Keterangan: C=Konsentrasi sampel yang didapat dari perhitungan persamaan regresi linier; V= Volume

Ekstrak yang digunakan; FP= Faktor pengenceran; SLK= Sarang Lebah Kering; SD= Standar Deviasi; EPMe= Ekstrak Propolis Metanol

Nama Ekstrak ^{Absorbansi Ke} ^Absorbansi

rata rata ^SD 1 2 3 EPMe 0.179 0.179 0.179 0.179 0,000 Konsentrasi (µg/mL) Konsentrasi rata-rata SD 1 2 3 116,6 116,6 116,6 _116,6 _0,000 SLK (g) FP ^V (mL) Total Kandungan Protein Rata-Rata ^SD TKP Akhir (µg/g) 1 2 3 23,385 5 1 24,931 24,931 24,931 24,931 24,931

75 6. Fortifikasi Yoghurt  pH yoghurt  Tabel % Dekolorisasi mL penambahan EpMe

% Dekolorisasi Hari Ke-

3 6 10 14 21 30 0 (kontrol) 0.092 3.756 8.333 9.499 10.583 10.924 40 (A) 59.504 78.932 51.304 56.991 57.161 58.177 80 (B) 61.295 80.810 57.174 82.713 83.080 83.521 100 (C) 82.920 83.803 86.087 87.080 87.576 87.953 Nama Ekstrak pH Hari Ke- 1 3 6 10 14 21 30 kontrol 6 5 4 4 4 4 4 EpMe + A 5 5 4 4 4 5 5 EpMe + B 5 5 4 4 4 5 5 EpMe + C 5 5 4 4 4 5 5

76  Fragmentasi KG-SM

BIODATA PENULIS

Penulis bernama Nia Paramitha. Penulis yang dilahirkan di Tangerang, 12 Juni 1996 ini merupakan anak tunggal dari pasangan Anim Mulyana dan Nining Ratnaningrum. Penulis telah menempuh pendidikan formalnya di TK Kartini Bogor (2000-2001), SDIT Baitussalam (2001-2004), SDN Polisi 4 Kota Bogor (2005-2007) SMP Negeri 4 Bogor (2007-2010) dan SMK SMAK Bogor (2010-2014). Penulis melanjutkan jenjang pendidikan S1 di Jurusan Kimia FMIPA ITS melalui jalur PKM dan terdaftar dengan Nomor Registrasi Pokok (NRP) 01211440000096. Pada tahu kedua dan ketiga penulis aktif sebagai presenter dan reporter ITS TV (youtube.com/eurekatvits) dan memegang amanah sebagai sekretaris selama 2 tahun. Pada tahun kedua dan ketiga penulis juga aktif mengikuti kepanitiaan dari berbagai acara yang diselenggarakan di lingkungan Jurusan, Fakultas dan Institut seperti Chemistry Week, PETROLIDA, YES Summit, dan AYCF. Penulis pernah menjalani kerja praktik di Laboratorium PDAM Tirta Pakuan Kota Bogor . Penulis menyelesaikan program Sarjana dengan mengambil tugas akhir di bidang Geokimia Organik Molekuler dibawah bimbingan Zjahra Vianita Nugraheni, M.Si. dan Herdayanto Sulistyo Putro, M.Si. Penulis dapat dihubungi melalui email:

Dalam dokumen Pengaruh Penambahan Ekstrak Metanol Propolis dari Sarang Lebah Trigona sp. Terhadap Aktivitas Antioksdan Yoghurt - ITS Repository (Halaman 53-96)