BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN
6.2 Saran
a. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk memisahkan masing-masing senyawa penyusun ekstrak etanol bakung putih dan menentukan aktivitas antibakteri dari masing-masing senyawa tersebut.
b. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan menggunakan bakteri uji lainnya.
DAFTAR PUSTAKA
Ajizah A. (2004). Sensitivitas Salmonella typhimurium Terhadap Ekstrak Daun Psidium guajava L. Bioscientiae, 1(1): 31-38.
Anonim. (2001). British Pharmacopoeia. Published on The Recommendation of The Medicines Commission. The Stationery Office, London.
Anonim. (2010). Ecology and Evolutionary Biology Plant Growth Facilitie, University of Connecticut. http://titanarum.uconn.edu/198500560.html. Diakses 21 Maret 2010 pukul 17.41
Athikomkulchai, S.; Watthanachaiyingcharoen, R.; Tunvichien, S.; Vayumhasuwan, P.; Karnsomkiet, P.; Sae-Jong, P. & Ruangrungsi, N. (2008). The Development of Anti-Acne Products from Eucalyptus globulus and Psidium guajava Oil. J Health Res, 22(3): 109-113.
Brooks, G.F.; Butel, J.S & Morse, S.A. (2005). Mikrobiologi Kedokteran. Penerjemah Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Salemba Medika, Jakarta.
Brunton, L.L.; Lazo, J.S. & Parker, K.L. (2006). Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Ed. The Mcgraw-Hill Companie, United States of America.
Burkhart, C.G.; Burkhart, C.N. & Lehmann, P.F. (1999). Acne: A Review of Immunologic and Microbiologic Factors. Postgrad Med J, 75: 328– 331.
Chomnawang, M.T.; Surassmo, S.; Nukoolkarn, V.S. & Gritsanapan, W. (2005). Antimicrobial Effects of Thai Medicinal Plants Against Acne-Inducing Bacteria. Journal of Ethnopharmacol, 10: 303-330.
Cowan, M.M. (1999). Plant Products as Antimicrobial Agents. Clinical Microbiology Reviews, 12(4): 564-582.
Cox, S.D.; Mann, C.M.; Markham, J.L.; Gustafson, J.E.; Warmington, J.R. & Wyllie, S.G. (2001). Determining the Antimicrobial Actions of Tea Tree Oil. Molecules 6; 87-91.
Departemen Kesehatan RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
--- . (1986). Sediaan Galenik. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
--- . (1979). Farmakope Indonesia, Edisi Ketiga. Dirjen POM, Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Ganiswarna, S.G. dkk. (1995). Farmakologi dan Terapi, Edisi IV. Gaya Baru, Jakarta.
Han, S.M.; Lee, K.G.; Yeo, J.H.; Baek, H.J. & Park, K. (2010). Antibacterial and Anti-Inflammatory Effects of Honeybee (Apis Mellifera) Venom Against Acne-Inducing Bacteria, Journal of Medicinal Plants Research, 4(6): 459-464.
Hargono, Dj.; Farouq; Santoso, S.O.; Mardiaty & Djubaedah, E. (1985). Tanaman Obat Indonesia, Jilid I. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
--- .(1985). Tanaman Obat Indonesia, Jilid II. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
Heyne, K. (1987). Tumbuhan Berguna Indonesia. Diterjemahkan oleh Badan Litbang Kehutanan. Yayasan Sarana Wana Jaya, Jakarta.
Katzung, B.G. (1997). Farmakologi Dasar dan Klinik, Edisi VI. Alih Bahasa, Staf Dosen Farmakologi Fakultas Kedokteran UNSRI. EGC, Jakarta. Khan, Z.Z.; Assi, M. & Moore, T.A. (2009). Recurrent Epidural Abscess Caused
by Propionibacterium acnes. Kansas Journal of Medicine: 92-95.
Kim, S.C.; Kang, J.I.; Kim, M.K.; Hyun, J.H.; Boo, H.J.; Park, D.B.; Lee, Y.J.; Yoo, E.S.; Kim, Y.H.; Kim, Y.H. & Kang, H.K. (2010). Promotion Effect of Norgalanthamine, a Component of Crinum asiaticum, on Hair Growth. Eur J Dermatol, 20(1): 42-48.
Kim, Y.H.; Kim, K.H.; Han, C.S.; Park, S.H.; Yang, H.C. Lee, B.Y.; Eom, S.Y.; Kim, Y.S.; Kim, J.H. & Lee, N.H. (2008). Anti-Inflammatory Activity of Crinum asiaticum Linne var. japonicum Extract and its Application as a Cosmeceutical Ingredient. J Cosmet Sci, 59(5): 419-430. Kim, Y.H.; Park, E.J.; Park, M.H.; Badarch, U.; Woldemichael, G.M. & Beutler,
J.A. (2006). Crinamine from Crinum Asiaticum var. japonicum Inhibits Hypoxia Inducible Factor-1 Activity But Not Activity of Hypoxia Inducible Factor-2. Biol Pharm Bul, 29(10): 2140-2142.
Margolis, D.J.; Bowe ,W.P.; Hoffstad, O. & Berlin, J.A. (2005). Antibiotic Treatment of Acne May Be Associated With Upper Respiratory Tract Infections. Arch Dermatol, 141: 1132-1136.
Mertaniasih, N.M.; Mudihardi, E.; K, Eko B.; Wiqoyah, N. & Debora, K. (1996). Kepekaan Mikroba dari Akne Vulgaris Terhadap Beberapa Antibiotika. Media IDI, 21(2): 9-11.
Miksusanti; Jennie, B.S.L.; Panco, B. & Trimulyadi, G. (2008). Kerusakan Dinding Sel Escherichia coli K1.1 oleh Minyak Atsiri Temu Kunci (Kaempferia pandurata). Berita Biologi 9 (1).
Min, B.S.; Gao, J.J.; Nakamura, N.; Kim, Y.H. & Hattori, M. (2001). Cytotoxic Alkaloids and a Flavan from the Bulbs of Crinum Asiaticum var. japonicum. Chem Pharm Bul, 49(9): 1217-1219.
Naufalin, R. (2005). Kajian Sifat Antimikroba Ekstrak Bunga Kecombrang (Nicolaia speciosa Horan) Terhadap Berbagai Mikroba Patogen dan Perusak Pangan. [Tesis] Jurusan Teknologi Pangan, Fakultas Pertanian, IPB, Bogor.
Nellasari; Soediro, I & Suganda, A.G. (1984). Pemeriksaan Fitokimia Ekstrak Etanol dari Daun dan Umbi Bakung Putih (Crinum asiaticum Linn.). http://bahan-alam.fa.itb.ac.id. Diakses 4 Januari 2010 pukul 15.17
Nelson, L.S; Shih R.D & Balict M.J. (2007). Handbook of Poisonous and Injurious Plants, 2nd Ed. Springer, New York.
Pelczar, M.J. & Chan, E.C.S. (1986). Dasar-Dasar Mikrobiologi, Jilid 1. UI Press, Jakarta.
Pratiwi, S.T. (2008). Mikrobiologi Farmasi. Erlangga, Jakarta.
Saising, J.; Hiranrat, A.; Mahabusarakam, W.; Ongsakul, M. & Voravuthikunchai, S.P. (2008). Rhodomyrtone from Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk. as a Natural Antibiotic for Staphylococus Cutaneous Infections. Journal of Health Science, 54(5) 589-595.
Samud, A.M.; Asmawi, M.Z.; Sharma, J.N. & Yusof, A.P. (1999). Anti-Inflammatory Activity of Crinum asiaticum Plant and its Effect on Bradykinin-Induced Contractions on Isolated Uterus. Immunopharmacology, 43(2-3): 311-316.
Sugita, T.; Miyamoto, M.; Tsuboi, R.; Takatori, K.; Ikeda, R. & Nishikawa, A. (2010). In Vitro Activities of Azole Antifungal Agents against Propionibacterium acnes Isolated from Patients with Acne Vulgaris. Biol
Pharm Bull. 33(1): 125-127.
Sukatta, U.; Rugthaworn, P.; Pitpiangchan, P. & Dilokkunanant, U. (2008). Development of Mangosteen Anti-Acne Gel, Kasetsart J. (Nat. Sci) 42: 163-168.
Suliantari. (2009). Aktivitas Antibakteri dan Mekanisme Penghambatan Ekstrak Sirih Hijau (Piper betle Linn) Terhadap Bakteri Patogen Pangan. [Disertasi] Jurusan Ilmu Pangan, Sekolah Pascasarjana, IPB, Bogor.
Sun, Q.; Shen, Y.H.; Tian, J.M.; Tang, J.; Su, J.; Liu, R.H.; Li, H.L.; Xu, X.K. & Zhang, W.D. (2009). Chemical Constituents of Crinum asiaticum L. var. sinicum Baker and Their Cytotoxic Activities. Chem Biodivers, 6(10): 1751-1757.
Swanson, J.K. (2003). Antibiotic Resistance of Propionibacterium acnes in Acne Vulgaris. Dermatology Nursing, 15(4): 359-362.
Syahrurachman, A. dkk. (1994). Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran, Edisi Revisi. Binarupa Aksara, Jakarta.
Tabak, M.; Armon, R.; Potasman, I. & Neeman, I. (1996). In Vitro Inhibition of Helicobacter pylori by Extract of Thyme. Journal of Applied
Bacteriology, 80: 667-672.
Tranggono, R.I.S. (1996). Kiat Apik Menjadi Sehat dan Cantik. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Wijayakusuma, M.H. (2000). Ensiklopedia Millenium Tumbuhan Berkhasiat Obat Indonesia, Jilid 1. Prestasi Insan Indonesia, Jakarta.
Yang, D.; Pornpattananangkul, D.; Nakatsuji, T.; Chan, M.; Carson, D. & Huang, C.M., dkk. (2009), The Antimicrobial Activity of Liposomal Lauric Acids Against Propionibacterium acnes. Biomaterials, 30: 6035-6040.
Lampiran 1. Tumbuhan bakung putih
Gambar 9. Tumbuhan bakung putih (Crinum asiaticum L.) (sumber http://palmislandpalms.com/Shrubs.html)
Lampiran 4. Perhitungan rendemen dan susut pengeringan
a. Rendemen
Serbuk daun dan umbi bakung putih masing-masing 700 g, diekstraksi dengan menggunakan etanol 70 %. Hasil penguapan pelarut diperoleh ekstrak daun bakung putih sebanyak 88,8136 g sedangkan ekstrak umbi bakung putih sebanyak 288,7112 g.
88,8136
700 288,7112
700
b. Susut pengeringan Ekstrak Daun Bakung
Bobot wadah kosong = 29,8437 g
Bobot wadah dan sample sebelum dipanaskan = 30,3420 g Bobot wadah dan sampel setelah dipanaskan = 30,2356 g
30,3420 – 30,2356 30,3420 – 29,8437
Ekstrak Umbi Bakung
Bobot wadah kosong = 27,5047 g
Bobot wadah dan sample sebelum dipanaskan = 28,1980 g Bobot wadah dan sampel setelah dipanaskan = 28,0773 g
28,1980 – 28,0773
28,1980 – 27,5047
Rendemen ekstrak daun bakung puih =
Rendemen ekstrak umbi bakung puih = x 100 % = 41,24 % x 100 % = 12,69 %
% Susut pengeringan =
x 100 % = 17,41 % x 100 % = 21,35 %
Lampiran 5. Hasil penapisan fitokimia ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
Ekstrak etanol daun bakung putih Ekstrak etanol umbi bakung putih Gambar 10. Penapisan alkaloid ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
Ekstrak etanol daun bakung putih Ekstrak etanol umbi bakung putih Gambar 11. Penapisan flavonoid ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
Ekstrak etanol daun bakung putih Ekstrak etanol umbi bakung putih Gambar 12. Penapisan saponin ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
(lanjutan)
Ekstrak etanol daun bakung putih Ekstrak etanol umbi bakung putih Gambar 13. Penapisan tanin ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
Ekstrak etanol daun bakung putih Ekstrak etanol umbi bakung putih Gambar 14. Penapisan steroid-triterpenoid ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
Lampiran 6. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih terhadap bakteri Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis
Ekstrak etanol daun bakung putih konsentrasi 30 %
Ulangan Diameter hambat (mm) Propionibacterium acnes Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis I 3,5 1,5 2,5 II 3 2 2,5 III 4 1 4 Rata-rata ± SD 3,50 ± 0,50 1,50 ± 0,50 3,00 ± 0,87
Bakteri uji Hasil uji ekstrak etanol daun bakung putih Propionibacterium acnes Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis uji kontrol kontrol kontrol uji uji
(lanjutan)
Ekstrak etanol umbi bakung putih konsentrasi 60 %
Ulangan Diameter hambat (mm) Propionibacterium acnes Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis I 10 4 3 II 7,5 3,5 2 III 9 3,5 3,25 Rata-rata ± SD 8,83 ± 1,26 3,67 ± 0,29 2,75 ± 0,66
Bakteri uji Hasil uji ekstrak etanol umbi bakung putih Propionibacterium acnes Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis uji kontrol uji kontrol uji kontrol
Lampiran 7. Uji daya hambat klindamisin HCl terhadap bakteri Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis
Daya hambat klindamisin HCl terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis
Konsentrasi (µg/ml) Rata-rata diameter hambat (mm) ± SD
Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Kontrol 0 0 0 0 0 0 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 1 0 0 0 0 0 0 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 5 2,5 2 2,5 2,5 3 2,5 2,33 ± 0,29 2,67 ± 0,29 10 5,5 4,5 4 4 6,5 5,5 4,67 ± 0,76 5,33 ± 1,26 15 7,5 7 8 6,5 8 7,5 7,50 ± 0,50 7,33 ± 0,76 20 10,5 9,5 10,5 9 9,5 9,5 10,17 ± 0,58 9,33 ± 0,29
(lanjutan)
Gambar 15. Daya hambat klindamisin HCl terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Gambar 16. Daya hambat klindamisin HCl terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis kontrol pelarut µg/ml 1 20 µg/ml 10 µg/ml 5 µg/ml 15 µg/ml 5 µg/ml 1 µg/ml 15 µg/ml 20 µg/ml 10 µg/ml kontrol pelarut
(lanjutan)
Daya hambat klindamisin HCl terhadap bakteri Propionibacterium acnes
Konsentrasi (µg/ml)
Rata-rata diameter hambat (mm) ± SD Propionibacterium acnes Kontrol 0 0 0 0,00 ± 0,00 50 3,5 3,5 3 3,33 ± 0,29 100 5,5 6,5 6 6,00 ± 0,50 150 7 7,5 8 7,50 ± 0,50 200 9 9,5 9 9,17 ± 0,29 250 14,5 14,5 15 14,67 ± 0,29
(lanjutan)
Gambar 17. Daya hambat klindamisin HCl terhadap bakteri Propionibacterium acnes 250 µg/ml 200 µg/ml 150 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml kontrol pelarut
Lampiran 8. Perhitungan potensi relatif antibakteri ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih dibandingkan dengan klindamisin HCl
Propionibacterium acnes
Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukan diameter hambat ekstrak etanol daun bakung putih sebesar 3,50 mm (konsentrasi ekstrak 30 %), sedangkan pada ekstrak etanol umbi bakung putih sebesar 8,83 mm (konsentrasi ekstrak 60 %). Persamaan garis hasil uji Propionibacterium acnes dengan klindamisin HCl adalah: y = 0,3790 + 0,0517x
Daun bakung putih Umbi bakung putih
y = 0,3790 + 0,0517x y = 0,3790 + 0,0517x 3,5 = 0,3790 + 0,0517x 8,83 = 0,3790 + 0,0517x
3,121 = 0,0517x 8,451 = 0,0517x
x = 60,37 x = 163,46
Potensi relatif = konsentrasi baku pembanding : konsentrasi ekstrak
Potensi relatif daun bakung putih = 60,37 : 300.000 = 1 : 4.969
Potensi relatif umbi bakung putih = 163,46 : 600.000 = 1 : 3.671
(lanjutan)
Staphylococcus aureus
Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukan diameter hambat ekstrak etanol daun bakung putih sebesar 1,50 mm (konsentrasi ekstrak 30 %), sedangkan pada ekstrak etanol umbi bakung putih sebesar 3,67 mm (konsentrasi ekstrak 60 %). Persamaan garis hasil uji Staphylococcus aureus dengan klindamisin HCl adalah: y = -0,4849 + 0,5313x
Daun bakung putih Umbi bakung putih
y = -0,4849 + 0,5313x y = -0,4849 + 0,5313x 1,5 = -0,4849 + 0,5313x 3,67 = -0,4849 + 0,5313x
1,9849 = 0,5313x 4,1549 = 0,5313x
x = 3,73 x = 7,82
Potensi relatif = konsentrasi baku pembanding : konsentrasi ekstrak
Potensi relatif daun bakung putih = 3,73 : 300.000 = 1 : 80.429
Potensi relatif umbi bakung putih = 7,82 : 600.000 = 1 : 76.726
(lanjutan)
Staphylococcus epidermidis
Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukan diameter hambat ekstrak etanol daun bakung putih sebesar 3,00 mm (konsentrasi ekstrak 30 %), sedangkan pada ekstrak etanol umbi bakung putih sebesar 2,75 mm (konsentrasi ekstrak 60 %). Persamaan garis hasil uji Staphylococcus epidermidis dengan klindamisin HCl adalah: y = -0,0031 + 0,4838x
Daun bakung putih Umbi bakung putih
y = -0,0031 + 0,4838x y = -0,0031 + 0,4838x 3 = -0,0031 + 0,4838x 2,75 = -0,0031 + 0,4838x
3,0031 = 0,4838x 2,7531 = 0,4838x
x = 6,21 x = 5,69
Potensi relatif = konsentrasi baku pembanding : konsentrasi ekstrak
Potensi relatif daun bakung putih = 6,19 : 300.000 = 1 : 48.309
Potensi relatif umbi bakung putih = 5,68 : 600.000 = 1 : 105.448
Lampiran 9. Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum dan Konsentrasi Bunuh Minimum ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
Gambar 18. KHM dan KBM ekstrak etanol daun bakung putih terhadap bakteri Propionibacterium acnes
Gambar 19. KHM dan KBM ekstrak etanol umbi bakung putih terhadap bakteri Propionibacterium acnes 10 mg/ml 5 mg/ml 2.5 mg/mL 1.25 mg/ml 0.625 mg/ml 0.3125 mg/ml 0.9375 mg/ml 1.875 mg/ml 3.75 mg/ml 7.5 mg/ml 15 mg/ml 30 mg/ml kontrol media
(lanjutan)
Gambar 20. KHM dan KBM ekstrak etanol daun bakung putih terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Gambar 21. KHM dan KBM ekstrak etanol umbi bakung putih terhadap bakteri Staphylococcus aureus 10 mg/ml 5 mg/ml kontrol positif 2.5 mg/ml 0.3125 mg/ml 1.25 mg/ml 0.625 mg/ml kontrol media 30 mg/ml 3.75 mg/ml mg/ml 7.5 1.875 mg/ml 0.9375 mg/ml 15 mg/ml
(lanjutan)
Gambar 22. KHM dan KBM ekstrak etanol daun bakung putih terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis
Gambar 23. KHM dan KBM ekstrak etanol umbi bakung putih terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis 10 mg/ml 0.3125 mg/ml 1.25 mg/ml mg/ml 2.5 0.625 mg/ml 5 mg/ml 15 mg/ml 3.75 mg/ml 1.875 mg/ml 7.5 mg/ml 30 mg/ml 0.9375 mg/ml
Lampiran 10. Hasil analisa kebocoran asam nukleat dan protein bakteri Propionibacterium acnes dengan spektrofotometer UV/VIS
*UV/VIS Perkin Elmer Lambda 25
Penentuan absorbansi ekstrak etanol daun bakung putih
Konsentrasi ekstrak
Absorbansi
260 nm 280 nm
1 KHM 0,207 0,295
2 KHM 0,423 0,572
*UV mini 1240 Shimadzu
Ket: 1 KHM = 1,25 mg/ml 2 KHM = 2,5 mg/ml
Lampiran 11. Hasil analisa kebocoran ion K+ dan Ca2+ bakteri Propionibacterium acnes dengan Atomic Absorption Spectrometry (AAS)
Lampiran 12. Makalah “Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun dan Umbi Crinum asiaticum L. Terhadap Bakteri Penyebab Jerawat”
Makalah ini diterbitkan di Majalah Farmasi Indonesia Vol 21 No 3 (in press)
AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN DAN UMBI Crinum asiaticum L. TERHADAP BAKTERI PENYEBAB JERAWAT
ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT OF LEAVES AND BULBS OF Crinum asiaticum L. AGAINST ACNE-INDUCING
BACTERIA
Azrifitria1, Syaikhul Aziz1*) dan Chairul1,2**)
1.
Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Syarif Hidayatullah, Jakarta
2.
Laboratorium Bahan Alam, Bidang Botani, Puslit Biologi LIPI, Cibinong
ABSTRAK
Telah diuji aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol daun dan umbi Crinum asiaticum L. terhadap Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis, bakteri patogen yang menyebabkan jerawat . Ekstrak etanol daun dan umbi C. asiaticum aktif terhadap semua bakteri yang diuji. Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ditentukan dengan metode dilusi. KHM dan KBM ekstrak etanol daun untuk P. acnes (1,25 dan 2,5 mg/ml), S. aureus (5 dan 10 mg/ml) dan S. epidermidis ( 2,5 dan 5 mg/ml). Sedangkan KHM dan KBM ekstrak etanol umbi untuk P. acnes (7,5 dan 15 mg/ml), S. aureus (7,5 dan 15 mg/ml) dan S. epidermidis (3,75 dan 7,5 mg/ml). Studi lebih lanjut dilakukan pada ekstrak etanol daun terhadap P. acnes untuk menganalisa kebocoran sel (asam nukleat dan protein) dengan spektrofotometri ultraviolet, ion logam (K+ dan Ca2+) dengan spektrometri serapan atom, dan mengamati perubahan dinding sel dengan pemindai mikroskop elektron (SEM). Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun bakung putih dapat merusak dinding sel dan mempengaruhi permeabilitas membran sel yang ditandai dengan keluarnya asam nukleat, protein, ion logam (K+ dan Ca2+) dari sel dan mengubah dinding sel P. acnes.
ABSTRACT
The antibacterial activity of ethanol extract of leaves and bulbs of Crinum asiaticum L. was tested against Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis, pathogenic bacteria that cause acne. Ethanol extract of leaves and bulbs of C. asiaticum was active against all assayed bacteria. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were determined by dilution methods. MIC and MBC of ethanol leaves extract were found for P. acnes (1,25 and 2,5 mg/ml), S. aureus (5 and 10 mg/ml) and S. epidermidis (2,5 and 5 mg/ml). While MIC and MBC of ethanol bulbs extract were found for P. acnes (7,5 and 15 mg/ml), S. aureus (7,5 and 15 mg/ml) and S. epidermidis (3,75 and 7,5 mg/ml). Further study conducted on the ethanol leaves extract against P. acnes to analyze cell leakage (nucleic acid and protein) by ultraviolet spectrophotometry, metal ion (K+ and Ca2+) by atomic absorption spectrometry, and observed alteration of the cell wall by scanning electron microscopy (SEM). The result showed that ethanol leaves extract could damage the cell wall and affect the permeability of cell membrane which marked by release of nucleic acid, protein, metal ion (K+ and Ca2+) from the cell and alter the cell wall of P. acnes.
Keywords: Antibacterial, Crinum asiaticum L., Propionibacterium acnes.
PENDAHULUAN
Jerawat adalah kelainan kulit yang biasa terjadi pada usia remaja. Meskipun jerawat bukan penyakit infeksi serius, banyak remaja yang berjerawat mengalami depresi, kecemasan dan putus asa (Saising et al., 2008). Diagnosis klinis jerawat mudah dibuat, tetapi pengobatannya sering mengalami kesulitan. Hal ini karena penyebab jerawat bersifat multifaktorial, dan salah satu faktornya adalah bakteri (Mertaniasih dkk, 1996).
Sampai saat ini belum ada cara penyembuhan yang tuntas terhadap jerawat, meskipun ada beberapa cara yang sangat menolong. Salah satunya penggunaan antibiotik sebagai solusi untuk jerawat yang beberapa dekade ini masih banyak diresepkan (Yang et al., 2009). Penggunaan antibiotik sebagai pilihan pertama penyembuhan jerawat harus ditinjau kembali untuk membatasi perkembangan resistensi antibiotik (Swanson, 2003). Oleh sebab itu, perlu digali antibakteri alami sebagai alternatif penyembuhan yang dapat mengatasi masalah tersebut. Kondisi ini mendorong untuk melakukan pengembangan penelitian antibakteri alami terhadap tumbuhan yang ada di Indonesia, diantaranya bakung putih (Crinum asiaticum L.).
Sejauh ini di pulau jawa, bakung putih ditanam hanya sebagai tanaman hias dan tumbuh liar mulai dari dataran rendah hingga ± 700 m di atas permukaan
laut. Secara empiris, terna ini sering digunakan sebagai anti racun (antidot) pada luka yang diakibatkan karena panah beracun, gigitan ular atau sengatan serangga, keracunan makanan dan obat luka (Hargono dkk, 1985; Heyne, 1987). Dengan adanya informasi penggunaan bakung putih sebagai obat luka menimbulkan dugaan bahwa bakung putih mengandung zat atau senyawa yang dapat membunuh bakteri pada luka (antibakteri).
Berdasarkan uraian diatas, untuk mempertimbangkan kemungkinan aplikasi bakung putih sebagai antibakteri alami pada pengobatan jerawat, maka diperlukan kajian mengenai aktivitas antibakterinya. Dalam hali ini, bakteri uji yang digunakan adalah Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis. Pemakaian ketiga bakteri tersebut didasarkan keterlibatannya dalam perkembangan jerawat (Bukhart et al., 1999; Chomnawang et al., 2005; Sukatta et al., 2008: Han et al., 2010 ). Penelitian ini akan mempelajari aktivitas antibakteri dan pengaruh pemberian ekstrak etanol bakung putih terhadap bakteri penyebab jerawat.
METODOLOGI
Pembuatan ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
Daun dan umbi tanaman bakung putih (diperoleh dari LIPI Kebun Raya Bogor) dirajang dan dikeringkan kemudian dijadikan serbuk. Serbuk daun dan umbi dimaserasi dalam tujuh bagian etanol 70% selama 5 hari. Maserat yang diperoleh disaring dan dipekatkan dengan vaccum rotary evaporator pada suhu 50
0
C sampai diperoleh ekstrak kental. Pembuatan suspensi bakteri
Bakteri Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus (ATCC 25923), dan Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228) diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Klinis, Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta. P. acnes dibiakkan selama 48 jam pada suhu 37 0C dalam kondisi anaerob pada Brucella Agar yang ditambah 5 % darah domba, sedangkan untuk S. aureus dan S. epidermidis dibiakkan selama 24 jam pada suhu 37 0C dalam kondisi aerob pada Mueller Hinton Agar. Bakteri disuspensikan dalam larutan NaCl 0,9 %. Suspensi
bakteri disetarakan menggunakan nephelometer (BD Phoenix) dengan standar 0,5 Mc Farland (diperkirakan 1,5x108 sel bakteri/ml).
Penentuan KHM dan KBM
Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) dilakukan dengan menggunakan metode dilusi cair. Konsentrasi larutan uji dibuat sebuah seri pengenceran dalam medium cair dengan volume total 1 ml (Brain Hearth Infusion untuk P. acnes sedangkan Nutrient Broth untuk S. aureus dan S. epidermidis). Konsentrasi larutan uji 10; 5; 2,5; 1,25; 0,625 dan 0,3125 mg/ml untuk ekstrak etanol daun bakung putih, dan konsentrasi larutan uji 30; 15; 7,5; 3,75; 1,875; dan 0,9375 mg/ml untuk ekstrak etanol umbi bakung putih, ditambahkan suspensi bakteri sebanyak 10 µl. Larutan uji diinkubasi pada inkubator goyang (200 rpm) suhu 37 0C selama 48 jam dalam kondisi anaerob untuk P. acnes sedangkan untuk S. aureus dan S. epidermidis pada suhu 37 0C selama 24 jam dalam kondisi aerob.
Nilai KHM dan KBM ditentukan setelah larutan uji tersebut ditumbuhkan kembali pada medium agar (Brucella Agar yang ditambah 5 % darah domba untuk P. acnes, sedangkan Agar Darah untuk S. aureus dan S. epidermidis) dan diinkubasi pada suhu 37 0C selama 48 jam dalam kondisi anaerob untuk P. acnes sedangkan untuk S. aureus dan S. epidermidis pada suhu 37 0C selama 24 jam dalam kondisi aerob. Nilai KHM dinyatakan sebagai konsentrasi terrendah ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih yang masih dapat menghambat pertumbuhan bakteri uji, sedangkan nilai KBM dinyatakan sebagai konsentrasi terrendah ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih yang tidak menunjukkan adanya pertumbuhan koloni bakteri pada agar. Pengujian dilakukan 3 kali pengulangan. Analisis kebocoran asam nukleat dan protein
Suspensi bakteri yang berumur 48 jam untuk P. acnes, ditambahkan ekstrak etanol daun bakung putih dengan konsentrasi 0 (kontrol), 1 dan 2 KHM. Larutan uji diinkubasi pada inkubator goyang (200 rpm) suhu 37 0C selama 48 jam dalam kondisi anaerob, kemudian disentrifus dengan kecepatan 3500 rpm selama 20 menit, dan dipisahkan supernatan dari endapan sel. Supernatan diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV/VIS (Perkin Elmer lamda 25) pada panjang gelombang 260 dan 280 nm.
Analisis kebocoran ion logam
Analisis kebocoran ion yang diukur adalah dalam bentuk ion K+ dan Ca2+ yang keluar dari sel bakteri akibat perlakuan dengan ekstrak etanol daun bakung putih. Sampel untuk analisis kebocoran ion logam berupa supernatan yang berasal dari perlakuan analisis kebocoran asam nukleat dan protein. Supernatan dianalisis dengan menggunakan Atomic Absoption Spectroscopy (AAS) Perkin Elmer. Pengamatan morfologi sel
Pellet atau endapan sel yang berasal dari perlakuan analisis kebocoran asam nukleat dan protein (kontrol dan 2 KHM), direndam dengan glutaraldehid 2% selama semalam, lalu ditambah chocodylate buffer, dan direndam selama 20 menit. Larutan uji disentrifus dan supernatan dipisahkan. Pelet ditambah osmium tetraoksida 1% dan direndam selama 1 jam, selanjutnya dikeringkan berturut-turut dengan alkohol 70 %, alkohol 80%, alkohol 95% dan alkohol absolut masing-masing selama 20 menit. Pelet disuspensikan dengan penambahan butanol, kemudian suspensi diletakkan diatas cover slip yang telah direkatkan pada stub alumunium. Suspensi yang telah mengering di cover slip kemudian dilapisi dengan emas melalui proses vakum selama 20 menit dan diamati dengan Scanning Electron Microscopy (JSM-5000).
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penghambatan pertumbuhan bakteri oleh senyawa antibakteri dapat dinyatakan dengan KHM dan KBM. Nilai KHM dan KBM senyawa antibakteri dari setiap ekstrak berbeda-beda bergantung dari jenis bakteri dan senyawa antibakteri yang terkandung didalamnya. Nilai KHM dan KBM untuk ekstrak etanol daun bakung putih berkisar antara 1,25 – 10 mg/ml, sedangkan untuk ekstrak etanol umbi bakung putih berkisar antara 3,75 – 15 mg/ml tergantung jenis bakteri uji (tabel I).
Tabel I. Nilai KHM dan KBM ekstrak etanol bakung putih Konsentrasi (mg/ml) Propionibacterium acnes Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis KHM KBM KHM KBM KHM KBM Daun 1,25 2,5 5 10 2,5 5 Umbi 7,5 15 7,5 15 3,75 7,5
Penelitian lebih lanjut dilakukan pada ekstrak etanol daun terhadap P. acnes dikarenakan mempunyai nilai KHM dan KBM terrendah jika dibandingkan dengan yang lain.
Pemberian ekstrak etanol daun terhadap P. acnes diduga dapat menyebabkan kebocoran sel yang berakibat pada kematian bakteri. Kebocoran sel akibat rusaknya sel dapat dideteksi dengan spektrofotometri ultraviolet. Panjang gelombang 260 nm dapat mendeteksi purin, pirimidin dan ribonukleotida, sedangkan pada panjang gelombang 280 nm dapat mendeteksi tirosin dan triptofan (Park et al., 2003 dalam Naufalin, 2005). Menurut Gilbert (1984) dalam Miksusanti dkk (2008), senyawa-senyawa yang memberikan serapan pada panjang gelombang 260 nm adalah RNA dan DNA, sedangkan pada panjang gelombang 280 nm diidentifikasi sebagai protein. Terdeteksinya asam nukleat dan