BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
B. Saran
1. Perlu dilakukan penelitian aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode yang lain.
2. Perlu dilakukan uji aktivitas antioksidan sari buah jeruk purut.
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 1986, Sediaan Galenik, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 11-12.
Apak R et al. 2007. Comparative evaluation of various total antioxidant capacity assay applied to phenolic compounds with the CUPRAC assay.
Molecules 12:1496-1547.
Cano.A., A. Medina, and A. Bermejo. 2008. Bioactive Compounds in Different Citrus Varieties. Discrimination Among Cultivars. J .Food Composition and Anal. 21:377-381.
Chan, Chung Chow, Lam, Herman, Lee, and Y.C., Zhang, Xue-Ming, 2004,
Analtytical Method Validation and Instrument Performance Verification,
John Wiley and Sons, Inc., New Jersey.
Citrus Variety Collection, University of California Riverside http://www.citrusvariety.ucr.edu/citrus/hystrix_2454.html review diakses pada tanggal 6, Mei 2013.
Davidek, 1997, in Macek, K., 1972, Pharmaceutical Ahallications of Thin Layer
Chromatography, Elseiver Publishing Company, Amsterdam, London,
New York, pp. 569, 608-611.
Dinis, T.C., Maderia, V.M., dan Almeida, L.M., 1994, Action of Phenolic Derivates (Acetoaminophen, Salycilate and 5-Aminosalycilate) as Inhibitors of Membrane Lipid Peroxidation and as Peroxyl Radical Scavengers, ABB, 315, 161–169.
Decker, E., 1998, Strategies for Manipulating the Prooxidative Antioxidative Balance of Foods to Maximize Oxidative Stability, Trends Food Sci.Technol., 9, 241-248.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995, Farmakope
Indonesia, edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta,
pp. 7 dan 1061.
Dos Santos, S.X., Mazo, L.H., dan Cavalheiro, E.T.G., 2008, The Use of a Graphite-Silicone Rubber Composite Electrode in the Determination of Rutin in Pharmaceutical Formulation, J. Braz. Chem. Soc., 19(8), 1603. Fergusson. J. J. 2002. Medicinal Use of Citrus. Series of the Horticultural
Sciences Departement, Florida Cooperative Extension Service, Institute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. 3 pp.
56
Gulcin, I., Uguz, M.T., Oktay, M., Beydemir, S., dan Kufrevioglu, O.I., 2004, Evaluation of the Antioxidant and Antimicrobial Activities of Clary Sage (Salvia sclarea L.), Turk. J. Agric. For., 28, 25-33.
Harmita, 2004, Majalah Ilmu Kefarmasian Vol.I, No.3: Petunjuk Pelaksanaan
Validasi Metode dan Cara, Departemen Farmasi FMIPA UI, Jakarta, pp.
117-135.
Huang, D., Ou, B., dan Prior, R.L., 2005, The Chemistry Behind AntioxidantCapacity Assays, J. Agric. Food Chem., 53, 1841-1856. Jacob, R., S. Hasegawa, and G. Manners. 2000. The Potential of Citrus Limonoids
as Anticancer Agents. Perishables Handling Quaterly Issue No.102. Kahl, R., 1984, Synthetic Antioxidants: Biochemical Actions and Interference
With Radiation, Toxic Compounds, Chemical Mutagens and Chemical Carcinogens, Toxicology, 33(3-4), 185-228.
Koleva I, van Beek T, Linnssen JPH, de Groot A, Evstarieva LN. 2002. Screening of plant extracts for antioxidant activity: a comparative study on three testing methods: Phytochem Anal 13: 494-500.
Miller, R. dan Miller, S., 2003, Tulsi Queen of Herbs, The Green Isle Enterprise, 1-2.
Molyneux, P., 2004, The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity, Songklanakarin J. Sci. Technol., 26(2), 211-219.
Mulja, H.M., dan Suharman, 1995, Analisis Instrumental, Airlangga University Press, Surabaya, pp. 26-33.
Oliveira, A.C.; Valentim, I.B.; Silva, C.A.; Bechara, E.J.H.; Barros, M.P.; Mano, C.M.; Goulart,M.O.F. (2009a). Total phenolic content and free radical scavenging activities ofmethanolic extract powders of tropical fruit residues. Food Chemistry, Vol.115, No.2,(July 2009), pp. 469-475, ISSN 0308-8146.
Oliveira, A.C.; Valentim, I.B.; Goulart, M.O.F.; Silva, C.A.; Bechara, E.J.H.; Trevisan, M.T.S. (2009). Fontes vegetais naturais de antioxidantes. Química Nova, Vol.32, No.3, (April 2009), pp. 689-702, ISSN 0100-4042.
Paulose, S.M. 2005. Isolation and Effect of Citrus Limonoids on Cytochrome 450 inhibition, Apoptotic Induction and Citotoxicity on Human Cancer Cells. Dissertation. Texas A and M University. 112 pp.
Palmer, D.M., dan Kitchin, JS., 2010, Oxidative Damage, Skin Aging,
Antioxidants and a Novel Antioxidant Rating System,
http://findarticles.com/p/ articles/mi_m0PDG/, diakses tanggal 14 September 2010.
Percival, M., 1998, Antioxidants, Advanced Nutrition Publication, Inc, http://acudoc.com/Antioxidants.PDF, diakses tanggal 13 September 2010.
Setiawan, D. 2000. Atlas Tumbuhan Organik Indonesia. Persi,co.id. Setiadi dan Parmin. 2004. Jeruk Asam. Penebar Swadaya. Jakarta.
Shivaprasad, H.N., Mohan, S., Kharya, M.D., Shiradkar, M.R., dan Lakshman, K., 2005, In-Vitro Models for Antioxidant Activity Evaluation: a Review
http://www.pharmainfo.net/reviews/vitro-models-antioxidant-activityevaluation- review, diakses tanggal 14 September 2010.
Singleton, V.L. and Rossi, J.A., 1965, Colorimetry of Total Phenolic with Phosphomolybdic-Phosphotungstic Acid Reagent, Am. J. Enol. Vitic, pp. 16, 147.
Spiegel-roy, P. and E. E. Goldschmidt. 1996. Biology of Citrus. Cambrdige University Press, UK. 230 pp.
Subeki. 1998. Pengaruh cara pemasakan terhadap kandungan antioksidan beberapa macam sayuran serta daya serap dan retensinya pada tikus percobaan [Tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
United States Department of Agriculture,
http://plants.usda.gov/java/ClassificationServlet?source=profile&symbol =CIHY2&display=31, review diakses pada tanggal 2 Juli 2013.
Tripoli, E., M. Guardia, S. Giamanco. 2007. Citrus Flavonoids: Molecular Structure, Biological Activity and Nutritional Properties: A Review.
Food Chem. 104:466-47.
Veeru, P., Kishor, M.P., dan Meenakshi, M., 2009, Screening of Medicinal Plant Extracts for Antioxidant Activity, JMR, 3(8), 608-612.
Winarsi, W., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, Penerbit Kanisius, Yogyakarta, pp. 13-15, 77-81.
58
LAMPIRAN
LAMPIRAN
60
Lampiran 2. Gambar buah jeruk purut
Lampiran 3. Bobot fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk purut Bobot kulit jeruk : 1 kg
Bobot ektrak etanol 76% : 32,30 g
Rendemen : x 100%
: 32,30
1000 x 100% : 3,230 % b/b Bobot fraksi etil asetat : 1,61 g
Rendemen : x 100%
: 1,61
1000 x100% : 0,161 % b/b
Lampiran 4. Data penimbangan uji aktivitas antioksidan 1. DPPH
Penimbangan Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Bobot kertas 0,4273 g 0,4162 g 0,5011 g Bobot kertas + DPPH 0,4313 g 0,4202 g 0,5052 g Bobot sisa 0,4273 g 0,4203 g 0,5012 g Bobot DPPH 0,0040 g 0,0039 g 0,0040 g
2. Rutin
Penimbangan Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Bobot kertas 0,2355 g 0,2561 g 0,3001 g Bobot kertas + rutin 0,2380 g 0,2587 g 0,3027 g Bobot sisa 0,2356 g 0,2562 g 0,3002 g Bobot rutin 0,0024 g 0,0025 g 0,0025 g
3. Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk purut
Penimbangan Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Bobot gelas arloji 14,241 g 14,240 g 14,245 g Bobot gelas arloji +sampel 14,2712 g 14,270 g 14,275 g Bobot + sisa 14,241 g 14,240 g 14,245 g Bobot akhir 0,0302 g 0,030 g 0,030 g
62
Lampiran 5. Data perhitungan konsentrasi larutan DPPH, larutan pembanding rutin, dan larutan uji
1. DPPH
Contoh perhitungan molaritas DPPH Replikasi 1 BM = 394,32 Mol = � = 4,0 394 ,32 = 0,0101 mmol M = = 0,0101 0,025 = 0,404 mM 2. Rutin
Konsentrasi larutan stok rutin = 2,5
10 = 250 µg/ml Konsentrasi larutan pembanding seri 1 (replikasi 1) : V1 x C1 = V2 x C2
0,49 ml x 250 g/ml = 10 x C2
C2 = 12,25 g/ml
3. Sampel
Konsentrasi larutan stok rutin = 30,2
10 = 3020 µg/ml Konsentrasi larutan pembanding seri 1 (replikasi 1) : V1 x C1 = V2 x C2
1,0 ml x 3020 g/ml = 10 x C2
C2 = 302 g/ml
Lampiran 6. Optimasi metode uji aktivitas antioksidan 1. Penentuan maks
64
b. Scanning DPPH
c. Scanning DPPH
2. Penentuan operating time a. Operating time rutin
Waktu (menit) Rutin 12,25µg/mL Rutin 26,25µg/mL Rutin 40,25µg/mL 5 0,798 0,663 0,541 10 0,769 0,62 0,44 15 0,748 0,59 0,38 20 0,732 0,568 0,337 25 0,722 0,548 0,305 30 0,714 0,532 0,281 35 0,708 0,517 0,261 40 0,703 0,505 0,245 45 0,700 0,494 0,234 50 0,697 0,486 0,225 55 0,695 0,478 0,216 60 0,693 0,472 0,209
b. Operating time fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk purut
Waktu (menit) DPPH 300 µg 900 µg 1500 µg 5 0,820 0,651 0,425 0,355 10 0,823 0,646 0,419 0,348 15 0,825 0,642 0,414 0,342 20 0,827 0,638 0,410 0,336 25 0,829 0,635 0.407 0,332 30 0,830 0,633 0,405 0,329 35 0,830 0,631 0,404 0,328 40 0,830 0,631 0,404 0,328 45 0,830 0,631 0,404 0,328 50 0,830 0,631 0,404 0,328 55 0,830 0,631 0,404 0,328 60 0,830 0,631 0,404 0,328
66
Lampiran 7. Uji akitivitas antioksidan dengan menggunakan radikal DPPH
% IC = − / � 100% 1. Rutin Replikasi Rutin Absorbansi Kontrol Absorbansi % IC Persamaan Regresi Linier 1 11,53 0,882 0,650 26,30 y = 1,5296x + 14,693 r = 0,9957 18,77 0,537 39,12 27,29 0,404 54,20 34,92 0,285 67,69 39,66 0,211 76,08 2 12,11 0,897 0,652 27,31 y = 1,7328x + 7,8707 r = 0,9953 20,23 0,523 41,69 28,23 0,396 55,85 34,09 0,303 66,22 39,45 0,218 75,70 3 11,27 0,863 0,640 25,84 y = 1,7697x + 5,8873 r = 0,9965 19,72 0,511 40,79 27,36 0,394 54,35 33,54 0,300 65,24 39,36 0,211 75,55
2. Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk purut Replikasi Konsentrasi (µg/2mL) % IC Persamaan regresi linier 302 20 y = 0,0433x+ 8,5231 r = 0,9966 600 34,94 I 904 50,32 1200 60,96 1508 72,29 300 20,1 y =0,0434x + 8,8617 r= 0,9969 604 35,86 II 902 50,18 1204 61,18 1500 72,54 300 19,64 y =0,0433x + 8,478 r= 0,9972 604 35,88 III 900 49,1 1202 60,82 1506 72,35
Contoh perhitungan nilai % IC
Rutin (replikasi 1, konsentrasi 11,53 g/ml)
% IC =0,882−0,650
68
Lampiran 8. Perhitungan nilai IC50 rutin dan Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk Purut
Bahan Uji IC50 (µg/ml) rata-rata (µg/ml) SD (µg/ml) CV (%) 1 2 3 Rutin 23,083 24,313 24,927 24,108 0,939 0,882 Fraksi etil asetat 964,6 957,7 965,7 962,667 4,340 0,005
Keterangan: SD = Standard Deviation; dan CV = Coefficient of Variant
Persamaan regresi linier dari konsentrasi dengan %IC adalah Bx + A
y = aktivitas antioksidan (%IC)
x = konsentrasi ( g/ml)
IC50 adalah nilai x pada saat y sebesar 50%
Contoh perhitungan nilai IC50 (Rutin replikasi 1)
y = 1,5296x + 14,693
50 = 1,5296x + 14,693
x = 23,08 g/ml
Contoh perhitungan nilai IC50 (Fraksi etil asetat replikasi 3)
y = 0,0433x + 8,478 50 = 0,0433x + 8,478
x = 965,70 mg/ml
Lampiran 9. Data penimbangan penetapan kandungan fenolik total 1. Asam galat Replikasi 1 (gram) Replikasi 2 (gram) Replikasi 3 (gram) Bobot kertas 0,2111 0,2056 0,2107
Bobot kertas + asam
galat 0,2161 0,2106 0,2157
Bobot kertas + sisa 0,2111 0,2056 0,2107
Bobot asam galat 0,0050 0,0050 0,0050
Lampiran 10. Optimasi penetapan kandungan fenolik total 1. Penentuan operating time
Waktu (menit) Asam galat 50 µg/ml Asam galat 100 µg/ml Asam galat 150 µg/ml 5 0,224 0,482 0,717 10 0,231 0,500 0,749 15 0,239 0,511 0,772 20 0,242 0,524 0,784 25 0,245 0,531 0,793 30 0,245 0,532 0,794 35 0,245 0,532 0,794 40 0,245 0,532 0,794 45 0,245 0,532 0,794 50 0,245 0,532 0,794 55 0,245 0,532 0,794 60 0,245 0,532 0,794
70
2. Penentuan maks
a. Scanning asam galat 50 µg/mL
b. Scanning asam galat 100 µg/mL
72
Lampiran 12. Penetapan Kandungan fenolik total
sampel konsentrasi (µg/mL) absorbansi kandungan fenolik total (µg/mL) kandungan fenolik total (mg ekivalen asam galat per g fraksi) rata-rata (mg ekivalen asam galat per g fraksi) SD (mg ekivalen asam galat per g fraksi) 1 350 0,578 0,1258 419,33 417,33 1,76 2 350 0,574 0,125 416,67 3 350 0,573 0,124,8 416
Contoh perhitungan kandungan fenolik total
Replikasi 1 Absorbansi sampel =0,578 y = 0,005x – 0,051 0,578 = 0,005x – 0,051 x = 0,578 +0,051 0,005 = 125,8 µg/mL Kandungan fenolik total =x . v
m = 0,1258 mg/mL. 100 mL
0,03 g = 419,33 mg 419,33 mg ekivalensi asam galat per g fraksi sampel
Replikasi 2 Absorbansi sampel =0,574 y = 0,005x – 0,051 0,574 = 0,005x – 0,051 x = 0,574 +0,051 0,005 = 125 µg/mL Kandungan fenolik total =x . v
m = 0,125 mg/mL. 100 mL
0,03 g = 416,67 mg 416,67 mg ekivalensi asam galat per g fraksi sampel
Replikasi 2 Absorbansi sampel =0,573 y = 0,005x – 0,051 0,573 = 0,005x – 0,051 x = 0,573 +0,051 0,005 = 124,8 µg/mL Kandungan fenolik total =x . v
m = 0,124,8 mg/mL. 100 mL
0,03 g = 416 mg 416 mg ekivalensi asam galat per g fraksi sampel.
74
Lampiran 13. Scanning pengkoreksi
1. Scanning metanol
400-600 nm
600-800 nm
76
3. Scanning rutin
4. Scanning asam galat
5. Scanning fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk purut
400-600 nm
78
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi yang berjudul “UJI AKTIVITAS PENANGKAPAN RADIKAL 1,1-DIFENIL-2-PIKRILHIDRAZIL (DPPH) DAN PENETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK KULIT BUAH JERUK PURUT (Citrus hystrix DC.)” memiliki nama lengkap Putut Wibisono. Dilahirkan di kota Klaten 24 April 1990 dari pasangan Bapak Joko Mulyanto dan Ibu Srihartati Takarini. Penulis telah menyelesaikan pendidikan di TK Pertiwi Keden pada tahun 1995 hingga 1996 lalu melanjutkan pendidikan dasar di SDN Keden 3 Klaten pada tahun 1996 hingaa 2002. Penulis melanjutkan pendidikan menengah di SMP N 1 Pedan pada tahun 2002 hingga 2005 dan SMF Bhakti Wiyata Kediri pada tahun 2006 hingga 2009. Kemudian penulis melanjutkan pendidikan perguruan tinggi di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2009 hingga 2013. Selama menjadi mahasiswa di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, penulis pernah menjadi peserta magang kegiatan SMF di apotek Kimia Farma dan RS dr. Soepraoen kota Malang (2008). Penulis cukup aktif dalam kegiatan kemahasiswaan baik di dalam fakultas maupun universitas antara lain Panitia PP n EC (2011), Panitia Pelepasan Wisuda Fakultas Farmasi (2012), Penulis pernah mendapatkan pendanaan dari Dikti atas program PKM (2012).
xviii
INTISARI
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan pada fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit buah jeruk purut (Citrus hystrix DC.)
menggunakan radikal bebas DPPH dan untuk mengetahui kandungan ekivalen fenolik totalnya. Maserasi menggunakan pelarut etanol untuk mendapatkan ekstrak etanolnya. Ektraksi cair-cair menggunakan etil asetat untuk mendapatkan fraksi etil asetat ekstrak etanol.
Fraksi etil asetat yang didapat diuji aktivitas antioksidannya menggunakan radikal 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl. Hasil dari pengukuran aktivitas antioksidan dinyatakan melalui harga Inhibition Concentration 50 (IC50) yang menyatakan konsentrasi yang menurunkan 50% dari konsentrasi DPPH awal yang dilihat dari absorbansinya. Adanya senyawa antioksidan akan mengubah warna ungu larutan DPPH menjadi kuning, disertai penurunan absorbansi DPPH. Penentuan kandungan fenolik total menggunakan metode Folin-Ciocalteau dinyatakan dengan nilai massa ekivalen asam galat per g fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit buah jeruk purut. Senyawa fenolik akan dioksidasi oleh pereaksi fenol Folin-Ciocalteau dalam suasana basa sehingga terbentuk larutan berwarna ungu.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa fraksi etil asetat ekstrak mempunyai nilai IC50 sebesar 962,667 ± 4,34 µg/mL dan kandungan fenolik total sebesar 417,33 ± 1,76 mg ekivalen asam galat per gram fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit buah jeruk purut (Citrus hystrix DC.).
Kata Kunci: antioksidan, kulit buah jeruk purut (Citrus hystrix DC.), fraksi etil asetat, DPPH, kandungan fenolik total dalam ekivalen.
xix
ABSTRACT
This study aims to determine the antioxidant activity of the ethyl acetate fraction of the ethanol extract of the fruit peel lime (Citrus hystrix DC.) using DPPH free radicals and to determine the total phenolic content of equivalence. Maceration using ethanol solvent to obtain an extract ethanol. Liquid-liquid extraction using ethyl acetate to obtain ethyl acetate fraction of ethanol extract.
Ethyl acetate fraction obtained using the tested antioxidant activity radical 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl. Results of measuring the antioxidant activity expressed through value Inhibition Concentration 50 (IC50) which states that lower the concentration of 50% of the initial DPPH concentration is seen from the absorbance. Presence of antioxidant compounds will change color purple DPPH solution to yellow, accompanied by decrease in absorbance of DPPH. Determination of total phenolic content using the Folin-Ciocalteau method revealed the mass value of gallic acid equivalents per g of ethyl acetate fraction of ethanol extract of lime rind. Phenolic compounds will be oxidized by the Folin-Ciocalteau phenol reagent under alkaline conditions, forming a purple solution.
Results of this study showed that the ethyl acetate extract fraction has a value of 1C50 962.667 ± 4.34 mcg / mL and total phenolic content of 417.33 ± 1.76 mg gallic acid equivalents per gram of ethyl acetate fraction of ethanol extract of the fruit peel lime (Citrus hystrix DC.).
Keywords: antioxidants, fruit peel lime (Citrus hystrix DC.), ethyl acetate fraction, DPPH, total phenolic content in the equivalent.
