BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Fraksi air brokoli memiliki efek toksik terhadap larva Artemia salina LEACH dengan nilai LCB50 Bsebesar 631 µg/ml.
2. Hasil KLT menunjukkan bahwa dalam fraksi air brokoli terkandung senyawa alil isotiosianat.
B. Saran
Perlu dilakukan pengujian lebih lanjut yaitu dengan uji biakan sel kanker untuk mengetahui sitotoksisitas dari fraksi air brokoli.
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2001, The Merck Index, 13P th
P
edition, 312-313, Merck & Co., INC., New York.
Anonim, 2007, Apoptosis, HThttp://en.wikipedia.org/wiki/ApoptosisTH. Diakses pada
28 Januari 2007.
Balmer, C., and Valley, A.W., 1997, Basic Principles of Cancer Treatment and Cancer Chemotherapy in Dipiro, J.T., Talbert, R.L., Yee, G.C., Matzke, G.R., Wells, B.G., and Posey, L.M., (Eds.), Pharmacotherapy A Pathophysiologic Approach, third edition, 2403-2408, Appleton & Lange, Stamford.
Best, B., 2006, Cancer Death -- Causes & Prevention, HThttp://www.benbest.com/
health/cancer.htmlTH. Diakses pada 6 Desember 2006.
Breier, A., Ziegelhoffer, A., Stankovicova, T., Docolomansky,P., Gemeiner, P., and Vrbanova, A., 1995, Inhibition of (Na/K)-ATPase by electrophilic substances: functional implications, HThttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/
query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&list_uids=7494549&dopt=AbstractTH
Diakses pada 7 Maret 2007.
Campbell, N.A., Recee, J.B., and Mitchell, L.G., 2002, BIOLOGY, diterjemahkan oleh Rahayu Lestari, Edisi 5, Jilid 1, 322-328, Penerbit Erlangga, Jakarta. Chaulk, J. and Park, J., 2002, Artemia salina : The Common Brine Shrimp as A
Useful Biological Indicator, Environmental Science 1000, 1-5.
Corwin, J.E., 1996, Handbook of Pathophysiology, diterjemahkan oleh Brahm U. Pendit, 206, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Dalimartha, S., 2000, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia, jilid 2, 25-27, Trubus Agriwidya, Jakarta.
Ganong, W.F., 1995, Buku Ajar Fisiologi Kedokteran, diterjemahkan oleh dr. Petrus Andrianto, Edisi 14, 27-29, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Gollman, B., 2001, Phytopia’s Top 10, HThttp://www.phytopia.com/oldsite/
top10.htmTH. Diakses pada 8 Februari 2007.
Gritter, R.J., Bobbitt, J.M., and Schwarting, A.E., 1991, Introduction to Chromatography, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, edisi 2, 108- 109, ITB, Bandung.
Henkart, P., 1999, Apoptosis Interest Group, HThttp://www.nih.gov/sigs/aig/
Aboutapo.htmlTH. Diakses pada 6 Desember 2006.
Jakubowski, 2002, Apoptosis: Programmed Cell Death, HThttp://employees.csbsju.
edu/ hjakubowski/classes/ch331/signaltrans/apoptosis.htmTH. Diakses pada 28
Januari 2007.
Katzung, B.G., 1989, Farmakologi Dasar dan Klinik, edisi 3, 857-859, Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Katzung, B.G., 2004, Farmakologi Dasar dan Klinik, buku 3, edisi 8, 298-302, Salemba Medika, Jakarta.
Krul, C., 2002, Metabolism of sinigrin (2-propenyl glucosinolate) by the human colonic microflora in a dynamic in vitro large-intestinal model,
HT
http://carcin.oxfordjournals.org/cgi/content/full/23/6/1009TH. Diakses pada 20
April 2007.
Kumar, S., Prasad, S., and Singh, R.N., 2005, Resurgence of Spider Mite Tetranychus ludeni Zacher (Acarina : Tetranychidae) Against Acaricides and Botanical Pesticides on Cowpea, Resistant Pest Management Newsletter, 1-3.
Kuswibawati, L., 2000, Apa Itu Kanker? dalam Yuswanto, Ag., Sinaradi, F., (Eds.), KANKER, 103-145, USD, Yogyakarta.
Li Tang, Zhang, Y., Jobson, H.E., Jun Li, Stephenson, K.K., Wade, K.L., and Fahey, J.W., 2006, Potent Activation of Mitochondria-Mediated Apoptosis and Arrest in S and M phases of Cancer Cells by a Broccoli Sprout Extract,
HT
http://mct.aacrjournals.org/cgi/content/abstract/5/4/935TH. Diakses pada 12
Januari 2007.
Meyer, B.N., Ferrigni, N.R., Putnam, J.E., Jacobsen, L.B., Nicholas, D.E., McLaughlin, J.L., 1982, Brine Shrimp : Convenient General Bioassay for Active Constituents, Planta Medica, 45, 31-34.
Mills, H.A., 2001, Vegetable Crops : Broccoli (Brassica oleracea var. italica),
HT
http://www.uga.edu/vegetable/broccoli.htmlTH. Diakses pada 16 September
2006.
Misiewicz, I., Skupinska, K., and Guttman T.K., 2003, Sulforaphane and 2- oxohexyl Isothiocyanate Induce Cell Growth Arrest and Apoptosis in L-
1210 Leukemia and ME-18 Melanoma Cells, HThttp://147.52.72.117/or/2003/
volume10/number6/2045.pdfTH. Diakses pada 6 Desember 2006.
Nestle, M., 1997,Broccoli sprouts as inducers of carcinogen-detoxifying enzyme systems: clinical, dietary, and policy implications, HThttp://www.sproutnetTH.
com/Nutrition/Research/broccoli_sprouts_as_inducers_of.htm. Diakses pada 20 April 2007.
T
Rouzaud, G., Young, S.A., and Duncan, A.J., 2004, THydrolysis of Glucosinolates
to Isothiocyanates after Ingestion of Raw or Microwaved Cabbage by Human Volunteers, HThttp://cebp.aacrjournals.org/cgi/content/full/13/1/125TH.
Diakses pada 12 Januari 2007.
Rukmana, R., 1995, Budidaya Kubis Bunga dan Broccoli, 15-16, 56, Penerbit Kanisius, Yogyakarta.
Shapiro, T.A., Fahey, J.W., Wade, K.L., Stephenson, K.K., and Talalay, P., 2001, Chemoprotective glucosinolates and isothiocyanates of broccoli sprouts: metabolism and excretion in humans, HThttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/
query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&list_uids=11352861&dopt=Abstra ctTH. Diakses pada 17 April 2007.
Solis, P.N., Wright, C.W., Anderson, M.M., Gupta, M.P., and Phillipson, J.D., 1993, A Microwell Cytotoxicity Assay Using Artemia Salina (Brine Shrimp), Planta Medica, 59, 250-252.
Stahl, E., 1985, Thin-Layer Chromatography, A Laboratory Handbook, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata & Iwang Sudiro, 266-273, ITB, Bandung.
Supranto, J., 1986, Pengantar Probabilitas dan Statistik Induktif, jilid 2, 221-235, Erlangga, Jakarta.
Surjadi, H., 2005, Pustaka Tani : Brokoli Berkhasiat Menghambat Pertumbuhan Kanker Kandung Kemih, HThttp://www.pustakatani.org/BeritaGlobal/Tabid/
54/ctl/ArticleView/mid/368/articled/33/TH. Diakses pada 27 Oktober 2006.
Wagner, H., Bladt, S., & Zgainski, E.M., 1984, Plant Drug Analysis, translated by Th. A. Scott, 255-256, Springer-Verlag, Berlin.
Xiao, D., et al, 2003, TAllylT isothiocyanate, a constituent of cruciferous vegetables,
inhibits proliferation of human prostate cancer cells by causing GB2B/M arrest
and inducing apoptosis, HThttp://carcin.oxfordjournals.org/cgi/content/full/24/
TH
Telp. (0274) 8833037,883968, Fax. (0274)886529 - Telegram: SADHAR YOGYA E-Mail: Farmasi@usd.ac.id
SURAT PENGESAHAN DETERMINASI
No: 390/LKTO/far-USD/09/06
Laboratorium Kebun Tanaman Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, menyatakan bahwa telah melakukan determinasi terhadap satu contoh tanaman, dengan nama:
Brassiea oleraeea var. italiea.
(Brokoli)
Determinasi telah dilakukan secara benar sesuai dengan:
Mills, H.A., 2001, Vegetable Crops: Broccoli (Brassica oleracea var italica) http://www.uga.edul Vegetable/broccoli.html. Diakses 16 September 2006.
Hingga katagori: varietas
Tanaman tersebut dipakai dalam penelitian:
Uji Brine Shrimp Lethality Test (BST) Fraksi Air Bunga Brokoli
(Brassiea oleraeea var italiea.) Beserta Profil Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Oleh : Sinta Kiranawati
Dari : Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma
Herbarium disimpan Laboratorium Biologi Umum, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, dengan nomor katalog:
Lampiran 2. Foto Penelitian
Gambar 12. Tanaman Brokoli (Brassica oleracea var. italica)
Gambar 14. Larva Artemia salina LEACH
A B
Gambar 16. Kromatografi Lapis Tipis Fraksi Air Brokoli untuk Pemeriksaan Alil Isotiosianat
Keterangan :
Jarak pengembangan 10 cm.
Fase diam : silika gel GFB254B (MERCK)
Fase gerak : n-butanol:n-propanol:asam asetat glasial:air (30:10:10:10, P v
P
/BvB)
Pembanding : Ekstrak bawang putih dalam pelarut metanol Sampel : Ekstrak kering brokoli dalam pelarut metanol Deteksi : Perekasi Ninhidrin dilihat secara visible
Lampiran 3. Cara Pembuatan Pereaksi Semprot Ninhidrin Timbang 0,3 gr serbuk ninhidrin
Larutkan dalam 100 ml butanol
Lampiran 4. Cara Pembuatan Ekstrak Alii sativi Bulbus dalam Pelarut Metanol sebagai Pembanding pada Uji KLT Senyawa Alil Isotiosianat
Timbang 1 gram biji Alii sativi Bulbus, kemudian direbus dalam 50 ml metanol selama 5 menit
Diamkan selama 1 jam dengan sekali-kali digojog
Ambil bagian yang bening dan diuapkan sampai volumenya tinggal 5 ml
Larutan pembanding ini diambil dengan menggunakan pipet kapiler 5 µl sebanyak 6 kali totolan sehingga konsentrasinya 150 µg/µl.
Lampiran 5. Perhitungan untuk Membuat Larutan Stok Fraksi Air
Timbang sebanyak 100 mg fraksi air dan dilarutkan dalam 10 ml metanol, sehingga konsentrasinya adalah 10 mg/ml (larutan A)
Dari larutan A diambil 1 ml dan dilarutkan juga dalam 10 ml metanol, sehingga konsentrasinya adalah 1 mg/ml (larutan B)
Larutan A dan B ini digunakan untuk membuat variasi konsentrasi 10, 100, dan 1000 µg/ml.
Perhitungan • Larutan A
100 mg fraksi air dalam 10 ml metanol CB1B = 100 mg : 10 ml
• Larutan B CB1B x VB1B = CB2B x VB2B
10 mg/ml x 1 ml = CB2B x 10 ml
CB2B = 1 mg/ml
• Konsentrasi 10 µg/ml
Dibuat dengan menggunakan larutan B (1 mg/ml) CB1B x VB1B = CB2B x VB2B
1 mg/ml x VB1B = 0,01 mg x 5 ml
VB1 B= 0,05 ml
• Konsentrasi 100 µg/ml
Dibuat dengan menggunakan larutan B (1 mg/ml) CB1B x VB1B = CB2B x VB2B
1 mg/ml x VB1B = 0,1 mg x 5 ml
VB1 B= 0,5 ml
• Konsentrasi 1000 µg/ml
Dibuat dengan menggunakan larutan A (10 mg/ml) CB1B x VB1B = CB2B x VB2B
10 mg/ml x VB1B = 1 mg x 5 ml
VB1 B= 0,5 ml
Lampiran 6. Perhitungan untuk Membuat Variasai Konsentrasi Larutan Sampel dari Fraksi Air
Larutan sampel dibuat berdasarkan hasil orientasi, dimana untuk fraksi air dapat memberikan respon kematian pada larva artemia dengan konsentrasi
tertinggi (Large Dose (LD)) yaitu 1000 µg/ml dan konsentrasi terendah (Small Dose (SD)) yaitu 100 µg/ml. Kemudian ditentukan faktor pengalinya (F) menggunakan rumus : 1,8 F 100 1000 F SD LD F 1 - 5 1 - n = = =
(Malone & Robichaud, 1962 cit Thompson, 1985) dimana :
F : faktor pengali (increment factor) SD : small dose n : jumlah peringkat waktu LD : large dose
Sehingga diperoleh 5 seri konsentrasi yaitu 320; 580; 1000; 1900; dan 3400 µg/ml. Volume larutan yang harus diambil untuk tiap-tiap konsentrasi adalah : • Konsentrasi 320 µg/ml
Dibuat dengan menggunakan larutan B (1 mg/ml) CB1B x VB1B = CB2B x VB2B
1 mg/ml x VB1B = 0,320 mg x 5 ml
VB1 B= 1,6 ml
• Konsentrasi 580 µg/ml
Dibuat dengan menggunakan larutan A (10 mg/ml) CB1B x VB1B = CB2B x VB2B
10 mg/ml x VB1B = 0,580 mg x 5 ml
• Konsentrasi 1000 µg/ml
Dibuat dengan menggunakan larutan A (10 mg/ml) CB1B x VB1B = CB2B x VB2B
10 mg/ml x VB1B = 1,000 mg x 5 ml
VB1 B= 0,5 ml
• Konsentrasi 1900 µg/ml
Dibuat dengan menggunakan larutan A (10 mg/ml) CB1B x VB1B = CB2B x VB2B
10 mg/ml x VB1B = 1,900 mg x 5 ml
VB1 B= 0,95 ml
• Konsentrasi 3400 µg/ml
Dibuat dengan menggunakan larutan A (10 mg/ml) CB1B x VB1B = CB2B x VB2B
10 mg/ml x VB1B = 3,400 mg x 5 ml
VB1 B= 1,7 ml
Lampiran 7. Data Kematian Larva Artemia salina Leach pada Kontrol Metanol dari Fraksi Air Setelah 24 jam
Jumlah larva artemia yang mati tiap flakon (ekor) Konsentrasi (µg/ml) I II III IV V Persentase Kematian (%) 320 1 1 1 1 0 8 580 2 0 1 0 1 8 1000 1 0 1 1 2 10 1900 2 1 0 0 2 10 3400 2 1 1 1 0 10
Lampiran 8. Data Kematian Larva Artemia salina Leach Karena Pengaruh Fraksi Air Setelah 24 jam
Jumlah larva artemia yang mati tiap flakon (ekor) Konsentrasi (µg/ml) I II III IV V Persentase Kematian (%) 320 4 3 4 4 4 38 580 5 4 5 5 6 50 1000 8 6 9 9 7 72 1900 8 6 9 9 9 78 3400 9 6 9 9 10 82
Lampiran 9. Perhitungan Persentase Kematian Larva Artemia pada Fraksi Air Menggunakan Rumus Abbot
% Kematian terkoreksi = x 100 kontrol pada kematian Persen - 100 kontrol pada kematian Persen - teramati kematian Persen
(Kumar, Prasad, & Singh, 2005) Konsentrasi 320 µg/ml % Kematian terkoreksi= x 100 8 - 100 8 38- % Kematian terkoreksi=32,6 % Konsentrasi 580 µg/ml % Kematian terkoreksi= x 100 8 - 100 8 50- % Kematian terkoreksi=45,7 % Konsentrasi 1000 µg/ml % Kematian terkoreksi= x 100 10 - 100 10 72- % Kematian terkoreksi=68,9 %
Konsentrasi 1900 µg/ml % Kematian terkoreksi= x 100 10 - 100 10 78- % Kematian terkoreksi= 75,6 % Konsentrasi 3400 µg/ml % Kematian terkoreksi= x 100 10 - 100 10 82- % Kematian terkoreksi=80 %
Lampiran 10. Perhitungan Data Statistik Fraksi Air Menggunakan Probit * * * * * * * * * P R O B I T A N A L Y S I S * * * * * * * * *
DATA Information
5 unweighted cases accepted.
0 cases rejected because of missing data. 0 cases are in the control group.
0 cases rejected because LOG-transform can't be done. MODEL Information
ONLY Normal Sigmoid is requested.
* * * * * * * * * P R O B I T A N A L Y S I S * * * * * * * * *
Parameter estimates converged after 12 iterations. Optimal solution found.
Parameter Estimates (PROBIT model: (PROBIT(p)) = Intercept + BX):
Regression Coeff. Standard Error Coeff./S.E. KONSENTR 1.34939 .53507 2.52189
Intercept Standard Error Intercept/S.E. -3.77872 1.60963 -2.34758 Pearson Goodness-of-Fit Chi Square = .385 DF = 3 P = .943 Since Goodness-of-Fit Chi square is NOT significant, no
heterogeneity factor is used in the calculation of confidence limits.
- - -
* * * * * * * * * P R O B I T A N A L Y S I S * * * * * * * * * Observed and Expected Frequencies
Number of Observed Expected
KONSENTR Subjects Responses Responses Residual Prob 2.51 10.0 3.3 3.479 -.219 .34789 2.77 10.0 4.6 4.814 -.244 .48144 3.02 10.0 6.9 6.171 .719 .61712 3.28 10.0 7.6 7.397 .163 .73969 3.53 10.0 8.0 8.381 -.381 .83814
* * * * * * * * * P R O B I T A N A L Y S I S * * * * * * * * * Confidence Limits for Effective KONSENTR
95% Confidence Limits Prob KONSENTR Lower Upper .01 11.92116 .00000 86.51926 .02 18.98167 .00002 113.16268 .03 25.49805 .00007 134.29437 .04 31.83657 .00020 152.84180 .05 38.13782 .00044 169.87744 .06 44.47458 .00087 185.93358 .07 50.89133 .00159 201.32019 .08 57.41854 .00272 216.23719 .09 64.07895 .00444 230.82328 .10 70.89074 .00696 245.18026 .15 107.70607 .04466 315.80471 .20 150.17940 .19469 388.28078 .25 199.74095 .68438 466.43734 .30 258.04432 2.10004 554.19316 .35 327.16202 5.87344 657.03628 .40 409.79332 15.34629 784.27750 .45 509.55308 37.90793 954.30125 .50 631.41335 88.36101 1209.25980 .55 782.41665 189.98986 1661.17189 .60 972.88756 359.43031 2639.20188 .65 1218.60974 577.70866 5121.17658 .70 1545.01683 812.57935 12072.72440 .75 1995.99941 1061.96380 33679.25348 .80 2654.71048 1348.99613 111957.61353 .85 3701.58171 1717.93034 471262.47595 .90 5623.90514 2266.21489 2954422.18449 .91 6221.74379 2416.61259 4615002.39726 .92 6943.45160 2589.20743 7498185.83335 .93 7834.00336 2790.90436 12796438.3605 .94 8964.28510 3032.13589 23266236.5153 .95 10453.73792 3329.66769 46052554.2087 .96 12522.79452 3712.80176 102824294.372 .97 15635.81542 4239.37897 276377432.516 .98 21003.57248 5048.23723 1030520055.35 .99 33443.29858 6628.75467 8224948863.37
Probit Transformed Responses
Log of KONSENTR 3.6 3.4 3.2 3.0 2.8 2.6 2.4 P robi t 1.0 .8 .6 .4 .2 -.0 -.2 -.4 -.6 Rsq = 0.9435BIOGRAFI PENULIS
Sinta Kiranawati. Lahir di Purbalingga pada tanggal 13 Juli 1984 sebagai putri keempat dari empat bersaudara, dari pasangan Bapak Sachid Hadi Prayitno & Ibu Agatha Ambar Rukmi Amir Retno. Penulis mulai menempuh jenjang pendidikan di Taman Kanak - Kanak Pertiwi, Purbalingga pada tahun 1988 sampai tahun 1990.
Dan melanjutkan pendidikan ke Sekolah Dasar di SD Negeri Gembong II, Purbalingga dari tahun 1990 sampai tahun 1996. Pendidikan Lanjutan Tingkat Pertama ditempuh oleh penulis dari tahun 1996 sampai tahun 1999 di SMP Negeri I Purbalingga, dan pendidikan Lanjutan Tingkat Atas di SMU Negeri I Purbalingga dari tahun 1999 sampai tahun 2002. Penulis melanjutkan pendidikan di Fakutas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Selama kuliah di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, penulis pernah aktif sebagai anggota Paduan Suara Farmasi “Veronika” pada tahun 2003 sampai tahun 2005 serta pernah aktif mengikuti beberapa kepanitiaan.