5 SIMPULAN DAN SARAN
5.2 Saran
Untuk lebih meyakinkan bahwa tumor berasal dari sel otot dapat dilakukan pemeriksaan histopatologi lebih lanjut dengan dilakukan pewarnaan imunohistokimia dengan antibodi anti Muscle-Actin Spesific dan α Smooth Muscle
DAFTAR PUSTAKA
Bäcklin BM, Eriksson L, Olovsson M. 2003. Histology of uterine leiomyoma and occurrence in relation to reproductive activity in the Baltic gray seal (Halichoerus grypus). Vet Pathol 40:175-180.
Bailey KL, Kinsel MJ, Connell KA. 2003. Multiple cutaneous leiomyosarcomas in the perineum of a horse. J Vet Diagn Invest 15: 454-456.
Bauer H, Iongh HHD, Princée FPG, Ngantou D. 2003. Research needs for lion conservation in West and Central Africa. CR Biologies 326:S112-S118. Bauer H, Merwe SVD. 2004. Inventory of free-ranging lions Panthera leo in
Africa. Oryx 38:26-31.
Bauer H, Iongh H. 2005. Lion (Panthera leo) home ranges and livestock conflicts in Waza National Park, Cameroon. Afr J Ecol 43:208-214.
Bauer H, Vanherle N, Silvestre ID, Iongh HHD. 2006. Lion-prey relation in West and Central Africa. Mamm Bio 73:70-73.
Bauer H, Nowell K, Packer C. 2008. Panthera leo. In: IUCN 2012. IUCN Red List of Threatened Species. Version 2012.1. [terhubung berkala]
www.iucnredlist.org [26 Jun 2012].
Beasley MB, Travis WD, Rubin E. 2009. The respiratory system. Di Dalam: Rubin E, Reisner HM, editor. Essentials of Rubin’s Pathology. Ed ke-5. Lippincott Williams & Wilkins.
Bollo E, Scaglione FE, Tursi M, Schröder C, Degiorgi G, Belluso E, Capella S, Bellis D. 2011. Malignant pleural mesothelioma in a female lion (Panthera
leo). Res Vet Sci 91:116-118.
Carlton WM, McGavin MD, Zachary J. 2001. Thomson’s Special Veterinary
Pathology. Ed ke-4. New York: Mosby.
Cheville NF. 2006. Introduction to Veterinary Pathology. Ed ke-3. Blackwell Publishing.
Cooper BJ, Valentine BA. 2002. Tumors of muscle. Di Dalam: Meuten DJ, editor.
Tumors in Domestic Animals. Ed ke-4. Iowa: Blackwell Publishing.
Cooper TK, Ronnett BM, Ruben DS, Zink MC. 2006. Uterine myxoid leiomyosarcoma with widespread metastasis in a cat. Vet Pathol 43:552-556. Corpa JM, Martinez CM. 2010. Uterine leiomyoma in a sheep. Reprod Dom Anim
31
Cullen JM, Page R, Misdorp W. 2002. An overview of cancer pathogenesis, diagnosis, and management. Dalam: Tumor in Domestic Animals. Ed ke-4. Iowa: Blackwell Publishing Company.
De Castro MB, Barbeitas MM, Borges TJ, Bonorino RP, Ramos RR, Szabó MPJ. 2011. Fibromatous epulis in a captive lion (Panthera leo). Braz J Vet Pathol 4:150-152.
Emer J, Solomon S, Mercer S. 2011. Reed’s syndrome a case of multiple cutaneous and uterine leiomyomas. J Clin Aesth Derm 4:37-43.
Feldhamer GA, Vessey SH, Drickamer LC. 1999. Mammology: Adaptation,
Diversity, and Ecology. USA: McGraw-Hill.
Fizell JP. 2001. Handbook of Pathophysiology. Springhouse Corp.
Gallay J, Bélanger MC, Hélie P, Côté E, Johnson TO, Peters ME. 2010. Cardia leiomyoma associated with advaned atrioventricular block in a young dog. J
Vet Cardiol 13:71-77.
Grzimek B. 1970. Grzimek’s Animal Life Encyclopedia Vol. 12: Mammals III. New York: Van Nonstrand Reinhold.
Handharyani E, Ochiai K, Kadosawa T, Kimura T, Umemura T. 1999. Canine hemangiopericytoma: an evaluation of metastatic potential. J Vet Diagn
Invest 11:474-478.
Harrison TM, McKnight CA, Sikarskie JG, Kitchell BE, Garner MM, Raymond JT, Fitzgerald SD, Valli VE, Agnew D, Kiupel M. 2010. Malignant lymphoma in African lion (Panthera leo). Vet Pathol 47:952-927.
Hayward MW, Kerley GIH. 2005. Prey preferences of the lion (Panthera leo). J
Zool Lond 267:309-322.
[IUCN] International Union for the Conservation of Nature and Natural Resources. 2006. Conservation strategy for the lion in west and central Africa. IUCN. [terhubung berkala] www.felidae.org [13 Jul 2012].
Jubb KVF, Kennedy PC, Palmer N. 2007. Pathology of Domestic Animals. Ed ke-5. California: Academic Press.
Kemp WL, Burns DK Brown TG. 2008. The Big Picture Pathology. The McGraw-Hill Companies, Inc.
Koestner A, Higgins RJ. 2002. Tumors of the nervous system. Dalam: Tumor in
Domestic Animals. Ed ke-4. Meuten DJ, editor. Iowa: Blackwell Publishing
Company. hlm 697-738.
Kumar V, Abbas AK, Fausto N. 2005. Robbins and Cotran Pathologic Basis of
32
Kumar, Abbas AK, Fausto N, Mitchell R. 2007. Robbins Basic Pathology. Ed ke-8. Saunders & Elsivier.
Lion’s Press Agency. 2012. Male lions show power and strength. [terhubung berkala] http://lionkingdom.nl/lf032e.htm [9 Okt 2012].
Liu S, Mikaelian I. 2003. Cutaneous smooth muscle tumors in the dog and cat. Vet
Pathol 6:685-692.
MacFarlane PS, Reid R, Callander R. 2000. Pathology Illustrated. Ed ke-5. Harcourt: Churchill Livingstone.
Manarolla G, Caserio S, Sironi G, Rampin T. 2011. Morphological and immunohistochemical observations on leiomyoma of the ventral ligament of the oviduct of the hen. J Comp Path 114:180-186.
Mazur B. 2008. African lion exhibit [terhubung berkala]
www.southwickzoo.com/africanlion.php [12 Sep 2012].
McGavin MD, Zachary JF. 2001. Pathologic Basis of Veterinary Disease. Ed ke-4. Missouri: Mosby Inc.
Mikaelian I, Labelle P, Dore M, Martineau D. 2000. Fibroleiomyomas of the tubular genital in female belunga whales. J Vet Diagn Invest 12:371-374. Montali RJ, Hildebrandt Th, Göritz F, Hermes R, Ippen R, Ramsay E. 1997.Verh
ber Erkrg Zootiere 38:253-258.
Morris J, Dobson J. 2001. Small Animal Oncology. Blackwell Science Ltd.
Munday JS, Stedman NL. 2002. Uterine leiomyomas in two Vietnamese pot-bellied pigs (Sus scrofa). Vet Pathol 39:580-583.
Nielsen AB, Jansen CL, Leifson PS, Jensen HE. 2007. Immunoreactivity of bovine schwannomas. J Comp Path 137:224-230.
Nowak RM. 2005. Walker’s Mammals of the World. Baltimore: John Hopkins University Pr.
Nowell K, Bauer H. 2004. Panthera leo IUCN Red List of threatened species. [terhubung berkala] www.iucnredlist.org [06 September 2012]. hlm 186. Nowell K, Jackson P. 1996. Wild cats status survey and conservation action
plan.Gland: IUCN.
Nzalak JO, Eki MM, Sulaiman MH, Umosen AD, Salami SO, Maidawa SM, Ibe CS. 2010. Gross anatomical studies of the bone of thoracic limbs of the lion (Panthera leo). J Vet Anat 3:65-71.
33
Palmarini M, Fan H. 2001. Retrovirus-induced ovine pulmonary adenocarcinoma, an animal model for lung cancer. J Natl Cancer Inst 90:1603-1614.
Pangayoman R, Yuwono HS. 2003. Gangren kaki yang disebabkan oleh trombosis vena dalam pada seorang wanita setengah baya. Majalah
Kedokteran Bandung 35:1.
Peraturan Pemerintah No. 7 Tahun 1999 Tentang Pengawetan Jenis Tumbuhan dan Satwa.
Price SA, Wilson LM. 2006. Patofisiologi: Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit. Ed-ke-6. Volume ke-1,2. Pendit BU, Hartanto H, Wulansari P, Mahanani DA, penerjemah; Hartanto H, Susi N, Wulansari P, Mahanani DA, editor; Jakarta: EGC. Terjemahan dari: Pathophysiology : Clinical Concepts of
Disease Processes.
Priosoeryanto BP, Huminto H, Wibawan IWT, Tiuria R, Tateyama S. 2002. Morphologial characteristics of in vitro cultured cells derived from tumor in domestic animals. Hayati 9:49-54.
Romansik EM, Reilly CM, Kass PH, Moore PF, and London CA. 2007. Mitotic indekx is predictive for survival for canine cutaneous mast cell tumor. Vet
Pathol 44:335-341.
Rao DG. 2010. A Textbook on Systemic Pathology of Domestic Animals. IBCD Publishers.
Ruddon RW. 2007. Cancer Biology. Ed ke-4. New York: Oxford University Pr. hlm: 4.
Schaudien D, Müller JMV, Baumgärtner W. 2007. Omental leiomyoma in a male adult horse. Vet Pathol 44:722-726.
Sendag S, Cetin Y, Alan M, Ilhan F, Eski F, Wehrend A. 2010. Cervical leiomyoma in a dairy cow during pregnancy. Ani Repro Sci 103:355-359. Smuts GL. 1982. Lion Johannesburg. Macmillian South Africa Publishers Pty Ltd.
hlm 231.
Sontas BH, Ozyogurtcu H, Turna O, Arun S, Ekici H. 2010. Uterine leiomyoma in a spayed Poodle bitch: acase report. Reprod Dom Anim 45:550-554. Stolte M, Welle M. 1995. Cutaneous mast cell tumors in a lion (Panthera leo): a
light and transmission electrin microscopical study. J Comp Path 113:291-294.
Suindra. 2005. Efektivitas ekstrak kloroform biji blustru (Luffa cylindrica) terhadap aktivitas penghambatan sel lestari tumor MCM-B2 dan HeLa secara in vitro [skripsi]. Bogor: Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
34
Tjarta A. 2002. Neoplasia. Dalam: Priggoutomo S, Himawan S, Tjarta A, editor.
Buku ajar Patologi Umum. Ed ke-1. Jakarta: Sagung Seto. hlm 171-238.
Uzal FA, Puschner B. 2008. Cervical leiomyoma in an aged goat leading to massive hemorrhage and death.Can Vet J 49:117-179.
[WCMC] UNEP World Conservation Monitoring Centre. 2012.
UNEP-WCMC Species Database: CITES-Listed Species. [terhubung berkala] http://www.unep-wcmc-apps.org/isdb/CITES/Taxonomy/tax-species-resu-lt.cfm/isdb/CITES/Taxo-nomy/tax-species-result.cfm?display-language= eng&Genus=%25panthe-ra%25&source=animals&Species=leo-&Country =&tabname=status [26 Jun 2012].
Vegad JL. 2007. A Textbook of Veterinary General Pathology. International Book Distributing Co.
Videan E, Satterfield, Buchls S, Lammey ML. 2011. Diagnosis and prevalece of uterine leiomyomata in female chimpanzees (Pan trolodytes). Am J
Primatol 73:665-670.
Withrow SJ, Vail DM. 2007. Withrow and MacEwen’s Small Animal Clinical
Oncology. Saunders Elsivier.
Yun SH, Jang HS, Ku SK, Park JS, Oh TH, Lee KW, Kwon YS, Jang KH. 2011. Desmoplastic fibroblastoma (collagenous fibroma) in an African lion. Pak
Vet J 31: 1-4.
Zen AI. 2012. Studi kasus: Kajian histopatologi pada seekor singa Afrika (Panthera leo) yang menderita pyometra [skripsi]. Bogor: Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
LAMPIRAN
Lampiran 1 Pembuatan Preparat Histopatologi
Sampel organ yang telah difiksasi menggunakan BNF 10% dipotong dengan ketebalan lebih kurang 3 mm dan dimasukkan ke dalam keranjang jaringan. Organ kemudian didehidrasi menggunakan alkohol bertingkat (70%, 80%, 90%, dan tiga kali dalam alkohol absolut). Dehidrasi bertujuan untuk mengeluarkan air dari jaringan agar jaringan bisa diisi oleh parafin. Pengisian parafin ke jaringan bertujuan agar jaringan dapat dipotong tipis.
Penjernihan merupakan tahapan setelah dehidrasi. Proses ini bertujuan untuk mengeluarkan dehidran/zat penarik air dari jaringan dan menggantikannya dengan zat kimia yang dapat bercampur dengan dehidran maupun parafin. Xilol merupakan larutan yang dipakai pada proses penjernihan. Selanjutnya dilakukan pembenaman. Pembenaman bertujuan untuk pengeluaran cairan pembening dari jaringan dan menggantikannya dengan parafin. Pembenaman dilakukan menggunakan parafin cair panas suhu 56-59 °C. Proses pembenaman diiringi dengan pembuatan blok. Pembuatan blok dilakukan menggunakan kotak besi yang diisi jaringan dan parafin panas sampai menutupi permukaan atas jaringan. Blok diberi label pada bagian atas jaringan.
Blok-blok parafin yang telah mengeras kemudian dipotong tipis setebal ± 3-5 µm dengan menggunakan mikrotom. Mikrotom yang digunakan adalah mikrotom putar. Pisau diletakkan pada mikrotom dengan sudut yang disesuaikan. Blok parafin yang akan dipotong direkatkan pada tempat blok pada mikrotom. Jarak preparat ke arah pisau diatur sedekat mungkin. Mikrotom diputar secara ritmis sehingga blok preparat menyentuh pisau dan memotong blok parafin dengan sempurna. Pita-pita parafin awal yang tidak berisi jaringan dibuang. Jika pada parafin telah terdapat organ maka pemotongan dilakukan dengan hati-hati. Pita parafin yang mengandung jaringan diambil dengan hati-hati menggunankan pinset. Pita tersebut letakkan pada penangas air yang berisi air dengan suhu 55 °C. Pita parafin dibiarkan sampai terkembang sempuna. Pita parafin kemudian diletakkan pada kaca objek secara hati-hati. Kaca objek diberi label dan letakkan di dalam inkubator bersuhu 57.1 °C dan biarkan sampai dua jam.
36
Lampiran 2 Pewarnaan Hematoksilin Eosin (HE)
1. Preparat di deparafinisasi mengunakan 3 larutan xilol masing-masing 1 menit. 2. Preparat dihidrasi menggunakan alkohol 100% selama 1 menit, alkohol 96%
selama 2 menit, dan akohol 70% selama 2 menit.
3. Pewarnaan dilanjutkan dengan melewatkan preparat pada air kran selama 30 detik.
4. Preparat dimasukkan ke dalam larutan Hematoksilin Mayer selama 1 menit. 5. Preparat dicuci dengan air kran mengalir selama 30 detik.
6. Preparat dicelupkan kedalam larutan litium karbonat sebanyak tiga celupan dan dicuci dengan air kran selama 30 detik.
7. Preparat dimasukkan ke dalam larutan Eosin 30 detik.
8. Preparat didehidrasi dalam alkohol bertingkat mulai dari alkohol 70%, alkohol 80%, dan dan 96% masing-masing 10 celupan, selanjutnya dimasukkan ke dalam alkohol absolut 15 celupan.
9. Preparat dimasukkan dalam empat larutan xilol masing-masing 1 menit, dibiarkan mengering, dioleskan entellan pada permukaan jaringan dan ditutup dengan gelas penutup.
37
Lampiran 3 Pewarnaan Masson’s Trichrome
1. Preparat dideparafinisasi kemudian dibilas dengan aquades.
2. Preparat direndam dalam larutan Mordant selama 30-40 menit lalu dibilas dengan aquades.
3. Preparat direndam ke dalam larutan Carrazi’s Hematoksilin selama 40 menit lalu dibilas dengan aquades.
4. Preparat dicelupkan secara berurutan ke dalam 0.75% Orange G selama 1-2 menit, asam asetat 1% selama beberapa saat selama dua kali, Ponceau Xylidine Fuchsin selama 15 menit, asam asetat 1% selama beberapa saat selama dua kali.
5. Preparat direndam dalam 2.5% asam fosfotungstat selama 10 menit.
6. Preparat dicelupkan ke dalam larutan asam asetat 1% selama beberapa saat selama dua kali.
7. Preparat direndam dalam larutan Anilin Blue selama 15 menit.
8. Preparat dicelupkan ke dalam larutan asam asetat 1% selama beberapa saat selama dua kali.
9. Preparat direndam ke dalam larutan alkohol 95% selama 5 menit.
10. Preparat didehidrasi dan dijernihkan menggunakan xilol, serta dilanjutkan dengan mounting.
Hasil dari pewarnaan Masson’s Trichrome yakni inti sel berwarna biru tua, otot dan elastin berwarna merah, fibrin dan kalsium berwarna ungu, hyalin berwarna biru muda, jaringan ikat kolagen dan mukus berwarna biru kehijauan.
38
Lampiran 4 Pewarnaan Imunohistokimia
1. Deparafinisasi, hidrasi, dan dicuci dalam aquades mengalir.
2. Dicuci dengan larutan phosphate buffer saline (PBS) sebanyak 3x masing-masing 5-10 menit.
3. Dilakukan proses blocking dengan 0.3% H2O2 selama 30 menit. 4. Dicuci dengan PBS sebanyak 3x masing-masing 5-10 menit. 5. Preinkubasi dalam normal serum rabbit.
6. Inkubasi dengan antibodi anti Desmin/Vimentin/Glial Fibrillary Acidic
Protein (GFAP)/Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) selama 30 menit
7. Dicuci dengan PBS sebanyak 3x masing-masing 5-10 menit. 8. Inkubasi dengan antibodi sekunder selama 10 menit
9. Dicuci dengan PBS sebanyak 3x masing-masing 5-10 menit. 10. Diberikan larutan peroksidase streptavidin selama 5 menit 11. Dicuci dengan PBS sebanyak 3x masing-masing 30 menit. 12. Diberikan pereaksi 3,3-diamino benzidine (DAB).
13. Dicuci dengan PBS sebanyak 3x masing-masing selama 5-10 menit. 14. Dicuci dengan akuades sebanyak 3x selama masing-masing 5-menit. 15. Setelah itu dicelupkan ke dalam larutan Hematoxylin counterstain. 16. Dicuci dengan air mengalir selama 20 menit.