BOGOR
2013
DAFTAR PUSTAKA
Adie MM, Krisnawati A. 2007. Biologi tanaman kedelai. Di dalam: Sumarno, Suyamto, Widjono A, Kasim H, editor. Kedelai:Teknik Produksi dan Pengembangan. Bogor (ID): Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian. hlm 45-73.
Adisarwanto T, Novianti S. 2000. Pengelolaan hara pada tanaman kedelai dan strategi penelitiannya. Di dalam: Gunawan LW, Sunarlim N, Handayani T, Soegiarto B, Adil W, Priyanto B, Suwarno, editor. Penelitian dan Pengembangan Produksi Kedelai di Indonesia. Bogor (ID): Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian. Hlm 71-79.
Anwar K, Askin A, Niarti R. 1995. Pengaruh sumber, takaran fosfat, dan pengapuran terhadap pertumbuhan dan hasil kedelai di lahan sulfat masam Karang Agung Ulu. Di dalam : Sunihardi, Musaddad A, Alihamsyah T, Ismail IG, editor. Teknologi Produksi dan Pengembangan Sistem Usahatani di Lahan Rawa. hlm 45-51.
Arsyad, DM. 2000. Varietas unggul dan strategi pemuliaan kedelai di Indonesia. Di dalam: Gunawan LW, Sunarlim N, Handayani T, Soegiarto B, Adil W, Priyanto B, Suwarno, editor. Penelitian dan Pengembangan Produksi Kedelai di Indonesia. Bogor (ID): Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian. hlm 39-42.
Atman. 2006. Pengelolaan tanaman kedelai di lahan kering masam. J Ilmiah Tambua. 5(3):281-287.
Bairu MW, Aremu AO, Staden JV. 2011. Somaclonal variation in plants: causes and detection methods. Plant Growth Regul. 63:147-173.
Bajji M, Berlin PP, Lutts S, Kinet JM. 2004. Evaluation of drought resistance traits in drum wheat somaclonal lines selected in vitro. Aust J Exp Agric. 44:27-35.
Baogui D, Hai N, Zhisheng Z, Cunyi Y. 2010. Effects of aluminum on superoxide dismutase and peroxidase activities, and lipid peroxidation in the roots and calluses of soybeans differing in aluminum tolerance. Acta Physiol Plant. 32(5):883-890.
Barwale UB, Kerns HR, Widholm JM. 1986. Plant regeneration from callus cultures of several soybean genotypes via embryogenesis and organogenesis. Planta. 167:473-481.
Biswas B, Chowdhurry, Battacharya A, Mandal B. 2002. In vitro screening for increasing drought tolerance in rice. In vitro Cell Dev Biol Plant. 38:525- 530.
BPS [Badan Pusat Statistik]. 2012. Luas Panen, Produktivitas, dan Produksi Kedelai [Internet].[diunduh 2012 Jul 19]. Tersedia pada:
http://www.bps.go.id.
Chawla HS. 2002. Introduction to Plant Biotechnology. New Hampshire (US). p512.
Christianson ML, Warnick DA, Carlson PS. 1983. A morphogenetically competent soybean suspension culture. Science. 222:632-634.
Deptan [Departemen Pertanian]. 2012. Pedoman Teknis SLPTT Kedelai [Internet]. [diunduh 2012 Jul 24]. Tersedia pada: http://www.deptan.go.id. Droste A, Leite PCP, Pasquali G, Mundstock EC, Bodanese-Zanettini MH. 2001. Regeneration of soybean via embryogenic suspension culture. Scientia Agricola. 58(4):753-758.
Droste A, Silva AM, Souza IF, Wiebke-Strohm B, Bücker-Neto L, Bencke M, Sauner MV, Bodanes-Zanettini MH. 2010. Screening of Brazilian soybean genotypes with high potential for somatic embryogenesis and plant regeneration. Pesquisa Agropecuária Brasileira. 45(7):715-720.
Evans DA, Sharp WR. 1986. Somaclonal and gametoclonal variation. Di dalam: Evans DA, Sharp WR, Ammino PV, editor. Hand Book of Plant Cell Culture Vol.4: Techniques and Application. New York (US): Macmilan Pub.Co. p 97-132.
Fernando JA, Vieira MLC, Geraldi IO, Appezzato-da-Glória B. 2002. Anatomical study of somatic embryogenesis in Glycine max (L.) Merrill. Braz Arch Biol Technol. 45(3):277-286.
Finer JJ, Nagasawa A. 1988. Development of an embryogenic suspension culture of soybean (Glycine max Merrill.). Plant Cell Tiss Organ Cul. 15:125-136. Franklin G, Carpenter L, Davis E, Reddy CS, Al-Abed D, Alaiwi WA, Parani M, Smith B, Goldman SL, Sairam RV. 2004. Factors influencing regeneration of soybean from mature and immature cotyledons. Plant Growth Regul. 43:73-79.
Fulzele DV, Satdive RK. 2003. Somatic embryogenesis, plant regeneration, and the evaluation of camptothecin content in Nothapodytes foetida. In vitro Cell Dev Biol Plant. 39:212-216.
George EF, Sherrington PD. 1984. Plant Propagation by Tissue Culture. London (UK): Exegenetics Ltd.
Gesteira AS, Otoni WC, Barros EG, Moreira MA. 2002. RAPD-based detection of genomic instability in soybean plants derived from somatic embryogenesis. Plant Breed. 121:269-271.
Guo T, Zhang G, Zhou M, Wu F, Chen J (2004) Effects of aluminum and cadmium toxicity on growth and antioxidant enzyme activities of two barley genotypes with different Al resistance. Plant Soil. 258:241–248. Hartweck LM, Lazzeri PA, Cui D, Collins GB, Williams EG. 1988. Auxin-
orientation effects on somatic embryogenesis from immature soybean cotyledons. In Vitro Cell Dev Biol. (24):8.
Horst WJ, Asher CJ, Cakmak I, Szulkiewicz P, Wissemeier A H. 1992. Short- term responses of soybean roots to aluminium. J Plant Physiol. 140:174– 178.
Husni A, Kosmiatin M, Mariska I. 2006. Peningkatan toleransi kedelai sindoro terhadap kekeringan melalui seleksi in vitro. Bul Agron. 34(1):25 – 31. Hutami S, Mariska I, Supriati Y. 2006. Peningkatan keragaman genetik tanaman
melalui keragaman somaklonal. J Agrobiogen. 2(2):81-88.
Ito M, Komatsuda T, Takahata Y, Kaizuma N. 1999. Genotype X sucrose interaction for 2,4_D induced somatic embryogenesis in soybean. Plant Biotechnol. 16(5):419-421
Jain MS. 2001. Tissue culture-derived variation in crop improvement. Euphytica. 118:153-166.
Jimènez VM. 2005. Involvement of plant hormones and plant growth regulators on in vitro somatic embryogenesis. Plant Growth Regul. 47:91–110. Joyner EY, Boykin LS, Lodhi MA. 2010. Callus induction and organogenesis in
soybean [Glycine max (L.) Merr.] cv. Pyramid from mature cotyledons and embryos. The Open Plant Sci J. 4:18-21.
Kamprath, E.J. 1970. Exchangeable aluminum as a creteria for liming leached mineral soils. Soil Sci Soc Am Proc. 34: 252-254.
Kennedy IR. 1992. Acid Soil and Acid Rain. New York (US): John Wiley and Sons Inc. p 254.
Khan AA, McNeilly T, Azhar FM. 2001. Review:Stress Tolerance in Crop Plants. Int J Agri Biol. 3(2):250-256.
Khumaida N, Handayani T. 2010. Induksi dan proliferasi kalus embriogenik pada beberapa genotipe kedelai. J Agron Indonesia. 38(1):19–24.
Ko T, Lee S, Krasnyanski S, Korban SS. 2003. Two critical factors are required for efficient transformation of multiple soybean cultivars: Agrobacterium strain and orientation of immature cotyledonary explant. Theor Appl Genet. 107:439–447.
Ko T, Korban SS. 2004. Enhancing the frequency of somatic embryogenesis following agrobacterium-mediated transformation of immature cotyledons of soybean [Glycine max (L.) Merrill.]. In Vitro Cell Dev Biol Plant. 40:552–558.
Kochian LV, Piñeros MA, Hoekenga OA. 2005. The physiology, genetics and molecular biology of plant aluminum resistance and toxicity. Plant and Soil. 274:175–195.
Komatsuda T, Ohyama K. 1988. Genotypes of high competence for somatic embryogenesis and plant regeneration in soybean Glycine max. Theor Appl Genet. 75:695-700.
Kumari BDR, Settu A, Sujatha G. 2006. Somatic embryogenesis and plant regeneration. Indian J Biotechnol. 5:243-345
Larkin P, Scowcroft W. 1981. Somaclonal variation - a novel source of variability from cell cultures for plant improvement. Theor Appl Genet. 60:197-214. Lazzeri PA, Hildebrand DF, Collins GB. 1985. A Procedure for Plant
Regeneration from Immature Cotyledon Tissue of Soybean. Plant Mol Biol Rep. 3(4):160-167.
Loganathan M, Maruthasalam S, Ling YS, Wei CL, Wen HH, Pei FL, Chih WY, Chin HL. 2010. Regeneration of soybean (Glycine max L. Merrill) through direct somatic embryogenesis from the immature embryonic shoot tip. In Vitro Cell Dev Biol Plant. 46:265–273.
Mariska I, Sjamsudin E, Sopandie D, Husni A, Kosmiatin M, Vivi AN. 2004. Peningkatan ketahanan tanaman kedelai terhadap aluminium melalui kultur in vitro. J Litbang Pertanian. 23(2):46-52.
Meredith CP. 1978. Response of cultured tomato cells to aluminium. Plant Sci. 12:17-24.
Moon H, Hildebrand Df. 2003. Effects of proliferation, maturation, and desiccation methods on conversion of soybean somatic embryos. In Vitro Cell Dev Biol Plant. 39:623–628.
Mulyani A, Hikmatullah, Subagyo H. 2004. Karakteristik dan potensi tanah masam lahan kering di Indonesia. Prosiding Simposium Nasional Pendayagunaan Tanah Masam. Bandar Lampung, 29-30 Sep 2003. Bogor
(ID): Pusat Penelitian dan Pengembangan Tanah dan Agroklimat. Hlm 1−32.
Murashige T,Skoog F. 1962. A revised medium for rapid growthand biossays with tobacco tissue cultures. Physiol Plant. 15: 473-477.
Parrott WA, Williams EG, Hildebrand DF, Collins GB. 1989. Effect of genotype on somatic embryogenesis from immature cotyledons of soybean. Plant Cell Tiss Organ Cul. 16:15-21.
Poelhman, JM. 1996. Breeding Field Corps. New York (US): Henry Hall and Company Inc. p427.
Purnamaningsih R, Mariska I. 2005. Seleksi in vitro tanaman padi untuk sifat ketahanan terhadap aluminium. J Biotek Pertanian. 10(2):61-69.
Raemakers CJJM, Jacobsen E, Visser RGF. 1995. Secondary somatic embryogenesis and applications in plant breeding. Euphytica. 81: 93-107. Rai MJ, Kalis RK, Singh R, Gangola MP, Dhawan AK. 2011. Developing stress
tolerant plants through in vitro selection-an overview of the recent progress. Environ Exper Bot. 71:89-98.
Ranch JP, Oglesby L, Zielinski AC. 1985. Plant regeneration from embryo- derived tissue cultures of soybeans. In Vitro Cell Dev Biol. 21:653-658. Riduan A. 2007. Variasi somaklonal sebagai salah satu sumber keragaman genetik
untuk perbaikan sifat tanaman. J Agron. 11:2:107-111.
Riyadi A. 2009. Kotiledon kedelai [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Roy B, Mandal AB. 2005. Towards development of Al-toxicity tolerant lines in
indica rice by exploiting somaclonal variation. Euphytica. 145:221–227. Ryan P, Skerrett M, Findlay G, Delhaize E, Tyerman S. 1997. Aluminum
activates an anion channel in the apical cells of wheat roots. Proc Natl Acad Sci. 94:6547–6552.
Samac DA, Tesfaye M. 2003. Plant improvement for tolerance to aluminum in acid soils – a review. Plant Cell Tiss Organ Cul. 75: 189-207.
Sanchez PA. 1992. Sifat dan Pengelolaan Tanah Tropika. Bandung(ID): ITB Pr. Schmidt MA, Tucker DM, Cahoon EB, Parrott WA. 2005. Towards normalization
of soybean somatic embryo maturation. Plant Cell Rep. 24:383–391. Suhartina. 2005. Deskripsi Varietas Unggul Kacan-kacangan dan Umbi-umbian.
Sumarno, Manshuri AG. 2007. Persyaratan tumbuh dan wilayah produksi kedelai di Indonesia. Di dalam: Sumarno, Suyamto, Widjono A, Kasim H, editor. Kedelai: Teknik Produksi dan Pengembangan. Bogor (ID): Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian. hlm 74-103.
Sutjahjo SH. 2006. Seleksi in vitro untuk ketegangan terhadap aluminium pada empat genotipe jagung. J Akta Agrosia. 9:2.
Sutjahjo SH, Andri E, Oliver H. 2004. Seleksi in vitro untuk toleransi terhadap cekaman Aluminium pada varian somaklon dua kultivar tomat (Lycopersicon esculentum Mill.). Zuriat. 15(1):77-85.
Tang K, E. Zhao, Q Hu, J Yao, A Wu. 2000. A simple and efficient procedure to improve plant regeneration from protoplast isolated from long-term cell- suspension cultures of indica rice. In Vitro Cell Dev Biol Plant. 36:361- 365.
Taylor MG, Vasil IK. 1996. The ultrastructure of somatic embryo development in Pearl Millet (Pennisetum glaucum; Poceae). Amer J Bot. 83 (1): 28-44. Texeira LR, Braccini AL, Churata BGM, Vieira ESN, Martins PK, Schuster I.
2011. Evaluation of soybean cultivars on the embryogenic and organogenic potential. Maringà. 33(1):67-74.
Thibaud-Nissen F, Shealy RT, Khanna A, Vodkin Lo. 2003. Clustering of microarray data reveals transcript patterns associated with somatic embryogenesis in soybean. Plant Physiol. 132:118–136.
Tomlin ES, Branch SR, chamberlain D, Gabe H, Wright MS, Stewart CN. 2002. Screening of soybean, Glycine max (L.) Merrill, lines for somatic embryo induction and maturation capability from immature cotyledons. In Vitro Cell Dev Biol Plant. 38:543–548.
Ubonprasert B, Srinives P, Lamseejan S, Prabuddham P, Peyachoknagul S . 1998. Effect of gamma irradiation of soybean cotyledon explant on embryo induction and regeneration in a somatic embryo cycling system. J Breed Genet. 30(1):19-24.
Wattimena GA. 1992. Bioteknologi Tanaman I. Bogor (ID): Pusat Antar Universitas Bioteknologi.
Wenzel G, Foroughi-Wehr. 1993. In vitro selection. In Hayward, MD, Bosemark NO, Romagosa I editors. Plant Breeding Principle and Prospects. London (UK): Chapman & Hall.
Widholm JM. 1996. In vitro selection and culture-induced variation in soybean. In: Verma DPS, Shoemaker editors. Soybean: Genetics, Molecular Biology and Biotechnology. Wallingford (UK): CAB International. p107- 126.
Wiebke-Strohm B, Homrich MS, Weber RLM, Droste A, Bodanese-Zanettini MH. 2012. Strategies for improvement of soybean regeneration via somatic embryogenesis and genetic transformation. Di dalam: Barrera- Saldaña HA, editor. Genetic Engineering - Basics, New Applications and Responsibilities.145-172.
Widoretno W, Arumningtyas EL, Sudarsono. 2003. Metode induksi pembentukan embrio somatik dari kotiledon dan regenerasi planlet kedelai secara in vitro. Hayati. 10(1):19-24.
Williams EG, Maheswaran G. 1986. Somatic embryogenesis: factors influencing coordinated behaviour of cells as an embryogenic group. Ann Bot. 57: 443- 462.
Yamamoto Y, Kobayashi Y, Devi SR, Rikiishi S, Matsumoto H.2003. Oxidative stress triggered by aluminum in plant roots. Plant Soil. 255:239–243. Yang C, Zhao T, Yu D, Gai J. 2009. Somatic embryogenesis and plant
regeneration in Chinese soybean [Glycine max (L.) Merr.]-impacts of mannitol, abscisic acid, and explant age. In Vitro Cell Dev Biol Plant. 45:180-188.
LAMPIRAN
Lampiran 1. Keragaan tanaman kedelai varietas Wilis di dalam pot dan berbagai genotipe benih kedelai
Keterangan: A) Keragaan tanaman kedelai varietas Wilis di dalam pot, B) Benih
Tanggamus, C) Benih Wilis, D) Benih CG 22-10, E) Benih SP-10-4.
B C D E
Lampiran 2. Komposisi Media Murashige and Skoog dan Media Gamborg
Komposisi Media Murashige and Skoog dan Media Gamborg
Bahan Kimia MS (mg/l) B5 (mg/l) (NH4)2SO4 - 134 NH4 NO 1650 - KNO3 1900 2500 CaCl2 . 2H2O 440 150 MgSO4 . 7H2O 370 250 KH2 PO4 170 - NaH2PO4 . H2O - 150 FeSO4 . 7H2O 27.8 27.8 Na2EDTA 37.3 37.3 MnSO4 . 4H2O 22.3 - MnSO4 . H2O - 10.0 ZnSO2 . 7H2O 8.6 2.0 H3BO3 6.2 3.0 KI 0.83 0.75 Na2MoO4 . 2H2O 0.25 0.25 CuSO4 . 5H2O 0.025 0.025 CoCl2 . 6H2O 0.025 0.025 Myi-inositol 100 100 Niacin 0.5 1.0 Pyridoxine-HCl 0.5 1.0 Thiamine-HCl 0.1 10.0 Glycine 2.0 - Sucrosa 30000 20000
Lampiran 3. Deskripsi kedelai varietas Tanggamus Dilepas tahun : 22 Oktober 2001
SK Mentan : 536/Kpts/TP.240/10/2001 Nomor Induk : K3911-66
Asal : Hibrida (persilangan tunggal): Kerinci x No. 3911
Hasil rata-rata : 1.22 t/ha Warna hipokotil : Ungu Warna epikotil : Hijau Warna kotiledon : Kuning
Warna bulu : Coklat
Warna bunga : Ungu
Warna kulit biji : Kuning Warna polong masak : Coklat Warna hilum : Coklat tua Bentuk biji : Oval Bentuk daun : Lanceolate Tipe tumbuh : Determinit Umur berbunga : 35 hari Umur saat panen : 88 hari Tinggi tanaman : 67 cm Percabangan : 3-4 cabang Bobot 100 biji : 11 g Ukuran biji : Sedang Kandungan protein : 44.5% Kandungan minyak : 12.9% Kandungan air : 6.1%
Kerebahan : Tahan rebah
Ketahanan thd penyakit : Moderat karat daun Sifat-sifat lain : Polong tidak mudah pecah Wilayah adaptasi : Lahan kering masam
Pemulia : Darman MA., M. Muchlis Adie, Heru Kuswantoro, dan Purwantoro
Lampiran 4. Deskripsi kedelai varietas Wilis
Dilepas tahun : 21 Juli 1983
SK Mentan : TP240/519/Kpts/7/1983 Nomor Induk : B 3034
Asal : Hasil seleksi keturunan persilangan Orba x No. 1682
Hasil rata-rata : 1.6 t/ha Warna hipokotil : Ungu Warna batang : Hijau
Warna daun : Hijau-hijau tua Warna bulu : Coklat tua
Warna bunga : Ungu
Warna kulit biji : Kuning Warna polong tua : Coklat tua Warna hylum : Coklat tua Tipe tumbuh : Determinit Umur berbunga : ± 39 hari Umur matang : 85-90 hari Tinggi tanaman : ± 50 cm
Bentuk biji : Oval, agak pipih Bobot 100 biji : ± 10 g
Kandungan protein : 37.0% Kandungan minyak : 18.0% Kerebahan : Tahan rebah
Ketahanan thd penyakit : Agak tahan karat daun dan virus
Benih penjenis : Dipertahankan di Balittan Bogor dan Balittan Malang
Pemulia : Sumarno, Darman M Arsyad., Rodiah, dan Ono Sutrisno
Lampiran 5. Deskripsi kedelai genotipe CG 22-10 dan SP-10-4
Genotipe SP-10-4 adalah galur harapan kedelai pada generasi F7 yang didaptkan dari persilangan tetua Slamet x Pangrango. Genotipe CG-22-10 adalah galur harapan kedelai pada generasi F7 yang didaptkan dari persilangan tetua Ceneng x Godek. Genotipe CG-22-10 dan SP-10-4 memiliki sifat toleran terhadap naungan dan diduga memiliki sifat high yielding sehingga berpotensi untuk dikembangan ke arah ketahanan terhadap tanah masam.
Lampiran 6. Prosedur penyiapan preparat parafin untuk analisis histologi kalus kedelai
Analisa Histologi
Untuk melihat karakter ontogeni kalus yang diduga embriogenik dilakukan studi histologi melalui pembuatan preparat dengan metode parafin. Langkah- langkah yang dilakukan adalah sebagai berikut:
Fiksasi
Sampel kalus yang diduga embriogenik difiksasi dalam larutan Boulin selama 24 jam. Sampel kemudian dipindahkan dan disimpan dalam alkohol 70 % sampai proses selanjutnya. Tujuan dari fiksasi adalah untuk menghentikan proses- proses metabolisme jaringan dengan cepat (pengawetan) dan mencegah autolisis atau pengawetan jaringan.
Dehidrasi
Sampel dipotong kecil dan didehidrasi dalam seri larutan alkohol dengan konsentrasi bertingkat (80%, 90%, dan 95%), masing-masing selama 24 jam. Setelah itu, sampel dimasukkan dalam alkohol 100% (Absolut I, II, dan III), masing-masing selama 24 jam. Tujuan dehidrasi adalah untuk menarik air dari dalam jaringan dengan menggunakan bahan-bahan kimia tertentu seperti alkohol. Penjernihan
Sampel dijernihkan dalam silol ( silol I, II, dan III), masing-masing selama 1 jam. Tujuan penjernihan adalah untuk menggantikan tempat alkohol dalam jaringan yang telah mengalami proses dehidrasi, sehingga sebagian besar jaringan akan menjadi jernih dan transparan.
Penanaman jaringan (Embedding)
Sampel ditanam dalam parafin cair yang terdiri atas parafin I, II, dan III, masing-masing selama 1 jam dalam oven dengan suhu 65oC. Proses ini merupakan suatu usaha memasukkan media penanaman dalam jaringan dengan jalan menggantikan kedudukan bahan penjernih. Sampel kemudian dimasukkan dalam cetakan yang berisi parafin cair. Setelah beku, sampel direndam dalam air biasa, lalu diangkat untuk disimpan dalam lemari es selama 24 jam. Blok parafin
yang sudah dicetak dilepaskan dari cetakannya, kemudian dipotong berbentuk segi empat. Blok paraffin tersebut ditempel pada potongan kayu kecil berbentuk persegi dengan cara dilelehkan sedikit pada bagian bawahnya. Proses penanaman jaringan dalam blok parafin bertujuan untuk memudahkan proses penyayatan dengan bantuan mikrotom.
Pemotongan
Blok paraffin dipotong melintang pada ketebalan 5 µm menggunakan mikrotom, lalu sayatan diletakkan di atas gelas objek. Preparat disimpan dalam inkubator selama 24 jam. Mikrotom adalah mesin yang khusus dirancang dan dipasarkan untuk tujuan mikroteknik dan mampu melakukan penyayatan spesimen dengan ketebalan yang sama atau mendekati sama.
Pewarnaan
Setelah dilakukan proses deparafinisasi dan rehidrasi, sediaan kemudian diwarnai dengan Alcian Blue (AB).
Pengamatan mikroskopis
Pengamatan dilakukan dengan menggunakan mikroskop cahaya yang dilengkapi skala mikrometer.
Lampiran 7. Prosedur pembuatan media padat untuk seleksi in vitro dengan AlCl3
Media seleksi dengan menggunakan agen seleksi AlCl3 dan pH 4 biasanya
dibuat dalam keadaan cair. Agar media yang dibuat tetap padat maka dilakukan dengan cara memisahkan antara larutan yang mengandung AlCl3 dan larutan MS
yang mengandung gelrite (Samac dan Tesfaye 2003). Hal ini dilakukan sebelum larutan di autoklaf, setelah diautoklaf kemudian kedua larutan tersebut dicampurkan dalam keadaan lingkungan yang steril yaitu di dalam autoklaf. Media yang digunakan adalah media MS. Bahan lain yang digunakan adalah gelrite, gula, alkohol 70%, alkohol 96%, bahan kimia komponen media MS, AlCl3, ZPT 2,4-D dan NAA serta aquadest. Alat yang digunakan adalah peralatan
gelas, timbangan analitik, autoklaf dan laminar air flow cabinet.
Prosedur pembuatan media padat untuk seleksi in vitro dengan AlCl3
meliputi: a) sterilisasi alat-alat gelas, b) pembuatan larutan stok dan media, c) pembuatan media seleksi.
a. Botol kultur kosong disterilkan dengan telah diberi tutup plastik dan karet pada botol, kemudian di sterilkan dengan autoklaf selama satu jam pada suhu 121oC tekanan 17.5 – 20 psi. Laminar air flow cabinet telah disterilisasi terlebih dahulu dengan sinar UV selama satu jam kemudian disemprot alkohol 70% dan dibersihkan dengan kertas tissue.
b. Pembuatan larutan stok media MS modifikasi dan stok ZPT 2,4-D serta NAA dilakukan untuk mempermudah pembuatan media. Pembuatan larutan stok untuk media MS modifikasi dikelompokkan dalam larutan stok makro, Ca, mikro A, mikro B, Fe, Myoinositol, vitamin dan stok ZPT.
c. Pembuatan media seleksi agar konsistensinya tetap padat yaitu dilakukan dengan cara memisahkan antara larutan yang mengandung AlCl3 dan larutan
yang mengandung gelrite. Hal ini dilakukan sebelum larutan di autoklaf, setelah diautoklaf kemudian kedua larutan tersebut dicampurkan dalam keadaan lingkungan yang steril yaitu di dalam autoklaf. Kemudian tutup botol yang telah dituangi larutan kemudian tutup dengan plastik dan karet.
VINA NOVITA. Induction of Somatic Embryogenesis and In Vitro Selection of Four Soybean Genotypes for Aluminum Tolerance. Supervised by NURUL KHUMAIDA and SINTHO WAHYUNING ARDIE.
Soybean (Glycine max (L.) Merr.) is an important source of protein for many Indonesian and the demand of soybean for food is increasing year by year. The increasing demand of soybean is not met by national production mainly due to decreasing harvest area. Therefore, expansion of soybean harvested area should be the main priority in the effort to increase soybean production. However, the targeted area should not be in competition with the other more profitable crops such as corn and rice. Dry acid soil, the main marginal lands in Indonesia, can be developed as an expansion of soybean planting areas because of the area reach 102.8 million hectares. Efficient crop improvement programs should be targeted to generate high yielding soybean varieties grown in acid soil. Currently, more than sixty varieties of soybean have been released by the Ministry of Agriculture, however, few are tolerant to acid soil. The constraint in developing soybean varieties for adaptation to adverse environmental condition is low genetic variability. Genetic variability can induced by conventional and non conventional plant breeding. In vitro selection is one strategy from non conventional plant breeding to produce plants that can be use as a source of variation in a breeding program. The use of somatic embryo for in vitro selection program is very valuable since the selected traits will be inherited in the progenies. Embryogenesis somatic was reported to be genotype specific for soybean. The general objective of this research was to obtain soybean promising lines tolerant to Al toxicity. Specifically, this study was aimed to obtain the optimum medium for induction and proliferation of somatic embryo, and to regenerate embryogenic callus of four soybean genotypes; and to obtain tolerant Al somaclones (putative). This study consisted of two experiments, which was induction of somaclonal variation of four soybean genotypes via somatic embryogenesis and in vitro selection of four soybean genotypes using AlCl3 to generate a putative somaclone acid soil tolerant.
Embryogenic callus was obtained from the experiment of optimation of embryogenic callus induction medium. Induced callus had morphological
genotypes. The morphology of the formed callus can be classified into six groups. Callus can be induced at 6 weeks after treatment (WAT) on MS medium with the addition of 10 mg/l 2,4-D and 10 mg/l NAA in all soybean genotypes. Callus induced on medium with 5 mg/l NAA had callus morphology that tends to be green and then rooted. Callus induced on MS medium with the addition of 40 mg/l 2,4-D tends to had compact callus. In MS medium containing 40 mg/l 2,4-D,