5. SIMPULAN DAN SARAN …
5.2 Saran
Penelitian lebih lanjut dengan menggunakan feses ternak yang mengandung antigen ekskretori sekretori Fasciola gigantica dari ternak yang positif terinfeksi Fasciola gigantica.
DAFTAR PUSTAKA
[DPD CDC]. 2009. Fascioliasis. [terhubung berkala]. http://www.dpd.cdc.gov/dpdx [4 Desember 2010].
Ath G de. 1995. ELISA sebagai Proses Pengukuran: Beberapa Pertimbangan Statistik. Di dalam: Artama WT, penerjemah; Burgess GW, editor. Teknologi ELISA dalam Diagnosis dan Penelitian. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Terjemahan dari: ELISA Technology in Diagnosis and Research.
Awad WS, Ibrahim AK, Salib FA. 2009. Using indirect ELISA to assess different antigens for the serodiagnosis of Fasciola gigantica infection in cattle, sheep, and donkeys. Res Vet Sci 86:466-471.
Bird AF, Jean B. 1991. The Structure of Nematodes Second Edition. California, San Diego: Academic Press Inc.
Burgess GW. 1995. Prinsip Dasar ELISA dan Variasi Konfigurasinya. Di dalam: Artama WT, penerjemah; Burgess GW, editor. Teknologi ELISA dalam Diagnosis dan Penelitian. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Terjemahan dari: ELISA Technology in Diagnosis and Research.
Cai YC, Chen JX. 2009. Chicken egg yolk immunoglobulin and its application in medicine. Zhongguo Ji Sheng Chong Xue Yu Ji Sheng Chong Bing Za Zhi 27(6):527-530.
Carlander D. 2002. Avian Ig-Y Antibody: In Vitro and In Vivo. Comprehensive Summaries of Uppsala Disertations from the Faculty of Medicine 1119. Uppsala: Acta Universities Upsaliensis.
Carnevale S, Rodríguez MI, Santillán G, Labbé JH, Cabrera MG, Bellegarde EJ, Velásquez JN, Trgovcic JE, Guarnera EA. 2001. Immunodiagnosis of human fascioliasis by an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) and a micro-ELISA. Clin Diag Lab Immun 8:174-177.
Cauvin A, Bouvet G, Boulard C. 1995. Humoral and cellular immune responses to Fasciola hepatica experimental primary and secondary infection in sheep. Int J Parasitol 25:1227-1241.
Chowdhury N, Tada I. 1994. Helminthology. New Delhi: Spinger – Verlag, Norasa Publising House.
Cock H de, Knox DP, Claerebout E, Graaf DC de. 1993. Partial characterization of proteolytic enzymes in different developmental stages of Ostertagia ostertagi. J Helminthol 67:271-278.
Dunn P. 1994. The Goatkeeper’s Veterinary Book Third Edition. London: Farming Press.
Estuningsih SE. 2006. Diagnosis of Fasciola gigantica infection in cattle using capture ELISA assay for detecting antigen in faeces JITV 11(3):229-234. Estuningsih SE, Widjajanti S, Adiwinata G, Piedrahita D. 2004. Detection of
coproantigen by sandwich ELISA in sheep experimentally infected with Fasciola gigantica. Trop Biomed 21(2):51-56.
Fagbemi BO, Aderibigde AO, Guobadia EE. 1997. The use of monoclonal antibody for immunodiagnosis of Fasciola gigantica infection in cattle. Vet Parasitol 69:231-240.
Farrah IO, Nyindo M. 1996. Schistosoma mansoni induces in the kenya baboon a novel intestinal pathology that manifestly modulated by an irradiated cercarial vaccine. J Parasitol. 72:285-308.
Foreyt WJ. 2001. Veterinary Parasitology Reference Manual Fifth Edition. America: Lowa State University Press.
Gao J, Zhou YC, Huang YF. 2008. Purification and clinical application of egg yolk immunoglobulins. Zhonghua Nan Ke Xue 14(2):166-170.
Gassman M, Pia T, Thomas W, Ulrich H. 1990. Efficient production of chicken egg yolk antibodies against a conserved mammalian protein. Foseb J 4:2528-2532.
Guyton AC, Hall JE. 2007. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi ke-11. Irawati, et al, penerjemah; Rachman LY, editor. Jakarta: EGC. Terjemahan dari: Textbook of Medical Physiology11th Edition.
Harlow E, Lane D. 1988. Antibodies, A Laboratory Manual. USA: Cold Spring Harbor Laboratory
Higgins DA, Cromie RL, Liu SS, Magor KE, Warr GW. 1995. Purification of duck immunoglobulin: an evaluation of protein A and protein G affinity chromatography. Vet Immunol Immunop 44:169-180.
Kresno SB. 2001. Imunologi: Diagnosis dan Prosedur Laboratorium. Edisi ke-4. Jakarta: Balai Penerbit FKUI.
Kusumamihardja S. 1992. Parasit dan Parasitosis pada Hewan Ternak dan Hewan Piaraan di Indonesia. Bogor: Pusat Antar Universitas Bioteknologi IPB.
Larsson A, Ballow RM, Lindahl TL, Frosberd PO. 1993. Chicken antibodies: taking advantages of evolution a review. Poultry Sci 72:1807-1812.
Larsson A, Sjoquist J. 1998. Chicken antibodies: a tool to avoid false positive result by rheumatoid factor in latex fixation test. J Immun Meth 108:205. Mader SS. 1997. Inquiry into Life. 8th Edition. Columbus: McGraw Hill
Company.
Malek EA. 1980. Snail Transmitted Parasitic Disease Vol. II. Florida: CRC Press. McKeand JB, Knox DP, Duncan JL, Kennedy MW. 1995. Protectiva immunisation of guinea pigs against Dictyocaulus viviparous using excretory/ sexcretory products of adults parasites. Int J Parasitol 25:93104. Michael A, Meenatchisundaram S, Parameswari G, Subbraj T, Selvakumaran R,
Ramalingam S. 2010. Chicken egg yolk (IgY) as an alternative to mammalian antibodies. Indian J Sci Technol 3:468-474.
Mitchell GBB. 2007. Liver Fluke. Edisi ke-4. London: Blackwell.
Murtini S. 2010. Diktat Praktikum ELISA. Bogor: Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
Patoja D, Vinueasa O, Gonzáles B, Álvarez H. 2000. Colloidal stability IgG and IgY coated latex microspores colloid and surfaces B. Biointerfaces 20:165-175.
Polson A, Von WM, Van RM. 1980. Isolation of viral IgY antibodies from yolk of immunized hens. Immunol Comun 9:475-493.
Rhoads ML, Fetterer RH. 1997. Extracellular matrix: a tool for defining the extracorporeal function of parasite proteases. Parasitol Today 13:119-122. Ridi R el, Salah M, Wagih A, William H, Tallima H, Shafie MH el, Khalek TA,
Amir A el, Ammou FFA, Motawi H. 2007. Fasciola gigantica excretory secretory products for immunodiagnosis and prevention of sheep fasciolosis. Vet Parasitol 149:219-228.
Rose ME, E Orlan. 1981. Immunoglobulin in the egg, embryo, and young Chick. Dev Comp Immun 5:15-20.
Satrija F. 2009. Pengembangan Diagnostika Coproantigen untuk Mendeteksi Infeksi Cacing Hati pada Ternak Ruminansia. Laporan Pelaksanaan Hibah Kompetensi.
Satrija F. 2010. Program Pengendalian Fasciolosis pada Ruminansia Berbasis Metoda Deteksi Dini Infeksi dengan Coproantigen . Laporan Pelaksanaan Hibah Kompetensi.
Satrija F, Murtini S, Retnani EB, Ridwan Y. 2007. Pengembangan Uji ELISA untuk Mendeteksi Coproantigen sebagai Metode Diagnosa Infeksi Cacing Pita pada Ayam. Makalah Seminar Hasil Penelitian LPPM IPB.
Schade R, Staak C, Hendriksen C, Erhard R, Hugl H, Koch G, Larsson A, Pollmann W, Regermortel M van, Rijke E, Spielmann H, Steinbusch H, et al. 1996. The production of avian (egg yolk) antibodies IgY alternative to laboratorium animal. Vet Immunol Immunop 24: 925-934.
Shehab AY, Hassan EM, Basha LMA, Omar EA, Helmy MH, Morshedy HN el, Farag HF. 1999. Detection of circulating E/S antigens in the sera of patients with fascioliasis by IELISA: a tool of serodiagnosis and assessment of cure. TropMed Int Health 4:686-690.
Silva WD da, Tambourgi DV. 2010. IgY: a promising antibody for use in immunodiagnostic and in immunotherapy. Vet Immun and Immunop 135:173-180.
Smith JR. 1995. Produksi Serum Hiperimun. Di dalam: Artama WT, penerjemah; Burgess GW, editor. Teknologi ELISA dalam Diagnosis dan Penelitian. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Terjemahan dari: ELISA Technology in Diagnosis and Research.
Soulsby EJL. 1986. Helminths, Arthopods, and Protozoa of Domesticated Animal Seventh Editon. London: Bailliere Tindall.
Subandriyo, Sartika T, Suhardono, Gray GD. 2004. Worm Control for Small Ruminants in Indonesia. Australia: Australian Center for International Agricultural Research-Scribby Gum Publication.
Suwarno. 2003. Prinsip Dasar, Optimalisasi, dan Interpretasi Hasil Uji ELISA. Surabaya: Lab Virology dan Immunologi FKH Unair.
Stewart I, Wood D, Jenkins J, Jinna A, Dodge B, Acaster M, Said B, Burns R, Gridley S, Brenner J, Gibson V, et al. 1990. Immnunochemical Techniques a Practical Workshop. Hatfield Herts: Hatfield Polytechnic.
Szabo C, L Bardos, S Losonezy, K Karchesz. 1998. Isolation of Antibody from Chicken and Quail Eggs. INABIS. http://www.mcmaster.ca [25 januari 2010].
Tizard IR. 2004. Veterinary Immunology: an Introduction Sixth Edition. Pennsylvania: WB Saunders.
Warr GW, Magor KE, Higgins DA. 1995. IgY: clues to the origins of modern antibodies. Immun Tod 16:392-398.
[WHO] World Health Organization. 2011. Fascioliasis.
http://www.who.int/neglected_diseases/diseases/fascioliasis/en/ [26 Juli
2011].
Wilson K, Walker J. 2000. Principles and Techniques of Practical Biochemistry Fifth Edition. United Kingdom: Cambridge University Press.
Wulandari S. 2004. Studi Histopatologi Saluran Cerna dan Limpa Ayam Petelur yang Diberi Bahan Antigen Ekskretori – Sekretori Cacing Ascaridia galli Dewasa [skripsi]. Bogor: Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor.
Zhang WW. 2003. The use of gene-spesific IgY antibodies for drug target discovery. Els Sci 8:364-371.
OPTIMASI PENGGUNAAN IgY DAN IgG SEBAGAI
ANTIBODI PENANGKAP DAN PENDETEKSI ANTIGEN
EKSKRETORI SEKRETORI (ES) Fasciola gigantica DALAM
UJI ELISA
RISMA ADELIA
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN
SUMBER INFORMASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi dengan judul “Optimasi Penggunaan IgY dan IgG sebagai Antibodi Penangkap dan Pendeteksi Antigen Ekskretori Sekretori (ES) Fasciola gigantica dalam Uji ELISA” adalah benar merupakan hasil karya saya dengan arahan dari dosen pembimbing dan belum pernah diajukan dalam bentuk apapun ke Perguruan Tinggi manapun. Semua sumber data dan informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang telah diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini.
Bogor, Juli 2011
Risma Adelia B04070010
ABSTRACT
RISMA ADELIA. Optimation IgY and IgG as Capture and Detection Antibody of Fasciola gigantica Excretory Secretory (ES) Antigen in ELISA Assay. Under direction of FADJAR SATRIJA and SRI MURTINI.
Fasciolosis is a parasitic disease of domestic ruminant that cause high economic loss. Currently diagnosis of fasciolosis relies on microscopic examination of Fasciola sp. eggs in fecal sample. Serological test such as ELISA has been developed to improve the diagnostic method of fasciolosis. This study was designed to optimize the use of polyclonal antibodies (IgY and IgG) as capture antibody and detection antibody in ELISA assay to detect excretory secretory (ES) of Fasciola gigantica. The conformation was done in two models which compared IgY (9,57 mg/ml) and IgG (3,75 mg/ml) as capture antibody. The first conformation was IgY as capture antibody in 1:1000 dilution and IgG as detection antibody in 1:100, 1:1000, and 1:10000 dilutions. The second conformation was IgG as capture antibody in 1:1000 dilution and IgY as detection antibody in 1:100, 1:1000, and 1:10000 dilutions. The results showed that IgY as capture antibody in 1:1000 dilution and IgG as detection antibody in 1:100, 1:1000, 1:10000 dilutions were able to capture ES antigen 3,87; 2,85; and 1,65 times than cut off value. The other conformation with IgG as capture antibody in 1:1000 dilution was able to capture ES antigen as much as 1,91 times than cut off value with IgY as detection antibody in 1:100 dilution. This showed that the good optimation ELISA was IgY as capture antibody in 1:1000 dilution and IgG as detection antibody in 1:100 dilution.
RINGKASAN
RISMA ADELIA. Optimasi Penggunaan IgY dan IgG sebagai Antibodi Penangkap dan Pendeteksi Antigen Ekskretori Sekretori (ES) Fasciola gigantica dalam Uji ELISA. Dibimbing oleh FADJAR SATRIJA dan SRI MURTINI.
Fasciolosis merupakan penyakit parasitik pada ruminansia domestik yang menyebakan kerugian ekonomi yang besar. Diagnosis fasciolosis saat ini mengandalkan pemeriksaan mikroskopik telur Fasciola sp. pada sampel feses. Tes serologis seperti ELISA sudah dikembangkan untuk meningkatkan metode diagnostik fasciolosis. Penelitian ini dirancang untuk optimasi penggunaan antibodi poliklonal (IgY dan IgG) sebagai antibodi penangkap dan antibodi pendeteksi untuk mendeteksi ekskretori sekretori (ES) Fasciola gigantica dalam uji ELISA. Konformasi pengujian dilakukan dalam dua permodelan dengan membandingkan IgY (9,57 mg/ml) dan IgG (3,75 mg/ml) sebagai antibodi penangkap. Konformasi pertama adalah IgY sebagai antibodi penangkap dengan pengenceran 1:1000 dan IgG sebagai antibodi pendeteksi dengan pengenceran 1:100, 1:1000, dan 1:10000. Konformasi kedua adalah IgG sebagai antibodi penangkap dengan pengenceran 1:1000 dan IgY sebagai antibodi pendeteksi dengan pengenceran 1:100, 1:1000, dan 1:10000. Hasil pengujian menunjukkan IgY sebagai antibodi penangkap pada pengenceran 1:1000 dan IgG sebagai antibodi pendeteksi pada pengenceran 1:100, 1:1000, dan 1:10000 mampu menangkap antigen ES 3,87; 2,85; dan 1,65 kali dari nilai cut off. Konformasi lain dengan IgG sebagai antibodi penangkap pada pengenceran 1:1000 hanya mampu menangkap antigen ES 1,91 kali dari nilai cut off dengan IgY sebagai antibodi pendeteksi pada pengenceran 1:100. Hasil menunjukkan bahwa optimasi yang baik adalah IgY sebagai antibodi penangkap pada pengenceran 1:1000 dan IgG sebagai antibodi pendeteksi pada pengenceran 1:100.
© Hak Cipta milik IPB tahun 2011
Hak Cipta Dilindungi Undang-Undang
Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulis ini tanpa
mencantumkan atau menyebutkan sumbernya. Pengutipan hanya
untuk kepentingan pendidikan, penelitian, penulisan karya ilmiah,
penyusunan laporan, penulisan kritik atau tinjauan suatu masalah,
dan pengutipan tersebut tidak merugikan kepentingan yang wajar
IPB.
Dilarang mengumumkan dan memperbanyak sebagian atau seluruh
karya tulis dalam bentuk apapun tanpa izin IPB.
OPTIMASI PENGGUNAAN IgY DAN IgG SEBAGAI
ANTIBODI PENANGKAP DAN PENDETEKSI ANTIGEN
EKSKRETORI SEKRETORI (ES) Fasciola gigantica DALAM
UJI ELISA
RISMA ADELIA
SKRIPSI
Sebagai Salah Satu Syarat untuk Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran Hewan pada Fakultas Kedokteran Hewan
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
Judul Skripsi : Optimasi Penggunaan IgY dan IgG sebagai Antibodi Penangkap dan Pendeteksi Antigen Ekskretori Sekretori (ES) Fasciola gigantica dalam Uji ELISA
Mahasiswa : Risma Adelia NIM : B04070010
Disetujui,
drh. Fadjar Satrija, MSc, PhD Dr. drh. Sri Murtini, MSi Pembimbing 1 Pembimbing 2
Diketahui,
Dr. Nastiti Kusumorini Wakil Dekan
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Payakumbuh, Sumatera Barat pada tanggal 11 Juli 1989. Penulis merupakan anak kedua dari empat bersaudara pasangan ayah drh. Erry Marsal dan ibu Dewi Darmasari.
Penulis menyelesaikan pendidikan dasar di SD PIUS Payakumbuh tahun 2001. Pada tahun 2004 penulis lulus dari SMP FIDELIS Payakumbuh, pada tahun 2007 penulis lulus dari SMAN 1 Payakumbuh, dan pada tahun yang sama penulis lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI) pada program studi Kedokteran Hewan.
Selama kuliah penulis aktif dalam berbagai organisasi dan kepanitiaan dalam kampus. Penulis pernah menjadi Dewan Gedung Asrama A3 (2007-2008), anggota Bicycle Community (2007-2008), Manajer Periklanan Koran Kampus IPB (2008-2009), Ketua Departemen Informasi dan Komunikasi Unit Kegiatan Mahasiswa Uni Konservasi Fauna IPB (UKM UKF IPB) (2008-2009), Ketua Divisi Pendidikan dan Pelatihan Himpunan Minat dan Profesi Ruminansia FKH IPB (Himpro Ruminansia FKH IPB) (2009-2010), Sekretaris Bidang Sosial Lingkungan UKM UKF IPB (2009-2010), Ketua Lembaga Struktural Bina Desa Badan Eksekutif Mahasiswa Kabinet Katalis FKH IPB (LS Bina Desa BEM FKH IPB) (2009-2010). Penulis pernah mengikuti kegiatan Pengabdian Masyarakat di Kabupaten Kediri (2010) yang diadakan oleh FKH IPB. Beasiswa yang pernah penulis dapatkan adalah Tanoto Foundation (2008-2010). Prestasi akademik dan nonakademik yang pernah penulis raih adalah Mahasiwa Berprestasi Tingkat 3 FKH IPB (2011) dan Juara 3 Kontes Penjurian Sapi Perah Tingkat Nasional Kategori Mahasiswa Grup (2010) yang diadakan oleh Cattle Buffalo Club Universitas Padjadjaran Bandung (CBC UNPAD). Penulis pernah mengikuti kegiatan magang kerja di Pusat Latihan Gajah (PLG) Taman Nasional Way Kambas Lampung (2008), Balai Inseminasi Buatan Daerah (BIBD) Tuah Sakato (2009), dan Koperasi Peternak Bandung Selatan (KPBS) Pangalengan (2010). Penulis juga pernah menjadi asisten praktikum mata kuliah Ilmu dan Teknologi Reproduksi (2011).
PRAKATA
Alhamdulillahirrabil’alamin. Puji syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT atas segala rahmat dan karunia yang telah diberikan, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul Optimasi Penggunaan IgY dan IgG sebagai Antibodi Penangkap dan Pendeteksi Antigen Ekskretori Sekretori (ES) Fasciola gigantica dalam Uji ELISA. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Hewan pada Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor.
Penulisan skripsi ini tidak lepas dari dukungan dan bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, dengan rasa tulus dan hormat, penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1. Orang tua dan keluarga besar (ayah, mama, kakak Megasari Marsela, adik Andhika Nugraha, adik Darmawan Sentosa, teh Donnawatty) atas doa, kasih sayang, motivasi, dukungan, dan nasihat, yang menjadi sumber semangat dan insipirasi bagi penulis.
2. drh. Fadjar Satrija, MSc, PhD dan Dr. drh. Sri Murtini, MSi sebagai pembimbing skripsi atas arahan, kesabaran, motivasi, waktu, dan pemikiran selama proses penelitian dan penyelesaian skripsi ini.
3. Dr. drh. Elok Budi Retnani, MS sebagai pembimbing akademik dan penilai seminar atas motivasi, kesabaran, perhatian, arahan, dan masukan.
4. Dr. drh. Sus Derthi, Msi dan drh. Kusdiantoro, MSi sebagai dosen penguji, serta drh. Okti Nadia Poetri, MSi sebagai moderator seminar atas saran, kritik, dan masukan ilmu untuk perbaikan skripsi.
5. Sonni Martahadi, SKH; Aidell Fitri, Auliya Indiarti, Bagus Setiawan, Megasari Kusuma atas semangat, perhatian, kesabaran, motivasi, bantuan, kekeluargaan, dan kasih sayangnya.
6. Rekan sepenelitian (Retno Setyaningsih, Joko Utomo, dan Ibu Samarang) atas kerja sama, bantuan, dan semangat selama penelitian dan penyelesaian skripsi. 7. Bapak Sulaeman, mba Selin, mba Ade, pak Kosasih, bu Wiwik, pak Agus, dan
8. Keluarga besar Gi44nuzzi (Ridi, Nyit, Amalia, Antok, Rahman, dll) atas tahun-tahun kebersamaan, pengalaman, dan pelajaran berharga.
9. Keluarga besar UKF, terutama UKF ‘5 (Hanna, jeung ‘5, dll) atas kekeluargaan, bantuan, pengalaman, pelajaran, dan ekspedisi berkesan.
10. Goblet ’42 (kak Sheva’Ciripa’, kak Othel, dll), Aesculapius ’43 (kak Unita, kak Tika, kak Putri, mas Umar, kak Roby, dll), Avenzoar ‘45, dan WCC Veteriner (mas Wawan, mas Bian) atas bantuan dan dukungannya.
11. Teman-teman Wisma Nusakambangan (Yasmin, kak Breth, mba Lulu, Icha) atas kebersamaan dan dorongan semangat.
12. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu yang telah memberikan bantuan, baik secara langsung maupun tidak langsung dalam penyelesaian skripsi ini. Semoga Allah senantiasa membalas kebaikan mereka dan melimpahkan rahmat-Nya.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna. Saran dan kritik untuk penyempurnaan skripsi ini sangat diharapkan. Akhir kata, semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca.
Bogor, Juli 2011
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR ISI ... xi
DAFTAR TABEL ... xii
DAFTAR GAMBAR ... xiii
1. PENDAHULUAN ……….. 1.1 Latar Belakang ………... 1.2 Tujuan ……… 1.3 Manfaat ……….. 1 1 2 3 2. TINJAUAN PUSTAKA ……… 2.1 Immunoglobulin Y (IgY) ...……… 2.2 Immunoglobulin G (IgG) ……….. 2.3 Fasciola gigantica ………. 2.3 Ekskretori Sekretori ………... 2.4 ELISA ……… 4 4 5 7 10 12 3. METODOLOGI PENELITIAN ………..
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ……… 3.2 Metode Penelitian ……….. 3.2.1 Pemurnian Immunoglobulin Y (IgY) ………... 3.2.2 Pemurnian Immunoglobulin G (IgG) ………... 3.2.3 Pengukuran Konsentrasi Immunoglobulin Y (IgY) ………. 3.2.4 Pengukuran Konsentrasi Immunoglobulin G (IgG)……….. 3.2.5 Pengujian ELISA ……….……. 3.2.6 Analisis Data ……….…… 14 14 14 14 15 16 16 17 20
4. HASIL DAN PEMBAHASAN ………. 21
5. SIMPULAN DAN SARAN ….………...………...
5.1 Simpulan ……… 5.2 Saran ……….. 29 29 29 DAFTAR PUSTAKA ……… 30
DAFTAR TABEL
No Halaman
1 2
Pengenceran larutan BSA dengan aquabides steril ...………… Nilai cut off konformasi uji ELISA ………...
17 22 3 Perbandingan hasil absorbansi uji ELISA konformasi pertama
dengan nilai cut off ….………... 24 4 Perbandingan hasil absorbansi uji ELISA konformasi kedua
DAFTAR GAMBAR
No Halaman
1 2
Struktur IgG ……….. Siklus hidup cacing hati ………
6 9 3
4
Konformasi pengujian ELISA .………... Nilai absorbansi ELISA konformasi pertama ...……….
17 22 5 Nilai absorbansi ELISA konformasi kedua ..……… 23 4 Perbedaan struktur IgG manusia dengan IgY ……….……….. 26
1. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Fasciolosis merupakan penyakit parasitik yang disebabkan oleh cacing digenetik trematoda yaitu Fasciola hepatica dan Fasciola gigantica yang biasa menyerang ternak ruminansia. Kasus fasciolosis secara epidemiologi merupakan penyakit ternak yang bersifat kosmopolitan karena distribusinya di negara-negara yang memelihara hewan ruminansia (Mitchell 2007). Penyakit ini dapat mengakibatkan kerugian ekonomi karena penurunan produksi daging, susu, wool, bahkan kematian serta pengafkiran hati.
Fasciolosis juga menjadi zoonosis penting di berbagai negara di dunia. Penyakit ini tidak lagi terbatas pada daerah geografi spesifik, namun sudah menyebar ke seluruh dunia. Kasus pada manusia dilaporkan meningkat dari Eropa, Amerika, Oceania, Afrika, dan Asia. Penularan fasiolosis awalnya dipercaya akibat bekerja di peternakan yang terinfeksi. Namun fakta lain menyebutkan bahwa penularan dapat terjadi dari manusia ke manusia. Kasus fasciolosis pada manusia terjadi akibat mengonsumsi tanaman air yang tercemar metaserkaria. Infeksi dapat juga terjadi akibat meminum air yang mengandung metaserkaria dan mengonsumsi makanan serta peralatan dapur yang dicuci air yang mengandung metaserkaria (WHO 2011).
Diagnosis fasciolosis secara konvensional dilakukan melalui pemeriksaan telur cacing pada sampel feses. Metode ini memiliki banyak kekurangan antara lain tingkat sensitifitasnya yang rendah karena telur cacing tidak ditemukan pada periode prepatent. Selain memakan banyak waktu dan tenaga, metode ini juga membutuhkan jumlah dan volume feses yang tepat. Metode ini kurang akurat digunakan pada kasus infeksi kronis karena dapat menghasilkan negatif palsu akibat sekresi telur melalui feses dalam fase infeksi ini bersifat intermitten. Kekurangan lain metode ini adalah tidak dapat mendiagnosis kasus fasciolosis ektopik ketika Fasciola sp. berkembang di jaringan selain di hati (Cauvin et al. 1995; Awad et al. 2009).
Berbagai teknik diagnosa lain telah dikembangkan untuk mengatasi kekurangan pemeriksaan telur cacing dalam feses. Salah satu metode diagnosa
alternatif yang berkembang adalah uji ELISA (Enzime Linked Immunosorbent Assay) untuk mendeteksi antigen cacing dalam tubuh induk semang. Antigen yang dapat dideteksi dalam uji ini antara lain berupa ekstrak kasar cacing, ekskretori sekretori, pemurnian atau molekul rekombinan seperti cathepsin L-1, dan deteksi antigen sirkulasi, serta coproantigen (Carnevale et al. 2001).
Coproantigen adalah antigen cacing yang dilepaskan ke sirkulasi darah dan dikeluarkan ke dalam feses induk semang definitif. Coproantigen umumnya berupa protein ekskretori sekretori (ES) yang merupakan hasil metabolisme cacing sejak cacing berparasit di dalam tubuh inangnya. Ekskretori sekretori yang dihasilkan oleh cacing Fasciola gigantica merupakan salah satu jenis antigen dalam feses ruminansia yang dapat dideteksi dengan uji serologis ELISA (Ridi et al. 2007, Awad et al. 2009).
Pengujian keberadaan suatu antigen membutuhkan antibodi penangkap dan pendeteksi berupa antibodi anti-ekskretori sekretori. Selama ini, antibodi penangkap dan pendeteksi yang umum digunakan berupa antibodi poliklonal dari kelinci dan antibodi monoklonal yang dikembangkan dengan kultur jaringan (Fagbemi 1997; Estuningsih et al. 2004). Penelitian yang dilakukan oleh Satrija et al. (2007) telah menggunakan IgY sebagai antibodi penangkap dari ekskretori sekretori cacing pita Raillietina sp.
Imunoglobulin Y (IgY) belum banyak digunakan dalam berbagai pengujian ELISA, terutama sebagai antibodi penangkap ataupun pendeteksi. IgY memiliki banyak keuntungan dibandingkan antibodi mamalia dalam mendeteksi antigen mamalia. Penelitian ini menguji kemampuan IgY dan IgG sebagai antibodi penangkap dan pendeteksi ekskretori sekretori Fasciola gigantica