FILM LAYAK MAKAN PROTEIN WHEY DENGAN EKSTRAK
HERBA MENIRAN (Phyllanthus niruri L.)
SEBAGAI ANTIBAKTERI
TESIS
Oleh
DIAN NIRWANA HARAHAP
117006021/KIM
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
FILM LAYAK MAKAN PROTEIN WHEY DENGAN EKSTRAK
HERBA MENIRAN (Phyllanthus niruri L.)
SEBAGAI ANTIBAKTERI
TESIS
Diajuan Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Memperoleh Gelar Magister Sains Dalam Program Studi Ilmu Kimia Pada Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Sumatera Utara
Oleh
DIAN NIRWANA HARAHAP
117006021/KIM
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Judul Tesis : FILM LAYAK MAKAN PROTEIN WHEY DENGAN EKSTRAK HERBA MENIRAN (Phyllanthus niruri L.) SEBAGAI
ANTIBAKTERI
Nama : DIAN NIRWANA HARAHAP
Nomor Pokok : 117006021
Program Studi : MAGISTER (S2) ILMU KIMIA
Menyetujui Komisi Pembimbing
Dr. Hamonangan Nainggolan, M.Sc Saharman Gea, M.Si, Ph.D
Ketua Anggota
Ketua Program Studi Dekan
Prof. Basuki Wirjosentono, MS, Ph.D Dr. Sutarman, M.Sc
NIP.195204181980021001 NIP.196310261991031001
Telah diuji pada
Tanggal : 29 Juli 2013
PANITIA PENGUJI TESIS
KETUA : Dr. Hamonangan Nainggolan, M.Sc
Anggota : 1. Saharman Gea, M.Si, Ph.D
2. Prof. Basuki Wirjosentono, MS, Ph.D
3. Dr. Nimpan Bangun, M.Sc
PERNYATAAN
FILM LAYAK MAKAN PROTEIN WHEY DENGAN EKSTRAK
HERBA MENIRAN (Phyllanthus niruri L.)
SEBAGAI ANTIBAKTERI
TESIS
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam tesis ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi dan sepanjang pengetahuan saya tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain kecuali secara tertulis diacu dalam naskah dan disebutkan sumbernya dalam daftar pustaka.
Medan, Juli 2013 Penulis
FILM LAYAK MAKAN PROTEIN WHEY DENGAN EKSTRAK
HERBA MENIRAN (Phyllanthus niruri L.)
SEBAGAI ANTIBAKTERI
ABSTRAK
Aktivitas antibakteri film layak makan berbahan dasar isolat protein whey (WPI) digabungkan dengan ektrak herba meniran (Phyllanthus niruri L.) pada konsentrasi 2%, 4%, 6%, 8%, 10% dan perbandingan gliserol 40%, 30% dan 20% terhadap beberapa bakteri patogen gram positif (S. aureus) dan gram negatif (Salmonella sp dan E. coli) telah diteliti dengan menggunakan metode difusi agar. Ekstrak herba meniran diuji fitokimia terlebih dahulu. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa sampel ekstrak herba meniran positif mengandung senyawa golongan flavonoid, alkaloid, tannin, glikosida, antrakuinon, dan triterpen/steroid. Zona hambat diukur setelah masa inkubasi 24 jam. Film yang mengandung ekstrak herba meniran (WPI-Meniran) berhasil menghambat bakteri S. aureus pada konsentrasi meniran 2% (w/w) yaitu 14.08; 14.68; 15.07 mm. Sedangkan film paling optimum zona penghambatannya berada pada film WPI-Meniran 10% (w/w) yaitu 27.12mm; 28.17mm dan 29.10 mm. Sama halnya pada bakteri S. aureus, edible film WPI-Meniran berhasil menghambat Salmonella sp dan E. coli pada film WPI-Meniran 2% (w/w) dengan zona penghambatan untuk Salmonella sp yaitu 15,12 mm; 15,42 mm; 15,92 mm dan untuk E. coli yaitu 14.40 mm; 15.47 mm dan 15.93 mm. Zona hambat optimum terletak pada konsentrasi 10% (w/w) untuk Salmonella sp yaitu 29.60 mm; 30.38 mm; 31.33 mm dan zona hambat E. coli yaitu 28.23 mm; 29,12 mm; 30,30 mm. Disimpulkan bahwa film layak makan WPI-Meniran sensitif terhadap bakteri patogen.
EDIBLE FILM PROTEIN WHEY WITH MENIRAN EXTRACT
HERBA (Phyllanthus niruri L.) AS ANTIBACTERIAL
ABSTRACT
Antibacterial activities of isolate protein whey-based edible film incorporated with meniran extract herba (Phyllanthus niruri L.) at various concentration of 2%, 4%, 6%, 8%, 10% and glycerol (40%, 30% and 20%) on pathogenic bacteria (S. aureus, Salmonella sp and E. coli) have been tested following a plate diffusion assay. The test of Phytochemical showed that Phyllanthus niruri L. contained chemical compounds of flavonoid, alkaloid, tannin, glikosida, antraquinon, and triterpen/ steroid. The zona of inhibition were measured after an incubation period. The film contained Phyllanthus niruri L. (WPI-Meniran) inhibited the growth S.aureus bacteria at 2% (14.08 mm; 14.68 mm; 15.07 mm). The most optimum zone of inhibition Edible film WPI-Meniran at 10% (w / w) were 27.12 mm; 28.17 mm; 29.10 mm. The edible film of WPI-Meniran inhibited Salmonella sp and E. coli at 2% (w/w) with inhibition zones for Salmonella sp were 15.12 mm; 15.42 mm; 15.92 mm and E. coli were 14:40 mm; 15:47 mm; 15.93 mm. The most optimum of inhibition zone at 10% (w / w) for Salmonella sp were 29.60 mm; 30.38 mm; 31.33 mm and inhibition zone E. coli were 28.23 mm; 29.12 mm; 30.30 mm. The conclusion of this experiment showed that the WPI-Meniran edible film gave the result of sensitivity with pathogenic bacteria.
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirrahim
Puji Syukur yang tak terhingga penulis ucapkan dengan segala kerendahan hati dan
diri kepada Allah SWT, Sang Khaliq yang senantiasa mencurahkan segala nikmat
Iman, Islam dan Ihsan, serta Shalawat dan salam kepada Nabi Allah sebagai teladan
insan terbaik; Rasulullah Muhammad SAW sehingga penulis mampu menyelesaikan
penelitian hingga selesainya penulisan tesis ini dengan sebaik mungkin. Tesis ini
berjudul “FILM LAYAK MAKAN PROTEIN WHEY DENGAN EKSTRAK
HERBA MENIRAN (Phyllanthus niruri L.) SEBAGAI ANTIBKTERI”. Tesis ini
merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister Sains (M.Si) Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universias Sumatera Utara Medan.
Keberhasilan dari penelitian dan penulisan tesis ini tidak terlepas dari bantuan
berbagai pihak yang terlibat secara langsung maupun tidak langsung dan telah
memberikan dukungan baik secara moril maupun materil. Pada kesempatan ini
penulis ingin menyampaikan terima kasih yang tidak terhingga kepada Orangtua
penulis, buat Ayahanda Kapten CAJ Dian Bahri Harahap dan Ibunda Hesti
Yulianti yang selalu sabar dan mendoakan, memberi perhatian, dan menjadikan
inspirasi di setiap langkah hidup kami. Kepada (alm) Kakek Soetrisno R, Nenek
Omi, yang selalu mendoakan dan memotivasi penulis. Kepada kakak saya tersayang
Diannita Harahap, S.Pd, M.Si dan adik-adik saya tersayang Rio Ferdiani, S.Pd
dan Ricky Harahap yang selalu memotivasi dan menginspirasi disetiap langkah
hidup kami.
Bapak Prof. Dr. dr. Syahril Pasaribu, DMT & H, M.Sc, (CTM), Sp.A(K) dan
Dr. Sutarman, M.Sc selaku Rektor Universitas Sumatera Utara dan Dekan Fakultas
Bapak Dr. Hamonangan Nainggolan, M.Sc selaku dosen pembimbing I dan
Bapak Saharman Gea, M.Si, Ph.D selaku dosen pembimbing II yang telah dengan
sabar meluangkan waktu, tenaga, dan pikirannya serta memberikan masukan, saran,
dan petunjuk kepada penulis dalam melakukan penelitian dan penyusunan tesis ini.
Bapak Prof. Basuki Wirjosentono, MS, Ph.D dan Dr. Hamonangan
Nainggolan, M.Sc selaku Ketua Program Studi dan Sekretaris Pascasarjana Ilmu
Kimia. Bapak dan Ibu dosen Pascasarjana Ilmu Kimia yang telah membimbing dan
memotivasi serta memberi disiplin ilmu selama penulis menjalani studi.
Seluruh staf laboratorium Kimia Polimer FMIPA USU, laboratorium
Fitokimia Farmasi FMIPA USU, laboratorium Mikrobiologi PTKI. Ibu Leo Asnah
Munthe, S.Ag selaku kepala SMP Nusa Penida Medan dan bapak Drs. Jasa
Sembiring selaku kepala SMK 1 Medan Area Medan. Ibu Iyus Dahniar S, S.Pd serta
ananda siswa-siswi SMP Nusa Penida Medan dan SMK 1 Medan Area Medan yang
telah bersedia membantu peneliti dalam penelitian ini. Kak Lely selaku tata usaha
Pascasarjana Ilmu Kimia dan bang Edi selaku teknisi Laboratorium Kimia Polimer
FMIPA-USU.
Sahabat seperjuangan yang selalu mengerti, membantu, dan berbagi dalam
suka dan duka, temon Adilah Wirdhani Lubis, S.Pd, M.Si. Teman-teman Kak Emma
Suryani, Kak Dwi yuliani, Tisna, Ibu Tuty, Ibu Gimelia, Deni Reflianto, Kak Sari,
Kak Ferry, Ibu Ratna, Bang Frans, Bang Nasir, Bang Mulia, Bang Ridwan, serta
seluruh saudara dan teman-teman yang selalu mendoakan yang terbaik kepada
penulis yang tidak dapat disebutkan satu persatu, yang telah dengan sabar
mendengarkan segala keluh kesah dan memberikan masukannya kepada penulis.
Hanya Allah SWT yang dapat membalas segala kebaikan yang telah kalian
berikan kepada penulis. Penulis berharap Allah memberikan Berkah-Nya berlipat
Penulis menyadari bahwa tesis ini masih banyak kekurangan. Oleh karena itu,
kritik dan saran yang membangun dari pihak pembaca sangat diharapkan penulis
demi kesempurnaan tesis ini. Akhir kata semoga tesis ini bermanfaat bagi penelitian
dan kemajuan ilmu pengetahuan untuk masa yang akan datang.
Medan, Juli 2013
Penulis
RIWAYAT HIDUP
DATA PRIBADI
Nama Lengkap berikut gelar : Dian Niwana Harahap, S.Pd
Tempat dan Tanggal Lahir : Jayapura, 16 April 1989
Alamat Rumah : Jl. Lapangan Golf Asrama Kodam I/BB blok
Anggrek No. H12, Tuntungan II, Kec. Pancur
Batu, Kab. Deliserdang, Prov. SUMUT
Telepon/HP : +6285296737673
Email : [email protected]
Nama Ayah : Kapten CAJ Dian Bahri Harahap
Nama Ibu : Hesti Yulianti
DATA PENDIDIKAN
SD : SD Swasta Alwashliyah Medan Tamat : 2000
SMP : SLTP Negeri 1 Pancur Batu Tamat : 2003
SMA : SMA Swasta Palapa Medan Tamat : 2006
Strata-1 : Pendidikan Kimia FKIP UISU Tamat : 2010
DAFTAR ISI
Halaman
ABSTRAK i
ABSTRACT ii
KATA PENGANTAR iii
RIWAYAT HIDUP vi
DAFTAR ISI vii
DAFTAR TABEL x
DAFTAR GAMBAR xi
DAFTAR LAMPIRAN xii
DAFTAR SINGKATAN xiii
BAB 1. PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang 1
1.2. Permasalahan 4
1.3. Pembatasan Masalah 4
1.4. Tujuan Penelitian 4
1.5. Manfaat Penelitian 5
1.6. Metodologi Penelitian 5
1.7. Waktu dan Lokasi Penelitian 5
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA
2.2. Film Layak Makan 7
2.3. Protein Whey Isolate 9
2.4. Agen Antibakteri 12
2.4.1. Meniran (Phyllanthus niruri L.) 12
2.4.2. Kandungan Kimia 15
2.4.2.1. Alkaloid 17
2.4.2.2. Flavonoid 18
2.4.2.3. Terpenoid 18
2.4.2.4. Tanin 19
2.4.2.5. Saponin 19
2.5. Bakteri Patogen 19
2.5.1. Bakteri S. aureus 19
2.5.2. Bakteri Salmonella sp 21
2.5.3. Bakteri E. coli 23
2.6. Mekanisme Kerja Antibakteri 24
2.7. Penggabungan Matriks dengan Agen Antibakteri 25
BAB 3. BAHAN DAN METODE PENELITIAN
3.1. Waktu dan Lokasi penelitian 27
3.2. Alat dan Bahan 27
3.2.1. Alat 27
3.2.2. Bahan 27
3.3. Prosedur Penelitian ... 27
3.3.1. Proses Ekstraksi Herba Meniran 27
3.3.2. Proses Pembuatan Film Layak Makan WPI-Meniran 28
3.4. Karakterisasi Film Layak Makan WPI-Meniran 29
3.4.1. Uji Fitokimia 29
3.4.1.1. Alkaloid 29
3.4.1.3. Steroida dan Triterpen Bentuk Bebas 30
3.4.1.4. Tanin 30
3.4.1.5. Saponin 30
3.4.1.6. Glikosida 30
3.4.1.7. Antrakinon Glikosida 31
3.4.1.8. Sianogenik Glikosida 31
3.4.2. Uji Antibakteri 31
3.4.3. Analisa Gugus Fungsi dengan Fourier Transform
Infrared Spectroscopy (FTIR) 32
3.4.4. Analisa Sifat Morfologi dengan Uji Scanning
Electron Microscopy (SEM) 32
3.5. Bagan Penelitian 33
3.5.1. Ekstraksi Herba Meniran 33
3.5.2. Pembuatan Film Layak Makan WPI-Meniran 34
3.5.3. Karakterisasi Film Layak Makan WPI-Meniran 35
BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil Penelitian 36
4.1.1. Ekstraksi Herba Meniran 36
4.1.1.1. Uji Fitokimia 36
4.1.2. Pembuatan film layak makan WPI-Meniran 37
4.1.3. Uji Aktivitas Antibakteri Edible Film WPI-Meniran 40
4.1.4. Analisa Gugus Fungsi dengan Fourier Tarnsform
Infrared Spectroscopy (FTIR) 46
4.1.5. Analisa Sifat Morfologi dengan Uji Scanning
Electron Microscopy (SEM) 51
BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan 53
DAFTAR PUSTAKA 54
DAFTAR TABEL
Nomor Judul Halaman
Tabel 2.1 Komposisi Protein Whey Susu Sapi 10
Tabel 4.1 Uji Fitokimia Herba Meniran (Phyllanthus niruri L.) 36
Tabel 4.2 Perbandingan Persentase WPI:Gliserol:Meniran 39
Tabel 4.3 Zona Hambat Film Layak Makan WPI-Meniran terhadap Bakteri Patogen
DAFTAR GAMBAR
Nomor Judul Halaman
Gambar 2.1 Herba Meniran (Phyllanthus niruri L) 13
Gambar 2.2 Struktur Senyawa Phytadiene dan 1,2-seco-cladiellan 14
Gambar 2.3 Struktur Kimia Filantin dan Hipofilantin 16
Gambar 2.4 Struktur Kimia Senyawa ) farnesil farnesol, isolintetralin, niranthin, 5-demethoxy-niranthin, dimethylenodioxy-niranthin
17
Gambar 2.5 Bakteri S. aureus 20
Gambar 2.6 Bakteri Salmonella sp 22
Gambar 2.7 E. coli 24
Gambar 2.8 Perbandingan Struktru Dinding Sel Bakteri Gram Positif
dan Negatif 25
Gambar 3.1 Bagan Ekstraksi Tumbuhan Meniran 33
Gambar 3.2 Bagan Pembuatan Film Layak Makan WPI-Meniran 34
Gambar 3.3 Karakterisasi Film Layak Makan WPI-Meniran 35
Gambar 4.1 Film Layak Makan WPI dan WPI-Meniran 38
Gambar 4.2 Grafik Zona Hambat Bakteri S. aureus 40
Gambar 4.3 Grafik Zona Hambat Bakteri Salmonella sp 41
Gambar 4.4 Grafik Zona Hambat Bakteri E. Coli 42
Gambar 4.5 Spektrum FT-IR Film Layak Makan WPI 47
Gambar 4.6 Skema Ikatan Silang Antara Senyawa 1,2-seco-cladiellan pada Herba Meniran dan Gugus Fungsi Asam Amino Protein
49
Gambar 4.7 Spektrum FT-IR Film Layak Makan WPI-Meniran 50
Gambar 4.8 Foto SEM permukaan film layak makan WPI dan
DAFTAR LAMPIRAN
Nomor Judul Halaman
Lampiran 1 Proses Ekstraksi Herba Meniran L-1
Lampiran 2 Gambar Pembuatan film layak makan WPI Meniran L-2
DAFTAR SINGKATAN
WPI : Whey Protein Isolat
FTIR : Fourier Tarnsform Infrared Spectroscopy
SEM : Scanning Electron Microscopy
FILM LAYAK MAKAN PROTEIN WHEY DENGAN EKSTRAK
HERBA MENIRAN (Phyllanthus niruri L.)
SEBAGAI ANTIBAKTERI
ABSTRAK
Aktivitas antibakteri film layak makan berbahan dasar isolat protein whey (WPI) digabungkan dengan ektrak herba meniran (Phyllanthus niruri L.) pada konsentrasi 2%, 4%, 6%, 8%, 10% dan perbandingan gliserol 40%, 30% dan 20% terhadap beberapa bakteri patogen gram positif (S. aureus) dan gram negatif (Salmonella sp dan E. coli) telah diteliti dengan menggunakan metode difusi agar. Ekstrak herba meniran diuji fitokimia terlebih dahulu. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa sampel ekstrak herba meniran positif mengandung senyawa golongan flavonoid, alkaloid, tannin, glikosida, antrakuinon, dan triterpen/steroid. Zona hambat diukur setelah masa inkubasi 24 jam. Film yang mengandung ekstrak herba meniran (WPI-Meniran) berhasil menghambat bakteri S. aureus pada konsentrasi meniran 2% (w/w) yaitu 14.08; 14.68; 15.07 mm. Sedangkan film paling optimum zona penghambatannya berada pada film WPI-Meniran 10% (w/w) yaitu 27.12mm; 28.17mm dan 29.10 mm. Sama halnya pada bakteri S. aureus, edible film WPI-Meniran berhasil menghambat Salmonella sp dan E. coli pada film WPI-Meniran 2% (w/w) dengan zona penghambatan untuk Salmonella sp yaitu 15,12 mm; 15,42 mm; 15,92 mm dan untuk E. coli yaitu 14.40 mm; 15.47 mm dan 15.93 mm. Zona hambat optimum terletak pada konsentrasi 10% (w/w) untuk Salmonella sp yaitu 29.60 mm; 30.38 mm; 31.33 mm dan zona hambat E. coli yaitu 28.23 mm; 29,12 mm; 30,30 mm. Disimpulkan bahwa film layak makan WPI-Meniran sensitif terhadap bakteri patogen.
EDIBLE FILM PROTEIN WHEY WITH MENIRAN EXTRACT
HERBA (Phyllanthus niruri L.) AS ANTIBACTERIAL
ABSTRACT
Antibacterial activities of isolate protein whey-based edible film incorporated with meniran extract herba (Phyllanthus niruri L.) at various concentration of 2%, 4%, 6%, 8%, 10% and glycerol (40%, 30% and 20%) on pathogenic bacteria (S. aureus, Salmonella sp and E. coli) have been tested following a plate diffusion assay. The test of Phytochemical showed that Phyllanthus niruri L. contained chemical compounds of flavonoid, alkaloid, tannin, glikosida, antraquinon, and triterpen/ steroid. The zona of inhibition were measured after an incubation period. The film contained Phyllanthus niruri L. (WPI-Meniran) inhibited the growth S.aureus bacteria at 2% (14.08 mm; 14.68 mm; 15.07 mm). The most optimum zone of inhibition Edible film WPI-Meniran at 10% (w / w) were 27.12 mm; 28.17 mm; 29.10 mm. The edible film of WPI-Meniran inhibited Salmonella sp and E. coli at 2% (w/w) with inhibition zones for Salmonella sp were 15.12 mm; 15.42 mm; 15.92 mm and E. coli were 14:40 mm; 15:47 mm; 15.93 mm. The most optimum of inhibition zone at 10% (w / w) for Salmonella sp were 29.60 mm; 30.38 mm; 31.33 mm and inhibition zone E. coli were 28.23 mm; 29.12 mm; 30.30 mm. The conclusion of this experiment showed that the WPI-Meniran edible film gave the result of sensitivity with pathogenic bacteria.
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
Kemasan aktif (active packaging) merupakan salah satu inovasi konsep kemasan
makanan yang telah dikenal sebagai permintaan terbaru dan mengikuti kecendrungan
pasar. Pada umumnya kemasan aktif dapat difungsikan untuk memperpanjang masa
simpan, pengatur oksigen, kelembaban, emisi etanol, rasa, dan aktivitas antimikroba
(Quintavalla dan Vicini, 2002).
Kontaminasi mikroba menurunkan masa simpan makanan dan meningkatkan
resiko keracunan makanan. Dalam kondisi yang sesuai, sebagian besar
mikroorganisme akan tumbuh atau berkembang biak. Bakteri berkembang biak
dengan cara membelah untuk memproduksi dari satu menjadi dua organisme,
jumlahnya meningkat secara eksponensial. Dalam kondisi ideal beberapa bakteri
dapat tumbuh dan membelah setiap 20 menit, sehingga satu sel bakteri bisa
meningkat sampai 16 juta sel dalam 8 jam (Coles et al, 2003).
Kemasan antimikroba adalah kemasan aktif yang menjanjikan pada produk
makanan. Sering sekali kontaminasi terjadi pada makanan terutama pada bagian
permukaan yang dikerenakan penanganan pascapengolahan. Berbagai upaya telah
dilakukan untuk meningkatkan keamanan pada makanan dan menunda pembusukan
salah satunya menggunakan spray antimikroba atau pencelupan. Selain itu
mencampurkan bakterisida dengan agen bakteriostatis ke dalam formula dapat
menyebabkan inaktivasi sebagian zat aktif produk oleh karena itu memiliki efek yang
Penggunaan kemasan film antimikroba lebih efesien. Dengan adanya migrasi
perlahan dari bahan material kemasan ke permukaan produk, sehingga konsentrasi
tinggi tetap terjaga dan hal ini sangat dibutuhkan. Jika antimikroba dimasukkan pada
bahan kemasan dapat mengontrol kontaminasi bakteri dengan mengurangi
pertumbuhan bakteri (Quintavalla dan Vicini, 2002). Berbagai jenis antibakteri baik
bahan sintetik maupun alami telah dikembangkan dan digunakan. Antibakteri sintetik
seperti formalin jika dikonsumsi terus menerus akan berbahaya bagi kesehatan. Oleh
karena itu pengawet alami seperti oregano, minyak esensial bawang putih dan
protein whey (Seydim dan Sarikus, 2006).
Regalado, et al (2006) memperkirakan whey cair diproduksi di seluruh dunia
sekitar 118 juta ton/tahun, yang setara dengan sekitar 7 juta ton padatan whey.
Menurut Han (2005) protein bahan pembentuk film layak makan ini diperoleh dari
sumber hewan dan tumbuhan seperti dari jaringan hewan, susu, telur dan biji-bijian.
Protein whey dapat menghasilkan film yang transparan, lunak, fleksibel dan
mempunyai sifat penahan aroma dan oksigen yang baik pada kelembaban relatif
(relative humity) yang rendah. Protein whey isolat merupakan hasil pemurnian dari
protein whey (Oscar et al, 2011). Setelah penambahan antibakteri dari ekstrak herba
meniran diharapkan mampu menghambat pertumbuhan beberapa jenis bakteri
patogen yang pada umumnya menyerang pangan hewani asal ternak.
Ekstrak herba meniran (Phyllanthus niruri L.) memiliki kandungan senyawa
aktif yang dapat digunakan untuk mengatasi berbagai macam penyakit diantaranya
adalah alkaloid, terpenoid, glikosida, steroid, saponin, tanin, dan flavonoid. Menurut
Robinson (1995) senyawa alkaloida (berberin dan kolumbin) dalam tanaman
brotowali (Tinospora crispa (L.) MIERS.) dapat mengganggu terbentuknya jembatan
silang komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri, sehingga lapisan dinding
sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel tersebut. Selain itu
sehingga menghambat pembentukan enzim penting dari mikroorganisme dan
perusakan senyawa protein dari mikroorganisme.
Desvita (2011) telah menguji sejauhmana ekstrak herba meniran dapat
menghambat pertumbuhan bakteri dan khamir patogen dengan pelarut yang berbeda
(metanol, etil asetat dan n-heksan). Hasil penelitiannya membuktikan bahwa
masing-masing ekstrak herba meniran memiliki aktivitas antimikroba yang berbeda dan
ekstrak yang paling potensial adalah ekstrak metanol. Sejalan dengan yang dilakukan
oleh Gunawan, et al (2008) yaitu mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa
terpenoid dari herba meniran dengan menggunakan pelarut n-heksana terhadap
bakteri E. coli dan S. aureus. Hasilnya membuktikan bahwa hasil ekstrak herba
meniran mengandung dua senyawa terpenoid yaitu Phytadiene dan
1,2-seco-cladiellan yang aktif terhadap dua bakteri tersebut.
Beberapa penelitian lain menggunakan plate counting test untuk
mengevaluasi WPI yang dikombinasi dengan lysozime, sistem lactoperoxidase,
lactoferrin dan lactoferin hydrolizate terhadap mikroorganisme gram positif (L.
monocytogens), dan mikroorganisme gram negatif (Salmonella enteric dan E. coli
O157:H7) (Regalado, dkk, 2006). Uji antimikroba juga telah dilakukan terhadap
jamur (Penicillium commune) oleh film layak makan WPI antimikroba digabung
dengan lactoferrin (LF), lactoverin hydrolizate (LFH), dan sistem lactoperoxidase
(LPOS). Namun hanya film WPI-LPOS menunjukkan pengaruh antimikroba terhadap
mikroorganisme gram negatif. Seydim dan Sarikus (2006) telah menggabungkan
WPI dan beberapa rempah oregano, rosemary dan minyak esensial bawang putih.
Hasil penelitian mereka menunjukan bahwa rosemary tidak memiliki aktivitas
antibakteri sedangkan rempah lainnya menunjukan adanya aktivitas antibakteri pada
perbandingan tertentu. Kemudian oleh Manab, et al (2011) yaitu dengan
menggabungkan film layak makan berbahan dasar protein whey dengan asam organik
lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus, E. coli, Salmonella sp.
Hasilnya menunjukan bahwa masing-masing memiliki zona hambat terhadap bakteri
tersebut. Oleh sebab itu, maka peneliti mencoba menggabungkan film layak makan
WPI dengan ekstrak meniran yang sudah terbukti mampu menghambat pertumbuhan
beberapa bakteri patogen.
Dalam penelitian ini peneliti berusaha mengatasi masalah kontaminasi
beberapa bakteri dengan memanfaatkan ekstrak herba meniran sebagai agen
antimikroba pada film layak makan berbahan dasar protein whey isolat dengan
memvariasikan konsentrasi ekstak herba meniran.
1.2. Rumusan Masalah
Rumusan masalah dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:
1. Apakah ekstrak herba meniran dapat dijadikan agen antibakteri alami yang dapat
digabungkan dengan film layak makan protein whey isolat?
2. Bagaimana aktivitas antibakteri film layak makan WPI-Meniran terhadap bakteri
S. aureus, Salmonella sp dan E. coli ?
1.3. Batasan Masalah
Penelitian ini dibatasi pada film layak makan berbahan dasar protein whey yang
digabungkan dengan ekstrak herba meniran untuk menghambat pertumbuhan bakteri
S. aureus, Salmonella sp dan E. coli.
1.4. Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:
1. Untuk mengetahui cara memperoleh agen antibakteri alami yang dapat
digabungkan dengan film layak makan berbahan dasar protein whey isolat.
2. Untuk mengetahui aktivitas antibakteri film layak makan WPI-Meniran terhadap
1.5. Manfaat Penelitian
Penelitian ini diharapkan mampu memberikan informasi kepada masyarakat dan
peneliti selanjutnya mengenai cara memperoleh agen antibakteri alami yang dapat
digabungkan pada saat pembuatan film layak makan. Demikian juga dengan
kemampuannya dalam menghambat pertumbuhan bakteri khususnya bakteri S.
aureus, Salmonella sp dan E. coli.
1.6. Metode Penelitian
Penelitian ini adalah penelitian skala laboratorium yang dilakukan dalam 3 (tiga)
tahap. Pertama, mengekstraksi herba meniran dengan metode maserasi menggunakan
pelarut metanol kemudian diuji Fitokimia. Kedua, pembuatan film layak makan
WPI-Meniran dengan mencampurkan keduanya menggunakan pengaduk magnet. Terakhir,
uji aktivitas antibakteri, dan karakterisasi gugus fungsi dengan FT-IR dan uji
morfologi dengan SEM.
1.7. Waktu dan Lokasi Penelitian
Penelitian ini dilakukan pada bulan November 2012 – Juni 2013. Penelitian
dilakukan di Laboratorium Penelitian FMIPA USU, Laboratorium Kimia Polimer,
Laboratorium Fitokimia Farmasi USU, Laboratorium Mikrobiologi FMIPA USU.
Sementara untuk uji gugus fungsi menggunakan FT-IR dilakukan di Laboratorium
Kimia Organik UGM Yogyakarta dan uji morfologi dengan SEM dilakukan di
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Smart Food Coating
Smart packaging didefinisikan oleh Wagner (1989) dalam Rooney (1995) sebagai
lebih dari sekedar menawarkan perlindungan. Kemasan berinteraksi dengan produk,
dan dalam beberapa kasus terbukti memberi perubahan. Active packaging sering
disebut sebagai interaktif atau smart packaging yang dimaksudkan untuk merasakan
perubahan lingkungan internal maupun eksternal dan perubahan sifat bagian dalam
dari kemasan.
Ruang lingkup bidang pengemasan saat ini juga sudah semakin luas, dari
mulai bahan yang sangat bervariasi hingga model atau bentuk dan teknologi
pengemasan yang semakin canggih dan menarik. Bahan kemasan yang digunakan
bervariasi dari bahan kertas, plastik, gelas, logam, fiber hingga bahan-bahan yang
dilaminasi. Namun demikian pemakaian bahan-bahan seperti papan kayu, karung
goni, kain, kulit kayu, daun-daunan, dan pelepah dan bahkan sampai barang-barang
bekas seperti koran dan plastik bekas yang tidak etis dan hiegenis juga digunakan
sebagai bahan pengemas produk pangan. Bentuk dan teknologi kemasan juga
bervariasi dari kemasan botol, kaleng, tetrapak, corrugated box, kemasan vakum,
kemasan aseptik, kaleng bertekanan, kemasan tabung hingga kemasan aktif dan pintar
(active and intelligent packaging) yang dapat menyesuaikan kondisi lingkungan di
dalam kemasan dengan kebutuhan produk yang dikemas (Julianti, 2007).
Kemasan antimikroba dapat diklasifikasikan menjadi dua jenis: (1) kemasan
yang mengandung agen antibakteri yang bermigrasi dari permukaan kemasan ke
makanan secara langsung; (2) kemasan yang efektif terhadap pertumbuhan
Wieddyanto, et al (2006) melaporkan pemanfaatan protein whey sebagai film
layak makan untuk bahan kemasan dalam upaya menghambat pertumbuhan mikroba
pada produk daging. Hasil yang diperoleh film layak makan ini dapat diaplikasikan
sebagai bahan pelapis daging yang dapat mempertahankan penurunan berat dan
penurunan jumlah mikroorganisme yang mengkontaminasi permukaan daging.
Senyawa antimikroba alami berasal dari alam telah diisolasi dari sumber tanaman dan
hewan. Senyawa dari asal tanaman termasuk ekstrak rempah-rempah; kayu manis,
allspice, cengkeh, thyme, rosemary, dan oregano adalah beberapa bahan yang telah
menunjukkan aktivitas antimikroba (Seydim dan Sarikus, 2006).
2.2. Film Layak Makan
Kemasan edible adalah kemasan yang layak untuk dimakan karena terbuat dari
bahan-bahan yang dapat dimakan seperti pati, protein atau lemak. Sifat-sifat kemasan
masa depan diharapkan mempunyai bentuk yang fleksibel namun kuat, transparan,
tidak berbau, tidak mengkontaminasi bahan yang dikemas dan tidak beracun, tahan
panas, biodegradable dan berasal dari bahan-bahan yang terbarukan. Bahan-bahan ini
berupa bahan-bahan hasil pertanian seperti karbohidrat, protein dan lemak (Julianti,
2007). Bahan-bahan ini juga dapat bertindak sebagai pembawa bahan aktif, seperti
antioksidan, rasa, kaya nutrisi, pewarna, agen antimikroba, atau rempah-rempah
(Cha, 2004).
Film layak makan yang sudah banyak beredar umumnya berasal dari bahan
protein, misalnya film dari kolagen gelatin, protein jagung (corn zein), protein
gandum (wheat gluten), protein kedelai (soy protein), kasein, dan film dari protein
whey. Film dengan bahan dasar protein biasanya diperoleh dari pencetakan dan
pengeringan (Khotibul et al, 2010). Selain itu kondisi pH juga harus diperhatikan.
Menurut Perez-Gago (1999) yang menyatakan bahwa pembentukan film layak makan
dari protein whey tidak bias secara sempurna pada pH 3, kemungkinan disebabkan
film layak makan ini dikondisikan pada pH 4 dan 5, viskositas larutan meningkat
dengan cepat sehingga menghasilkan gel yang lunak.
Salah satu bahan pembuatan film layak makan yang berasal dari protein yaitu
protein whey. Protein whey berasal dari hasil samping industri keju, yang
mengandung laktoglobulin (57%) dan laktalbumin (19%). Film layak makan protein
whey mempunyai sifat transparan, lunak, fleksibel dan penahan aroma dan
oksigenyang baik pada kelembaban rendah yang didapatkan dengan cara protein
didenaturasi pada suhu 90oC selama 30 menit, penambahan asam dan basa untuk
membentuk ikatan disulfida intermolekuler sehingga menghasilkan gel yang lunak
(Manab, 2008).
Protein whey merupakan protein globular dimana kebanyakan gugus
hidrofobik dan sulfidrilnya berada di dalam struktur protein sehingga diperlukan
denaturasi panas untuk memunculkannya dan memacu ikatan disulfida intermolekuler
yang merupakan struktur penyusun film protein whey (Perez-Gago et al, 1999).
Adanya ikatan kovalen disulfide meningkatkan kestabilan film dan menyebabkan
film dari protein ini tidak larut dalam air (Galietta et al, 1998).
Pembentukan film dari protein whey juga dipengaruhi oleh adanya bahan
pemlastis. Komponen ini diperlukan untuk membantu meningkatkan pengikatan
antara molekul-molekul protein di dalam film, tetapi jumlahnya tidak boleh terlalu
sedikit ataupun terlalu banyak. Apabila terlalu sedikit film yang dihasilkan rapuh dan
apabila terlalu banyak akan meningkatkan nilai water vapour permeability (WVP)
film yang tidak diinginkan dalam pembentukan film ini. Bahan pemlastis yang
digunakan adalah gliserol karena mampu meningkatkan pengikatan molekul-molekul
protein dan tidak mengganggu ikatan hidrogen (Galietta et al, 1998). Penambahan
komponen pemlastis kedalam formulasi film mempengaruhi keregangan, fleksibelitas
film layak makan dengan tujuan untuk meningkatkan ikatan silang ionik di dalam
film (Cagri, 2003). Ikatan ini penting untuk membantu meningkatkan gaya kohesi,
sifat barier, kekuatan, dan mencegah film agar tidak mudah larut (Galietta et al,
1998).
2.3. Protein Whey Isolat
Whey protein berasal dari susu sapi dan biasanya tersedia dalam bentuk suplemen
bubuk protein sehingga lebih cepat diserap tubuh.. Whey protein memiliki kandungan
Branch Chain Amino Acids (BCAA/asam amino rantai bercabang) terbesar yang
sangat baik untuk pembentukan dan pemeliharaan massa otot tubuh, sudah lama
populer di industri keolahragaan sebagai suplemen pembangun otot. Namun,
penelitian menunjukkan hal ini memungkinkan memiliki aplikasi yang jauh lebih luas
sebagai makanan fungsional dalam mencegah penyakit seperti kanker, hepatitis B,
HIV, penyakit jantung, osteoporosis dan bahkan stres kronis.
Ada 2 (dua) jenis protein whey yaitu (1) Whey Protein Concentrate, yaitu
whey protein berkualitas tinggi yang masih mengandung karbohidrat dan lemak.
Kadar konsentrasi protein mencapai 70%, (2) Whey Protein Isolate, adalah jenis
whey protein yang berkualitas tinggi dan lebih murni karena diterapkan pemrosesan
tambahan. Kadar konsentrasi proteinnya mencapai 93% atau lebih tinggi.
Whey protein diekstrak dari whey, bahan cair dibuat dari produksi keju.
Protein susu terbagi dalam dua bentuk fraksi protein, ditemukan sebagai protein
kasein dan protein whey (Hidayat et al, 2006). Protein whey mewakili sekitar 20%
dari protein susu dan protein lainnya mewakili 80% dari total. Protein whey
berkualitas tinggi, karena memiliki semua asam amino esensial, dan nilai biologis
tinggi dari pada protein telur atau kasein.
Whey adalah cairan kuning-hijau yang terpisah dari kasein saat pembuatan
limbah whey atau dikembalikan kepeternakan untuk makanan ternak. Namun
penelitian tentang protein whey berkembang, biaya keuangan dalam penjualan whey
sangat menguntungkan. Selanjutnya, terutama protein dan laktosa digunakan untuk
bahan makanan. Protein whey telah digunakan dalam kembang gula, roti, dan eskrim
produk, susu formula dan makanan kesehatan. Penelitian baru-baru ini menemukan
penggunaan dari protein whey yaitu dengan memanfaatkan kemampuan protein whey
olahan (80- 90%) untuk membentuk film dan coating pada permukaan produk
[image:32.612.107.531.310.553.2](Regalado et al, 2006). Komposisi protein whey dapat dilihat pada Tabel 2.1.
Tabel 2.1 Komposisi Protein Whey Susu Sapi
Protein Whey Konsentrasi (g/L)
Mr (kDa)
Td (oC)
Fungsi Biologi
Total 7 - - -
β-LG 3 18,6 71,9 Transfer provitamin A
α-LA 0,7 14,2 35 Sintesis laktosa
64,3b
Ig 1 150-900 - Imunitas pasif
BSA 0,4 66,4 72-74 Transfer asam
lemak
LFc 0,02-0,35 78,5 - Agen bakteriostatik
LPODd 0,01-0,03 77 - Agen antibakteri
Lysozim < 0,001 14 - Agen antibakteri
Enzymes (>50) 0,03 - - Indikator kesehatan Proteose peptones ≥ 1 <12 - Aktivitas Opioid
GMPe 0-1,5 8-32 - Regulasi pertumbuhan
sel a
Td = Termal denaturasi, bTd = Ca berikatan α-LA, claktoferrin, dLPOD = laktoperoksidase, eGMP = glikomakropeptida. (Regalado et al, 2006)
Tabel 2.1 meninjukan bahwa Protein whey mengandung: β-lactoglobulin (β -LG), α-lactalbumin (α-LA), bovine serum albumin (BSA) and immunoglobulins (Ig) (Regalado et al, 2006). Whey terdiri dari sejumlah protein termasuk beta
-lactoglobulin, alpha-lactalbumin, bovineserum albumin (BSA) dan
glycomacropeptide (GMP). Secara kolektif, whey mengandung beberapa asam amino
dan perbaikan jaringan dan leusin khususnya memainkan peran penting dalam inisiasi
terjemahan - sintesis protein. Protein whey juga mengandung agen bakteriostatik
yaitu laktoferrin, laktoperoksidase, dan lisozim. Jeremi, et al (2013) menyatakan
bahwa laktoferrin, laktoperoksidase, dan lisozim memiliki sifat antimikroba.
Protein whey merupakan protein globular dimana kebanyakan gugus
hidrofobik dan sulfidrilnya berada di dalam struktur protein sehingga diperlukan
denaturasi panas untuk memunculkannya dan memacu ikatan disulfida intermolekuler
yang merupakan struktur penyusun film protein whey (Perez-Gago et al, 1999). Hasil
penelitian Khotibul, et al (2010) film protein whey pada pemanasan 90oC mudah
mengalami keretakan pada saat penyimpanan, sehingga perlu ditambahkan pemlastis.
Tujuan penambahan bahan pemlastis dalam larutan film adalah untuk mengurangi
kerapuhan dan meningkatkan fleksibilitas film. Peningkatan fleksibilitas film
dikarenakan terjadi pengurangan kekuatan tarik intermolekuler diantara rantai
polimer.
2.4. Agen Antibakteri
2.4.1. Meniran (Phyllanthus niruri L.)
Herba meniran merupakan herba semusim, tumbuh tegak, tinggi 30-50 cm,
bercabang–cabang. batang berwarna hijau pucat. Tumbuhan ini berdaun tunggal
dengan letak berseling, helaian daun bundar memanjang, ujung tumpul, pangkal
membulat, permukaan bawah berbintik kelenjar, tepi rata, panjang sekitar 1,5 cm,
lebar sekitar 7 mm, dan berwarna hijau. Dalam satu tanaman ada bunga betina dan
bunga jantan. Bunga jantan keluar di bawah ketiak daun, sedangkan bunga betina
keluar di atas ketiak daun. Buahnya kotak, bulat pipih, licin, bergaris tengah 2-2,5
mm. Bijinya kecil, keras, berbentuk ginjal, berwarna coklat (Syamsyuhidayat dan
Tumbuhan meniran tumbuh liar di dataran dan daerah pegunungan dari
ketinggian 1 mm sampai 1000 m dari permukaan laut. Tumbuhan ini tumbuh liar di
tempat terbuka pada tanah gembur, berpasir di ladang, di tepi sungai dan di pantai,
bahkan tumbuh liar di sekitar pekarangan rumah (Dalimarta, 2000). Pemanenan
dilakukan setelah tanaman berumur 2-3 bulan. Ciri tumbuhan meniran yang siap
dipanen adalah daun tampak hijau tua hampir menguning dan buah agak keras jika
dipijit.
Herba meniran merupakan tanaman yang mempunyai banyak khasiat dan
telah digunakan sebagai obat tradisional. Khasiat tanaman tersebut diduga berasal
dari kandungan berbagai senyawa kimia. Khasiat tersebut diduga berasal dari
kandungan berbagai senyawa kimia, di antaranya alkaloid (sekurinin), flavonoid
(kuersetin, kuersitrin, isokuersitrin, astragalin, nirurin, niruside, rutin, leukodelfinidin,
dan galokatekin), dan lignan (filantin dan hipofilantin). Senyawa lainnya, steroid dan
triterpenoid, berasal dari biosintesis skualena, kebanyakan berupa alkohol, aldehid
atau asam karbohidrat (Wibowo, 2009). Tumbuhan meniran (Gambar 2.1) memiliki
sistematika sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Bangsa : Euphorbiales
Suku : Euphorbiaceae
Marga : Phyllanthus
Jenis : P. niruri Linn.
Gambar 2.1. Herba meniran (Phyllanthus niruri L)
Nama lain dari Phyllanthus niruri L. adalah Phyllanthus urinaria L.,
Phyllanthus alatas BI, Phyllanthus cantonensis Hornen, Phyllanthus echinatus Wall,
Phyllanthus leptocarpus Wight. Nama daerah Jawa: meniran, meniran merah,
meniran hijau. Sunda: memeniran. Maluku: gosau cau, hsieh hsia chu (Dalimarta,
2000).
Potensi herba meniran di Indonesia untuk dijadikan obat alternatif terhadap
berbagai penyakit berbahaya seperti demam panas, diabetes, hepaptitis, dan jenis
penyakit lainnya. Hal ini disebabkan karena herba meniran mudah ditemukan di
Indonesia. Herba meniran telah digunakan masyarakat untuk pengobatan diabetes.
Pada dosis 10 mg per 200 g BB ekstrak metanol herba meniran efektif menurunkan
kadar glukosa darah tikus putih (Rattus norvegitus L.) diabetik (Fahri et al, 2005).
Penelitian sebelumnya telah membuktikan bahwa herba meniran memiliki
efek imunostimulator dan aktivitas antiviral terhadap virus Hepatitis B dan virus
Herpes Simpleks. Selain itu pada hewan uji mencit, ketika diberikan infusa herba
pengobatan infeksi kulit yang disebabkan oleh S. aureus. Masa penyembuhan hewan
uji yang diinfeksi kulitnya dengan S. aureus adalah 22,10 hari dengan menggunakan
ekstrak herba meniran dan 20,77 hari dengan kotrimoksazol (Praseno et al. 2001).
Penelitian lain menyebutkan herba meniran mengandung senyawa-senyawa yang
memiliki aktivitas sebagai antimalaria. Pada dosis 800.128 mg/kg BB hewan uji
optimal dalam menghambat pertumbuhan 6182 parasitemia tiap 10000 eritrosit dalam
tubuh hewan uji (Latra, 2004).
Gunawan (2008) yaitu mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa terpenoid
dari herba meniran dengan menggunakan pelarut n-heksana terhadap bakteri
Escerichia coli dan Staphylococcus aureus. Hasil penelitian membuktikan bahwa
hasil ekstrak herba meniran mengandung dua senyawa terpenoid yaitu Phytadiene
dan 1,2-seco-cladiellan yang aktif terhadap dua bakteri tersebut. Struktur
Phytadienedan 1,2-seco-cladiellan dapat dilihat dalam Gambar 2.2.
(a)
OH OCH3
O
O
(b)
[image:36.612.201.438.433.666.2]Senyawa tersebut terbentuk dari karvon, dimana karvon merupakan senyawa
golongan monoterpenoid yang mengandung gugus keton (Gunawan et al, 2008).
Senyawa tersebut yang diduga aktif terhadap beberapa bakteri patogen.
2.4.2. Kandungan Kimia
Tumbuhan meniran mengandung lignin, alkaloid, dan bioflavonoid. Konstituens
utama tumbuhan ini berupa lignan filantin (0.5%) dan hipifilantin (hingga 0.2%)
(Daniel, 2006). Adapun struktur filantin dan hipofilantin dapat dilhat pada Gambar
2.3
Selain senyawa filantin dan hipofilantin ada pula beberapa senyawa lainnya
yang terkandung dalam herba meniran seperti farnesil farnesol, isolintetralin,
niranthin, 5-demethoxy-niranthin dan dimethylenodioxy-niranthin (Maciel et al,
2007). Masing-masing struktur senyawa tersebut dapat dilihat pada Gambar 2.4.
(a)
H3C
H3C
O O
O
O O
CH3
CH3
O
CH3
(b)
Gambar 2.3 Struktur kimia (a) filantin dan (b) hipofilantin
OH
(a)
OCOMe OCOMe
OMe
OMe O
O
(b) H3C
H3C O O
O O
CH3
CH3
(c) (d)
[image:39.612.136.502.107.431.2]
(e)
Gambar 2.4 Struktur kimia (a) farnesil farnesol; (b) isolintetralin; (c) niranthin; (d) 5-demethoxy-niranthin; (e) dimethylenodioxy-niranthin
Penapisan fitokimia merupakan pemeriksaan kandungan kimia secara
kualitatif untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung dalam tumbuhan.
Pemeriksaan diarahkan pada senyawa metabolit sekunder yang memiliki kasiat
aktivitas antibakteri seperti alkaloid, flavonoid, terpen, tanin, saponin, glikosida dan
antrakuinon.
2.4.2.1. Alkaloid
Alkaloid adalah golongan senyawa yang bersifat basa, mengandung satu atau lebih
atom nitrogen biasanya dalam gabungan berbentuk siklik, serta dapat dideteksi
dengan cara pengendapatan menggunakan pereaksi Meyer, Dragendorff dan
Bouchardat. Alkaloid sebagian besar berbentuk kristal padat dan sebagian kecil
berupa cairan pada suhu kamar, memutar bidang polarisasi dan berasa pahit (Aprilya,
2012). Kebasaan pada alkaloid menyebabkan senyawa tersebut mudah mengalami
dekomposisi terutama oleh panas dan sinar dengan adanya oksigen. Hasil
dekomposisi seringkali berupa N-oksida (Lenny, 2006)
Mekanisme kerja alkaloid sebagai antibakteri diprediksi melalui
penghambatan sintesis dinding sel yang akan menyebabkan lisis pada sel sehingga sel
akan mati (Lamothe et al, 2009). Adanya komponen asing dalam membran juga dapat
menyebabkan pembentukan dinding sel akan terhalangi atau membentuk dinding sel
yang rapuh, yang selanjutnya akan menyebabkan lisis dan kematian sel.
2.4.2.2. Flavonoid
Flavonoid merupakan senyawa yang umumnya terdapat pada tumbuhan
berpembuluh. Flavonoid terdapat dalam tumbuhan sebagai glikosida dan aglikon
flavonoid. Biasanya dalam menganalisis flavonoid, yang diperiksa adalah aglikon
dalam ekstrak tumbuhan yang sudah dihidrolisis. Proses ekstraksi flavonoid
dilakukan dengan etanol mendidih untuk menghindari oksidasi enzim. Pendekatan
adanya senyawa ini dapat dilakukan dengan menambahkan besi (III) klorida 1%
dalam air atau etanol yang menimbulkan warna hijau atau hitam kuat (Aprilya, 2012).
2.4.2.3. Terpenoid
Terpen adalah salah satu senyawa yang tersusun dari isopren CH2=C(CH3)-CH=CH2
dan memiliki kerangka karbon yang dibangun oleh penyambungan dua atau lebih
satuan unit isoprene ini. Terpenoid terdiri atas beberapa macam senyawa seperti
monoterpen, dan seskuiterpen yang mudah menguap, triterpen dan sterol. Secara
umum terpen larut dalam lemak dan terdapat dalam sitoplasma sel tumbuhan.
Biasanya terpen diekstraksi dengan menggunakan eter dan kloroform. Senyawa ini
biasanya diidentifikasi dengan reaksi Lieberman-Bouchardat (anhidrat asetat –
2.4.2.4. Tanin
Tanin merupakan senyawa yang pada umumnya terdapat dalam tumbuhan
berpembuluh, memiliki gugus fenol, rasa sepat dan mampu menyamak kulit karena
kemampuannya menyambung silang protein. Tanin dapat bereaksi dengan protein
membentuk kopolimer yang tidak larut dalam air. Secara kimia tanin dikelompokan
menjadi dua golongan yaitu tanin terkondensasi dan tanin terhidrolisis.
Tanin terkondensasi secara biosintesis dapat dianggap terbentuk dengan cara
kondensasi katekin tunggal yang membentuk senyawa dimer dan kemudian oligomer
yang lebih tinggi. Tanin terhidrolisis mengandung ikatan ester yang terhidrolisis jika
dididihkan dalam asam klorida encer (Harborne, 1987). Tanin diidentifikasi dengan
cara pengendapan menggunakan larutan gelatin 10%, campuran natrium
klorida-gelatin, Besi (III) klorida 3%, dan timbal (II) asetat 25%.
2.4.3.5. Saponin
Saponin adalah glikosida triterpen yang merupakan senyawa aktif permukaan dan
dapat menimbulkan busa jika dikocok dengan air. Pada konsentrasi yang rendah
dapat menyebabkan hemolisis sel darah merah pada tikus (Harborne, 1987).
Identifikasi saponin dapat dilakukan dengan mengocok ekstrak bersama air hangat di
dalam tabung reaksi dan akan timbul busa yang dapat bertahan lama, setelah
penambahan HCl 2N busa tidak hilang.
2.5.Bakteri Patogen
2.5.1. Bakteri S. aureus
Staphylococcus adalah nama yang berasal dari istilah Yunani staphile (sekelompok
anggur) dan kokkus (strawberry). S. aureus merupakan bakteri berbentuk bulat
(coccus), yang bila diamati di bawah mikroskop tampak berpasangan, membentuk
Beberapa strain dapat menghasilkan racun protein yang sangat tahan panas, yang
dapat menyebabkan penyakit pada manusia. Hampir semua orang pernah mengalami
beberapa tipe infeksi S. aureus sepanjang hidupnya, bervariasi dalam beratnya mulai
dari keracunan makanan atau infeksi kulit ringan sampai infeksi berat yang
mengancam jiwa. Bakteri ini bersifat Gram-positif dan hampir setiap orang pernah
mengalami infeksi yang disebabkan oleh spesies ini (Jawetz et al, 1996). S. aureus
merupakan bakteri yang dapat menghasilkan enterotoksin yang menyebabkan
penyakit keracunan makanan (Ajizah et al, 2007).
S. aureus (Gambar 2.5) adalah bakteri yang bersifat anaerobik fakultatif,
termasuk dalam kelompok bakteri gram positif dan menghasilkan asam laktat. Sel S.
aureus berbentuk bulat memiliki diameter sekitar 1 μm, berwarna kuning terang dan
cenderung muncul bergerombol menyerupai seikat anggur atau tersusun dalam
kelompok-kelompok yang tidak teratur, tidak berspora, dan dapat menghemolisis sel
[image:42.612.213.431.429.578.2]darah.
Gambar 2.5. Bakteri S. aureus (Nancy, 2013)
S. aureus mudah tumbuh dalam banyak pembenihan bakteriologik dalam
keadaan aerobik atau mikroaerobik, tumbuh optimum pada suhu 30-37oC, pH
optimum 7,0 -7,5 dan tumbuh baik dalam larutan NaCl 15%. S. aureus mengandung
dalam struktur dinding sel. Peptodoglikan, suatu polimer polisakarida yang
mengandung subunit-subunit yang terangkai, merupakan eksoskeleton yang kaku
pada dinding sel. Peptodoglikan dihancurkan oleh asam kuat atau lisozim. Hal ini
penting dalam patogenesis infeksi.Bakteri ini diisolasi dari lukabernanah, terutama
dalam selaput hidung, folikel rambut, kulit dan perineum. Komponen utama dinding
sel terdiri dari peptidoglikan, asam terikoat, dan protein (Jawetz et al, 1996).
Kerusakan makanan oleh bakteri S. aureus saat ini dapat diamati pada berbagai
produk makanan. Selain itu bakteri S. aureus adalah patogen manusia yang
menyebabkan kerusakan makanan yang memnyebabkan penyakit di seluruh dunia (Elizaquı'vel dan Aznar, 2008). S. aureus adalah salah satu dari mikroba pada kulit manusia (Fujimoto et al, 2006). Pada kadar 89% dari wabah yang disebabkan oleh
kontaminasi makanan oleh pekerja dibidang makanan, patogen dipindahkan ke
makanan oleh tangan pekerja. Oleh karena itu, S. aureus adalah patogen penting yang
harus dikontrol dalam industri makanan (Shen et al, 2010).
2.5.2. Bakteri Salmonella sp
Salmonella (Gambar 2.6) adalah bakteri pendek (1-2 μm), Gram negatif, berbentuk
batang yang tidak membentuk spora, biasanya motil dengan flagella peritrisous.
Salmonella adalah anaerob fakultatif yang secara biokimia dikarakterisasi dengan
kemampuannya memfermentasi glukosa yang memproduksi asam dan gas, dan
ketidakmampuannya menyerang laktosa dan sukrosa. Temperatur pertumbuhan
optimumnya 38oC (Forsythe and Hayes, 1998). Salmonella dapat tumbuh pada
aktivitas air yang rendah (aw ≤ 0,93) yang responnya tergantung strain dan jenis
pangan. Salmonella aktif tumbuh pada kisaran pH 3,6 – 9,5 dan optimal pada nilai pH
Gambar 2.6. Bakteri Salmonella sp (James G, 2012)
Salmonella sp terdapat pada bahan pangan mentah, seperti telur dan daging
ayam mentah serta akan bereproduksi bila proses pamasakan tidak sempurna. Sakit
yang diakibatkan oleh bakteri Salmonella sp dinamakan salmonellosis. Salmonella sp
adalah penyebab utama dari penyakit yang disebarkan melalui makanan (foodborne
diseases). Pada umumnya, serotipe Salmonella sp menyebabkan penyakit pada organ
pencernaan. Orang yang mengalami salmonellosis dapat menunjukkan beberapa
gejala seperti diare, keram perut, dan demam dalam waktu 8-72 jam setelah memakan
makanan yang terkontaminasi oleh Salmonella sp. Gejala lainnya adalah demam,
sakit kepala, mual dan muntah-muntah (Sorrels et al, 1970).
Tiga serotipe utama dari jenis S. enterica adalah S. typhi, S. typhimurium, dan S.
enteritidis. S. typhi menyebabkan penyakit demam tifoid (Typhoid fever), karena
invasi bakteri ke dalam pembuluh darah dan gastroenteritis, yang disebabkan oleh
keracunan makanan/intoksikasi. Gejala demam tifus meliputi demam, mual-mual,
muntah dan kematian. S. typhi memiliki keunikan hanya menyerang manusia, dan
tidak ada inang lain. Infeksi Salmonella dapat berakibat fatal kepada bayi, balita, ibu
hamil dan kandungannya serta orang lanjut usia. Hal ini disebabkan karena kekebalan
tangan dan menjaga kebersihan makanan yang dikonsumsi (Beuchat and Heaton,
1975).
Cara penularan yang utama adalah dengan menelan bakteri dalam pangan yang
berasal dari pangan hewani yang terinfeksi. Pangan juga dapat melalui kontaminasi
silang akibat higiene yang buruk. Penularan dari satu orang ke orang lain juga dapat
terjadi selama infeksi. Gejala keracunan: Pada kebanyakan orang yang terinfeksi
Salmonella sp, gejala yang terjadi adalah diare, kram perut, dan demam yang timbul 8-72
jam setelah mengkonsumsi pangan yang tercemar. Gejala lainnya adalah menggigil, sakit
kepala, mual, dan muntah. Gejala dapat berlangsung selama lebih dari 7 hari. Banyak
orang dapat pulih tanpa pengobatan, tetapi infeksi Salmonella ini juga dapat
membahayakan jiwa terutama pada anak-anak, orang lanjut usia, serta orang yang
mengalami gangguan sistem kekebalan tubuh. Penanganan: Untuk pertolongan dapat
diberikan cairan untuk menggantikan cairan tubuh yang hilang. Lalu segera bawa korban
ke puskesmas atau rumah sakit terdekat (POM RI, 2009).
2.5.3. Bakteri E.coli
Escherichia coli umumnya merupakan flora normal saluran pencernaan manusia dan
hewan. Sejak 1940 di Amerika Serikat telah ditemukan strain-strain E. coli yang tidak
merupakan flora normal saluran pencernaan. Strain tersebut dapat menyebabkan diare
pada bayi (Supardi dan Sukamto, 1999).
E. coli (Gambar 2.7) mempunyai ukuran panjang 2-6 µm dan lebar 1,1-1,5
µ m, tersusun tunggal, tidak membentuk spora, yang dapat meragikan laktosa dengan
pembentukan asam dan gas pada suhu 37oC dan 44oC dalam waktu kurang dari 48
jam. E. coli merupakan bakteri Gram negatif, tidak berkapsul, umumnya mempunyai
Gambar 2.7 Bakteri E. coli (Drew F, 2010)
Bakteri yang dapat menjadi penyebab infeksi salah satunya adalah bakteri ini
mudah menyebar dengan cara mencemari air dan mengkontaminasi bahan-bahan
yang bersentuhan dengannya. Suatu proses pengolahan biasanya E. coli
mengkontaminasi alat-alat yang digunakan dalam industri pengolahan. Kontaminasi
bakteri ini pada makanan atau alat-alat pengolahan merupakan suatu indikasi bahwa
praktek sanitasi dalam suatu industri kurang baik menjadi penyebab E. coli juga
pernah ditemukan pada bahan makanan asal hewan seperti daging sapi dan daging
ayam segar (Faridz et al, 2007).
2.6. Mekanisme Kerja Antibakteri
Kemampuan herba dalam menghambat pertumbuhan bakteri merupakan salah satu
kriteria pemilihan senyawa antibakteri. Semakin kuat efek penghambatannya semakin
efektif digunakan.
Pengaruh komponen antibakteri terhadap sel bakteri dapat menyebabkan
kerusakan sel yang yang berlanjut pada kematian. Kerusakan sel yang ditimbulkan
komponen anti bakteri dapat bersifat mikrosidal (kerusakan bersifat tetap) atau mikro
statik (kerusakan yang dapat pulih kembali). Suatu komponen akan bersifat
mikrosidal atau mikrostaik tergantung pada konsentrasi komponen dan kultur yang
Menurut Suprianto dalam Thorpe (1995), cara kerja senyawa antibakteri
dipengaruhi oleh sifat-sifat zatnya antara lain polaritas dan keadaan molekul. Sifat
hidrofilik sangat penting untuk menjamin bahwa antibakteri larut dalam air ketika
pertumbuhan bakteri terjadi, sedangkan pada saat yang sama antibakteri bekerja pada
membran sel yang hidrofobik sehingga membutuhkan sifat hidrofobik (Gambar 2.7).
Gambar 2.8 Perbandingan struktur dinding sel bakteri gram negatif dan positif (Suprianto, 2008)
Bakteri gram positif dapat dihambat dengan menyerang polimer dinding sel
bakteri yang sangat tebal, sedangkan pada bakteri gram negatif antibakteri cenderung
melumpuhkan membran sel bakteri dan dan peptidoglikan yang tipis.
2.7. Penggabungan Matriks dengan Agen Antibakteri
Penelitian mengenai film layak makan protein whey telah dilakukan sebelumnya oleh
Seacheol et al, (2005) dengan menggabungkan sistem laktoperoksidase dengan film
layak makan protein whey dengan mengikuti metode McHugh dan Krochta (1994).
[image:47.612.188.491.240.468.2]tertentu, divakum untuk menghilangkan udara terlarut. Proses denaturasi dilakukan
dengan pemanasan campuran pada suhu 90oC selama 30 menit, dan dilanjutkan
dengan pendinginan di atas es. Proses terakhir dilakukan dengan penambahan
laktoperoksidase sebanyak 0,5% hingga 5,0% w/v. Selain itu penelitian juga
dilakukan oleh Khotibul (2010) dengan mengikuti metode Galietta et al (1998).
Larutan film dipanaskan pada suhu 90oC dengan di atas hot plate pH diatur hingga
5,2. Selanjutnya pengeringan dilakukan pada oven vakum pada suhu 34oC selama 38
jam. Monir et al, (2011) mengikuti yang metode yang dilakukan oleh Kim dan
Ustunol (2001) dengan sedikit modifikasi menjelaskan bahwa setelah pencampuran
larutan film, diatur pH 8 dengan menggunakan NaOH kemudian dilakukan
pemanasan 90oC selama 30 menit sambil diaduk terus menerus, pada 5 menit terakhir
BAB 3
METODE PENELITIAN
3.1. Waktu dan Lokasi Penelitian
Penelitian ini dilakukan pada bulan November 2012 – Juni 2013, di Laboratorium
Penelitian FMIPA USU, Laboratorium Polimer FMIPA USU, Laboratorium
Fitokimia Farmasi USU, Laboratorium Mikrobiologi FMIPA USU, Laboratorium
Biokimia UGM Yogyakarta, Geologi Kuarter PPPLG Bandung.
3.2. Bahan dan Alat
3.2.1. Peralatan
Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu peralatan gelas pirex, rotari
evaporator Buchi Rotavapor R-200, desikator, batang pengaduk kaca, Erlenmeyer,
magnetic tirrer,hot plate, plat kaca, oven blower, dan termometer.
3.2.2. Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu herba meniran, bubuk whey protein
isolate (WPI 93%), metanol, akuades, gliserol, CaCl2(aq) 20%, NaOH 0,1 N, HCl 0,1
N, dan minyak kelapa sawit.
3.3. Prosedur Penelitian
3.3.1. Proses Ekstraksi Meniran
Tumbuhan meniran diperoleh dari Kecamatan Pancurbatu, Kabupaten Deliserdang,
Sumatera Utara. Tanaman (daun, batang, bunga dan buah) dicuci bersih, lalu
dikeringanginkan pada suhu kamar tanpa terkena sinar matahari langsung selama ± 1
minggu, kemudian dipotong kecil-kecil dan diblender hingga diperoleh serbuk
meniran. Selanjutnya ditimbang sebanyak ± 300 g dan dimasukkan ke dalam gelas
dilakukan pada suhu kamar dan hindari terkena sinar matahari, selama ± 3 hari dan
pengadukan dilakukan setiap hari. Setelah 3 hari pemaserasian, maserat kemudian
disaring. Filtrat dipisahkan dan ampasnya direndam kembali dengan larutan yang
baru. Maserasi dilakukan 5 kali hingga diperoleh maserat yang terakhir berwarna
jernih. Filtrat yang diperoleh dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu tidak
lebih dari 50oC dan diuapkan sehingga terpisah pelarutnya dengan ekstrak kental
herba meniran. Ekstrak kental kemudian dimasukkan ke dalam botol vial dan
dikeringkan dalam desikator sehingga diperoleh ekstrak kering (Desvita, 2011).
3.3.2 Proses Pembuatan Edible Film WPI-Meniran
Prosedur pembuatan edible film WPI-Meniran dilakukan menurut Galiettaet al.
(1998) modifikasi pada bagian pengeringan edible film dengan menggunakan oven
blower. Isolat protein whey dilarutkan dalam 15 ml akuades ditambahkan dengan
gliserol sesuai dangan perlakuan (larutan I) dan 30 ml akuades ditambah dengan 0,25
ml CaCl2 20% (larutan II). Larutan I ditambahkan dengan larutan II kemudian diatur
pH dengan NaOH 0,1 N hingga pH 8 dan dipanaskan pada suhu 90oC di atas hot plate
dengan bantuan pengaduk magnetik 250 rpm selama 30 menit. Kemudian
ditambahkan minyak kelapa sawit 0,25 ml 10 menit terakhir dan agen antibakteri
herba meniran sesuai perlakuan 5 menit terakhir. Didinginkan hingga suhu ruang (di
bawah 30oC). Kemudian disaring dan diatur pH 5,2 dengan HCl 0,1 N selanjutnya
divakum selama 30 menit untuk menghilangkan udara terlarut dalam larutan film.
Kemudian dicetak pada plat kaca yang sudah dilapisi aluminium foil. Setelah itu
dikeringkan pada oven blower selama 18 jam. Setelah kering dikelupas dari cetakan
3.4. Karakterisasi Edible Film WPI-Meniran
3.4.1. Uji Fitokimia
Uji fitokimia herba meniran adalah uji yang dilakukan untuk mengidentifikasi
senyawa-senyawa kimia yang terkandung di dalamnya. Senyawa kimia yang diuji
antara lain: alkaloida, glikosida, steroida dan triterpen bentuk bebas, saponin,
cyanogenik glikosida, antrakinon glikosida, tanin, dan flavonoid. Prosedur kerja uji
fitokimia dapat dilakukan dengan cara:
3.4.1.1. Alkaloida
Sebanyak 1 g ekstrak metanol herba meniran ditambahkan kedalam 10 ml HCl 0,2 N,
kemudian dipanaskan selama 10 menit pada suhu 100º C, selanjutnya didinginkan
dan disaring. Lalu ditambahkan 2 tetes larutan iodium ke dalam 0,5 ml filtrat, jika
terdapat kekeruhan maka mengandung alkaloida (Depkes RI, 1995).
3.4.1.2. Flavonoida
Sebanyak 10 ml metanol ditambahkan kedalam 0,5 g ekstrak metanol herba meniran,
kemudian direfluks dengan menggunakan alat pendingin balik selama 10 menit, lalu
disaring dengan kertas saring kecil berlipat, filtrat diencerkan dengan 10 ml air.
Setelah dingin ditambahkan 5 ml eter minyak tanah, dan dikocok dengan hati-hati,
lalu didiamkan. Kemudian diuapkan pada suhu 40º C untuk membuang lapisan
metanol. Filtrat dilarutkan dalam 5 ml etilasetat, lalu disaring. Selanjutnya 1 ml
larutan percobaan diuapkan hingga kering, sisanya dilarutkan dalam 1 ml sampai 2
ml etanol 95%, ditambahkan 0,5 g serbuk Zn dan 2 ml HCl 2 N, lalu didiamkan
selama 1 menit. Kemudian ditambahkan 10 ml HClpekat, jikadalamwaktu 2-5 menit
terjadi warna merah intensif, menunjukkan adanya flavonoida (glikosida-3 flavonol)
3.4.1.3. Steroida dan Triterpen Bentuk Bebas
Sebanyak 1 g ekstrak metanol herba meniran dimaserasi dengan 20 ml eter selama 2
jam, lalu disaring. Kemudian 5 ml filtrat diuapkan di dalam cawan penguap, lalu
ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat, maka akan
terbentuk warna ungu atau hijau jika mengandung steroida atau triterpen
(Farnsworth,1996).
3.4.1.4. Tanin
Sebanyak 10 ml air ditambahkan ke dalam 1 g ekstrak metanol herba meniran,
kemudian disaring dan diencerkan sampai hampir tidak berwarna. Kemudian 1-2
tetes larutan FeCl3 10% ditambahkan ke dalam 2 ml larutan sampel, jika muncul
warna biru atau hijau menunjukkan adanya tanin (Farnsworth, 1996).
3.4.1.5. Saponin
Sebanyak 10 ml air panas ditambahkan ke dalam 0,5 g ekstrak metanol herba
meniran, lalu didinginkan dan dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Apabila terbentuk
buih selama tidak kurang dari 10 menit, setinggi 1 cm sampai 10 cm dan jika
ditambahkan 1 tetes HCl 2 N, buih tidak hilang maka ekstrak tersebut mengandung
saponin (Depkes RI, 1995).
3.4.1.6. Glikosida
Membuat larutan percobaan sebanyak 1 g ekstrak metanol herba meniran
dicampurkan dengan 10 ml campuran etanol 95% dengan air (7:3) dalam alat
pendingin alir balik, kemudian direfluks selama 10 menit, lalu larutan tersebut
didinginkan dan disaring. Kemudian 25 ml air dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M
ditambahkan ke dalam 20 ml filtrat, kemudian dikocok dan didiamkan selama 5
menit, lalu disaring. Filtrat diekstrak sebanyak 3 kali dengan menambahkan 20 ml
dalamnya, lalu disaring dan diuapkan pada suhu tidak lebih dari 50º C. Selanjutnya
sisa filtrat dilarutkan dengan 2 ml metanol.
Cara percobaan:
Sebanyak 0,1 ml larutan di atas diuapkan dengan penangas air. Kemudian sisanya
dilarutkan dalam 5 ml asam asetat anhidrat, ditambahkan pula 10 tetes asam sulfat
pekat, maka akan terjadi warna biru atau hijau, jika mengandung glikosida (reaksi
Libermann-Bouchard) (Depkes RI, 1995).
3.4.1.6. Antrakinon Glikosida
Sebanyak 2 ml larutan FeCl3dan 8 ml air serta 5 ml HCl pekat ditambahkan kedalam
200 mg ekstrak metanol herba meniran, lalu dididihkan, kemudian didinginkan.
Selanjutnya 5 ml benzen ditambahkan kedalamnya, kemudian dikocok dan dibiarkan
sampai lapisan benzen memisah, lalu dicuci 2 kali dengan 2 ml air, sampai lapisan
benzen bewarna kuning. Kemudian 2 ml NaOH 2 N ditambahkan dan dikocok. Jika
lapisan benzen tidak berwarna dan lapisan air berwarna merah, maka menunjukkan
adanya antrakinon (Depkes RI, 1995).
3.4.1.7. Sianogenik Glikosida
Sampel dimasukkan ke dalam erlenmeyer kemudian dilembabkan dengan air. Kertas
saring yang telah dibasahi dengan larutan natrium pikrat dijepitkan dengan bantuan
gabus pada mulut labu. Kemudian sampel tersebut dibiarkan terkena sinar matahari.
Apabila timbul warna merah pada kertas saring menunjukkan adanya sianogenik
glikosida (Depkes RI 1995).
3.4.2 Uji Antibakteri
Edible film WPI-Meniran diuji dengan mengikuti prosedur Oscar et al. (2011). Film
dipotong dengan diameter 0,6 mm dengan menggunakan cork borer kemudian
disterilkan dengan menggunakan UV selama 10 menit. Sebanyak 10 ml media MHA
dicelupkan pada suspensi biakan dengan kepadatan sel 107 cfu, dan diusapkan
<
