Pengembangan Metode Spektrofotometri UV-Vis untuk Penetapan Kadar Antibiotik Sefadroksil

(1)

HIKMATULLAH

DEPARTEMEN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(2)

PENGEMBANGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI UV-Vis

UNTUK PENETAPAN KADAR ANTIBIOTIK SEFADROKSIL

HIKMATULLAH

Skripsi

sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Sains pada

Departemen Kimia

DEPARTEMEN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(3)

NIM : G44076012

Disetujui

Pembimbing I Pembimbing II

Drs Dudi Tohir, MS Rudi Heryanto, SSi, MSi

NIP 195711041989031001 NIP 197604282005011002

Diketahui

Ketua Departemen Kimia

Prof Dr Ir Tun Tedja Irawadi, MS

NIP 195012271976032002

(4)

PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala

karunia-Nya sehingga karya ilmiah ini berhasil diselesaikan. Karya ilmiah ini disusun

berdasarkan penelitian dan studi pustaka yang dilaksanakan pada bulan Juni

hingga September 2012 bertempat di Laboratorium Kimia Organik dan

Laboratorium Bersama Institut Pertanian Bogor dengan judul Pengembangan

Metode Spektrofotometri UV-Vis untuk Penetapan Kadar Antibiotik Sefadroksil.

Penulis mengucapkan terima kasih kepada bapak Drs Dudi Tohir, MS dan

bapak Rudi Heryanto, SSi, MSi selaku pembimbing yang telah memberikan

bimbingan dan pengarahan selama penelitian dan penulisan karya ilmiah ini.

Terima kasih penulis ucapkan kepada Pak Sabur dan keluarga besar Laboratorium

Kimia Organik yang telah membantu penulis selama menjalani penelitian. Terima

Kasih juga kepada Pak Eko dari Laboratorium Bersama yang menyediakan

spektrofotometer UV-Vis yang akan digunakan penulis. Ucapan terima kasih juga

penulis sampaikan kepada Saudari Yuniorita, Saudara Yulianto, Endro yang

membantu dalam pencarian literatur dan informasi farmasi lainnya.

Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.

Bogor, Desember 2012

(5)

M Sulaeman dan Ibu Nurhayati. Penulis merupakan putra keempat dari empat

bersaudara.

Tahun 2001 penulis lulus dari SMU Negeri 21 Bandung dan diterima di IPB

pada Program Studi Analisis Kimia, Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan

Ilmu Pengetahuan Alam. Pada tahun 2004 penulis lulus dari Program Diploma

Analisis Kimia setelah menyelesaikan tugas akhir praktik kerja lapangan di Balai

Besar Industri Agro, Bogor, Jawa Barat.

(6)

ABSTRAK

HIKMATULLAH. Pengembangan Metode Spektrofotometri UV-Vis untuk

Penetapan Kadar Antibiotik Sefadroksil. Dibimbing oleh DUDI TOHIR dan RUDI

HERYANTO.

Antibiotik sefadroksil dihasilkan oleh jamur Cephalosporium acremonium dan

telah digunakan secara luas. Pada penelitian ini, dikembangkan metode penetapan

kadar sefadroksil dalam kapsul obat dengan menggunakan spektrofotometer

ultraviolet-tampak (UV-Vis). Metode ini lebih cepat, mudah, murah, dan terbukti

memberikan hasil pengukuran yang tidak berbeda nyata dengan metode

kromatografi cair kinerja tinggi yang menjadi rujukan United States

Pharmacopeia, untuk waktu hidrolisis selama 30 menit. Panjang gelombang

maksimum ialah 355.5 nm untuk pelarut akuades dan 351.8 nm untuk pelarut

bufer fosfat pH 5. Validasi metode spektrofotometri UV-Vis menghasilkan

akurasi, presisi, linearitas, limit deteksi dan kuantitasi yang memenuhi persyaratan

International Conference on Harmonization. Secara keseluruhan, pelarut akuades

memberikan hasil validasi yang lebih baik daripada pelarut bufer fosfat pH 5.

ABSTRACT

HIKMATULLAH. Development of UV-Vis Spectrophotometric Method for

Determination of Cefadroxil in antibiotic. Supervised by DUDI TOHIR and RUDI

HERYANTO.

(7)

Halaman

DAFTAR TABEL ... vii

DAFTAR GAMBAR ... vii

DAFTAR LAMPIRAN ... viii

PENDAHULUAN ... 1

BAHAN DAN METODE

Bahan dan Alat ... 1

Pemilihan Pelarut Standar dan Sampel ... 1

Validasi Metode Spektrofotometri UV-Vis ... 1

Pengukuran Sefadroksil dengan Metode KCKT ... 2

HASIL DAN PEMBAHASAN

Spektrum Sefadroksil dalam Kapsul Obat ... 2

Kadar Sefadroksil dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis ... 3

Kadar Sefadroksil dengan Metode KCKT ... 4

Perbandingan Metode Spektrofotometri UV-Vis dengan KCKT ... 4

Hasil Validasi Metode Spektrofotometri UV-Vis ... 5

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan ... 6

Saran ... 6

DAFTAR PUSTAKA ... 7

(8)

DAFTAR TABEL

Halaman

1

Serapan sampel sefadroksil-KOH 1 N ... 3

2

Kadar sefadroksil dalam sediaan kapsul obat antobiotik ... 4

3

Hasil uji statistik metode spektrofotometri UV-Vis dan KCKT ... 5

4

Hasil validasi metode spektrofotometri UV-Vis ... 6

DAFTAR GAMBAR

Halaman

1

Spektrum serapan standar sefadroksil dalam akuades dan dalam bufer

fosfat pH 5 tanpa pemanasan ... 3

(9)

PENDAHULUAN

Antibiotik adalah senyawa organik yang

dihasilkan oleh spesies mikroorganisme

tertentu dan bersifat toksik bagi spesies mikroorganisme lain. Sifat toksik senyawa antibiotik dapat menghambat pertumbuhan bakteri (efek bakteriostatik) atau langsung

membunuh bakteri (efek bakteriosida)

(Sumardjo 2008). Sefadroksil adalah

antibiotik -laktam generasi pertama dari

sefalosporin yang mempunyai aktivitas

antibakteri spektrum luas dan bersifat

bakteriosida, bekerja dengan menghambat pembentukan dinding sel mikroorganisme (Tjay & Rahardja 2002).

Secara umum, obat memiliki efek samping yang tidak diinginkan dan bersifat merugikan bila berlebihan (Ditjen POM 1996). Untuk itu, diperlukan pengawasan yang ketat dalam bidang farmasi, sejak proses pembuatan hingga penetapan kadar pada produk akhir. Penetapan kadar sefadroksil telah banyak dilakukan dengan menggunakan berbagai teknik analisis, di antaranya kromatografi lapis tipis dan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) (USP 2011).

Salah satu metode lain yang

dikembangkan untuk penetapan kadar

sefadroksil dalam sediaan farmasi (kapsul) adalah spektrofotometri ultraviolet-tampak (UV-Vis). Kelebihan metode ini di antaranya menghasilkan absorbans maksimum lebih besar dan analisanya lebih cepat. Shantier et

al. (2011) telah menunjukkan bahwa

penggunaan NaOH memberikan hasil yang sesuai dengan International Conference on

Harmonisation (ICH) of Technical

Requirement for Registration of

Pharmaceutical for Human Use, namun puncak serapannya melebar. Penelitian ini memodifikasi pereaksi basa yang digunakan menjadi KOH. Larutan yang digunakan juga

dimodifikasi mengikuti metode KCKT

berdasarkan USP (2011). Hasil validasi metode modifikasi ini diharapkan akan

memenuhi persyaratan ICH.

BAHAN DAN METODE

Bahan dan Alat

Bahan-bahan yang digunakan adalah kapsul sefadroksil, standar sefadroksil (U.S.

Pharmacopoeia), KH2PO4 (p.a. Merck), pelet

KOH (p.a. Merck), dan akuades.

Alat yang digunakan adalah

spektrofotometer UV-1700 Shimadzu, kuvet

kuarsa 1 cm, instrumen KCKT Prominence LC20AD Shimadzu, kolom Shim-pack VP-ODS C18 4.6 mm × 25 cm, neraca analitik,

peralatan kaca, komputer, perangkat lunak UV Probe solution versi 2.21, perangkat lunak Microsoft Excel tahun 2007, dan saringan Nilon 0.02 µm.

Pemilihan Pelarut Standar dan Sampel

Sepuluh mg standar sefadroksil

dimasukkan ke dalam gelas piala dan ditambahkan 20 mL akuades kemudian diaduk dengan pengaduk magnetik selama 30 menit. Larutan dipindahkan ke labu takar 100 mL dan ditepatkan volumenya dengan akuades. Larutan stok standar dengan konsentrasi 100 µg/mL tersebut diencerkan menjadi 10, 20, 30, 40, dan 50 µg/mL, masing-masing ditambahkan KOH 1 N dan dimasukkan ke dalam penangas air selama 15, 30, 45, dan 60 menit.

Larutan sampel dibuat dengan menimbang serbuk kapsul setara dengan 25 mg sefadroksil dan dimasukkan ke dalam gelas piala, kemudian ditambahkan 60 mL akuades dan diaduk dengan pengaduk magnetik. Larutan dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL dan

ditepatkan volumenya dengan akuades.

Larutan stok sampel dengan konsentrasi 250 µg/mL tersebut diencerkan menjadi 25 µg/mL, lalu ditambahkan KOH 1 N dan dimasukkan ke dalam penangas air selama 15, 30, 45, dan 60 menit

Larutan standar dan sampel juga dibuat dalam pelarut bufer fosfat pH 5. Prosedur pembuatannya sama seperti di atas, dengan akuades digantikan oleh bufer tersebut. Sampel adalah kapsul sefadroksil dengan label klaim per kapsul mengandung 500 mg sefadroksil. Semua larutan standar dan sampel diukur serapannya pada panjang gelombang maksimum.

Validasi Metode Spektrofotometri UV-Vis Akurasi

(10)

2

dengan pelarut. Pengukuran dilakukan 3 kali ulangan. Nilai perolehan kembali dihitung dengan rumus

Perolehan kembali (%) = × 100%

Keterangan:

a = konsentrasi sampel + standar yang terukur (mg)

b = konsentrasi sampel (mg)

c = konsentrasi standar teoretis yang ditambahkan (mg)

Presisi

Larutan sampel diukur dengan

spektrofotometer UV-Vis sebanyak 9 ulangan pada hari yang sama. Nilai presisi diukur dengan menghitung persentase simpangan

baku relatif (% RSD) data dengan

menggunakan rumus

= 2

=1

n – 1

RSD (%) = × 100% Keterangan :

s = simpangan baku RSD = simpangan baku relatif

xi = kadar sefadroksil tiap pengulangan _{= rerata kadar sefadroksil}

n = jumlah ulangan

Linearitas

Setiap konsentrasi larutan standar diukur sebanyak 6 ulangan pada kondisi optimum dan ditentukan persamaan garisnya dengan metode regresi linear (y = a + bx). Peubah a menyatakan intersep dan b adalah kemiringan garis. Linearitas kurva kalibrasi dilihat dari nilai koefisien korelasi (r).

Limit Deteksi dan Limit Kuantitasi

Persamaan linear yang diperoleh pada uji linearitas digunakan untuk menghitung limit deteksi dan limit kuantitasi. Limit deteksi dan

limit kuantitasi dihitung dari rerata

kemiringan garis dan simpangan baku intersep kurva standar tersebut dengan rumus sebagai berikut:

Limit deteksi = 3.3

Limit kuantitasi = 10

Keterangan:

Sa = Simpangan baku intersep

b_{= Rerata kemiringan}

Pengukuran Sefadroksil dengan Metode KCKT

Fase gerak ialah larutan bufer fosfat pH 5,

disiapkan dengan melarutkan 13.6 g KH2PO4

dalam 2 L akuades lalu diatur ke pH 5 dengan KOH 10 N yang dicampur dengan asetonitril dengan nisbah 960:40. Larutan disaring dengan saringan nilon sebelum digunakan. Kolom yang dipakai berukuran 4.6 mm × 250

mm dengan fase diam C18, panjang

gelombang deteksi 230 nm, dan laju alir 1.5 mL/menit.

Standar dibuat dengan menimbang secara saksama sefadroksil lalu dilarutkan dalam larutan bufer fosfat pH 5 hingga diperoleh konsentrasi sekitar 1.06 mg/mL, dan disaring dengan membran nilon. Sebanyak 10 kapsul

dikeluarkan isinya, dicampurkan,

dihomogenkan dengan mortar. Serbuk obat ini ditimbang setara dengan 212 mg sefadroksil ke dalam labu ukur 200 mL dan ditambahkan 100 mL bufer fosfat pH 5 kemudian di kocok selama 5 menit. Larutan ditera dengan bufer fosfat pH 5, disaring dengan membran nilon. Larutan standar dan sampel diinjeksikan ke dalam sistem KCKT sebanyak 10 µ L dengan kondisi kerja yang sama.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Spektrum Sefadroksil dalam Kapsul Obat

Dalam penelitian ini, sefadroksil

dihidrolisis dalam pelarut akuades dan bufer fosfat pH 5 yang lazim digunakan pada pemisahan secara KCKT (USP 2011). Pereaksi basa yang digunakan untuk hidrolisis ialah KOH. Sebelumnya, Shantier et al. (2011) telah melaporkan hidrolisis sefadroksil menggunakan pereaksi NaOH dan akuades. KOH digunakan dalam penelitian ini karena merupakan basa kuat juga dan diharapkan memberikan spektrum yang lebih baik dibandingkan dengan menggunakan NaOH yang spektrumnya melebar. Diagram alir penelitian terdapat pada Lampiran 1.

(11)

Berdasarkan USP (2011), panjang gelombang sefadroksil dalam akuades ialah 263 nm,

maka puncak B merupakan serapan

sefadroksil. Serapan puncak B lebih rendah dibandingkan dengan puncak A. Hal ini akan mengakibatkan sensitivitas pengukuran tidak baik pada konsentrasi rendah.

[image:11.595.112.293.169.287.2]

A B

Gambar 1 Spektrum serapan standar sefadroksil dalam akuades (merah) dan dalam bufer fosfat pH 5 (biru) tanpa pemanasan.

Setelah dihidrolisis dengan KOH 1 N dan

dipanaskan dalam akuades 98 oC, kedua

pelarut memberikan spektrum serapan yang lebih baik (Gambar 2), bila dibandingkan dengan spektrum setelah dihidrolisis dengan NaOH (Shantier et al. 2011). Terbentuk serapan tunggal yang lebih kuat intensitasnya . Puncak A pada Gambar 1 bergeser sebagai akibat pemutusan ikatan C-N pada cincin ß-laktam (Lampiran 2). Hasil ini serupa dengan hasil penelitian Ivama et al. (1999) dalam menentukan kadar sefaklor dalam sediaan farmasi, yaitu puncak kedua pada sefaklor menghilang setelah aminolisis dan bergeser serapan maksimumnya ke 340 nm. Lampiran 3 dan 4 menunjukkan spektrum

serapan berbagai konsentrasi standar

sefadroksil pada pelarut akuades dan pelarut bufer fosfat pH 5 dengan berbagai waktu pemanasan.

Gambar 2 Spektrum serapan standar sefadroksil 25 µg/mL dalam akuades (merah) dan dalam bufer fosfat pH 5 (biru) setelah pemanasan selama 30 menit dengan KOH 1N.

Hidrolisis sefadroksil dengan KOH

menghasilkan larutan berwarna kuning yang memberikan serapan maksimum 355.5 nm pada pelarut akuades dan 351.6 nm pada pelarut bufer fosfat pH 5. Perubahan warna larutan menjadi kuning menunjukkan bahwa proses hidrolisis telah berhasil. Pemutusan ikatan C-N pada cincin ß-laktam mengubah hibridisasi sp3 pada N menjadi sp2 dan proses

ini disertai eksitasi elektron yang

memunculkan warna kuning. Hidrolisis

ß-laktam dimungkinkan karena memiliki regangan sudut yang besar. Atom karbon

karbonil sp2 secara normal memiliki sudut

ikatan 120o, sedangkan sudut ikatan amida

dalam cincin ß-laktam mendekati 90o

(Cairns 2004). Hasil ini serupa dengan hasil penelitian Susidarti et al. (2008) dalam menentukan kadar sefadroksil dalam sediaan farmasi, yaitu perubahan larutan menjadi kuning oleh etil asetoasetat dan formaldehida.

Selama hidrolisis sampel, intensitas

[image:11.595.324.507.398.463.2]

serapan meningkat hingga menit ke-45 (Tabel 1). Efek hiperkromik ini berasal dari gugus auksokrom OH fenolik (Cairns 2004).

Tabel 1 Serapan sampel sefadroksil-KOH 1 N

Serapan Waktu pemanasan (menit)*

15 30 45 60

Akuades 0.4422 0,5668 0.6713 0.6367

Bufer fosfat pH 5

0.4792 0.5582 0.6717 0.6218

Keterangan: *= rerata dari 9 ulangan presisi

Kadar Sefadroksil dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis

Kadar sefadroksil dalam kapsul obat ditentukan dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang maksimum, yaitu 355.5 nm untuk pelarut akuades dan 351.6 nm untuk pelarut bufer fosfat pH 5. Rentang konsentrasi standar yang digunakan adalah

10−50 g/mL. Lampiran 5 dan 6

[image:11.595.108.293.575.694.2]

(12)

4

Tabel 2 menunjukkan kadar sefadroksil dalam sediaan kapsul obat yang diperoleh dari 9 ulangan dengan spektrofotometer UV-Vis. Larutan dalam kedua pelarut memiliki kisaran

kadar 503.1 hingga 504.6 mg/kapsul.

Lampiran 7 dan 8 menunjukkan perhitungan kadar sefadroksil tersebut.

Kadar Sefadroksil dengan Metode KCKT (USP 2011)

Metode KCKT yang merujuk pada USP

(2011) digunakan sebagai metode

pembanding untuk penetapan kadar

sefadroksil. Konsentrasi standar sefadroksil

yang digunakan adalah 5, 10, dan 15 g/mL,

sedangkan sampel dibuat setara dengan 10

g/mL, disiapkan sebanyak 6 kali ulangan.

Lampiran 9 dan 10 menunjukkan

kromatogram standar dan sampel sefadroksil. Lampiran 11 menunjukkan waktu retensi dan luas puncak standar dan sampel sefadroksil. Waktu retensi sefadroksil berada di sekitar menit ke-3.3. Sedikit perbedaan waktu antara standar dan sampel terjadi karena terdapat perbedaan matriks di antara keduanya. Kurva kalibrasi dibuat sebagai hubungan konsentrasi standar dengan luas puncak yang dihasilkan. Persamaan garis yang diperoleh adalah y = -336887 + 2542421.2x. Nilai koefisien korelasi yang didapat juga sesuai dengan ICH, yaitu lebih besar dari 0.9970, menunjukkan bahwa metode KCKT juga mampu memberikan hasil uji yang proporsional dengan konsentrasi sefadroksil dalam sampel.

Perbandingan luas puncak kromatogram standar dan sampel menghasilkan kadar sefadroksil dalam sampel kapsul obat sebesar 505.1 mg/kapsul. Nilai tersebut diperoleh dari rerata 6 kali ulangan.

Perbandingan Metode Spektrofotmetri UV-Vis dengan KCKT

Metode spektrofotometri UV-Vis teknik pengerjaannya lebih mudah dibandingkan dengan metode KCKT (sebagai rujukan). Metode alternatif ini didapati memberikan hasil yang sama baiknya dengan metode KCKT. Pengujian statistik dilakukan dengan uji beda nyata, dengan membandingkan varians dan rerata sampel dari kedua metode.

Uji-F membandingkan ketelitian kedua

metode dan mengukur varians, sedangkan uji-t membandingkan keuji-tepauji-tan kedua meuji-tode dan mengukur rerata.

Hasil uji-F menunjukkan bahwa nilai Fhitung lebih kecil daripada Ftabel (Tabel 3).

Artinya, varians yang dihasilkan dengan

metode spektrofotometri UV-Vis tidak

berbeda nyata dengan metode KCKT.

Sementara itu, uji-t tidak berpasangan

mendapatkan nilai thitung lebih kecil daripada

ttabel hanya pada waktu pemanasan 30 menit

(Tabel 3). Nilai thitung pada menit ke-15, 45,

dan 60 lebih besar daripada ttabel. Dapat

disimpulkan bahwa nilai rerata yang

dihasilkan kedua metode berbeda nyata pada 15, 45, dan 60 menit, tetapi tidak berbeda nyata pada 30 menit waktu pemanasan. Uji

beda nyata ini dilakukan pada taraf

kepercayaan 95%. Lampiran 12 menunjukkan perhitungan uji distribusi F dan uji t.

Hasil uji statistik menyatakan bahwa hasil hidrolisis memberikan varians yang sama untuk semua perlakuan, tetapi menunjukkan perbedaan rerata pada menit ke-15, 45, dan 60. Berdasarkan hasil tersebut kondisi yang baik untuk hidrolisis ialah 30 menit yang memberikan varians yang sama dan tidak berbeda nyata hasilnya bila dibandingkan dengan metode KCKT.

Tabel 2 Kadar sefadroksil dalam sediaan kapsul obat antibiotik

Parameter

Spektrofotometer UV-Vis _KCKT

Akuades Bufer fosfat pH 5

15 menit 30 menit 45 menit 60 menit 15 menit 30 menit 45 menit 60 menit Kadar

sefadroksil (mg/kapsul)

503.1 504.1 504.1 504.1 504.0 504.5 504.2 504.1 505.1

Koefisien

korelasi (r) 0.9968 0.9974 0.9993 0.9980 0.9998 0.9998 0.9955 0.9999 0.9998 Simpangan baku

(SD) 0. 1.1404 0.5124 0.5360 0.9999 0.8485 0.5671 0.5125 0.9456 Simpangan baku

(13)

Hasil Validasi Metode Spektrofotometri UV-Vis

Validasi adalah suatu tindakan untuk membuktikan bahwa suatu proses atau metode dapat memberikan hasil yang konsisten sesuai dengan spesifikasi yang telah ditetapkan dan terdokumentasi dengan baik (Valcarcel 2000).

Keabsahan hasil yang didapatkan dari

pengembangan metode spektrofotometri

UV-Vis perlu dievaluasi dengan melakukan validasi metode. Berdasarkan hasil uji statistik, validasi hanya dilakukan pada menit ke-30. Parameter validasi meliputi akurasi, presisi, linearitas, limit deteksi, dan limit kuantitasi.

Akurasi

Akurasi atau ketepatan metode analisis

ditentukan dengan metode penambahan

standar dan dinyatakan sebagai perolehan kembali (%). Standar sefadroksil sebanyak 1.0, 1.5, dan 2.0 mg ditambahkan ke dalam sampel obat yang berisi 0.5 mg sefadroksil. Perolehan kembali pada pelarut akuades

berkisar 99.52−100.30%, sedangkan dalam

pelarut bufer fosfat pH 5 99.56−100.58%

(Tabel 4). Hasil ini sesuai dengan yang

disyaratkan oleh ICH, yaitu 98−102%, yang

menunjukkan bahwa metode penetapan kadar sefadroksil secara spektrofotometri UV-Vis telah memiliki akurasi yang tinggi dengan

hasil pengukuran dekat dengan nilai

sebenarnya. Lampiran 12 menunjukkan

perhitungan akurasi pada pelarut akuades dan bufer fosfat pH 5.

Presisi

Presisi menggambarkan kedekatan nilai antara serangkaian pengukuran yang didapat dari sampel yang homogen pada kondisi tertentu (ICH 1996). Nilai presisi merupakan ukuran sebaran data di sekitar nilai tengahnya

dan lazim dituliskan sebagai simpangan baku relatif (RSD) dari sederet pengukuran (Meier

& Z nd 2000).

Tabel 4 menunjukan nilai presisi yang didapatkan dari 9 kali pengukuran larutan sampel 25 µg/mL. Dalam akuades, nilainya 0.2262% dan dalam bufer fosfat pH 5, 0.1683%. Hasil ini menunjukkan bahwa

analisis antibiotik sefadroksil teliti

berdasarkan kriteria yang ditetapkan ICH (1996), karena nilai RSD di bawah 2%. Ketelitian yang tinggi menunjukkan bahwa hasil analisis oleh analisis yang sama dalam

periode kerja tertentu dan dengan

menggunakan larutan dan peralatan yang sama, memiliki keterulangan yang baik.

Linearitas

Linearitas menunjukkan kemampuan suatu prosedur analisis untuk memperoleh hasil pengujian yang sesuai dengan konsentrasi analit dalam sampel (ICH 1996). Nilai linearitas dievaluasi sebagai koefisien korelasi

(r). Koefisien korelasi menunjukkan

hubungan antara jumlah atau konsentrasi sampel dan respons dari persamaan kurva regresi linear (y = a + bx).

Penentuan linearitas dilakukan dengan 5 konsentrasim sampel yaitu 10, 20, 30, 40, dan

50 g/mL, masing-masing sebanyak 6 kali

ulangan. Pada pelarut akuades, koefisien korelasi berkisar 0.9997 dan pada pelarut bufer fosfat pH 5 berkisar 0.9993 (Tabel 4).

Nilai koefisien korelasi yang tinggi

menunjukkan hubungan yang linear antara sinyal detektor yang terukur dan jumlah sefadroksil dalam sampel. Nilai koefisien korelasi yang didapatkan positif, maka kedua peubah

mempunyai hubungan searah (Supranto 2001).

Nilai kemiringan garis (a) menyatakan sensitivitas suatu metode. Nilai kemiringan yang kecil menunjukkan bahwa perubahan

konsentrasi yang kecil tidak terlalu

Tabel 3 Uji statistik metode spektrofotometri UV-Vis dan KCKT

Larutan Waktu (menit) Uji F Uji t

Fhitung Ftabel thitung ttabel

Akuades

15 1.593

3.687

4.763

2.160

30 0.75 2.014

45 1.269 2.448

60 1.024 2.289

Bufer fosfat pH 5

15 1.271

3.687

2.426

2.160

30 1.243 1.448

45 2.875 2.244

(14)

6

Tabel 4 Hasil validasi metode spektrofotometri UV-Vis

Parameter Akuades Bufer fosfat

pH 5

Standar

ICH Simpulan

Presisi (% RSD) 0.2262 0.1683 0 – 2 Kedua pelarut memberikan hasil

yang teliti

Akurasi (%)

a) Standar 1.0 mg 99.52 100.13

98 – 102 Hasil pengukuran kedua pelarut dekat dengan nilai sebenarnya

b) Standar 1.5 mg 100.30 100.58

c) Standar 2.0 mg 100.07 99.55

Linearitas

Koefisien korelasi 0.9997 0.9993 0.9970

Kedua pelarut menunjukkan hubungan linear antara sinyal yang terukur dan jumlah sefadroksil dalam sampel .

Limit deteksi (µg/mL) 0.2164 0.7087 –

Konsentrasi terendah pada kedua pelarut yang dapat membedakan sinyal sefadroksil dan blangko

Limit kuantasi (µg/mL) 0.6557 2.1474 –

Konsentrasi terendah pada kedua pelarut yang memberikan ketelitian dan ketepatan yang baik

berpengaruh terhadap sinyal detektor yang dihasilkan. Nilai intersep (b) menyatakan pengaruh matriks pada larutan. Nilai intersep yang semakin jauh dari nol menandakan pengaruh matriks dalam larutan yang semakin besar. Matriks memengaruhi kemampuan suatu metode untuk mengukur konsentrasi terkecil. Hal ini dapat mengganggu penentuan

analit dalam sampel yang ditentukan.

Lampiran 13 menunjukkan nilai a dan b yang relatif kecil, yang menunjukkan bahwa metode ini cukup sensitif dan pengaruh matriks tidak signifikan.

Limit Deteksi dan Limit Kuantitasi

Limit deteksi dan limit kuantitasi

ditentukan dari persamaan regresi linear rerata hasil uji linearitas. Limit deteksi merupakan jumlah atau konsentrasi terkecil analit yang dapat dideteksi dan secara statistis dapat

dibedakan dari sinyal blangko. Limit

kuantitasi adalah jumlah atau konsentrasi terkecil analit yang dapat ditentukan dan dapat dipercaya (Valcarcel 2000). Limit deteksi dan kuantitasi dihitung dari nilai simpangan baku intersep dan rerata kemiringan dari persamaan regresi linear rerata.

Limit deteksi metode spektrofotometri UV-Vis pada pelarut akuades ialah 0.2164

g/mL (Tabel 4). Nilai ini menunjukkan

bahwa pada konsentrasi kurang dari 0.2164

g/mL keberadaan sefadroksil menjadi tidak

terdeteksi dalam akuades. Limit deteksi pada pelarut bufer fosfat pH 5 lebih tinggi, yaitu

0.7087 g/mL.

Nilai limit kuantitasi diperoleh sebesar

0.6557 g/mL pada pelarut akuades dan

2.1476 g/mL pada pelarut bufer fosfat pH 5.

Konsentrasi analit yang terukur di bawah nilai ini akan memberikan ketelitian dan ketepatan yang tidak baik. Lampiran 14 menunjukkan perhitungan limit deteksi dan limit kuantitasi.

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan

Metode spektrofotometri UV-Vis dengan hidrolisis selama 30 menit dapat digunakan dalam penetapan kadar sefadroksil dalam

kapsul obat antibiotik. Metode ini

memberikan hasil pengukuran yang tidak berbeda nyata dengan metode KCKT. Hasil validasi metode spektrofotometri UV-Vis menghasilkan akurasi, presisi, linearitas, limit deteksi dan kuantitasi yang memenuhi persyaratan ICH. Secara umum, pelarut akuades memberikan hasil validasi yang lebih baik daripada pelarut bufer fosfat pH 5.

Saran

Perlu dilakukan analisis terhadap

(15)

DAFTAR PUSTAKA

Cairns D. 2004. Intisari Kimia Farmasi.

Puspita RM, penerjemah; Simanjuntak J, editor. Jakarta: ECG. Terjemahan dari: Essential of Pharmaceutical Chemistry. Ditjen POM Depkes RI. 1996. Kompedia

Obat Bebas. Jakarta: Ditjen POM Depkes RI.

Harvey D. 2000. Modern Analytical

Chemistry. New York: McGraw-Hill. [ICH] International Conference on Harmoni-

zation. 1995. Validation of Analytical

Procedures: Text and Methodology Q2

(R1) [terhubung berkala]. www.ich.org. [1 Nov 2012]

Ivama VM et al. 1999. Spectrophotometric determination of cefaclor in pharma-ceutical preparations. J Quimica Nova 22:201-204.

Meier PC, Z nd RE. 2000. Statistical Methods

in Analytical Chemistry. Ed ke-2.

New York: J Wiley.

Shantier SW, Gadkariem EA, Ibrahim KE, El-Obied HA. 2011. Spectrophotometric determination of cefadroxil in bulk and dosage form using sodium hydroxide. E-J Chem 8(3):1314-1322.

Sumardjo D. 2008. Buku Panduan Kuliah

mahasiswa Kedokteran Program Strata 1 Fakultas Bioeksata. Jakarta: ECG.

Supranto J. 2001. Statistik. Jakarta: Erlangga. Susidarti RA. Rianti A, Martono S. 2008.

Penetapan kadar sefadroksil secara

spektrofotometri visible menggunakan

pereaksi etil asetoasetat dan formaldehida. Maj Farmi Indones 19:41-47.

Tjay TH, Rahardja K. 2002. Obat-obat Penting: Khasiat Penggunaan, dan Efek- efek Sampingnya. Ed ke-4. Jakarta: Elex

Media Komputindo.

[USP] United States Pharmacopoiea 2011. USP 34. Maryland: USP Convention. Valcarcel M. 2000. Principle of Analytical

(16)

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

1

Diagram alir penelitian ... 9

2

Reaksi hidrolisis sefadroksil .. ... 10

3

Spektrum serapan standar dan sampel sefadroksil dalam akuades ... 11

4

Spektrum serapan standar dan sampel sefadroksil dalam bufer fosfat pH 5.. 12

5

Kurva standar sefadroksil dalam akuades pada 355.5 nm

... 13

6

Kurva standar sefadroksil dalam bufer fosfat pH 5 pada

35

1.5 nm ... 14

7

Kadar sefadroksil dalam kapsul obat dengan metode spektrofotometri

UV-Vis dalam akuades ... 15

8

Kadar sefadroksil dalam kapsul obat dengan metode spektrofotometri

UV-Vis dalam bufer fosfat pH 5 ... 17

9

Kromatogram standar sefadroksil ... 19

10

Kromatogram sampel sefadroksil 10 µg/mL ... 20

11

Kadar sefadroksil dalam kapsul obat dengan metode KCKT ... 21

12

Uji statistika metode spektrofotometri UV-Vis dan KCKT ... 22

13

Perolehan kembali kadar sefadroksil dalam kapsul obat dengan metode

spektrofotometri UV-Vis pada waktu pemanasan 30 menit ... 24

14

Linearitas kadar sefadroksil dengan metode spektrofotometri UV-Vis ... 25

(17)

(18)

9

Lampiran 1 Diagram alir penelitian

Pelarut: Akuades, bufer fosfat pH 5 Waktu hidrolisis: 15, 30, 45, 60 menit

Standar sefadroksil dan sampel obat

Uji statistika Metode spektrofotometri:

1. Preparasi standar dan sampel

2. Penentuan panjang gelombang

maksimum

3. Penentuan kurva standar

4. Penentuan kadar sefadroksil

dalam sampel

Metode rujukan USP (2011)

(KCKT)

Validasi metode:

(19)

O H

N H

NH

O O

C

H N C

COOH

C

CH₃

CH2SH

Lampiran 2 Reaksi hidrolisis sefadroksil

O H

NH2

CONH

N

O

S

COOH C

H₃ CH₃

Turunan 2,5-diketopiperazina

+ KOH

(20)

11

Lampiran 3 Spektrum serapan standar dan sampel sefadroksil dalam akuades

(a) Waktu pemanasan 15 menit (b) Waktu pemanasan 30 menit

(c) Waktu pemanasan 45 menit (d) Waktu pemanasan 60 menit

Keterangan :

= Standar sefadroksil 10 µg/mL = Standar sefadroksil 20 µg/mL

= Standar sefadroksil 30 µg/mL = Standar sefadroksil 40 µg/mL = Standar sefadroksil 50 µg/mL

= Sampel kapsul sefadroksil 25 µg/mL

(21)

Lampiran 4 Spektrum serapan standar dan sampel sefadroksil dalam bufer fosfat pH 5

(a) Waktu pemanasan 15 menit (a) Waktu pemanasan 30 menit

(c) Waktu pemanasan 45 menit (d) Waktu pemanasan 60 menit

Keterangan :

= Standar sefadroksil 10 µg/mL = Standar sefadroksil 20 µg/mL

= Standar sefadroksil 30 µg/mL = Standar sefadroksil 40 µg/mL = Standar sefadroksil 50 µg/mL

(22)

13

Lampiran 5 Kurva standar sefadroksil dalam akuades pada 355.5 nm

Waktu pemanasan 15 menit

No Konsentrasi

(µg/mL) Absorbans

1 10 0.1340

2 20 0.3629

3 30 0.5447

4 40 0.7275

5 50 0.8972

No Konsentrasi

(µg/mL) Absorbans

1 10 0.2289

2 20 0.4436

3 30 0.6627

4 40 0.8867

5 50 1.1620

No Konsentrasi

(µg/mL) Absorbans

1 10 0.2678

2 20 0.5357

3 30 0.8035

4 40 1.0448

5 50 1.3392

No Konsentrasi

(µg/mL) Absorbans

1 10 0.2059

2 20 0.5226

3 30 0.7734

4 40 1.0244

5 50 1.2902

y = - 0.034040 + 0.018910x r = 0.9968

0,0000 0,2000 0,4000 0,6000 0,8000 1,0000

0 20 40 60

A b so rb an s Konsentrasi (µg/mL)

y = - 0.016010 + 0.023093x r = 0.9974

0,0000 0,5000 1,0000 1,5000

0 20 40 60

y = 0.00263 + 0.026519x r = 0.9993

0,0000 0,5000 1,0000 1,5000

0 20 40 60

y = - 0.03782 + 0.026704x r = 0.9980

0,0000 0,5000 1,0000 1,5000

0 20 40 60

(23)

Lampiran 6 Kurva standar sefadroksil dalam bufer fosfat pH 5 pada 351.5 nm

No Konsentrasi

(µg/mL) Absorbans

1 10 0.1832

2 20 0.3698

3 30 0.5729

4 40 0.7700

5 50 0.9730

No Konsentrasi

(µg/mL) Absorbans

1 10 0.2139

2 20 0.4484

3 30 0.6581

4 40 0.8905

5 50 1.1141

No Konsentrasi

(µg/mL) Absorbans

1 10 0.2408

2 20 0.5422

3 30 0.8342

4 40 1.0311

5 50 1.3539

No Konsentrasi

(µg/mL) Absorbans

1 10 0.2466

2 20 0.4935

3 30 0.7408

4 40 0.9856

5 50 1.2334

y = - 0.02016 + 0.019798x r = 0.9998

0,0000 0,2000 0,4000 0,6000 0,8000 1,0000 1,2000

0 20 40 60

y = - 0.00775 + 0.022425x r = 0.9998

0,0000 0,2000 0,4000 0,6000 0,8000 1,0000 1,2000

0 20 40 60

y = - 0.01409 + 0.027151x r = 0.9955

0,0000 0,2000 0,4000 0,6000 0,8000 1,0000 1,2000 1,4000 1,6000

0 20 40 60

y = 0.00027 + 0.024657x r = 0.9999

0,0000 0,2000 0,4000 0,6000 0,8000 1,0000 1,2000 1,4000

0 20 40 60

(24)

15

Lampiran 7 Kadar sefadroksil dalam kapsul obat dengan metode spektrofotometri UV-Vis dalam akuades

Ulangan Bobot obat Absorbans Konsentrasi Kadar dalam

(mg) terbaca (µ g/mL) 1 kapsul (mg)

1 _26.90 _0.4431 _25.2322 _503.1343

2 _26.90 _0.4429 _25.2216 _502.9229

3 _26.90 _0.4424 _25.1951 _502.3945

4 _26.80 _0.4409 _25.1158 _502.6819

5 _26.80 _0.4403 _25.0841 _502.0475

6 _26.90 _0.4442 _25.2903 _504.2928

7 26.90 0.4426 25.2057 502.6059

8 _26.80 _0.4416 _25.1528 _503.4225

9 26.80 0.4422 25.1846 504.0589

Rerata 503.0624

Selang kepercayaan 0.6826

1 26.90 0.5668 25.2375 503.2399

2 26.90 0.5666 25.2289 503.0685

3 26.80 0.5648 25.1509 503.3844

4 26.90 0.5682 25.2981 504.4483

5 26.80 0.5644 25.1336 503.0382

6 26.90 0.5683 25.3025 504.5361

7 26.80 0.5683 25.3025 506.4187

8 26.90 0.5673 25.2592 503.6727

9 26.80 0.5662 25.2115 504.5973

Rerata 504.0449

1 26.80 0.6699 25.1620 503.6066

2 26.80 0.6697 25.1544 503.4545

3 _26.80 _0.6709 _25.1997 _504.3612

4 _26.90 _0.6719 _25.2374 _503.2380

5 _26.80 _0.6712 _25.2110 _504.5873

6 _26.90 _0.6736 _25.3015 _504.5161

7 _26.90 _0.6729 _25.2751 _503.9897

8 _26.80 _0.6707 _25.1921 _504.2090

9 26.80 0.6711 25.2072 504.5113

Rerata 504.0526

(25)

y .= 0.6342 .=

0.6342 + 0.037682 0.026701

.=

x

.-0.03782 + 0.026701x .-0.03782 + 0.026701x

.=

25.1655 µg/mL

1 mg 100 mL 100 mL

1000 µg 26.8 mg 1 mL

1000 mg 500 mg

1 g 525 mg

503.6767 mg .=.

×

0.56321 g

Kadar sefadroksil × × × ×

×

.=. 25.1655 µg mL

.=. 505.5899 mg

t × SD

√n

.=. 0.4127

.=. Selang kepercayaan (taraf kepercayaan 95%, t : 2.31)

.=. 2.31 × 0.5360

√9

lanjutan Lampiran 7

1 _26.80 _0.6342 _25.1655 _503.6767

2 26.90 0.6368 25.2629 503.7464

3 _26.80 _0.6353 _25.2067 _504.5013

4 _26.90 _0.6369 _25.2666 _503.8202

5 _26.90 _0.6365 _25.2516 _503.5211

6 _27.00 _0.6401 _25.3865 _504.3362

7 _26.90 _0.6374 _25.2854 _504.1951

8 26.80 0.6361 25.2367 505.1017

9 26.90 0.6374 25.2854 504.1951

Rerata 504.1215

Keterangan :

1 kapsul ~ 500 mg sefadroksil

Bobot 10 kapsul dengan isi = 6.7302 g

Bobot 10 kapsul kosong = 1.0981 g

Bobot rerata isi kapsul = 0.56321 g

Contoh perhitungan: (Ulangan 1, waktu pemanasan 60 menit)

(26)

17

Lampiran 8 Kadar sefadroksil dalam kapsul obat dengan metode spektrofotometri UV-Vis dalam bufer fosfat pH 5

1 _26.80 _0.4790 _25.2126 _504.6193

2 _26.90 _0.4803 _25.2783 _504.0535

3 _26.80 _0.4779 _25.1571 _503.5085

4 _26.90 _0.4811 _25.3187 _504.8591

5 _26.80 _0.4766 _25.0914 _502.1936

6 _26.90 _0.4802 _25.2733 _503.9538

7 26.80 0.4781 25.1672 503.7107

8 26.90 0.4811 25.3187 504.8591

9 26.80 0.4788 25.2025 504.4171

Rerata 504.0194

1 _26.80 _0.5589 _25.2687 _505.7422

2 _26.90 _0.5590 _25.2731 _503.9498

3 _26.80 _0.5578 _25.2196 _504.7594

4 _26.90 _0.5596 _25.2999 _504.4842

5 _26.80 _0.5586 _25.2553 _505.4740

6 26.80 0.5569 25.1795 503.9569

7 _26.90 _0.5596 _25.2999 _504.4842

8 _26.80 _0.5557 _25.1260 _502.8861

9 26.80 0.5575 25.2062 504.4913

Rerata 504.4698

1 26.80 0.6699 25.1921 504.2090

2 _26.90 _0.6727 _25.2952 _504.3905

3 _26.80 _0.6695 _25.1773 _503.9128

4 _26.90 _0.6727 _25.2952 _504.3905

5 _26.90 _0.6723 _25.2805 _504.0974

6 26.90 0.6717 25.2584 503.6567

7 26.90 0.6715 25.2510 503.5091

8 _26.80 _0.6709 _25.2289 _504.9456

9 26.90 0.6731 25.3099 504.6836

Rerata 504.1995

(27)

x =

y = -0.00027 + 0.024657x

x =

25.1827 µg/mL 0.024657

0.6212 – 0.000027

0.6212 = -0.000027 + 0.024657x

1 mg 100 mL 50 mL

1000 µg 26.8 mg 5 mL

1000 mg 500 mg

1 g 525 mg

504.0209 mg .=.

×

0.56321 g

×

.=.25.1827 µg mL

.=. 505.5899 mg

t × SD

√n

.=. 0.3946

.=.

Selang kepercayaan (taraf kepercayaan 95%, t : 2.31)

.=. 2.31 × 0.5125_√9 lanjutan Lampiran 8

1 26.80 0.6212 25.1827 504.0209

2 26.80 0.6212 25.1827 504.0209

3 26.80 0.6217 25.2023 504.4272

4 26.90 0.6227 25.2435 503.3596

5 26.80 0.6219 25.21111 504.5893

6 26.80 0.6213 25.1868 504.1030

7 26.90 0.6231 25.2598 503.6846

8 26.80 0.6215 25.1949 504.2651

9 26.80 0.6220 25.2152 504.6714

Rerata 504.1269

Keterangan :

Contoh perhitungan: (Ulangan 1, waktu pemanasan 60 menit)

(28)

19

Lampiran 9 Kromatogram standar sefadroksil

(a) Konsentrasi 5 µg/mL

(b) Konsentrasi 10 µg/mL

(c) Konsentrasi 15 µg/mL

0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 min -100

0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000

mAU 230nm,4nm (1.00)

3.

34

3

0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 min -500

-250 0 250 500 750 1000 1250 1500 1750 2000 2250 2500 2750 3000 3250 3500

mAU 230nm,4nm (1.00)

3.

36

3

0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 min -500

0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500

4000mAU230nm,4nm (1.00)

3.

38

(29)

Lampiran 10 Kromatogram sampel sefadroksil 10 µg/mL

0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 min -500

0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500

mAU 230nm,4nm (1.00)

3

.3

2

(30)

21

y .= .-3368887 + 2542421.2x 22752306 .= .-3368887 + 2542421.2x

.=

x.=

10.2741 µg/mL 2542421.2 22752306 + 3368887

1 mg 200 mL 100 mL

1000 µg 218.0 mg 1 mL

1000 mg 500 mg

1 g 525 mg

.=.505.5899 mg ×

0.56321 g

×

.=.10.2741 µg mL

.=. 505.5899 mg

t × SD

√n

.=. 0.9916

.=.

.=. 2.57 x 0.9456_√9 Lampiran 11 Kadar sefadroksil dalam kapsul obat dengan metode KCKT

Luas puncak dan standar sefadroksil

No Konsentrasi

(µg/mL) Waktu retensi (menit) Luas puncak

1 5 3.344 9243138

2 10 3.362 22255487

3 15 3.364 34667350

Kadar sefadroksil dalam kapsul obat

Ulangan Waktu retensi

(menit) Bobot obat (mg) Luas puncak Konsentrasi terbaca (µg/mL)

Kadar dalam 1 kapsul (mg)

1 3.325 218 22752306 10.2741 505.5899

2 3.336 218 22661617 10.2385 503.8380

3 3.354 216 22538935 10.1902 506.1043

4 3.352 216 22502523 10.1759 505.3941

5 3.363 216 22525714 10.1850 505.8460

6 3.359 216 22436522 10.1499 504.1027

Rerata 505.1458

Keterangan :

Contoh perhitungan: (Ulangan 1 )

y = -3368887 + 2542421.2x r = 0.9998

0 10000000 20000000 30000000 40000000

0 5 10 15 20

L

ua

s punc

ak

(31)

(S1)2

(S2)2

.= 0.1591

.= Fhitung

.= (0.9451)

2

(0.7492)2

Lampiran 12 Uji statistika metode spektrofotometri UV-Vis dan KCKT

Uji distribusi F

No Larutan Waktu (menit) S1 S2 Fhitung

1 Akuades 15

0.9451

0.7492 1.591

30 1.0916 0.750

45 0.5124 3.402

60 0.9990 0.895

2

Bufer fosfat pH 5 15 0.9999 0.893

30 0.8485 1.241

45 0.5671 2.777

60 0.5125 3.401

Keterangan: S1 = Simpangan baku metode spektrofotometri UV-Vis

S2 = Simpangan baku metode KCKT

Contoh perhitungan: (Akuades, 15 menit)

Ftabel (derajat bebas; v1 = 5, v2 = 8 pada taraf kepercayaan 95%) = 3.687

Fhitung < Ftabel (Varians kedua metode tidak berbeda nyata)

Uji perbedaan (uji-t)

No Larutan Waktu (menit) S2

pool Spool thitung

1 Akuadest 15 0.6890 0.8301 4.763

30 1.0768 1.0377 2.013 45 0.5051 0.7107 2.919 60 0.5203 0.7213 2.694 2 Bufer fosfat pH 5 ₁₅ _0.9588 _0.9792 _2.183

30 0.7866 0.8869 1.446 45 0.5415 0.7359 2.240

60 0.5052 0.7108 2.720

Keterangan : n1 = Jumlah sampel KCKT = 6

n2 = Jumlah sampel spektrofotometri UV-Vis = 9

(32)

23

Spool .=

.= 0.5052

.=

S2pool

.=

(

n

1–1)

2

S1

2

+ (

n

2–1)

2

S2

2

(

n

1+

n

2– 2)

(6–1) 0.94512_{+ (9–1) 0.5125}2

(6 + 9 – 2)

0.7108

1 1

n

1

n

2

.=

1 1

6 9

.=

√

0.5052 .+

|505.1458 – 504.1269|

2.270 thitung

√

Spool

| x1 – x2 |

.=

.+

lanjutan Lampiran 12

Contoh perhitungan:

(Bufer fosfat pH 5, 60 menit)

Derajat bebas =

n

1 +

n

2– 2

= 6 + 9 – 2 = 13

ttabel dengan derajat bebas = 13 pada taraf kepercayaan 95% = 2.398

(33)

a – b c Perolehan kembali (%)

×

.=

× 100% .=

.=2.5251 – 0.5169 2.0132

99.75%

Lampiran 13 Perolehan kembali kadar sefadroksil dalam kapsul obat dengan metode spektrofotometri UV-Vis pada waktu pemanasan 30 menit

Pelarut akuades

Standar sefadroksil (mg) Sampel sefadroksil Perolehan

kembali

Rerata Selang RSD

Ditambahkan Terukur terbaca (mg) (%) kepercayaan (%)

1.0031

0.9968

0.5017

99.37

99.52 0.3307 0.13

0.9990 99.59

0.9992 99.61

1.5598

1.5589

0.5017

99.94

100.30 0.7743 0.31

1.5674 100.48

1.5671 100.47

2.0552

2.0554

0.5017

100.01

100.07 0.7425 0.30

2.0511 99.80

2.0632 100.39

Pelarut bufer fosfat pH 5

Standar sefadroksil (mg) Sampel sefadroksil _Perolehan

kembali

Rerata Selang RSD

Ditambahkan Terukur terbaca (mg) (%) kepercayaan (%)

0.9918

0.9958

0.5169

100.40

100.13 0.6177 0.25

0.9909 99.91

0.9926 100.09

1.5242

1.5329

0.5169

100.57

100.58 0.3736 0.15

1.5307 100.42

1.5353 100.73

2.0132

2.0082

0.5169

99.75

99.55 0.4273 0.17

2.0018 99.44

2.0027 99.48

Contoh perhitungan: 100% Keterangan :

a = konsentrasi sampel + konsentrasi standar terukur (mg) b = konsentrasi sampel (mg)

c = konsentrasi standar yang ditambahkan (mg)

t × SD SD

√3 Rerata

0.1721 99.55

0.17% Simpangan baku relatif (%)

.=

.= × 100%

.= 0.4273

.=

Selang kepercayaan

.= 4.30 × 0.1721

√3

(34)

25

t × SD

√n

.=. 5.06 × 10-3

.=.

.=. 2.57 × 0.004828

√6

Lampiran 14 Linearitas kadar sefadroksil dengan metode spektrofotometri UV-Vis

Serapan standar sefadroksil dalam pelarut akuades

Konsentrasi (µ g/mL) Absorbans

1 2 3 4 5 6

10 0.2264 0.2266 0.2269 0.2273 0.2289 0.2244

20 0.4481 0.4443 0.4463 0.4454 0.4436 0.4444

30 0.6619 0.6633 0.6619 0.6616 0.6627 0.6656

40 0.8807 0.8821 0.8861 0.8871 0.8867 0.8801

50 1.1609 1.1671 1.1635 1.1659 1.1620 1.1619

Serapan standar sefadroksil dalam pelarut bufer fosfat pH 5

Konsentrasi (µ g/mL) Absorbans

1 2 3 4 5 6

10 0.2125 0.2115 0.2148 0.2139 0.2289 0.2140

20 0.4454 0.4489 0.4503 0.4484 0.4436 0.4513

30 0.6536 0.6609 0.6591 0.6581 0.6627 0.6595

40 0.8870 0.8820 0.8873 0.8905 0.8867 0.8877

50 1.1146 1.1150 1.1089 1.1141 1.1620 1.1085

Linearitas standar sefadroksil dalam pelarut akuades

Ulangan Persaman garis (y = a+ bx)

a b r

1 -0.014880 0.023016 0.9970

2 -0.018960 0.023188 0.9967

3 -0.016960 0.023130 0.9973

4 -0.018210 0.023189 0.9971

5 -0.016010 0.023093 0.9974

6 -0.017930 0.023107 0.9972

Rerata = -0.017158 0.023121 0.9971

Simpangan baku = 0.001516 0.000065 0.000248

Selang kepercayaan = 1.59 × 10-3 6.82 × 10-5 2.60 × 10-4

Linearitas standar sefadroksil dalam pelarut bufer fosfat pH 5 pada 30 menit

Ulangan Persaman garis (y = a+ bx)

a b r

1 -0.011120 0.022458 0.9997

2 -0.008370 0.022401 0.9997

3 -0.003480 0.022252 0.9997

4 -0.007750 0.022425 0.9998

5 -0.016010 0.023093 0.9974

6 -0.003240 0.022254 0.9997

Rerata = -0.008328 0.022481 0.9993

Simpangan baku = 0.004828 0.000313 0.000948

Selang kepercayaan = 5.06 × 10-3 3.28 × 10-4 9.94 × 10-4

(35)

S a

b

LOQ S a

b

.= 0.6557 µg/mL 0.001516 0.023121

.= 0.2163 µg/mL

.= 10 ×

.= 10 ×0.001516 0.023121

.=

LOD

.=

3.3 ×

Lampiran 15 Limit deteksi (LOD) dan limit kuantitasi (LOQ) sefadroksil dengan metode spektrofotometri UV-Vis

Parameter Intersep (a) Kemiringan (b)

Akuades Bufer fosfat pH 5 Akuades Bufer fosfat pH 5

Rerata -0.017158 -0.008328 0.023121 0.022481

Simpangan baku 0.001516 0.004828 0.000065 0.000313