Beberapa sifat virus penyakit ingusan (Malignant catarrhal Fever) serta peran kambing dan domba dalam penularannya

(1)

(2)

(3)

(4)

(5)

(6)

(7)

(8)

(9)

(10)

(11)

I. PENDAHULUAN

1. Latar belakang

MCF d i k e n a l s e b a g a i p e n y a k i t m e n u l a r y a n g b e r j a l a n s e c a r a s p o r a d i k a t a u e n d e m i k y a n g t e r d a p a t p a d a s a p i d a n k e r b a u d i s e l u r u h d u n i a ( 8 1 ) . Di I n d o n e s i a MCF m e n y e r a n g s a p i bali, s a p i m a d u r a d a n k e r b a u s e d a n g k a n j e n i s s a p i k e t u r u n a n 5 0 s i n d i c u s d a n 80s t a u r u s r e l a t i f t a h a n ( 4 3 ) . P e n y a k i t ini t e l a h d i k e n a l l a m a di I n d o n e s i a d a n t e r j a d i s e c a r a a p o r a d i k s e p a n j a n g t a h u n d e n g a n t i n g k a t k e m a t i a n k a s u s y a n g s a n g a t t i n g g i .

(12)

S e l a i n s a p i bali, kerbau j u g a menduduki t e m p a t y a n g p e n t i n g d a l a m s e k t o r pertanian di Indonesia, karena s s l a i n d a g i n g n y a hewan ini memegang peran penting d a l a m penger- j a a n lahan pertanian. S e d a n g k a n sapi m a d u r a , s e l a i n s e b a g a i s u m b e r daging. dikenal p u l a sebagai sapi karapan. K e d u a j e n i s hewan t e r a k h i r , t e r a n c a m juga k e h i d u p a n n y a o l e h penyakit HCF.

S e j a k tahun 1978 t e l a h t e r j a d i pula penyakit MCF p a d a k e r b a u di d a e r a h Deli S e r d a n g , S u m a t e r a Utara, y a n g mengambil korban dari t a h u n k e t a h u n ( 7 4 ) dan s e j a k t a h u n 1986 t e r d a p a t p a d a s a p i bali di d a e r a h B e l a n g k e j e r e n , A c e h T e n g g a r a , Daerah Istimewa Aceh, y a n g baru d i d a t a n g k a n dari N u s a T e n g g a r a T i m u r ( 7 5 ) .

2. P e r m a s a l a h a n

(13)

dipelajari sifat-sifat virus lebih lanjut, termasuk anti- genisitas dan imunoganisitasnya.

Meskipun telah diketahui sejak lama, sampai sekarang cara penularan d m cara pengendalian psnyakit MCF belum dikenal. Demikian pula apa yang menjadai reservoar m e n penyakit belum diketahui. Memqng banyak laporan yang menyatakan bahwa kejadian penyakit MCF ada hubungannya dengan kehadiran domba tetapi belum pernah dibuktikan secara virologik. Selanjutnya, belum pernah ada laporan tentang peran serangga pengisap darah sebagai vektor dalam penularan w e n penyakit MCF. Padahal, serangga tersebut banyak terdapat di lapangan penggembalaan yang perlu mendapat perhatian.

Sementara itu bslum pernah dilaporkan peran kambing dalam penularan penyakit MCF. Kmnbing seperti halnya domba memegang peran penting dalam subsektor peternakan di Indonesia. Kambing dan domba dipelihara bersama-sama atau berdekatan dengan sapi dan kerbau.

3. Kerangka pemikiran dan tujuan penelitian

Virus isolat diduga adalah penyebab penyakit MCF yang akan dibuktikan dengan postulat Koch.

(14)

tahan lama bila disimpan pada suhu ~ O C atau lebih rendah, tumbuh baik pada pH netral tetapi diperkirakan tidak tahan terhadap larutan yang asam.

Selanjutnya, virus isolat diduga adalah virus herpes. yakni mempunyai ampelop di luar sel hidup, mengandung deoksiribonukleat, bereplikasi di dalam inti sel dan dirakit di dalam inti serta di dalam sitoplasma sel yang ditularinya. Virus tersebut diduga pula mengandung antigen yang imunogenik. Sementara itu, kambing d m domba kemungkinan berperan sebagai reservoar virus. Selama menjadi reservoar, diduga kedua jenis hewan dapat melepas- kan virus melalui sekresi tubuh seperti ingus, air mata dan cairan vagina/preputium. Selain itu, s e r m g g a pengisap darah dicurigai sebagai vektor dalam penularan virus MCF.

Kambing dan domba diduga mudah ditulari virus MCF tetapi t idak memperl ihatkan kesakitan yang berarti

.

Selama mengandung virus, kambing dan domba diduga mengan- dung antibodi di dalam tubuhnya yang titernya naik tunun berlawanan dengan naik turunnya titer virus di dalam sekresi tubuh, yang diduga mempengaruhi tingkat insiden pada hewan peka.

Sehubungan dengan hal-ha1 tersebut di atas, diadakan penelitian yang bertu juan untuk :

(15)

(b). menentukan sifat-sifat d m struktur virus sehingga diketahui cara penyimpanan, pemeliharaan, transpor- tasi dan untuk pembuatan reagen diagnostik dan tujuan imunisasi serta dapat ditetapkan penggolongannya.

( c ) . mempelajari kemungkinan berperannya kambing dan domba

sebagai reservoar dan pelepas virus MCF. (dl. mempelajari cara penularan virus MCF.

(e). mempelajari eksistensi antibodi terhadap virus MCF di dalam tubuh kambing dan domba dan hubungannya dengan tingkat insiden penyakit pada sapi bali dan kerbau.

4. Kegunaan basil penelitian

Dengan diketahuinya agen penyakit dan sifat-sifat virus, dan diketahui pula reservoar virus serta cara penularannya, maka kedudukan penyakit MCF di Indonesia menjadi jelas. Dengan demikian dapat ditetapkan langkah- langkah yang tepat dalam mencari u p w a pengendalian penyakit dan arah penelitian lebih lanjut.

5. T e m p a t den lama penelitian

(16)

(17)

1. Sejarah penyakit;

Penyakit ingusan atau m a l i g n a n t c a t a r r h a l f e v e r ( M C F ) , dieebut juga C o r y z a g a n g r a e n o s a &ovum, B o o r s a a r d i g e k o p z i e k t e , dilaporkan oleh Plowright et a l . ( 8 1 ) sebegai penyakit menular pada sapi d m kerbau, terjadi secara, sporadik atau endemik, berjalan lambat tetapi dengan tingkat kematian kasus (case fatality rate) mencapai 95 persen. Selain sapi dan kerbau, MCF juga menyerang ruminansia liar seperti rusa ( C e r v u s t i r o r o n s i s ) ( 1 4 , 16), rusa sika ( C e r v u s n i p p o n ) ( 1 2 0 ) . u s merah ( C e r v u s e l e p h u s ) ( 9 2 ) . rusa ekor putih ( 1 2 4 ) . rusa Pere Davis

( E l a p h u r u s d a r i d i a n u s ) ( I l l ) , rusa aksis (Axis a x i s ) ( 1 2 ) ,

"greater kudu" ( T r a g e l a p h u s s t r e p s i c e r r o s ) ( 2 , lo), *gaur8'

( B o s g a u r u s ) ( 1 0 , 1 2 5 ) , "wildebeest" ( C o n o c h a e t e s t a u r i n u s

dan C - gnu ) ( 7 9 , 1 0 6 ) , "hartebeest" ( A l c e l a p h u s h u c e l a p h u s

Cockei Gunther) ( 9 0 , 9 1 ) dan "bison" ( 8 0 s b o n a s u s ) ( 1 1 5 ) .

Selain itu, di taman hewan San Diego. MCF terjadi pada banteng ( 8 0 s i a v a n i c u s , 80s s o n d a i c u s ) secara endernik

( 3 4 ) . Banteng adalah nenek moyang dari sapi bali dan sapi madura.

Penyakit ini dilaporkan terjadi di Eropah pada tahun

(18)

s a p i yang h i d u p n y a b e r d e k a t a n dengan d o m b a ( 2 3 ) . S e j a k itu n a m a penyakit d f s e b u t s e b a g a i MCF yang m e n u l a r dari d o m b a ( s h e e p a s s o c i a t e d ) a t a u t i p e Eropah. K e j a d i a n MCF s e p e r t i di Eropah t e r d a p a t pula di Amerika s e h i n g g a penyakit disebut j u g a s e b a g a i t i p s A m e r i k a (76, 77). Agen p e n y a k i t dari t i p e ini belum berhasil d i t e n t u k a n . R e s k i p u n v i r u s h e r p e s berhaail diisolasi dari sapi p e r a h y a n g sakit dengan g e j a l a k l i n i s s e p e r t i MCF di M i n n e s o t a d a n v i r u s bereaksi d e n g a n antibodi t e r h a d a p v i r u s MCF y a n g berasal dari "wildebeest" ( w i l d e b e e s t a s s o c i a t e d ) , t e t a p i d a l a m p e n u l a r a n kembali p a d a s a p i t i d a k m e n g h a s i l k a n g e j a l a k l i n i s HCF (26). S e m e n t a r a itu a d a pula k a s u s y a n g m e n u n j u k k a n g e j a l a k l i n i s s e p e r t i MCF, tetapi s e l a i n v i r u s h e r p e s t e r i s o l a s i pula v i r u s h I u e t u u n g u e ( B T V ) ( 1 9 ) .

Di Afrika penyakit HCF terjadi pada sapi y a n g ber- h u b u n g a n dengan "wildebeest" ( 5 6 ) d'isebabkan o l e h v i r u s yang diisolasi dari "wildebeest" ( 7 9 ) dan d i s e b u t s e b a g a i

t . i p e Afrika. D e n g a n d e m i k i a n dikenal dua tipe, y a i t u t i p e A f r i k a d e n g a n "wildebeest" s e b a g a i r e s e r v o a r v i r u s n y a d a n

(19)

s a k i t , d a p a t d i t u l a r k a n ke k e l i n c i dan domba yang d i t a n d a i dengan kebengkakan simpul-simpul l i m f e ( l i m f a d e n o p a t i ) dan p r o l i f e r a s i e e l T (7).

D i I n d o n e s i a , MCF pertama k a l i d i l a p o r k a n o l e h

P a z o t t a pada tahun 1894 yang menyerang kerbau d i K e d i r i

(69). Belakmgan d i k e t a h u i bahwa p e n y a k i t dengan g e j a l a s e p e r t i yang d i l a p o r k a n P a z o t t a , t e r j a d i d i hampir s e l u r u h kepulauan Nusantara. Penning dalam J a a r b o e k D e p a r t e m e n t

v a n Landbouw 1910 menyatakan bahwa p e n y a k i t B o o r s a a r d i g e k o p z i e k t e agak s e r i n g t e r d a p a t pada s a p i . Dalam l a p o r a n t a h u n 1916 Van d e r Poel melaporkan adanya g e j a l a C o r y z a d i dua d e s a dalam U n d e r d i s t r i c t S r e s e h d i Madura yang

menyebabkan kematian semua s a p i madura yang t e r s e r a n g . Dalam pada i t u d a p a t d i l i h a t bahwa p e n y a k i t d i d a e r a h i t u

t e r j a d i s e c a r a endemik. S e l a n j u t n y a Van d e r Poel melaporkan bahwa d i Purwokerto dan P u r b a l i n g g a p e n y a k i t

t e r ja d i s e c a r a s p o r a d i k .

S e l a n j u t n y a Van d e r Poel melaporkan dalam l a p o r a n

tahun 1917 p e n y a k i t t e r j a d i d i B a l i g e ( S u m a t e r a ) , d i Pulau Madura dan Purwokerto; 1918 d i beberapa tempat d i I n d o n e s i a , t e r u t a m a Pulau Jawa; 1919 t e r j a d i pada s a p i dan kerbau d i beberapa tempat d i Pulau Jawa.

(20)

D a l a m l a p o r a n J a w a t a n Kehewanan P u s a t t a h u n 1925,

d a p a t d i b a c a bahwa MCF menyerang s a p i dan k e r b a u d i

b e b e r a p a Daerah Kedokteran Hewan, s e p e r t i d i Kupang

( Tirnor)

.

Pamekasan (Madura) , Bondowoso d a n b a g i a n u t a r a P u l a u J a w a (Rembang d a n Semarang) d m d i M e d a n ( S u m a t e r a ) . Sedangkan t a h u n b e r i k u t n y a , 1926, t e r j a d i d i b a g i a n u t a r a

P u l a u Jawa; 1927 d i d a e r a h Bondowoso. Pamekasan ( M e u r a ) , B a l i g e ( S u m a t e r a ) ; 1928 d i Kupang ( T i m o r ) . Makassar

( S u l a w e s i ) , d i d a e r a h Bondowoso d a n d i d a s r a h S e r a n g dan Bal i g e .

Dalam b u l a n P e b r u a r i 1929, N a s u t i o n melaporkan d a r i

Watampone ( S u l a w e s i ) bahwa s a p i b a l i yang d i b a g i k a n kepada

r a k y a t menurut Kontrak Sumba, t e r s e r a n g B n o s a a r d ~ g e k o p z z e k t e , yang meskipun d i p i n d a h k a n tempatnya, t i d a k rnemberi a k i b a t b a i k ( 5 3 ) .

Pada a k h i r t a h u n 1919 d a n permulaan t a h u n 1920,

Mohede melaporkan d a r i Karangasem t e n t a n g adanva b e b e r a p a

k e j a d i a n p e n y a k i t pada s a p i yang memperlihatkan t a n d a -

t a n d a banyak k e l u a r l e n d i r d a r i hidung dan m a t a dan

d i d i a g n o s i s s e b a g a i C o r y z a g a n g r a e n o s a . S e l a n j u t n y a Made Bagi Asna yang b e r t u g a s d i Karangasem ( B a l i ) d a r i t a h u n

(21)

mengeluarkan a i r m a t a , hidungnya k e r i n g kadang-kadang t e r b e l a h - b e l a h dan k e p a l a n y a bengkak. P a r a p e t a n i - t e r n a k yang m e m i l i k i s a p i b e r p e n y a k i t d e m i k i a n m i n t a i e i n u n t u k

memotong hewannya. K e p a l a d a n b a g i a n - b a g i a n yang menun jukkan k e l a i n a n d i a f k i r ( 53 1 .

D a r i d a t a yang dikumpulkan o l e h Mansjoer ( 5 3 ) d a p a t

d i a m b i l k e s i m p u l a n bahwa hewan p a l i n g p e k a t e r h a d a p MCF

a d a l a h s a p i b a l i d i s u s u l o l e h s a p i madura d a n k e r b a u , s e d a n g k a n s a p i o n g o l e d a n s a p i f r i e s i a n h o l s t e i n r e l a t i f t a h a n . S e j a k t a h u n 1978, MCF t i m b u l pada k e r b a u dan s a p i d i Kecamatan Lubukpakem, Kabupaten D e l i S e r d a n g , P r o p i n s i S u m a t e r a U t a r a dengan t i n g k a t i n s i d e n s ( i n c i d e n c e r a t e )

a d a l a h 0 . 4 7 p e r s e n , sedangkan p a d a s a p i o n g o l e 0 . 0 2

p e r s e n , masing-masing dalam s a t u t a h u n ( 7 2 ) . S e l a n j u t n y a t e r j a d i p u l a pada s a p i b a l i d i Kecamatan B e l a n g k e j e r e n , Kabupaten Aceh Tenggara. P r o p i n s i Daerah I s t i m e w a Aceh, y a i t u s a p i b a n t u a n p e m e r i n t a h yang d i b a g i k a n k e p a d a r a k y n t d i d a e r a h i t u , b e r a s a l d a r i P r o p i n s i Nusa Tenggara Timur. dengan t i n g k a t i n s i d e n s 20.76 p e r s e n p e r t a h u n ( 7 5 ) .

K e j a d i a n MCF yang b e r j a l a n s e c a r a endemik, d i l a p o r k a n t e r j a d i d a r i t a h u n 1975 h i n g g a t a h u n 1978 p a d a s a p i b a l i d i d a e r a h Ciomas, C i b a l o k dan d i P u s a t P e n e l i t i a n d a n Pengembangan T e r n a k d i Ciawi-Bogor. S e l m a m a s a

(22)

P e n e l i t i a n Ternak Ciawi-Bogor, MCF t e l a h menyerang d a n

menyebabkan k e m a t i a n empat d a r i t u j u h e k o r s a p i b a l i ; 5 0 d a r i 177 e k o r k e r b a u sedangkan 6 3 e k o r s a p i k e t u r u n a n B u s

i n d i c u s , t i g a e k o r k e t u r u n a n Bos t a u r u s dan empat e k o r k e r b a u murrah, t e t a p s e h a t (37).

P e n y a k i t MCF d i l a p o r k a n t e r j a d i d i B a l i r a n g menyerang s a p i b a l i . dan dalam p e n u l a r a n b u a t a n y a i t u

dengan menyuntikkan d a r a h p e n d e r i t a yatlg d i d e f i b r i n a s i k e s a p i - b a l i yanp s e h a t , menimbulkan g e j a l a k l i n i s d m

perubahan p a t o l o g i s k h a s MCF. Malahan p e n y a k i t b e r ~ a l a n l e b i h c e p a t d a n l e b i h p a r a h d a r i p e n y a k i t d i lapangan

( 8 7 ) . Kasus MCF d i Lampung. Bengkulu dan Sumatera S e l a t a n

menunjukkan k e n y a t a a n bahwa s a p i b a l i a d a l a h p a l i n g peka,

menyusul k e r b a u d a n s a p i p e r a n a k a n o n g o l e ( 8 5 ) .

S e l a i n p a d a hewan t e r n a k , d i I n d o n e s i a p e r n a h p u l a

d i d i a g n o s i s MCF pada r u s a ( C e r r u s t i r o r e n s i s ) d i Nusa Tenggara Timur dan t i n g k a t k e m a t i a n k a s u s d i l a p o r k a n

s d n g a t t i n g g i ( 1 4 ) .

D i n e g a r a t e t a n g g a M a l a y s i a d i l a p o r k a n a d a n y a

k e j a d i a n yang menyerang s a p i p a d a t a h u n 1949 d a n 1 9 5 8 .

Dnri l a p o r a n - l a p o r a n b e r i k u t n y a d i k e t a h u i bahwa d i

s e b a g i a n b e s a r n e g a r a - n e g a r a b a g i a n d i Semenanjung,

t e r d a p a t MCF ( 1 1 7 ) . Pada t a h u n 1 9 8 0 Vanselow melaporkan

h a s i l pengamatannya t e n t a n g k e j a d i a n MCF, y a i t u d a r i

Nopember 1976 sampai J u n i 1 9 7 7 , m o r b i d i t a s pada s a p i

(23)

p e r s e n , p a d a s a p i p e r a h a s a l I n d i a m o r b i d i t a s 23,3 p e r s e n d e n g a n t i n g k a t k e m a t i a n k a s u s 100 p e r s e n ( 1 1 7 ) .

2. D i a g n o s i s p e h y a k i t

D i a g n o s i s p e n y a k i t MCF, s e b - i a n b e s a r , d i l a k u k a n d e n g a n cara k l i n i k - p a t o l o g i k . G e j a l a k l i n i s k h a s MCF

a d a l a h a d a n y a c a i r a n mukopurulen d a r i h i d u n g d a n m a t a

d i s e r t a i p e n g e l u a r a n bau b u s u k , k e k e r u h a n k o r n e a ( c o r n e a l o p a c i t y ) , l i m f a d e n o p a t i umum, s u h u badan 41°c a t a u l e b i h ,

e r o s i s e l a p u t l e n d i r m u l u t , k o n j u n g t i v i t i s ; s e d a n g k a n

secara h i s t o p a t o l o g i k a d a n y a v a s k u l i t i s p a d a o r g a n - o r g a n

t u b u h d i p a k a i s e b a g a i p e g a n g a n (22. 37, 5 2 , 73. 8 5 . 1 0 8 ) . P a d a t a h u n 1980, R o s s i t e r mencoba membuat c a r a m e n d i a g n o s i s MCF d e n g a n pernotongan t i p i s j a r i n g a n l i m f o i d b e k u d a n d i p e r i k s a d e n g a n u j i f l u o r e s e n s i l a n g s u n g ( f l u o r e s c e n t a n t i b o d y t e c h n i q u e , FAT); t e t a p i k a d a n g - k a d a n g s a j a d i p e r o l e h h a s i l p o s i t i f , s e h i n g g a cara i n i d i a n g g a p k u r a n g b a i k ( 1 0 0 ) .

I s o l a s i v i r u s d e n g a n penanaman s e l - s e l l i m f o i d p a d a b i a k a n s e l ( c e l l c u l t u r e ) t e l a h b e r h a s i l d i l a k u k a n ( 1 0 ,

7 9 , 9 0 ) d a n s u d a h d i l a k u k a n secara r u t i n d e n g a n penanaman

...

(24)

Adanya antigen virus MCF pada hewan penderita dapat dideteksi setelah sel-sel limfosit ditanam dalam Roswell Park medium ( R P M I ) 1640 berisi 10 persen serum fetus sapi dan antibiotik yang kemudian diperiksa dengan FAT (73). Terdapatnya virus dalam sel-sel limfosit dari hewan penderita MCF telah pula dilaporkan oleh Patel dan Edington dengan menjadikan biakan eksplan jaringan limfoid dalam RPMI 1640 dan diperiksa dengan IFAT, dengan hasil sebanyak 9 0 persen limfosit berdiameter 11-13 um mengandung virus MCF, sedangkan limfoblastoid yanp sedana berproliferasi. tidak (66).

3. Etiol-i

Agen penyakit berhasil diisolasi pertama kali dari "wildebeest" d i Af rika. Virus ini menyerupai virus varicella soster, virus citomegalo dan virus Marek dan sangat terikat sel (cell associated) (79). Selanjutnya virus tersebut mempunyai sifat peka terhadap asam dan pelarut lemak, membentuk sinsisia dan badan inklusi tip% A dengan ukuran 100 nm di dalam sel dan 140-220 nm di luar sel hidup (81). Virus ini dimasukkan k e dalam virus herpes bovid-3 (35. 123). Kemudian, virus dengan antibodi yang dapat menetralisasi virus yang diisolasi dari "wildebeest", berhasil pula diisolasi dari "hartebeest"

(25)

diubah namanya menjadi A I c e l a p h i n e h e r p e s v i r u s - l ( 9 1 ) . Tetapi Plowright mengusulkan nama virus tersebut menjadi H i p p o t r a g i n e h e r p e s v i r u s , karena hewan-hewan sumber penularan tersebut termasuk di dalam famili H i p p o t r a g i n a e

(84). Namun karena ungulata a l c e l a p h i n e adalah induk semang virus di alam bebas, sebaiknya virus diberi nama A l c e l a p h i n e h e r p e s v i r u s (AHV-1) ( 6 2 ) . Virus herpes yang identik dengan virus MCF WCll (berasal dari "wildebeest"), berhasil diisolasi dari "gaur" dan "greater kudu" ( 1 0 ) rang berukuran 98-194 nrn ( 1 1 )

Sejak tahun 1936 sudah diketahui bahwa penyakit MCF dapat ditularkan ke kelinci dengan menyuntikkan darah yang diberi antikoagulan atau suspensi jaringan ( 15). Pengalaman yang sama dilaporkan oleh Mansjoer (53) dan Piercy (77). Namun psrcobaan menulari mencit dan marmot tidak menimbulkan penyakit (77, 8 0 ) . dan virus tidak tumbuh pada telur ayam bertunas (84).

(26)

yang berhubungan dengan domba dapat ditransmisikan dari sapi sakit k e sapi sehat dengan penyuntikan darah yang diberi antikoagulan (109).

Isolasi virus MCF dari kerbau dan sapi bali berhasil dilakukan dengan menginokulasikan suspensi sel-sel leukosit, suspensi sel-sel limpa dan suspensi sel-sel simpul limfe pada biakan sel G F S dan TFS. Virus ternyata bereaksi dengan antibodi terhadap virus MCF W C l l (70, 71,

73, 75). ,

4. Peran kambing dan d-ba dalam penularan MCF

Meskipun agen penyakit telah berhasil diisolasi. namun bagaimana mekanisme penularannya belum pernah dilaporkan. Kebanyakan laporan {kecuali d i Afrika) menyimpulkan bahwa domba adalah biang penularan MCF meskipun beberapa peneliti menemui penyakit pada hewan peka yang tidak berhubungan dengan domba. Selman et a I . melaporkan bahwa kejadian MCF di Inggris ada yang berhubungan dengan domba tetapi ada pula yang tidak (108). MCF di New Zealand menunjukkan tingkat insidens tertinggi pada saat domba dan sapi digembalakan bersama-sama (32). Demikian pula ke jad ian MCF pada "gaur" dan "greater kudu" di Taman Hewan Oklahoma, Amerika Serikat, ada hubungan tidak langsung dengan domba (10). Selain itu kejadian MCF pada beberapa bangsa rusa juga berhubungan dengan domba

(27)

MCF d i M a l a y s i a juga dihubungkan dengan k e h a d i r a n domba p a d a semua k a s u s p e n y a k i t , namun dalam pengamatannya Vanselow menjumpai k e j a d i a n p e n y a k i t pada s e e k o r s a p i r a n g t i d a k berhubungan dengan domba, t e t a p i berhubungan dengan

sapi p e n d e r i t a d a n b a n g k a i s a p i ( 1 1 7 ) .

D i I n d o n e s i a , k e j a d i a n MCF p a d a s a p i b a l i , k e r b a u ( 3 7 , 53, 72, 8 5 ) dan r u s a ( 1 4 ) d i l a p o r k a n berhubungan dengan domba

.

Namun sampai s a a t i n i , belum p e r n a h d i l a p o r k a n a d a n y a hubungan a n t a r a kambing dengan p e n u l a r a n

MCF, p a d a h a 1 d i I n d o n e s i a , d i samping jumlahnya l e b i h banyak, hewan i n i p u n h i d u p n y a s e l a l u d e k a t dengan s a p 5 d a n k e r b a u . D i S u l a w e s i m i s a l n y a , s a p i b a l i yang m e n d e r i t a

MCF s e l a i n berhubungan dengan domba, d i lapangem penggernbalaan yang sama t e r d a p a t j u g a kambing ( 5 3 ) . S e l a i n i t u , d i l o k a s i k e j a d i a n HCF d i D e l i S e r d a n g t e r d a p a t j u g a kambing, bahkan p o p u l a s i n y a d u a k a l i l e b i h banyak d a r i domba. Karena i t u . kambing p e r l u p u l a d i c u r i g a i s e b a g a i sumber p e n u l a r a n v i r u s MCF.

(28)

virus MCF WCll (70. 71). Selanjutnya, tiga ekor domba yang ditulari dengan tiga virus MCF isolat dari kerbau menunjukkan bahwa dua ekor domba menjadi sakit ingusan ringan pada minggu pertama dan seekor domba lainnya pada minggu kedua pasca penularan. Pada waktu domba menunjukkan gejala klinis dapat diisolasi virus sinsiogenik yang bereaksi dengan antibodi terhadap virus MCF W C l l dalam IFAT dan bereaksi pula dengan virus MCF K6/AP dalam pengujian dengan FAT. Virus tersebut ternyata dapat hidup dalam tubuh domba aedikitnya swmbilan minggu sesudah ditulari (73).

Buxton et al. (1985) telah berhasil menulari domba dengan virus MCF dari rusa merah atau dari kelinci. Suspensi sel dari rusa atau dari kelinci disuntikkan intravena k e 2 1 ekor domba yang bunting dengan umur kebuntingan antara 40-66 hari, ternyata empat dari lima ekor anak domba yang hidup menunjukkan gejala klinis seperti MCF dan mati atau dibunuh pada hari k e 10, 16, 47 dan 175. Dari pemeriksaan patologi-anatomik terlihat gambaran 1 imf adenopati dan dalam pengamatan secara histologik terlihat adanya kerusakan daerah T jaringan limfoid disertai penghentian produksi sel B. Namun, virus tidak berhasil diisolasi kembali dari rusa dan kelinci

yang hidup dalam satu kandang dengan domba. Hal ini

(29)

Peran domba dalam penularan MCF di Victoria, Australia, dilaporkan oleh Snowdon bahwa setiap kejadian penyakit pada sapi selalu berhubungan dengan pemeliharaan domba. Snowdon selanjutnya melaporkan bahwa MCF yang menular dengan perantaraan domba ini, adalah tipe rang berhubungan dengan domba, namun isolasi agen penyakit dengan penanaman sel-sel organ baik dari domba maupun dari sapi tidak tumbuh pada biakan sel ginjal an& domba dan tiroid anak sapi (112).

(30)

5. Peran vektor dalam penularan penyakit

Bentuk penularan dari domba dan atau kambing ke hewan yang peka terhadap MCF, belum pernah dilaporkan. Kemungkinan adanya vektor misalnya ser-ga penghisap darah sebagai perantara penularan pernah dipertimbangkan oleh Mettam (56) tetapi tidak pernah diteliti lebih lanjut. Mengingat virus MCF dapat diisolasi dari leukosit

( 7 0 , 73, 75) dan transmisi penyakit dapat dilakukan melalui penyuntikan darah yang diberi antikoagulan (38, 53, 87). pemindahan virus melalui gigitan serangga penghisap darah adalah mungkin. Kemungkinan ini ditopang oleh kenyataan bahwa beberapa virus seperti BTV, virus a f r i c a n h o r s e s i c k n e s s (AHS) virus a k a b a n e dan virus e p i z o o t i c h a e r o r r h a q i c of deer ( E H D ) di%ularkan melalui beberapa spesies dari genus C u l i c o i d e s . BTV ternyata dipindahkan dari domba penderita k e domba yang sehat melalui C - i w i c o l a dan C - a b s o l e t u s di Spanyol dan Portugal ( 5 5 > , dan C - a b s o l e t u s . yang tersebar luas di Lesbos. Yunani (4). Vektor terpenting pada penularan BTV di Amerika Serikat adalah C. v a r i i p e n n i s , yang sering terdapat mengalami infeksi campuran beberapa serotipe BTV, diantaranya serotipe 1 0 dan 1 7 (107).

Penularan virus AHS adalah melalui C - v a r i i p e n n i s (4) sedangkan virus a k a b a n e ditularkan melalui C - b r e v i t a r s i s sementara virus E H D berhasil ditumbuhkan dalam tubuh C - n u h e c u l o s u s , setelah virus diinokulasikan melalui toraks

(31)

C , p e r e g r i n u s dan C - p a l p i f e r terdapat di Asia termasuk Indonesia ( 8 8 ) . Penyidikan tentang kemungkinan penularan virus MCF dari reservoar ke hewan peka atau dari satu hewan peka ke hewan peka lainnya melalui vektor. belum pernah dilaporkan.

Plowright e t a l . (83) dalam usahanya mengimunisasi sapi terhadap virus MCF, melaporkan bahwa hewan yang disuntik dengan virus yang dilemahkan, dua kali, menghasilkan antibodi dengan titer tinggi. Sementara, serum imun dapat diperoleh dari kelinci setelah ditulari

C dengan virus MCF C S o 0 ( 59).

Mushi e t a l . melaporkan bahwa dengan uji netralisasi serum dapat ditunjukkan adanya antibodi terhadap virus MCF WCl 1 dalam ingus dan air mata anak-anak "wildebeest"

.

berumur lebih tiga bulan yang tidak terdapat pada anak d i bawah umur tiga bulan. Sedangkan dalam serum, semua anak- anak "wildebeest" tersebut mengandung antibodi (61).

Dengan menggunakan virus MCF yang diekstrak dari biakan sel tertentu, dengan ultrasonik, sebagai antigen dalam pengujian pengikatan komplemen, Rossiter e t d l . melaporkan bahwa dalam serum hiperimum sapi, kelinci dan

(32)

m e s k i p u n k u r a n g s e n s i t i f , r r r u n o - d i f f u s i o n ( I D ) d a n

c o u n t e r - i r m u n o - e l e c t r o p h o r e s i s ( C I E P ) menggunakan s e r u m h i p e r i m u n d a p a t d i d e t e k s i a d a n y a a n t i g e n MCF ( 9 8 ) .

D i A f r i k a Timur k e b a n y a k a n MCF d i s e b a b k a n o l e h v i r u s y a n g b e r a s a l d a r i " w i l d e b e e s t " ( 7 9 ) d a n s a p i yang m e n d e r i t a MCF mengandung a n t i b o d i ( 9 9 ) . Sedangkem d i E r o p a h d a n d i b a g i a n l a i n d u n i a , d i k a t a k a n bahwa domba b e r t i n d a k s e b a g a i sumber p e n u l a r a n (23. 78, 1 0 9 ) .

9

Meskipun belum d i k e t a b u i m e n p e n y a k i t n y a , s a p i p e n d e r i t a mengandung a n t i b o d i t e r h a d a p MCF b e r a s a l " w i l d e b e e s t " s e h i n g g a memberi k e s a n bahwa v i r u s MCF t i p e A f r i k a t e r d a p g l t j u g a d a l a m t u b u h hewan t e r s e b u t ( 1 0 3 ) . R a t a - r a t a

t i t e r a n t i b o d i d a l a m s e r u m d0mb.a l e b i h t i n g g i d a r i r a t a -

r a t a t i t e r a n t i b o d i d a l a m s e r u m s a p 1 s e d a n g k a n rata-rata

t i t e r a n t i b o d i d a l a m s e r u m " w i l d e b e e s t " l e b i h t i n g g i d a r i yang t e r d a p a t d a l a m s e r u m domba ( 1 0 1 ) .

Dsngan u j i n e t r a l i s a s i s e r u m ( N T S ) mengaunakan b i a k a n s e l G F S yang d i t u l a r i d e n g a n v i r u s MCF K 6 / A P , i s o l a t d a r i

k e r b a u , s e b a g a i a n t i g e n , s e r u m domba y a n g d i t u l a r i t i g a k a l i d e n g a n v i r u s yang sama, d e n g a n s e l a n g 10 h a r i , mengandung a n t i b o d i d e n g a n t i t e r 1 : > 1 6 ( 7 3 ) .

H i n g g a s a a t i n i belum a d a l a p o r a n mengenai gambaran a n t i b o d i t e r h a d a p MCF d a l a m s e r u m kambing.

.

7 . A n t i g e n i s i t a s d a n i m u n o g e n i s i t a s

(33)

tahun 1975. Virus yang berasal dari "wildebeest" diperbanyak dalam sel hidup atau dimatikan dengan formalin dan dicampur dengan a d ~ u v a n Freund tidak lengkap, menghasilkan antibodi dengan titer tinggi pada sapi. tetapi tidak tahan terhadap tantangan dan infeksi alamiah. Melihat kenyataan ini Plowright et al. menduga bahwa selain mekanisme humoral masih ada mekanisme lain rang ikut berperan ( 8 3 ) .

Sementara itu, Rossiter melaporkan adanya proteksi antibodi terhadap tantangan pada kelinci. Kelinci dihiperimunkan dengan suspensi sel-sel limfoid tertulari virus MCF yang dilemahkan, tidak menimbulkan kekebalan dan tidak tahan terhadap tantangan. Selanjutnya, kelinci yang 'dihiperimunkan dengan suspensi sel-sel ginjal sapi tertular virus MCF, menimbulkan antibodi tetapi tidak tahan terhadap tantangan. Sebaliknya, kelinci yang dihiperimunkan dengan suspensi sel-sel ginjal kelinci tertulari virus MCF, tahan terhadap tantangan 47 hari pasca imunisasi. Namun, tantangan kembali pada minggu ke- 9 0 pasca imunisasi menyebabkan kernatian dua dari empat ekor kelinci (102).

(34)

dengan NTS. Dua dari tiga sapi yang diimunisasi, tahan terhadap tantangan virus homolog yang virulen berpasase rendah. Setelah ditantang lagi dengan virus yang berasal dari "wildebeest", semua sapi tidak menunjukkan gejala MCF. Namun, tiga ekor sapi yang diimunisasi dengan virus dari "hartebeest" pasase ke 3 0 saja tanpa ditatltang dengan virus homolog virulen berpasase rendah, tidak tahan terhadap tantangan virus yang berasal dari "wildebeest" (90).

(35)

8 . Struktur dan penggolon8an virus herpes

Virus dibagi dalam tiga kelas yaitu : a) virus tanaman (plant virus), b) bakteriofag (bacteriophage) dan c ) virus hewan (animal virus). Virus-virus tersebut mengandung asam nukleat nucleic acid, NA), yakni asam ribonukleat (ribonucleic acid, RNA) atau as am deoksiribonukleat (deoxyribonucleic acid. DNA). Asam nukleat terletak di bagian paling dalam sebagai inti (core). Dengan mikroskop elektron (ME) dapat dilihat apakah virus mempunyai NA beruntai tunggal (single stranded) atau beruntai ganda (double stranded). Virus herpes mempunyai DNA yang beruntai ganda (18, 44, 47).

Secara umum, virus mengandung ensim yang terdiri dari dua kelas, yakni ensim yang menyerang dinding sel atau membran sel inang seperti lisosom atau neuraminidase, dan ensim yang mengkatalisis sintesis NA seperti DNA polimerase ( 4 7 . 1 1 8 1 .

(36)

v i r u s h e r p e s b e t a m e m p u n y a i k i s a r a n i n a n g y a n g s e a p i t , k u r a n g m e n i m b u l k a n CPE, s i k l u s r e p l i k a s i p a n j a n g , b i a s a n y a m e n y e b a b k a n i n f e k s i l a t e n d a l a m k e l e n j a r l u d a h d a n d a l a m j a r i n g a n l a i n ; d a n 3) v i r u s h e r p e s g a m m a d e n g a n k i s a r a n i n a n g y a n g s e m p i t , s e r t a d a p a t m e n y e b a b k a n t u m o r . V i r u s i n f e c t i o u s b o v i n e r h i n o t r a c h e i t i s ( I B R ) , v i r u s i n f e c t i o u s b o v i n e k e r a t o - c o n j u n c t i v i t i s CIBKV), k e d u a n y a p a d a s a p i , v i r u s i n f e c e i o u s I a r y n g o t r a c h e i t i s ( I L T ) p a d a a y a m , a d a l a h b e b e r a p a a n g g o t a v i r u s h e r p e s a l f a ; v i r u s c y t o m e g a l o ( h u m a n b e t a h e r p e s v i r u s 5 ) p a d a o r a n g t e r m a s u k k e d a l a m v i r u s h e r p e s b e t a ; d a n v i r u s E b s t e i n - B a r ( h u m a n g a m m a h e r p e s v i r u s 4 ) p a d a o r a n g , v i r u s M a r e k p a d a a y a m , v i r u s h e r p e s s a i m i r i p a d a b a n g s a k e r a , t e r m a s u k k e d a l a m v i r u s h e r p e s g a m m a .

(37)

Penggolongan v i r u s h e r p e s b o v i d i n i d i d a s a r k a n pada

pertimbangan s e j a r a h , r e a k s i s e r o l o g i s d m p o l a pemecahan

DNA o l e h e n d o n u k l e a s e . S i f a t i n f e k s i pada semua v i r u s yang t e r m a s u k dalam golongan BHV, a d a l a h l a t e n ( 4 9 ) .

Menurut Dulbecco (18) v i r u s h e r p e s mempunyai m o r f o l o g i yang sama. Ukuran d i a m e t e r b e r k i s a r a n t a r a 100

d a n 2 0 0 nm, mempunyai k a p s i d yang i k o s a h e d r a l d a n d i dalamnya t e r d a p a t 162 kapsomer. D i b a g i a n p a l i n g l u a r t e r d a p a t ampelop yang mengandung l i p i d s e h i n g g a p e k a

t e r h a d a p z a t p e l a r u t lemak seperti eter dan k l o r o f o r m .

V i r u s MCF asal " w i l d e b e e s t " t e r m a s u k v i r u s h e r p e s (36, 123). P l o w r i g h t et al. (81) melaporkan bahwa n u k l e o k a p s i d v i r u s MCF yang d i i s o l a s i d a r i " w i l d e b e e s t " a d a l a h i k o s a - h e d r a l s i m e t r i dan mengandung DNA s e b a g a i i n t i . D i dalam

s e l , v i r u s a d a l a h t e l a n j a n g sedangkan d i l u a r sel v i r u s mempunyai ampelop (81)

V i r u s h e r p e s termasuk v i r u s MCF mernbentuk badan i n k l u s i t i p e A pada b i a k a n s e l yang d i t u l a r i n y a (10, 8 2 ) .

9 - Proses penularan sel oleh virus

V i r u s a d a l a h s u a t u u n i t yang h i d u p d a n mdmperbanyak

d i r i d i dalam s e l h i d u p , sedangkan d i l u a r s e l h i d u p i a

t i d a k a k t i f (18).

(38)

ke dalam sel dengan cara : a) penelanan seluruh partikel virus (engulfment) atau dksebut juga viropeks, b) dengan menginjeksikan N A ke dalam sel bakteri dan c) dengan penetrasi seluruh partikel virus ke dalam sel secara langsung yang mekanismenya belum diketahui ( 4 4 , 47, 122).

Semua NA virus, setidak-tiddcnya berisi dua kode, satu kode untuk pembuatan NA dan satu lainnya untuk pembentukan protein (18, 47).

Selanjutnya terjadilah perakitan komponen-komponen virus menjadi partikel virus baru, mungkin secara spontan

( 2 0 ) , namun Wood dan Edgar (1968) membuat percobaan dan menyimpulkan bahwa proses perakitan memerlukan ensim khusus ( 122).

Virus harpes disintesis di dalam inti dan dirakit di dalam inti dan sitoplasma sel yang ditulari (18). Setelah tercapai suatu timbunan tertentu, komponen virus dilepas dari sel inang ke daerah sekitarnya. Virus berampelop, sebelum melepaskan diri ke luar sel, membentuk ampelop dari membran sel (18). Castro dan Daley ( 1 1 ) melaporkan bahwa virus MCF yang diisolasi dari "gaur" dan

"greater kudu" dirakit di dalam inti sel dimatangkan di dalam sitoplasma dan akhirnya virus membentuk ampelop @ari membran sel sebelum melepaskan diri dengan cara seperti

,

(39)

ditulari (11). Jadi, virus MCF d i dalam sel membentuk nukleokapsid, sedangkan di luar sel virus mempunyai

(40)

111. BAEAN DAN METODE

1. Bahan untuk menentukan sifat virus MCF

Untuk mempelajari sifat virus MCF digunakan bahan- bahan sebagai berikut :

a. 5-iodo-2'-deoxyuridine (IUDR), untuk mempelajari NA

virus MCF.

b. Acridine orange ( A O ) . Curnoy's Fixing F l u i d , yang digunakan dafam pewarnaan AO, untuk rnengamati NA virus MCF

:

c. Filter, untuk uji filtrasi yang berdiameter dari I 0 0 sampai 450 nm.

2- Aewan percobaan

Dalam percobaan postulat Koch, dipakai tiga ekor kerbau, dua ekor diinokulasi dengan virus isolat dan seekor lainnya dijadikan sebagai kontrol.

Dalam percobaan untuk menentukan peran kambing dan domba sebagai sumber penularan virus MCF, digunakan masing-masing 1 0 ekor kambing d m domba percobaan yang diinokulasi dengan virus MCF dan masing-masing lima ekor untuk kontrol

.

(41)

Untuk mengukur antigenisitas dan imunogenisitas virus MCF digunakan 3 0 ekor kambing. 25 ekor dibagi menjadi lima ke lompok. Setiap kelompok terdiri dari lima ekor. diinokulasi dengan satu macam antigen dari virus MCF (semuanya ada lima antigen), lima ekor selebihnya d i ~ a d i k a n kelompok kontrol dan disuntik dengan P B S

(larutan buffer).

3. Bahan pemeriksaan dari lapangan

a . B a h a n u n t u k p e n e n t u a n e k s i s t e n s i v i r u s

Bahan untuk menentukan eksistensi virus MCF pada kambing dan domba yang berada di lapangan, terdiri dari darah, ingus, air mat% dan cairan vagina/preputium yang diambil dari 4 0 ekor kambing (kambing lapanpan) dan 4 0 ekor domba (domba lapangan), betina atau jantan. Hewan- hewan tersebut diambil secara acak dari lokasi penyakit MCF yang terjadi secara endemik, yakni 3 0 ekor kambing dan 30 ekor domba dari Kecamatan Lubukpakam, Kabupaten Deli Serdang, Propinsi Sumatera Utara, serta 10 ekor kambing dan 10 ekor domba dari Kecamatan Belangkejeren. Kabupaten Aceh Tenggara. Propinsi Daerah Istimewa Aceh.

(42)

Tabung berisi darah dengan behan antibeku dan yang tanpa bahan antibeku serta tabung berisi kapas penampungan dalam medium pengirim, dimasukkan ke dalam peti kemas berisi gliserol dingin atau es batu, lalu dibawa ke laboratorium BPPH Wilayah I, Medan.

Leukosit dipisahkan dengan jalan memusingkan dalam sentrifus dingin 1-2 ml darah setelah ditambah

f i c o l l h e p a q u e (Pharmacia, Sweden) sama banyak dengan darah, dengan kecepatan 6 000 rpm selama 15 menit. Leukosit yang terpisah, direndam dalam medium penumbuh (73) dengan kepadatan 3 x l o 5 per ml, dan disimpan pada suhu 4 OC, sebelum diinokulasikan pada biakan sel.

b. S e r a n g g a p e n g i s a p d a r a h

Serangga pengisap darah ditangkap di dan pada waktu pengambilan 3.a dan di kandang hewan percobaan. Serangga pemangsa pada malam hari (nocturnal) ditangkap dengan menggunakan perangkap insek (light trap) yang dipasang sepanjang malam, sedangkan serangga pemangsa siang

(diurnal) ditangkap dengan jala penangkap serangga.

Serangga yang tertangkap dikemas di dalam botol termulut besar steril, lalu dimasukkan ke dalam peti kemas berisi es batu atau gliserol dingin lalu dibawa k e laboratorium.

c. S a h a n u n t u k p e n e n t u a n e k s i s t e n s i t i t e r a n t i b o d i

(43)

33

\

virus. Darah sebanyak 5 b l ditampung dalam tabung dan dimasukkan k e dalam peti kqmas bersama-sama dengan darah

i

untuk isolasi virus dan serangga. Di laboratorium, serum dipisahkan dan disimpan pada suhu -20 OC.

4. D a r a h

Untuk melihat naik turunnya antibodi terhadap virus MCF pada kambing dan domba percobaan, diambil darah dan diproses seperti pada 3.a dan 3.c d i atas.

5 . Biakan s e l ( c e l l culture)

a. B i a k a n s e l p r i m e r

Biakan sel primer ginjal fetus sapi ( G F S ) dan tiroid fetus sapi (TFS), diperoleh dengan melakukan tripsinasi jaringan ginjal dan tiroid fetus sapi. Sel-sel tunggal direndam dalam medium penumbuh dengan kepadatan 3 x lo5 per ml dan dieramkan pada suhu 37 OC ( 7 3 ) . Biakan sel yang tumbuh dapat diinokulasi dengan bahan pemeriksaan, enam hari sesudah penanaman.

b. B i a k a n s e l I e s t a r i

I

Biakan sel lestari Madin-Derby bovine kidney (MDBK), diperoleh dari N a t i o n a l I n s t i t u t e o f A n i m a l H e a l t h ( N I A H ) ,

(44)

6. M e d i u m p e n u m b u h

Medium penumbuh, m e d i u m pemelihara, medium penyimpan, m e d i u m pengirim dan m e d i u m p e n u m b u h leukosit d i g u n a k a n s e p e r t i y a n g dipakai o l e h P e r a n g i n a n g i n (1986) u n t u k mengisolasi v i r u s MCF (73), d e n g a n parbedaan, serum u n t u k menuabuhkan biakan sel d i g u n a k a n s e r u m sapi berasal d a r i r u m a h potong hewan. Untuk menghindari kemungkinan a d a n y a a n t i b o d i t e r h a d a p virus MCF di d a f a m s e r u m sapi t e r s e b u t , u n t u k menumbuhkan biakan s e l y a n g s u d a h diinokulasi d e n g a n v i r u s , d i g u n a k a n fraksi a l b u m i n V sapi (Difco).

7. Virus

Virus MCF y a n g d i g u n a k a n d a l a m penslitian ini adalah: a ) v i r u s isolat berasal d a r i k e r b a u d a n sapi bali (K3/AP; KS/AP; K6/AP, S b l / A P dan S b 2 / A P ( 7 0 , 73) d a n v i r u s y a n g d i i s o l a s i s e l a m a p e n e l i t i a n yakni d a r i s a p i bali, k a m b i n g d a n d o m b a lapangan e e r t a dari s e r a n g g a penghisap d a r a h , b) s e b a g a i p e m b a n d i n g d i g u n a k a n v i r u s PI-3 (parainfluenza-3 v i r u s ) dan v i r u s IBR ( i n f e c t i o u s b o v i n e r h i n o t r a c h e i t i s virus).

8 . R e a g e n

K o n j u g a t a n t i v i r u s MCF i s o l a t K 6 / A P (konjugat K 6 / A P )

d i b u a t s e n d i r i (73).

(45)

Konjugat antiimunoglobulin G sapi, buatan Cappel Laboratory.

Konjugat antiimunoglobulin kambing, konjueat anti- imunoglobulin domba dan konjugat antiimunoglobulin kerbau dibuat sendiri dengan bantuan biaya dari Pusat Antar Universitas Bioteknologi, lnstitut Pertanian Bogor.

Antiserum sapi terhadap virus MCF galur WCll, berasal dari Plum Island Animal Disease Centre, Greenport, New York. Amerika Serikat, atas kebaikan Dr. J. A. House.

1. Postulat Koch

(46)

diberikan adalah 2

ml

suspensi, yakni 2 ml suspensi sel

GFS atau TFS tertulari virus K6/AP untuk kerbau

KPIH

dan 2

ml suspensi sel tertulari Kb2LP untuk kerbau KP2P.

Sebelum ditetapkan menjadi hewan percobaan, ketiga

kerbau terlebih dahulu diperiksa kemungkinan adanya

infeksi virus MCF yaitu dengan menginokulasikan leukosit

pada sel GFS atau TFS dengan cara sel pengumpan (feeder

layer) (73). Selain itu diukur pula antibodi terhadap

virus MCF dengan uji

NTS

menggunakan virus

K6/AP

bebas

sebagai antigen dengan titer 400 TCIDS0 per 0,l ml. Hanya

kerbau rang bebas dari infeksi virus MCF dan titer

antibodi <2 yang digunakan.

Setelah disuntik, suhu badan dan gejala klinis ketiga

kerbau diukur serta diamati setiap hari. Setiap kali

terjadi kenaikan suhu badan atau memperlihatkan gejala

klinis, dilakukan isolasi virus dari leukosit, ingus, air

mata dan dari preput ium dengan menginokulasikannya pada

sel GFS atau sel TFS. Cara mengambil, memproses dan

menanam ingus, air mata dan cairan preputium serta

rnengidentifikasi virusnya, sama seperti mengisolasi virus

dari ingus, air mata dan cairan preputium pada kambing dan

domba lapangan (B.6.a dan B.6.b).

Apabila sampai hari ke 30, yang analog dengan hari

di lakukannya penyuntikan ulang pada percobaan imunisas i

oleh Plowright (831, kedua kerbau yang ditulari belum

(47)

n e g a t i f s e r t a a n t i b o d i belum t e r b e n t u k , p e n y u n t i k a n

d i u l a n g i d e n g a n v i r u s y a n g sama t e t a p i d o s i s n y a d i n a i k k a n

menjrndi 3 m l s u s p e n s i s e l GFS a t a u TFS t e r t u l a r i v i r u s .

P e r c o b a a n d i a k h i r i p a d a h a r i k e 158. Pada h a r i i t u

k e t i g a k e r b a u , b i l a masih h i d u p , d i p o t o n g d a n d i l a k u k a n

i s o l a s i virus dari l e u k o s i t , i n g u s , a i r mata, c a i r a n

p r e p u t i u m , limpa d a n s i m p u l l i m f e . Cara m e n g i s o l a s i v i r u s

d a r i limpa dan s i m p u l l i r n f e , d i l a k u k a n dengan penanaman

s u s p e n s i s e l p a d a s e l GFS a t a u TFS secara s e l pengumpan

( 7 3 ) dan t i t e r a n t i b o d i d i u k u r dengan u j i NTS.

2. Cara penentuan sifat-sifat virus MCF

a. S i f a t k e h i d u p a n

Untuk m e n g e t a h u i a p a k a h v i r u s MCF yang d i i s o l a s i d a r i

k e r b a u , s a p i b a l i , kambing d a n domba b e r s i f a t t e r i k a t s e l

a t a u v i r u s b e b a s , medium penumbuh d a r i s e l GFS a t a u TFS

yang s u d a h d i t u m b u h i v i r u s MCF, d i b u k t i k a n d e n g a n a d a n y a

s i n s i s i a , d i i n o k u l a s i k a n p a d a s e l GFS a t a u TFS y a n g b a r u .

Medium penumbuh d a r i s e l GFS a t a u TFS t e r s e b u t d i

atas d i a m b i l d a r i b o t o l b i a k a n s e l d a n d i p u s i n g k a n d e n g a n

k e c e p a t a n 5 000 r p m selama 30 m e n i t u n t u k mengendapkan

semua s e l b e s e r t a p e c a h a n n y a . S u p e r n a t a n h a s i l pemusingan

d i a m b i l d a n d i t a n a m s e b a n y a k 0 , 5 m l p a d a s e l GFS a t a u TFS

d a l a m d u a b o t o l b i a k a n s e l 11 onz ( b e r k a p a s i t a s 5 m l

(48)

d a n sudah d i le n g k a p i dengan g e l a s penutup, kemudian

dieramkan pada suhu 37 OC. Pada h a r i keenam p a s c a

i n o k u l a s i y a k n i h a r i t e r b a n y a k t e r b e n t u k n y a s i n s i s i a ( 7 3 )

g e l a s p e n u t u p d i a n g k a t d a n d i p e r i k s a adanya s i n s i s i a

dengan pewarnaan Giemsa. B i l a s i n s i s i a t e r b e n t u k b e r a r t i

a d a pertumbuhan v i r u s yang d i g u n a k a n s e b a g a i p e t u n j u k

bahwa s u p e r n a t a n mengandung v i r u s MCF b e b a s . S e b a l i k n y a ,

b i l a t i d a k t e r j a d i s i n s i s i a , b e r a r t i s u p e r n a t a n t i d a k

mengandung v i r u s , b e r a r t i v i r u s t e r i k a t pada s e l . S e l GFS

a t a u TFS yang sudah d i t u l a r i v i r u s MCF i s o l a t t a d i ,

s e t e l a h s u p e r n a t a n n y a d i k e l u a r k a n , d i p a s a s e dengan

menggunakan t r i p s i n ( 0 , 1 2 5 p e r s e n ) d a n EDTA ( 0 , l p e r m i l )

u n t u k melepaskan s e l d a r i d i n d i n g b o t o l b i a k a n s e l .

P a s a s e dan penanaman s u p e r n a t a n d i l a n j u t k a n sampai

i n o k u l a s i s u p e r n a t a n menghasilkan s i n s i s i a pada s e l GFS

a t a u TFS. Untuk meyakinkan bahwa v i r u s yang tumbuh a d a l a h

v i r u s MCF, pemeriksaan d i l a n j u t k a n dengan p e n g u j i a n FAT

menggunakan k o n j u g a t K6/AP d a n IFAT menggunakan a n t i s e r u m

t e r h a d a p v i r u s MCF WCI1.

V i r u s b e b a s i n i d i t a n a m k e m b a l i u n t u k k e p e r l u a n

pewarnaan n e g a t i f p a d a p e m e r i k s a a n ME d a n k e p e r l u a n l a i n ,

sedangkan =el b e r i s i v i r u s d a r i b o t o l kedua d i t r i p s i n a s i

d a n d i s i m p a n pada suhu - 4 8 " ~ dengan c a r a s e p e r t i yang

(49)

b. P e n g a r u h s u h u

S e b a g i a n d a r i s u p e r n a t a n yang sudah b e r i s i v i r u s

b e b a s d i s i m p a n pada suhu kamar, 4 OC, -10 OC, -20 OC d a n -48 OC.

Cara menentukan apakah v i r u s masih h i d u p d a l a m

s u p e r n a t a n i a l a h dengan menginokulasikannya 0 , 2 m l p a d a

s e l GFS a t a u TFS dalam b o t o l L e i g h t o n b e r i s i 0 , 8 m l medium

penumbuh, yang d i l e n g k a p i dengan g e l a s p e n u t u p . Gelas

p e n u t u p d i a n g k a t dan d i p e r i k s a p a d a h a r i keenam pasca

i n o k u l a s i

.

Pemeriksaan d i la k u k a n dengan pewarnaan Giemsa

u n t u k mengamati t e r j a d i n y a s i n s i s i a p a d a s e l GFS a t a u TFS.

Untuk meyakinkan bahwa v i r u s yang tumbuh a d a l a h v i r u s MCF,

p e n g u j i a n d i l a n j u t k a n dengan FAT menggunakan k o n j u g a t

KG/AP

d a n IFAT menggunakan a n t i s e r u m t e r h a d a p v i r u s MCF

Untuk menentukan d a y a t a h a n v i r u s b e b a s t e r h a d a p s u h u

kamar, s u p e r n a t a n d i i n o k u l a s i k a n p a d a s e l GFS d a n a t a u TFS

d i a m a t i pertumbuhannya s e t i a p h a r i , sedangkan yang

d i s i m p a n p a d a suhu ~ O C , - ~ O ~ C , -20°c dan -48°C d i i n o k u l a s i

d a n d i p e r i k s a s e t i a p minggu. P e n e n t u a n adanya pertumbuhan

v i r u s , d i t e n t u k a n dengan pewarnaan Giemsa, FAT dan IFAT.

S u p e r n a t a n v i r u s MCF b e b a s , d i i n o k u l a s i k a n p u l a p a d a

b i a k a n s e l l e s t a r i MDBK dengan c a r a yang sama dengan

penanaman p a d a s e l GFS a t a u TFS d i a t a s . S e l a i n

pengamatan t e r h a d a p adanya k e r u s a k a n s e l ( c y t o p a t h i c

(50)

111. BAEAN DAN METODE

1. Bahan untuk menentukan sifat virus MCF

Untuk mempelajari sifat virus MCF digunakan bahan- bahan sebagai berikut :

a. 5-iodo-2'-deoxyuridine (IUDR), untuk mempelajari NA

virus MCF.

b. Acridine orange ( A O ) . Curnoy's Fixing F l u i d , yang digunakan dafam pewarnaan AO, untuk rnengamati NA virus MCF

:

c. Filter, untuk uji filtrasi yang berdiameter dari I 0 0 sampai 450 nm.

2- Aewan percobaan

Dalam percobaan postulat Koch, dipakai tiga ekor kerbau, dua ekor diinokulasi dengan virus isolat dan seekor lainnya dijadikan sebagai kontrol.

Dalam percobaan untuk menentukan peran kambing dan domba sebagai sumber penularan virus MCF, digunakan masing-masing 1 0 ekor kambing d m domba percobaan yang diinokulasi dengan virus MCF dan masing-masing lima ekor untuk kontrol

.

(51)

Untuk mengukur antigenisitas dan imunogenisitas virus MCF digunakan 3 0 ekor kambing. 25 ekor dibagi menjadi lima ke lompok. Setiap kelompok terdiri dari lima ekor. diinokulasi dengan satu macam antigen dari virus MCF (semuanya ada lima antigen), lima ekor selebihnya d i ~ a d i k a n kelompok kontrol dan disuntik dengan P B S

(larutan buffer).

3. Bahan pemeriksaan dari lapangan

a . B a h a n u n t u k p e n e n t u a n e k s i s t e n s i v i r u s

Bahan untuk menentukan eksistensi virus MCF pada kambing dan domba yang berada di lapangan, terdiri dari darah, ingus, air mat% dan cairan vagina/preputium yang diambil dari 4 0 ekor kambing (kambing lapanpan) dan 4 0 ekor domba (domba lapangan), betina atau jantan. Hewan- hewan tersebut diambil secara acak dari lokasi penyakit MCF yang terjadi secara endemik, yakni 3 0 ekor kambing dan 30 ekor domba dari Kecamatan Lubukpakam, Kabupaten Deli Serdang, Propinsi Sumatera Utara, serta 10 ekor kambing dan 10 ekor domba dari Kecamatan Belangkejeren. Kabupaten Aceh Tenggara. Propinsi Daerah Istimewa Aceh.

(52)

Tabung berisi darah dengan behan antibeku dan yang tanpa bahan antibeku serta tabung berisi kapas penampungan dalam medium pengirim, dimasukkan ke dalam peti kemas berisi gliserol dingin atau es batu, lalu dibawa ke laboratorium BPPH Wilayah I, Medan.

Leukosit dipisahkan dengan jalan memusingkan dalam sentrifus dingin 1-2 ml darah setelah ditambah

f i c o l l h e p a q u e (Pharmacia, Sweden) sama banyak dengan darah, dengan kecepatan 6 000 rpm selama 15 menit. Leukosit yang terpisah, direndam dalam medium penumbuh (73) dengan kepadatan 3 x l o 5 per ml, dan disimpan pada suhu 4 OC, sebelum diinokulasikan pada biakan sel.

b. S e r a n g g a p e n g i s a p d a r a h

Serangga pengisap darah ditangkap di dan pada waktu pengambilan 3.a dan di kandang hewan percobaan. Serangga pemangsa pada malam hari (nocturnal) ditangkap dengan menggunakan perangkap insek (light trap) yang dipasang sepanjang malam, sedangkan serangga pemangsa siang

(diurnal) ditangkap dengan jala penangkap serangga.

Serangga yang tertangkap dikemas di dalam botol termulut besar steril, lalu dimasukkan ke dalam peti kemas berisi es batu atau gliserol dingin lalu dibawa k e laboratorium.

c. S a h a n u n t u k p e n e n t u a n e k s i s t e n s i t i t e r a n t i b o d i

(53)

33

\

virus. Darah sebanyak 5 b l ditampung dalam tabung dan dimasukkan k e dalam peti kqmas bersama-sama dengan darah

i

untuk isolasi virus dan serangga. Di laboratorium, serum dipisahkan dan disimpan pada suhu -20 OC.

4. D a r a h

Untuk melihat naik turunnya antibodi terhadap virus MCF pada kambing dan domba percobaan, diambil darah dan diproses seperti pada 3.a dan 3.c d i atas.

5 . Biakan s e l ( c e l l culture)

a. B i a k a n s e l p r i m e r

Biakan sel primer ginjal fetus sapi ( G F S ) dan tiroid fetus sapi (TFS), diperoleh dengan melakukan tripsinasi jaringan ginjal dan tiroid fetus sapi. Sel-sel tunggal direndam dalam medium penumbuh dengan kepadatan 3 x lo5 per ml dan dieramkan pada suhu 37 OC ( 7 3 ) . Biakan sel yang tumbuh dapat diinokulasi dengan bahan pemeriksaan, enam hari sesudah penanaman.

b. B i a k a n s e l I e s t a r i

I

Biakan sel lestari Madin-Derby bovine kidney (MDBK), diperoleh dari N a t i o n a l I n s t i t u t e o f A n i m a l H e a l t h ( N I A H ) ,

(54)

6. M e d i u m p e n u m b u h

Medium penumbuh, m e d i u m pemelihara, medium penyimpan, m e d i u m pengirim dan m e d i u m p e n u m b u h leukosit d i g u n a k a n s e p e r t i y a n g dipakai o l e h P e r a n g i n a n g i n (1986) u n t u k mengisolasi v i r u s MCF (73), d e n g a n parbedaan, serum u n t u k menuabuhkan biakan sel d i g u n a k a n s e r u m sapi berasal d a r i r u m a h potong hewan. Untuk menghindari kemungkinan a d a n y a a n t i b o d i t e r h a d a p virus MCF di d a f a m s e r u m sapi t e r s e b u t , u n t u k menumbuhkan biakan s e l y a n g s u d a h diinokulasi d e n g a n v i r u s , d i g u n a k a n fraksi a l b u m i n V sapi (Difco).

7. Virus

Virus MCF y a n g d i g u n a k a n d a l a m penslitian ini adalah: a ) v i r u s isolat berasal d a r i k e r b a u d a n sapi bali (K3/AP; KS/AP; K6/AP, S b l / A P dan S b 2 / A P ( 7 0 , 73) d a n v i r u s y a n g d i i s o l a s i s e l a m a p e n e l i t i a n yakni d a r i s a p i bali, k a m b i n g d a n d o m b a lapangan e e r t a dari s e r a n g g a penghisap d a r a h , b) s e b a g a i p e m b a n d i n g d i g u n a k a n v i r u s PI-3 (parainfluenza-3 v i r u s ) dan v i r u s IBR ( i n f e c t i o u s b o v i n e r h i n o t r a c h e i t i s virus).

8 . R e a g e n

K o n j u g a t a n t i v i r u s MCF i s o l a t K 6 / A P (konjugat K 6 / A P )

d i b u a t s e n d i r i (73).

(55)

Konjugat antiimunoglobulin G sapi, buatan Cappel Laboratory.

Konjugat antiimunoglobulin kambing, konjueat anti- imunoglobulin domba dan konjugat antiimunoglobulin kerbau dibuat sendiri dengan bantuan biaya dari Pusat Antar Universitas Bioteknologi, lnstitut Pertanian Bogor.

Antiserum sapi terhadap virus MCF galur WCll, berasal dari Plum Island Animal Disease Centre, Greenport, New York. Amerika Serikat, atas kebaikan Dr. J. A. House.

1. Postulat Koch

(56)

diberikan adalah 2

ml

suspensi, yakni 2 ml suspensi sel

GFS atau TFS tertulari virus K6/AP untuk kerbau

KPIH

dan 2

ml suspensi sel tertulari Kb2LP untuk kerbau KP2P.

Sebelum ditetapkan menjadi hewan percobaan, ketiga

kerbau terlebih dahulu diperiksa kemungkinan adanya

infeksi virus MCF yaitu dengan menginokulasikan leukosit

pada sel GFS atau TFS dengan cara sel pengumpan (feeder

layer) (73). Selain itu diukur pula antibodi terhadap

virus MCF dengan uji

NTS

menggunakan virus

K6/AP

bebas

sebagai antigen dengan titer 400 TCIDS0 per 0,l ml. Hanya

kerbau rang bebas dari infeksi virus MCF dan titer

antibodi <2 yang digunakan.

Setelah disuntik, suhu badan dan gejala klinis ketiga

kerbau diukur serta diamati setiap hari. Setiap kali

terjadi kenaikan suhu badan atau memperlihatkan gejala

klinis, dilakukan isolasi virus dari leukosit, ingus, air

mata dan dari preput ium dengan menginokulasikannya pada

sel GFS atau sel TFS. Cara mengambil, memproses dan

menanam ingus, air mata dan cairan preputium serta

rnengidentifikasi virusnya, sama seperti mengisolasi virus

dari ingus, air mata dan cairan preputium pada kambing dan

domba lapangan (B.6.a dan B.6.b).

Apabila sampai hari ke 30, yang analog dengan hari

di lakukannya penyuntikan ulang pada percobaan imunisas i

oleh Plowright (831, kedua kerbau yang ditulari belum

(57)