1. Sejarah penyakit;
Penyakit ingusan atau m a l i g n a n t c a t a r r h a l f e v e r ( M C F )
,
dieebut juga C o r y z a g a n g r a e n o s a &ovum, B o o r s a a r d i g e k o p z i e k t e , dilaporkan oleh Plowright et a l . ( 8 1 ) sebegai penyakit menular pada sapi d m kerbau, terjadi secara, sporadik atau endemik, berjalan lambat tetapi dengan tingkat kematian kasus (case fatality rate) mencapai 95 persen. Selain sapi dan kerbau, MCF juga menyerang ruminansia liar seperti rusa ( C e r v u s t i r o r o n s i s ) ( 1 4 , 16), rusa sika ( C e r v u s n i p p o n ) ( 1 2 0 ) . u s merah ( C e r v u s e l e p h u s ) ( 9 2 ) . rusa ekor putih ( 1 2 4 ) . rusa Pere Davis( E l a p h u r u s d a r i d i a n u s ) ( I l l ) , rusa aksis ( A x i s a x i s ) ( 1 2 ) , "greater kudu" ( T r a g e l a p h u s s t r e p s i c e r r o s ) ( 2 , lo), *gaur8' ( B o s g a u r u s ) ( 1 0 , 1 2 5 ) , "wildebeest" ( C o n o c h a e t e s t a u r i n u s dan C - gnu ) ( 7 9 , 1 0 6 ) , "hartebeest" ( A l c e l a p h u s h u c e l a p h u s Cockei Gunther) ( 9 0 , 9 1 ) dan "bison" ( 8 0 s b o n a s u s ) ( 1 1 5 ) . Selain itu, di taman hewan San Diego. MCF terjadi pada banteng ( 8 0 s i a v a n i c u s , 80s s o n d a i c u s ) secara endernik
( 3 4 ) . Banteng adalah nenek moyang dari sapi bali dan sapi
madura.
Penyakit ini dilaporkan terjadi di Eropah pada tahun
1 9 3 4 rang dilukiskan sebagai penyakit yang timbul dalam
s a p i yang h i d u p n y a b e r d e k a t a n d e n g a n d o m b a ( 2 3 ) . S e j a k itu n a m a p e n y a k i t d f s e b u t s e b a g a i M C F y a n g m e n u l a r d a r i d o m b a ( s h e e p a s s o c i a t e d ) a t a u t i p e Eropah. K e j a d i a n MCF
s e p e r t i di E r o p a h t e r d a p a t pula di A m e r i k a s e h i n g g a p e n y a k i t d i s e b u t j u g a s e b a g a i t i p s A m e r i k a (76, 7 7 ) . Agen
p e n y a k i t dari t i p e ini b e l u m berhasil d i t e n t u k a n . R e s k i p u n v i r u s h e r p e s b e r h a a i l d i i s o l a s i d a r i s a p i p e r a h y a n g s a k i t d e n g a n g e j a l a k l i n i s s e p e r t i MCF di M i n n e s o t a d a n v i r u s b e r e a k s i d e n g a n a n t i b o d i t e r h a d a p v i r u s MCF y a n g b e r a s a l dari " w i l d e b e e s t " ( w i l d e b e e s t a s s o c i a t e d ) , t e t a p i d a l a m p e n u l a r a n k e m b a l i p a d a s a p i t i d a k m e n g h a s i l k a n g e j a l a k l i n i s HCF (26). S e m e n t a r a itu a d a pula k a s u s y a n g m e n u n j u k k a n g e j a l a k l i n i s s e p e r t i MCF, t e t a p i s e l a i n v i r u s h e r p e s t e r i s o l a s i p u l a v i r u s h I u e t u u n g u e ( B T V ) ( 1 9 ) . Di A f r i k a p e n y a k i t HCF t e r j a d i p a d a s a p i y a n g ber- h u b u n g a n d e n g a n " w i l d e b e e s t " ( 5 6 ) d'isebabkan o l e h v i r u s y a n g d i i s o l a s i dari " w i l d e b e e s t " ( 7 9 ) dan d i s e b u t s e b a g a i t . i p e Afrika. D e n g a n d e m i k i a n d i k e n a l d u a t i p e , y a i t u t i p e A f r i k a d e n g a n "wildebeest" s e b a g a i r e s e r v o a r v i r u s n y a d a n t . i p e E r o p a h a t a u t i p e A m e r i k a d e n g a n d o m h a s e b a g a i s u m b e r p e n u l a r a n n y a . A n t a r a k e d u a t i p e , g e j a l a k l i n i s d a n p e r u b a h a n p a t o l o g i s n y a t i d a k b e r b a d a ( 7 8 ) . S e l a i n i t u , k e d u a t i p e MCF d a p a t m e n y e r a n g r u s a d e n g a n g e j a l a k l i n i s d a n p e r u b a h a n p a t o l o g i s y a n g s a m a ( 4 0 ) . V i r u s MCF t i p e
s a k i t , d a p a t d i t u l a r k a n ke k e l i n c i dan domba yang d i t a n d a i dengan kebengkakan simpul-simpul l i m f e ( l i m f a d e n o p a t i ) dan p r o l i f e r a s i e e l T ( 7 ) .
D i I n d o n e s i a , MCF pertama k a l i d i l a p o r k a n o l e h P a z o t t a pada tahun 1894 yang menyerang kerbau d i K e d i r i (69). Belakmgan d i k e t a h u i bahwa p e n y a k i t dengan g e j a l a s e p e r t i yang d i l a p o r k a n P a z o t t a , t e r j a d i d i hampir s e l u r u h kepulauan Nusantara. Penning dalam J a a r b o e k D e p a r t e m e n t v a n Landbouw 1910 menyatakan bahwa p e n y a k i t B o o r s a a r d i g e k o p z i e k t e agak s e r i n g t e r d a p a t pada s a p i . Dalam l a p o r a n t a h u n 1916 Van d e r Poel melaporkan adanya g e j a l a C o r y z a d i dua d e s a dalam U n d e r d i s t r i c t S r e s e h d i Madura yang menyebabkan kematian semua s a p i madura yang t e r s e r a n g . Dalam pada i t u d a p a t d i l i h a t bahwa p e n y a k i t d i d a e r a h i t u t e r j a d i s e c a r a endemik. S e l a n j u t n y a Van d e r Poel melaporkan bahwa d i Purwokerto dan P u r b a l i n g g a p e n y a k i t t e r j a d i s e c a r a s p o r a d i k .
S e l a n j u t n y a Van d e r Poel melaporkan dalam l a p o r a n tahun 1917 p e n y a k i t t e r j a d i d i B a l i g e ( S u m a t e r a ) , d i Pulau Madura dan Purwokerto; 1918 d i beberapa tempat d i I n d o n e s i a , t e r u t a m a Pulau Jawa; 1919 t e r j a d i pada s a p i dan kerbau d i beberapa tempat d i Pulau Jawa.
Pada tahun 1922, Kepala P u s a t Jawatan Kehewanan melaporkan bahwa C o r y z a menyerang kerbau d i d a e r a h Bogor, Sukabumi, Cirebon, Tegal, Semarang dan Bondowoso. S e l a n j u t n y a dalam l a p o r a n tahun 1924, d i n y a t a k a n adanya p e n y a k i t i n i d i d a e r a h Rembang.
D a l a m l a p o r a n J a w a t a n Kehewanan P u s a t t a h u n 1925, d a p a t d i b a c a bahwa MCF menyerang s a p i dan k e r b a u d i b e b e r a p a Daerah Kedokteran Hewan, s e p e r t i d i Kupang
( Tirnor)
.
Pamekasan (Madura) , Bondowoso d a n b a g i a n u t a r a P u l a u J a w a (Rembang d a n Semarang) d m d i M e d a n ( S u m a t e r a ) . Sedangkan t a h u n b e r i k u t n y a , 1926, t e r j a d i d i b a g i a n u t a r a P u l a u Jawa; 1927 d i d a e r a h Bondowoso. Pamekasan ( M e u r a ) , B a l i g e ( S u m a t e r a ) ; 1928 d i Kupang ( T i m o r ) . Makassar ( S u l a w e s i ) , d i d a e r a h Bondowoso d a n d i d a s r a h S e r a n g d a n B a l i g e .Dalam b u l a n P e b r u a r i 1929, N a s u t i o n melaporkan d a r i Watampone ( S u l a w e s i ) bahwa s a p i b a l i yang d i b a g i k a n kepada r a k y a t menurut K o n t r a k Sumba, t e r s e r a n g B n o s a a r d ~ g e k o p z z e k t e , yang meskipun d i p i n d a h k a n t e m p a t n y a , t i d a k rnemberi a k i b a t b a i k ( 5 3 ) .
Pada a k h i r t a h u n 1919 d a n permulaan t a h u n 1920, Mohede melaporkan d a r i Karangasem t e n t a n g a d a n v a b e b e r a p a k e j a d i a n p e n y a k i t p a d a s a p i yang memperlihatkan t a n d a - t a n d a banyak k e l u a r l e n d i r d a r i hidung dan m a t a d a n d i d i a g n o s i s s e b a g a i C o r y z a g a n g r a e n o s a . S e l a n j u t n y a Made Bagi Asna yang b e r t u g a s d i Karangasem ( B a l i ) d a r i t a h u n 1942-1950, dalam d a e r a h t u g a s n y a , t e l a h m e l i h a t l i m a k a l i p e n y a k i t S o n s a a r d i g e k o p z i e k t e p a d a s a p i - s a p i yang umurnya k u r a n g - l e b i h l i m a t a h u n . N a m a yang l a z i m d i b e r i k a n p a d a p e n y a k i t i t u i a l a h p e n y a k i t N g i n g i s a n , a r t i n y a k e l u a r i n g u s
.
Mata s a p i - s a p i i t u rnenjadi p u t i h d a n banyakmengeluarkan a i r m a t a , hidungnya k e r i n g kadang-kadang t e r b e l a h - b e l a h dan k e p a l a n y a bengkak. P a r a p e t a n i - t e r n a k yang m e m i l i k i s a p i b e r p e n y a k i t d e m i k i a n m i n t a i e i n u n t u k memotong hewannya. K e p a l a d a n b a g i a n - b a g i a n yang menun jukkan k e l a i n a n d i a f k i r ( 53 1 .
D a r i d a t a yang dikumpulkan o l e h Mansjoer ( 5 3 ) d a p a t d i a m b i l k e s i m p u l a n bahwa hewan p a l i n g p e k a t e r h a d a p MCF a d a l a h s a p i b a l i d i s u s u l o l e h s a p i madura d a n k e r b a u , s e d a n g k a n s a p i o n g o l e d a n s a p i f r i e s i a n h o l s t e i n r e l a t i f t a h a n . S e j a k t a h u n 1978, MCF t i m b u l pada k e r b a u dan s a p i d i Kecamatan Lubukpakem, Kabupaten D e l i S e r d a n g , P r o p i n s i S u m a t e r a U t a r a dengan t i n g k a t i n s i d e n s ( i n c i d e n c e r a t e ) a d a l a h 0 . 4 7 p e r s e n , sedangkan p a d a s a p i o n g o l e 0 . 0 2 p e r s e n , masing-masing dalam s a t u t a h u n ( 7 2 ) . S e l a n j u t n y a t e r j a d i p u l a pada s a p i b a l i d i Kecamatan B e l a n g k e j e r e n , Kabupaten Aceh Tenggara. P r o p i n s i Daerah I s t i m e w a Aceh, y a i t u s a p i b a n t u a n p e m e r i n t a h yang d i b a g i k a n k e p a d a r a k y n t d i d a e r a h i t u , b e r a s a l d a r i P r o p i n s i Nusa Tenggara Timur. dengan t i n g k a t i n s i d e n s 20.76 p e r s e n p e r t a h u n ( 7 5 ) . K e j a d i a n MCF yang b e r j a l a n s e c a r a endemik, d i l a p o r k a n t e r j a d i d a r i t a h u n 1975 h i n g g a t a h u n 1978 p a d a s a p i b a l i d i d a e r a h Ciomas, C i b a l o k dan d i P u s a t P e n e l i t i a n d a n Pengembangan T e r n a k d i Ciawi-Bogor. S e l m a m a s a p e n e l i t i a n i t u d i l a p o r k a n t i d a k t e r d a p a t hewan l a i n y a n g t e r s e r a n g ( 2 2 ) . Hoffman et d l . ( 3 7 ) melaporkan bahwa' s e j a k September 1979 sampai b u l a n M e i 1982, d i B a l a i
P e n e l i t i a n Ternak Ciawi-Bogor, MCF t e l a h menyerang d a n menyebabkan k e m a t i a n empat d a r i t u j u h e k o r s a p i b a l i ; 5 0 d a r i 177 e k o r k e r b a u sedangkan 6 3 e k o r s a p i k e t u r u n a n B u s i n d i c u s , t i g a e k o r k e t u r u n a n Bos t a u r u s d a n empat e k o r k e r b a u murrah, t e t a p s e h a t (37). P e n y a k i t MCF d i l a p o r k a n t e r j a d i d i B a l i r a n g menyerang s a p i b a l i . dan dalam p e n u l a r a n b u a t a n y a i t u dengan menyuntikkan d a r a h p e n d e r i t a yatlg d i d e f i b r i n a s i k e s a p i - b a l i y a n p s e h a t , menimbulkan g e j a l a k l i n i s d m p e r u b a h a n p a t o l o g i s k h a s MCF. Malahan p e n y a k i t b e r ~ a l a n
l e b i h c e p a t d a n l e b i h p a r a h d a r i p e n y a k i t d i l a p a n g a n ( 8 7 ) . Kasus MCF d i Lampung. Bengkulu dan S u m a t e r a S e l a t a n menunjukkan k e n y a t a a n bahwa s a p i b a l i a d a l a h p a l i n g p e k a , menyusul k e r b a u d a n s a p i p e r a n a k a n o n g o l e ( 8 5 ) . S e l a i n p a d a hewan t e r n a k , d i I n d o n e s i a p e r n a h p u l a d i d i a g n o s i s MCF pada r u s a ( C e r r u s t i r o r e n s i s ) d i Nusa T e n g g a r a Timur dan t i n g k a t k e m a t i a n k a s u s d i l a p o r k a n s d n g a t t i n g g i ( 1 4 ) . D i n e g a r a t e t a n g g a M a l a y s i a d i l a p o r k a n a d a n y a k e j a d i a n yang menyerang s a p i p a d a t a h u n 1949 d a n 1 9 5 8 . D n r i l a p o r a n - l a p o r a n b e r i k u t n y a d i k e t a h u i bahwa d i s e b a g i a n b e s a r n e g a r a - n e g a r a b a g i a n d i Semenanjung, t e r d a p a t MCF ( 1 1 7 ) . Pada t a h u n 1 9 8 0 Vanselow melaporkan h a s i l pengamatannya t e n t a n g k e j a d i a n MCF, y a i t u d a r i Nopember 1976 sampai J u n i 1 9 7 7 , m o r b i d i t a s p a d a s a p i a d a f a h 4 7 , 6 p e r s e n dengan t i n g k a t k e m a t i a n k a s u s 8 7 , 7
p e r s e n , p a d a s a p i p e r a h a s a l I n d i a m o r b i d i t a s 23,3 p e r s e n d e n g a n t i n g k a t k e m a t i a n k a s u s 100 p e r s e n ( 1 1 7 ) . 2. D i a g n o s i s p e h y a k i t D i a g n o s i s p e n y a k i t MCF, s e b - i a n b e s a r , d i l a k u k a n d e n g a n cara k l i n i k - p a t o l o g i k . G e j a l a k l i n i s k h a s MCF a d a l a h a d a n y a c a i r a n mukopurulen d a r i h i d u n g d a n m a t a d i s e r t a i p e n g e l u a r a n bau b u s u k , k e k e r u h a n k o r n e a ( c o r n e a l o p a c i t y ) , l i m f a d e n o p a t i umum, s u h u badan 41°c a t a u l e b i h , e r o s i s e l a p u t l e n d i r m u l u t , k o n j u n g t i v i t i s ; s e d a n g k a n secara h i s t o p a t o l o g i k a d a n y a v a s k u l i t i s p a d a o r g a n - o r g a n t u b u h d i p a k a i s e b a g a i p e g a n g a n (22. 37, 5 2 , 73. 8 5 . 1 0 8 ) . P a d a t a h u n 1980, R o s s i t e r mencoba membuat c a r a m e n d i a g n o s i s MCF d e n g a n pernotongan t i p i s j a r i n g a n l i m f o i d b e k u d a n d i p e r i k s a d e n g a n u j i f l u o r e s e n s i l a n g s u n g ( f l u o r e s c e n t a n t i b o d y t e c h n i q u e , FAT); t e t a p i k a d a n g - k a d a n g s a j a d i p e r o l e h h a s i l p o s i t i f , s e h i n g g a cara i n i d i a n g g a p k u r a n g b a i k ( 1 0 0 ) . I s o l a s i v i r u s d e n g a n penanaman s e l - s e l l i m f o i d p a d a b i a k a n s e l ( c e l l c u l t u r e ) t e l a h b e r h a s i l d i l a k u k a n ( 1 0 , 7 9 , 9 0 ) d a n s u d a h d i l a k u k a n secara r u t i n d e n g a n penanaman
...
s e l - s e l l i m f o i d p a d a b i a k a n s e l g i n j a l f e t u s s a p i (GFS) d a n a t a u t i r o i d f e t u s s a p i ( T F S ) , d i i d e n t i f i k a s i d e n g a n FAT menggunakan kon j u g a t yang d i b u a t s e n d i r i d a n d e n g a n u j i f l u o r e s e n s i t a k l a n g s u n g ( i n d i r e c t f l u o r e s c e n t a n t i b o d y t e c h n i q u e , IFAT) menggunakan a n t i b o d i t e r h a d a p v i r u s WCll ( 7 0 , 7 1 , 7 3 ) .Adanya antigen virus MCF pada hewan penderita dapat dideteksi setelah sel-sel limfosit ditanam dalam Roswell Park medium
( R P M I )
1640 berisi 1 0 persen serum fetus sapi dan antibiotik yang kemudian diperiksa dengan FAT (73). Terdapatnya virus dalam sel-sel limfosit dari hewan penderita MCF telah pula dilaporkan oleh Patel dan Edington dengan menjadikan biakan eksplan jaringan limfoid dalam RPMI 1640 dan diperiksa dengan IFAT, dengan hasil sebanyak 9 0 persen limfosit berdiameter 11-13 um mengandung virus MCF, sedangkan limfoblastoid yanp sedana berproliferasi. tidak (66).3. Etiol-i
Agen penyakit berhasil diisolasi pertama kali dari "wildebeest" d i Af rika. Virus ini menyerupai virus varicella soster, virus citomegalo dan virus Marek dan sangat terikat sel (cell associated) (79). Selanjutnya virus tersebut mempunyai sifat peka terhadap asam dan pelarut lemak, membentuk sinsisia dan badan inklusi tip% A dengan ukuran 100 nm di dalam sel dan 140-220 nm di luar sel hidup (81). Virus ini dimasukkan k e dalam virus herpes bovid-3 (35. 123). Kemudian, virus dengan antibodi yang dapat menetralisasi virus yang diisolasi dari "wildebeest", berhasil pula diisolasi dari "hartebeest" ( 90). Karena "wi ldebeest" dan "hartebeest" termasuk di dalam subfamili A l c e l a p h i n a e , maka virus ini diusulkan
diubah namanya menjadi A I c e l a p h i n e h e r p e s v i r u s - l ( 9 1 ) . Tetapi Plowright mengusulkan nama virus tersebut menjadi
H i p p o t r a g i n e h e r p e s v i r u s , karena hewan-hewan sumber penularan tersebut termasuk di dalam famili H i p p o t r a g i n a e
(84). Namun karena ungulata a l c e l a p h i n e adalah induk semang virus di alam bebas, sebaiknya virus diberi nama
A l c e l a p h i n e h e r p e s v i r u s (AHV-1) ( 6 2 ) . Virus herpes yang identik dengan virus MCF W C l l (berasal dari "wildebeest"), berhasil diisolasi dari "gaur" dan "greater kudu" ( 1 0 ) rang berukuran 98-194 nrn ( 1 1 )
Sejak tahun 1936 sudah diketahui bahwa penyakit MCF dapat ditularkan ke kelinci dengan menyuntikkan darah yang diberi antikoagulan atau suspensi jaringan ( 15). Pengalaman yang sama dilaporkan oleh Mansjoer (53) dan Piercy (77). Namun psrcobaan menulari mencit dan marmot tidak menimbulkan penyakit (77, 8 0 ) . dan virus tidak tumbuh pada telur ayam bertunas (84).
Transmisi penyakit dengan penyuntikan darah sapi sakit yang diberi antikoagulan ke dalam vena sapi sehat. berhasil dilakukan (53, 8 7 ) dan darah yang didefibrinasi dari kerbau sakit menimbulkan penyakit pada sapi (38).
Tetapi isolasi virus dengan penanaman suspensi sel-sel limpa, ginjal, hati, otak dan simpul limfe kerbau sakit pada biakan sel lestari (cell line) BHK-21 (baby hamster kidney), MDBK (Madin-Derby bovine kidney) dan Vero, tidak berhasil (38). Selanjutnya dilaporkan bahwa penyakit MCF
yang berhubungan dengan domba dapat ditransmisikan dari sapi sakit k e sapi sehat dengan penyuntikan darah yang diberi antikoagulan (109).
Isolasi virus MCF dari kerbau dan sapi bali berhasil dilakukan dengan menginokulasikan suspensi sel-sel leukosit, suspensi sel-sel limpa d a n suspensi sel-sel simpul limfe pada biakan sel G F S dan TFS. Virus ternyata bereaksi dengan antibodi terhadap virus MCF W C l l (70, 71,
73, 75). ,
4. Peran kambing dan d-ba dalam penularan MCF
Meskipun agen penyakit telah berhasil diisolasi. namun bagaimana mekanisme penularannya belum pernah dilaporkan. Kebanyakan laporan {kecuali d i Afrika) menyimpulkan bahwa domba adalah biang penularan MCF meskipun beberapa peneliti menemui penyakit pada hewan peka yang tidak berhubungan dengan domba. Selman et a I .
melaporkan bahwa kejadian MCF di Inggris ada yang berhubungan dengan domba tetapi ada pula yang tidak (108). MCF di New Zealand menunjukkan tingkat insidens tertinggi pada saat domba dan sapi digembalakan bersama-sama (32). Demikian pula ke jad ian MCF pada "gaur" dan "greater kudu" d i Taman Hewan Oklahoma, Amerika Serikat, ada hubungan tidak langsung dengan domba (10). Selain itu kejadian MCF pada beberapa bangsa rusa juga berhubungan dengan domba
MCF d i M a l a y s i a juga dihubungkan dengan k e h a d i r a n domba p a d a semua k a s u s p e n y a k i t , namun dalam pengamatannya Vanselow menjumpai k e j a d i a n p e n y a k i t pada s e e k o r s a p i r a n g t i d a k berhubungan dengan domba, t e t a p i berhubungan dengan sapi p e n d e r i t a d a n b a n g k a i s a p i ( 1 1 7 ) .
D i I n d o n e s i a , k e j a d i a n MCF p a d a s a p i b a l i , k e r b a u ( 3 7 , 53, 72, 8 5 ) dan r u s a ( 1 4 ) d i l a p o r k a n berhubungan dengan domba
.
Namun sampai s a a t i n i , belum p e r n a h d i l a p o r k a n a d a n y a hubungan a n t a r a kambing dengan p e n u l a r a n MCF, p a d a h a 1 d i I n d o n e s i a , d i samping jumlahnya l e b i h banyak, hewan i n i p u n h i d u p n y a s e l a l u d e k a t dengan s a p 5 d a n k e r b a u . D i S u l a w e s i m i s a l n y a , s a p i b a l i yang m e n d e r i t a MCF s e l a i n berhubungan dengan domba, d i lapangem penggernbalaan yang sama t e r d a p a t j u g a kambing ( 5 3 ) . S e l a i n i t u , d i l o k a s i k e j a d i a n HCF d i D e l i S e r d a n g t e r d a p a t j u g a kambing, bahkan p o p u l a s i n y a d u a k a l i l e b i h banyak d a r i domba. Karena i t u . kambing p e r l u p u l a d i c u r i g a i s e b a g a i sumber p e n u l a r a n v i r u s MCF.T e t a p i p e r a n kambing d a n domba s e b a g a i sumber p e n u l a r a n v i r u s MCF belum d a p a t d i b u k t i k a n . Yang ' s u d a h d i k e t a h u i i a l a h kedua j e n i s hewen i t u d a p a t d i t u l a r i dengan v i r u s MCF d a n menunjukkan g e j a l a k l i n i s r i n g a n b e r u p a i n g u s e n c e r , 18 d a n 17 h a r i s e s u d a h d i s u n t i k , masing-masing dengan 2 5 m l d a r a h k e r b a u s a k i t yang s u d a h d i b e r i a n t i k o a g u l a n . S e l a i n i t u , d a r i kedua hewan i t u d a p a t d i i s o l a s i v i r u s s i n s i o g e n i k yang i d e n t i k denpan
virus MCF WCll (70. 71). Selanjutnya, tiga ekor domba yang ditulari dengan tiga virus MCF isolat dari kerbau menunjukkan bahwa dua ekor domba menjadi sakit ingusan ringan pada minggu pertama dan seekor domba lainnya pada minggu kedua pasca penularan. Pada waktu domba menunjukkan gejala klinis dapat diisolasi virus sinsiogenik yang bereaksi dengan antibodi terhadap virus MCF W C l l dalam IFAT dan bereaksi pula dengan virus MCF K6/AP dalam pengujian dengan FAT. Virus tersebut ternyata
dapat hidup dalam tubuh domba aedikitnya swmbilan minggu sesudah ditulari (73).
Buxton et al. (1985) telah berhasil menulari domba dengan virus MCF dari rusa merah atau dari kelinci. Suspensi sel dari rusa atau dari kelinci disuntikkan intravena k e 2 1 ekor domba yang bunting dengan umur kebuntingan antara 40-66 hari, ternyata empat dari lima ekor anak domba yang hidup menunjukkan gejala klinis seperti MCF dan mati atau dibunuh pada hari k e 10, 16, 47 dan 175. Dari pemeriksaan patologi-anatomik terlihat gambaran 1 imf adenopati dan dalam pengamatan secara histologik terlihat adanya kerusakan daerah T jaringan limfoid disertai penghentian produksi sel B. Namun, virus tidak berhasil diisolasi kembali dari rusa dan kelinci
yang hidup dalam satu kandang dengan domba. Hal ini
Peran domba dalam penularan MCF di Victoria, Australia, dilaporkan oleh Snowdon bahwa setiap kejadian penyakit pada sapi selalu berhubungan dengan pemeliharaan domba. Snowdon selanjutnya melaporkan bahwa
MCF
yang menular dengan perantaraan domba ini, adalah tipe rang berhubungan dengan domba, namun isolasi agen penyakit dengan penanaman sel-sel organ baik dari domba maupun dari sapi tidak tumbuh pada biakan sel ginjal an& domba dan tiroid anak sapi (112).Suatu kejadian yang tidak biasa yaitu kasus MCF pada seekor anak sapi jantan friesian holstein umur lima bulan, yang biasanya menyerang ternak dewasa, ditandai denqan gejala klinis dan dikonfirmasikan dengan patologi- anatomik. Ternyata, di tempat penggemukannya berkeliaran domba, dua diantaranya beranak pada musim semi sebelum kejadian (94). Sharpe et a l . melaporkan terjadinya suatu wabah MCF pada 98 ekor sapi susu, sembilan diantaranya mati atau dipotong. Kejadian ini bermula dari sekelompok sapi berumur sembilan bulan yang dikandangkan dalam bangsal yang biasa ditinggali 19 ekor domba selama musim beranak. Selain itu dari sapi-sapi penderita ditemukan antibodi terhadap BTV, sehingga menimbulkan dugaan bahwa domba dan BTV memiliki peran dalam penularan MCF (111).
5. Peran vektor dalam penularan penyakit
Bentuk penularan dari domba dan atau kambing ke hewan yang peka terhadap MCF, belum pernah dilaporkan. Kemungkinan adanya vektor misalnya ser-ga penghisap darah sebagai perantara penularan pernah dipertimbangkan oleh Mettam (56) tetapi tidak pernah diteliti lebih lanjut. Mengingat virus MCF dapat diisolasi dari leukosit
( 7 0 , 73, 75) dan transmisi penyakit dapat dilakukan
melalui penyuntikan darah yang diberi antikoagulan (38,
53, 87). pemindahan virus melalui gigitan serangga
penghisap darah adalah mungkin. Kemungkinan ini ditopang oleh kenyataan bahwa beberapa virus seperti BTV, virus
a f r i c a n h o r s e s i c k n e s s (AHS) virus a k a b a n e dan virus
e p i z o o t i c h a e r o r r h a q i c of deer ( E H D ) di%ularkan melalui beberapa spesies dari genus C u l i c o i d e s . BTV ternyata dipindahkan dari domba penderita k e domba yang sehat melalui C - i w i c o l a dan C - a b s o l e t u s di Spanyol dan Portugal ( 5 5 > , dan C - a b s o l e t u s . yang tersebar luas di Lesbos. Yunani (4). Vektor terpenting pada penularan BTV di Amerika Serikat adalah C. v a r i i p e n n i s , yang sering terdapat mengalami infeksi campuran beberapa serotipe
BTV,
diantaranya serotipe 1 0 dan 1 7 (107).Penularan virus AHS adalah melalui C - v a r i i p e n n i s (4) sedangkan virus a k a b a n e ditularkan melalui C - b r e v i t a r s i s
sementara virus E H D berhasil ditumbuhkan dalam tubuh C - n u h e c u l o s u s , setelah virus diinokulasikan melalui toraks
C , p e r e g r i n u s dan C - p a l p i f e r terdapat di Asia termasuk Indonesia ( 8 8 ) . Penyidikan tentang kemungkinan penularan virus MCF dari reservoar k e hewan peka atau dari satu hewan peka ke hewan peka lainnya melalui vektor. belum pernah dilaporkan.
Plowright e t a l . (83) dalam usahanya mengimunisasi sapi terhadap virus MCF, melaporkan bahwa hewan yang disuntik dengan virus yang dilemahkan, dua kali, menghasilkan antibodi dengan titer tinggi. Sementara, serum imun dapat diperoleh dari kelinci setelah ditulari
C dengan virus MCF C S o 0 ( 59).
Mushi e t a l . melaporkan bahwa dengan uji netralisasi serum dapat ditunjukkan adanya antibodi terhadap virus MCF WCl 1 dalam ingus dan air mata anak-anak "wildebeest"
.
berumur lebih tiga bulan yang tidak terdapat pada anak d ibawah umur tiga bulan. Sedangkan dalam serum, semua anak- anak "wildebeest" tersebut mengandung antibodi (61).
Dengan menggunakan virus MCF yang diekstrak dari biakan sel tertentu, dengan ultrasonik, sebagai antigen dalam pengujian pengikatan komplemen, Rossiter e t d l .
melaporkan bahwa dalam serum hiperimum sapi, kelinci dan "wildebeest" terdapat antibodi dengan titer 1 : > 6 4 ( 9 7 1 ,
sedangkan dalam serum sapi normal di daerah endemik tidak terdapat antibodi (99). Selanjutnya dilaporkan bahwa
m e s k i p u n k u r a n g s e n s i t i f , r r r u n o - d i f f u s i o n ( I D ) d a n c o u n t e r - i r m u n o - e l e c t r o p h o r e s i s ( C I E P ) menggunakan s e r u m h i p e r i m u n d a p a t d i d e t e k s i a d a n y a a n t i g e n MCF ( 9 8 ) . D i A f r i k a Timur k e b a n y a k a n MCF d i s e b a b k a n o l e h v i r u s y a n g b e r a s a l d a r i " w i l d e b e e s t " ( 7 9 ) d a n s a p i yang m e n d e r i t a MCF mengandung a n t i b o d i ( 9 9 ) . Sedangkem d i E r o p a h d a n d i b a g i a n l a i n d u n i a , d i k a t a k a n bahwa domba b e r t i n d a k s e b a g a i sumber p e n u l a r a n (23. 78, 1 0 9 ) . 9 Meskipun belum d i k e t a b u i m e n p e n y a k i t n y a , s a p i p e n d e r i t a mengandung a n t i b o d i t e r h a d a p MCF b e r a s a l " w i l d e b e e s t " s e h i n g g a memberi k e s a n bahwa v i r u s MCF t i p e A f r i k a t e r d a p g l t j u g a d a l a m t u b u h hewan t e r s e b u t ( 1 0 3 ) . R a t a - r a t a t i t e r a n t i b o d i d a l a m s e r u m d0mb.a l e b i h t i n g g i d a r i r a t a - r a t a t i t e r a n t i b o d i d a l a m s e r u m s a p 1 s e d a n g k a n rata-rata t i t e r a n t i b o d i d a l a m s e r u m " w i l d e b e e s t " l e b i h t i n g g i d a r i yang t e r d a p a t d a l a m s e r u m domba ( 1 0 1 ) . Dsngan u j i n e t r a l i s a s i s e r u m ( N T S ) mengaunakan b i a k a n s e l G F S yang d i t u l a r i d e n g a n v i r u s MCF K 6 / A P , i s o l a t d a r i k e r b a u , s e b a g a i a n t i g e n , s e r u m domba y a n g d i t u l a r i t i g a k a l i d e n g a n v i r u s yang sama, d e n g a n s e l a n g 10 h a r i , mengandung a n t i b o d i d e n g a n t i t e r 1 : > 1 6 ( 7 3 ) .
H i n g g a s a a t i n i belum a d a l a p o r a n mengenai gambaran a n t i b o d i t e r h a d a p MCF d a l a m s e r u m kambing.
.
7 . A n t i g e n i s i t a s d a n i m u n o g e n i s i t a s
Usaha pembuatan v a k s i n u n t u k mengebalkan s a p i t e r h a d a p MCF s u d a h d i l a k u k a n o l e h P l o w r i g h t e t d l . p a d a
tahun 1975. Virus yang berasal dari "wildebeest" diperbanyak dalam sel hidup atau dimatikan dengan formalin dan dicampur dengan a d ~ u v a n Freund tidak lengkap, menghasilkan antibodi dengan titer tinggi pada sapi. tetapi tidak tahan terhadap tantangan dan infeksi alamiah. Melihat kenyataan ini Plowright et al. menduga bahwa selain mekanisme humoral masih ada mekanisme lain rang ikut berperan ( 8 3 ) .
Sementara itu, Rossiter melaporkan adanya proteksi antibodi terhadap tantangan pada kelinci. Kelinci dihiperimunkan dengan suspensi sel-sel limfoid tertulari virus MCF yang dilemahkan, tidak menimbulkan kekebalan dan tidak tahan terhadap tantangan. Selanjutnya, kelinci yang 'dihiperimunkan dengan suspensi sel-sel ginjal sapi tertular virus MCF, menimbulkan antibodi tetapi tidak
tahan terhadap tantangan. Sebaliknya, kelinci yang dihiperimunkan dengan suspensi sel-sel ginjal kelinci tertulari virus MCF, tahan terhadap tantangan 47 hari pasca imunisasi. Namun, tantangan kembali pada minggu ke- 9 0 pasca imunisasi menyebabkan kernatian d u a dari empat ekor kelinci (102).
Sebelumnya, Reid dan Rowe dalam tahun 1973 telah mencoba mernbuat vaksin dari virus asal "hartebeest". Virus yang menjadi virus bebas pada pasase ke 3 0 diinokulasikan pada sapi, tidak menimbulkan gejala klinis khas MCF tetapi menirnbulkan antibodi yang dapat diditeksi
dengan NTS. Dua dari tiga sapi yang diimunisasi, tahan terhadap tantangan virus homolog yang virulen berpasase rendah. Setelah ditantang lagi dengan virus yang berasal dari "wildebeest", semua sapi tidak menunjukkan gejala MCF. Namun, tiga ekor sapi yang diimunisasi dengan virus dari "hartebeest" pasase ke 3 0 saja tanpa ditatltang dengan virus homolog virulen berpasase rendah, tidak tahan terhadap tantangan virus yang berasal dari "wildebeest" (90).
Sementara itu dilaporkan kemungkinan adanya pembentukan kompleks imun dalam vaksinasi pada
MCF
(105). Terjadinya vaskulitis mungkin sebagai manifestasi dari reaksi imunopatologis, reaksi vaskular dan limforetikuler (106, 108) seperti terjadi pada reaksi Coomb dan Gell tipe I11 dan IV (13). Namun imunoglobulin (Ig) dan komplemen-3 (C3) yang berisi kornpleks imuh pada luka-luka hanya kadang-kadang saja dapat d ideteks i ( 52, 58, 100). Kompleks imun juga dilaporkan berisi konglutinin (Cg) yang
mengendap dalam glornelurus namun terjadinya arteritis akan menjadi terang bila kornposisi dari endapan dipastikan (67). Pada kelinci ternyata tidak ditemukan kompleks imun tetapi antibodi yang sudah berada dalam tubuh tidak mencegah terjadinya penyakit setelah ditulari dengan virus penantang (105).
8 . Struktur dan penggolon8an virus herpes
Virus dibagi dalam tiga kelas yaitu : a) virus tanaman (plant virus), b) bakteriofag (bacteriophage) dan c ) virus hewan (animal virus). Virus-virus tersebut mengandung asam nukleat nucleic acid, NA), yakni asam ribonukleat (ribonucleic acid, RNA) atau as am deoksiribonukleat (deoxyribonucleic acid. DNA). Asam nukleat terletak di bagian paling dalam sebagai inti (core). Dengan mikroskop elektron
(ME)
dapat dilihat apakah virus mempunyai NA beruntai tunggal (single stranded) atau beruntai ganda (double stranded). Virus herpes mempunyai DNA yang beruntai ganda (18, 44, 47).Secara umum, virus mengandung ensim yang terdiri dari d u a kelas, yakni ensim yang menyerang dinding sel atau membran sel inang seperti lisosom atau neuraminidase, dan ensim yang mengkatalisis sintesis NA seperti DNA polimerase ( 4 7 . 1 1 8 1 .
Virus yang mengandung RNA diklasifikasikan sebagai virus R N A dan virus yang mempunyai DNA sebagai virus DNA. Joklik dalam tulisannya tahun 1980 ( 4 4 ) , melukiskan bahwa virus herpes adalah salah satu dari famili virus DNA, terdiri dari : 1 ) virus herpes alfa yang mempunyai inang berkisar dari sangat luas sampai dengan sangat sempit
dengan infeksi yang bersifat laten dalam ganglia sensori
d m menimbulkan kerusakan sel (cytopathic effect. CPE) sangat tinggi dan kebanyakan siklus replikasi pendek. 2 )
v i r u s h e r p e s b e t a m e m p u n y a i k i s a r a n i n a n g y a n g s e a p i t , k u r a n g m e n i m b u l k a n CPE, s i k l u s r e p l i k a s i p a n j a n g , b i a s a n y a m e n y e b a b k a n i n f e k s i l a t e n d a l a m k e l e n j a r l u d a h d a n d a l a m j a r i n g a n l a i n ; d a n 3 ) v i r u s h e r p e s g a m m a d e n g a n k i s a r a n i n a n g y a n g s e m p i t , s e r t a d a p a t m e n y e b a b k a n t u m o r . V i r u s i n f e c t i o u s b o v i n e r h i n o t r a c h e i t i s ( I B R ) , v i r u s i n f e c t i o u s b o v i n e k e r a t o - c o n j u n c t i v i t i s CIBKV), k e d u a n y a p a d a s a p i , v i r u s i n f e c e i o u s I a r y n g o t r a c h e i t i s ( I L T ) p a d a a y a m , a d a l a h b e b e r a p a a n g g o t a v i r u s h e r p e s a l f a ; v i r u s c y t o m e g a l o ( h u m a n b e t a h e r p e s v i r u s 5 ) p a d a o r a n g t e r m a s u k k e d a l a m v i r u s h e r p e s b e t a ; d a n v i r u s E b s t e i n - B a r ( h u m a n g a m m a h e r p e s v i r u s 4 ) p a d a o r a n g , v i r u s M a r e k p a d a a y a m , v i r u s h e r p e s s a i m i r i p a d a b a n g s a k e r a , t e r m a s u k k e d a l a m v i r u s h e r p e s g a m m a . Virus h a r p e n p a d a r u m i n a n s i a y a n g d i s e b u t v i r u s h e r p e s b o v i d ( b o v i d h e r p e s v i r u s , B H V ) d i g o l o n g k a n m e n j a d i e n a m t i p e , y a k n i BHV-I s a m p a i 6 ( 4 9 ) . BHV-1 t e r u t a m a m e n y e r a n g s a l u r a n p e r n a f a s a n a t a u a l a t k e l a m i n s a p i , t e r d i r i d a r i v i r u s I B R d a n I P V ( i n f e c t i o u s p u s t u l a r v u l v o v a g i n i t i s ) . V i r u s y a n g t e r a a s u k k e d a l a m BHV-2 a d a l a h B H M ( b o v i n e h e r p e s m a m m i l l i t i s ) y a n g m e n y e b a b k a n k e k a s a r a n k u l i t p a d a s a p i . T i p e y a n g k e t i g a y a k n i BHV-3 t e r m a s u k v i r u s MCF d e n g a n r e s e r v o a r " w i l d e b e e s t " , d a n B H V - 4 y a n g m e n y e b a b k a n b e r b a g a i b e n t u k g e j a l a k l i n i s p a d a s a p i d a n k e r b a u . S e d a n g k a n BHV-5 a d a l a h v i r u s y a n g m e n y e b a b k a n a d e n o m a t n s i s p A d a p a r u - p a r u d o m b a d a n t i p e t e r a k h i r BHV-6 mnrtlpakan v i r u s h e r p e s p a d a k a m h i n g ( 4 9 ) .
Penggolongan v i r u s h e r p e s b o v i d i n i d i d a s a r k a n p a d a p e r t i m b a n g a n s e j a r a h , r e a k s i s e r o l o g i s d m p o l a pemecahan
DNA o l e h e n d o n u k l e a s e . S i f a t i n f e k s i pada semua v i r u s yang t e r m a s u k dalam g o l o n g a n BHV, a d a l a h l a t e n ( 4 9 ) .
Menurut Dulbecco (18) v i r u s h e r p e s mempunyai m o r f o l o g i yang sama. Ukuran d i a m e t e r b e r k i s a r a n t a r a 100 d a n 2 0 0 nm, mempunyai k a p s i d yang i k o s a h e d r a l d a n d i dalamnya t e r d a p a t 162 kapsomer. D i b a g i a n p a l i n g l u a r t e r d a p a t ampelop yang mengandung l i p i d s e h i n g g a p e k a t e r h a d a p z a t p e l a r u t lemak seperti e t e r dan k l o r o f o r m . V i r u s MCF a s a l " w i l d e b e e s t " t e r m a s u k v i r u s h e r p e s (36, 123). P l o w r i g h t et al. (81) melaporkan bahwa n u k l e o k a p s i d v i r u s MCF yang d i i s o l a s i d a r i " w i l d e b e e s t " a d a l a h i k o s a - h e d r a l s i m e t r i d a n mengandung DNA s e b a g a i i n t i . D i dalam s e l , v i r u s a d a l a h t e l a n j a n g s e d a n g k a n d i l u a r sel v i r u s mempunyai ampelop (81)
V i r u s h e r p e s t e r m a s u k v i r u s MCF mernbentuk badan i n k l u s i t i p e A pada b i a k a n s e l yang d i t u l a r i n y a (10, 8 2 ) .
9 - Proses penularan sel oleh virus
V i r u s a d a l a h s u a t u u n i t yang h i d u p d a n mdmperbanyak d i r i d i dalam s e l h i d u p , s e d a n g k a n d i l u a r s e l h i d u p i a t i d a k a k t i f (18).
Proses p e n u l a r a n sel oleh v i r u s a d a l a h s u a t u i n t e r - a k s i a n t a r a v i r u s dengan s e l i n a n e . V i r u s m e l e k a t pada l o k a s i t e r t e n t u p a d a s e l yang d i s e b u t r e s e p t o r , l a l u masuk
k e dalam sel dengan cara : a) penelanan seluruh partikel virus (engulfment) atau dksebut juga viropeks, b) dengan menginjeksikan N A ke dalam sel bakteri dan c) dengan penetrasi seluruh partikel virus k e dalam sel secara langsung yang mekanismenya belum diketahui ( 4 4 , 47, 122).
Semua
N A
virus, setidak-tiddcnya berisi dua kode, satu kode untuk pembuatanN A
dan satu lainnya untuk pembentukan protein (18, 47).Selanjutnya terjadilah perakitan komponen-komponen virus menjadi partikel virus baru, mungkin secara spontan
( 2 0 ) , namun Wood dan Edgar (1968) membuat percobaan dan
menyimpulkan bahwa proses perakitan memerlukan ensim khusus ( 122).
Virus harpes disintesis di dalam inti dan dirakit di dalam inti dan sitoplasma sel yang ditulari (18). Setelah tercapai suatu timbunan tertentu, komponen virus dilepas dari sel inang ke daerah sekitarnya. Virus berampelop, sebelum melepaskan diri ke luar sel, membentuk ampelop dari membran sel (18). Castro dan Daley ( 1 1 ) melaporkan bahwa virus MCF yang diisolasi dari "gaur" dan
"greater kudu" dirakit di dalam inti sel dimatangkan di dalam sitoplasma dan akhirnya virus membentuk ampelop @ari membran sel sebelum melepaskan diri dengan cara seperti
,
membentuk kuncup (budding). Selain membentuk ampelop dari membr- sel bagian luar, virus MCF juga membentuk ampelop dari mernbran sel dari vakuola d m dari sisterna. Karena itu, virus berampelop terdapat di dalam vakuola dan ada ~ u g a yang terperangkap di dalam sisterna inti sel yang
ditulari (11). Jadi, virus MCF d i dalam sel membentuk nukleokapsid, sedangkan di luar sel virus mempunyai
111. BAEAN DAN METODE
1. Bahan untuk menentukan sifat virus
MCF
Untuk mempelajari sifat virus MCF digunakan bahan- bahan sebagai berikut :
a. 5-iodo-2'-deoxyuridine (IUDR), untuk mempelajari NA virus MCF.
b. Acridine orange ( A O ) . Curnoy's Fixing F l u i d , yang digunakan dafam pewarnaan AO, untuk rnengamati NA virus MCF
:
c. Filter, untuk uji filtrasi yang berdiameter dari I 0 0 sampai 450 nm.
2- Aewan percobaan
Dalam percobaan postulat Koch, dipakai tiga ekor kerbau, dua ekor diinokulasi dengan virus isolat dan seekor lainnya dijadikan sebagai kontrol.
Dalam percobaan untuk menentukan peran kambing dan domba sebagai sumber penularan virus MCF, digunakan masing-masing 1 0 ekor kambing d m domba percobaan yang
diinokulasi dengan virus MCF dan masing-masing lima ekor untuk kontrol
.
Selain itu diperlukan pula 10 ekor kelinci untuk melemahkan virus MCF.
Untuk mengukur antigenisitas dan imunogenisitas virus MCF digunakan 3 0 ekor kambing. 25 ekor dibagi menjadi lima ke lompok. Setiap kelompok terdiri dari lima ekor. diinokulasi dengan satu macam antigen dari virus MCF (semuanya ada lima antigen), lima ekor selebihnya d i ~ a d i k a n kelompok kontrol dan disuntik dengan P B S
(larutan buffer).
3. Bahan pemeriksaan dari lapangan
a . B a h a n u n t u k p e n e n t u a n e k s i s t e n s i v i r u s
Bahan untuk menentukan eksistensi virus MCF pada kambing dan domba yang berada di lapangan, terdiri dari darah, ingus, air mat% dan cairan vagina/preputium yang diambil dari 4 0 ekor kambing (kambing lapanpan) dan 4 0 ekor domba (domba lapangan), betina atau jantan. Hewan- hewan tersebut diambil secara acak dari lokasi penyakit MCF yang terjadi secara endemik, yakni 3 0 ekor kambing dan 3 0 ekor domba dari Kecamatan Lubukpakam, Kabupaten Deli Serdang, Propinsi Sumatera Utara, serta 10 ekor kambing dan 10 ekor domba dari Kecamatan Belangkejeren. Kabupaten Aceh Tenggara. Propinsi Daerah Istimewa Aceh.
Darah sebanyak 2 ml dimasukkan k e dalam tabung berisi 0.1 persen EDTA (ethylenetetraacetic acid) sebagai antikoagulan. Ingus, air mata dan cairan vagina/prepu- tium, ditampung dengan kapas bertangkai steril dan dimasukkan ke dalam tabung berisi medium pengirim.
Tabung berisi darah dengan behan antibeku dan yang
tanpa bahan antibeku serta tabung berisi kapas penampungan dalam medium pengirim, dimasukkan ke dalam peti kemas berisi gliserol dingin atau es batu, lalu dibawa k e laboratorium BPPH Wilayah
I,
Medan.Leukosit dipisahkan dengan jalan memusingkan dalam sentrifus dingin 1-2 ml darah setelah ditambah f i c o l l h e p a q u e (Pharmacia, Sweden) sama banyak dengan darah, dengan kecepatan 6 000 rpm selama 15 menit. Leukosit yang terpisah, direndam dalam medium penumbuh
(73) dengan kepadatan 3 x
l o 5
per ml, dan disimpan pada suhu 4 OC, sebelum diinokulasikan pada biakan sel.b. S e r a n g g a p e n g i s a p d a r a h
Serangga pengisap darah ditangkap di dan pada waktu pengambilan 3.a dan di kandang hewan percobaan. Serangga pemangsa pada malam hari (nocturnal) ditangkap dengan menggunakan perangkap insek (light trap) yang dipasang sepanjang malam, sedangkan serangga pemangsa siang
(diurnal) ditangkap dengan jala penangkap serangga.
Serangga yang tertangkap dikemas di dalam botol termulut besar steril, lalu dimasukkan ke dalam peti kemas berisi es batu atau gliserol dingin lalu dibawa k e laboratorium.
c. S a h a n u n t u k p e n e n t u a n e k s i s t e n s i t i t e r a n t i b o d i
Darah yang akan diproses menjadi serum, diambil dari kambing dan domba yang sama untuk pemeriksaan eksistensi
33 \
virus. Darah sebanyak 5 b l ditampung dalam tabung dan dimasukkan k e dalam peti kqmas bersama-sama dengan darah
i
untuk isolasi virus dan serangga. Di laboratorium, serum dipisahkan dan disimpan pada suhu -20 OC.
4. D a r a h
Untuk melihat naik turunnya antibodi terhadap virus
MCF
pada kambing dan domba percobaan, diambil darah dan diproses seperti pada 3.a dan 3.c d i atas.5 . Biakan s e l ( c e l l culture)
a. B i a k a n s e l p r i m e r
Biakan sel primer ginjal fetus sapi ( G F S ) dan tiroid fetus sapi (TFS), diperoleh dengan melakukan tripsinasi jaringan ginjal dan tiroid fetus sapi. Sel-sel tunggal direndam dalam medium penumbuh dengan kepadatan 3 x
lo5
per ml dan dieramkan pada suhu 37 OC ( 7 3 ) . Biakan sel
yang tumbuh dapat diinokulasi dengan bahan pemeriksaan, enam hari sesudah penanaman.
b. B i a k a n s e l I e s t a r i
I
Biakan sel lestari Madin-Derby bovine kidney (MDBK), diperoleh dari N a t i o n a l I n s t i t u t e o f A n i m a l H e a l t h ( N I A H ) ,
Jepang, atas kebaikan J a p a n I n t e r n a t i o n a l C o o p e r a t i o n A g e n c y (JICA). Pasase dilakukan setiap 9-12 hari.
6. M e d i u m p e n u m b u h
Medium penumbuh, m e d i u m p e m e l i h a r a , medium p e n y i m p a n , m e d i u m p e n g i r i m d a n m e d i u m p e n u m b u h l e u k o s i t d i g u n a k a n s e p e r t i y a n g d i p a k a i o l e h P e r a n g i n a n g i n ( 1 9 8 6 ) u n t u k m e n g i s o l a s i v i r u s MCF (73), d e n g a n p a r b e d a a n , s e r u m u n t u k m e n u a b u h k a n b i a k a n s e l d i g u n a k a n s e r u m sapi berasal d a r i r u m a h p o t o n g hewan. U n t u k m e n g h i n d a r i k e m u n g k i n a n a d a n y a a n t i b o d i t e r h a d a p v i r u s MCF d i d a f a m s e r u m sapi t e r s e b u t , u n t u k m e n u m b u h k a n biakan s e l y a n g s u d a h d i i n o k u l a s i d e n g a n v i r u s , d i g u n a k a n f r a k s i a l b u m i n V s a p i (Difco). 7. V i r u s V i r u s MCF y a n g d i g u n a k a n d a l a m p e n s l i t i a n ini adalah: a ) v i r u s i s o l a t berasal d a r i k e r b a u d a n s a p i bali (K3/AP;
KS/AP; K6/AP, S b l / A P d a n S b 2 / A P ( 7 0 , 73) d a n v i r u s y a n g d i i s o l a s i s e l a m a p e n e l i t i a n y a k n i d a r i s a p i b a l i , k a m b i n g d a n d o m b a l a p a n g a n e e r t a d a r i s e r a n g g a p e n g h i s a p d a r a h , b ) s e b a g a i p e m b a n d i n g d i g u n a k a n v i r u s PI-3 (parainfluenza-3 v i r u s ) d a n v i r u s IBR ( i n f e c t i o u s b o v i n e r h i n o t r a c h e i t i s virus). 8 . R e a g e n K o n j u g a t a n t i v i r u s MCF i s o l a t K 6 / A P ( k o n j u g a t K 6 / A P ) d i b u a t s e n d i r i (73). K o n j u g a t a n t i v i r u s IBR ( k o n j u g a t IBR). b u a t a n K y o t o B i k e n L a b o r a t o r i e s , Inc. J e p a n g , a t a s k e b a i k a n JICA.
Konjugat antiimunoglobulin G sapi, buatan Cappel Laboratory.
Konjugat antiimunoglobulin kambing, konjueat anti- imunoglobulin domba dan konjugat antiimunoglobulin kerbau dibuat sendiri dengan bantuan biaya dari Pusat Antar Universitas Bioteknologi, lnstitut Pertanian Bogor.
Antiserum sapi terhadap virus
MCF
galur WCll, berasal dari Plum Island Animal Disease Centre, Greenport, New York. Amerika Serikat, atas kebaikan Dr. J. A. House.1. Postulat Koch
Tiga ekor kerbau jantan, masing-masing berumur 1,5 tahun, digunakan dalam percobaan postulat Koch. Kerbau pertama dengan nomor kodegPIHdisuntik intravena dengan suspensi sel GFS atau TFS yang sudah ditulari dengan virus isolat dari kerbau KG/AP, pasase ketiga. Kerbau kedua dengan nomor kode KPzP disuntik intravena dengan suspensi sel GFS atau TFS yang sudah ditulari dengan virus isolat dari ingus kambing Kb2LP, pasase kedua, sedangkan kerbau ketiga dengan nomor kode
